基于内质网应激PERK/ATF4/CHOP信号通路探讨丹参多酚酸盐对膜性肾病大鼠足细胞凋亡的影响

目的:基于蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)/活化转录因子4(ATF4)/转录因子C/EBP同源蛋白(CHOP)信号通路探讨丹参多酚酸盐对膜性肾病(MN)大鼠内质网应激的影响。方法:将80只雄性SD大鼠随机分配,其中20只为正常组,剩余60只大鼠采用尾静脉注射阳离子化牛血清白蛋白(C-BSA)的方法诱导MN病变。将造模成功的大鼠随机分为模型组、贝那普利组和丹参多酚酸盐低、中、高剂量组,每组10只,另取10只正常组大鼠共同进行实验。贝那普利组每日给药剂量为10 mg/kg,丹参多酚酸盐低、中、高剂量组每日给药剂量分别为16.7、33.3、66.7 mg/kg,正常组和模型组予等体积生理盐水,各组均每日灌胃1次,连续4周。检测各组大鼠治疗后24 h尿蛋白定量(24 h-UTP);腹主动脉取血分离血清,检测各组大鼠血尿素氮(BUN)、肌酐(Scr)含量;过碘酸六胺银(PASM)染色后光镜观察各组大鼠肾组织病理形态,透射电子显微镜进一步观察各组大鼠肾组织细微结构变化;免疫荧光法检测各组大鼠肾组织免疫球蛋白G(IgG)沉积情况;免疫组化(IHC)法检测各组大鼠肾组织足细胞裂隙膜蛋白(Podocin)、足细胞裂孔隔膜蛋白(Nephrin)表达水平;蛋白免疫印迹(Western blot)法检测各组大鼠肾组织PERK、ATF4、CHOP、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)表达。结果:相较于正常组,模型组大鼠的肾组织显示出显著的病理性变化,肾小球基底膜显著增厚,并出现类似钉突的结构改变,同时伴有系膜基质的增生现象,沿毛细血管袢有IgG弥漫性沉积;各给药组大鼠肾组织上述病理改变有所缓解,足细胞损伤减少,IgG沉积减轻。模型组大鼠24 h-UTP水平显著高于正常组(P<0.01);各给药组大鼠24 h-UTP水平均显著低于模型组(P<0.05,P<0.01),其中丹参多酚酸盐中剂量组大鼠24 h-UTP水平与贝那普利组比较差异无统计学意义(P>0.05),丹参多酚酸盐高剂量组大鼠24 h-UTP水平明显低于贝那普利组(P<0.01),丹参多酚酸盐对MN模型大鼠24 h-UTP水平的降低作用具有明显的剂量依赖性(P<0.01)。各组大鼠血清BUN、Scr水平比较差异均无统计学意义(P>0.05)。模型组大鼠肾组织Podocin、Nephrin蛋白表达显著低于正常组(P<0.05);各给药组大鼠上述蛋白表达均显著高于模型组(P<0.05),其中丹参多酚酸盐中剂量组大鼠上述蛋白表达水平与贝那普利组比较差异无统计学意义(P>0.05),丹参多酚酸盐高剂量组大鼠上述蛋白表达水平明显高于贝那普利组(P<0.05),丹参多酚酸盐对MN模型大鼠上述蛋白表达水平的升高作用具有明显的剂量依赖性(P<0.05)。模型组大鼠肾组织PERK、ATF4、CHOP、Bax蛋白表达水平均明显高于正常组(P<0.01),Bcl-2蛋白表达水平明显低于正常组(P<0.01);各给药组大鼠肾组织上述蛋白表达水平均较模型组显著改善(P<0.05,P<0.01),其中丹参多酚酸盐中剂量组大鼠上述蛋白表达水平与贝那普利组比较差异无统计学意义(P>0.05),丹参多酚酸盐高剂量组大鼠上述蛋白表达的改善程度显著优于贝那普利组(P<0.01),丹参多酚酸盐对MN模型大鼠上述蛋白表达水平的改善作用具有明显的剂量依赖性(P<0.01)。结论:丹参多酚酸盐可能通过调控PERK/ATF4/CHOP信号通路,缓解肾组织内质网应激,抑制足细胞凋亡,进而保护肾脏及延缓疾病进展。

益肾通络方干预低中危PLA2R-Ab阳性膜性肾病进程的临床研究

目的:观察益肾通络方干预治疗低中危型PLA2R-Ab阳性膜性肾病的临床疗效。方法:中医辨证为脾肾亏虚兼有血瘀的低、中危PLA2R-Ab阳性膜性肾病患者90例,低危组患者42例,随机分为对照组和治疗组,各21例;中危组患者48例,随机分为对照组和治疗组,各24例。对照组给予基础治疗,治疗组在对照组基础上服用益肾通络方。每月检测24 h UTP、Alb、TC、PLA2R-Ab,每月监测血常规、肝功能、肾功能。观察6个月。结果:有效率比较:低危组第3个月,治疗组80.95%vs对照组65%(P<0.05);第6个月,治疗组90.48%vs对照组75%(P<0.05);中危组第3个月,治疗组78.26%vs对照组63.63%(P<0.05);第6个月,治疗组86.96%vs对照组72.73%(P<0.05)。化验指标比较:治疗第3、6个月两组24 h UTP明显下降(P<0.01),TC、PLA2R-Ab均较治疗前下降(P<0.05),Alb较治疗前升高(P<0.05)。低危组与中危组比较,在第6个月时,低危组治疗组24 h UTP、TC较中危组降低更明显(P<0.05),Alb升高更显著(P<0.05);而低、中危两组中治疗组的PLA2R-Ab在第3个月就较对照组有明显下降(P<0.05);低、中危两组治疗组比较,低危组PLA2R-Ab下降更明显,差异有统计学意义(P<0.05)。低、中危两组BUN、Scr在治疗前后均无明显变化。结论:基础治疗加益肾通络方可更有效、更快速地诱导原发性低中危膜性肾病缓解,且安全性高。

檀金川教授治疗局灶节段性肾小球硬化经验

介绍檀金川教授治疗局灶节段性肾小球硬化的诊疗经验,檀教授认为治疗该病应将中医理论与微观表现相结合,针对微观,分型论治,同时配合激素、免疫抑制剂及其他西药的应用,达到优势互补、标本兼治的作用,此外要注意预防感染、规律停药、合理饮食、避免劳累等以防止其复发,并附典型病案1例,以供参考。

特发性膜性肾病尿液肾小管损伤标记物的研究进展

特发性膜性肾病是一种常见的原发性肾小球疾病,其进展、预后除与肾小球自身有关外,还与肾小管损伤的严重程度相关。血肌酐、尿蛋白虽为公认的特发性膜性肾病生物标志物,但出现时间晚、反应不敏感、缺乏特异性,难以及时、准确反映病情进展。尿液中的N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶、肾损伤分子1、中性粒细胞明胶酶相关脂蛋白等标记物可早期动态反映肾损伤进展,且检测无创,但相关研究较缺乏,尚需进一步深入探讨。

大黄泄浊方对IgA肾病合并高尿酸血症患者肾小管功能的影响

目的:观察大黄泄浊方对慢性肾脏病(CKD)1~2期免疫球蛋白A(IgA)肾病合并高尿酸血症(HUA)患者的临床症状、血尿酸及肾小管功能的影响。方法:将中医辨证为脾肾两虚浊瘀互结证的60例CKD1~2期IgA肾病合并HUA患者随机分为观察组和对照组各30例。对照组予基础治疗,氯沙坦钾片50~100 mg/次,1次/d及碳酸氢钠片0.5 g/次,3次/d口服,配合低盐低脂饮食、低嘌呤饮食;观察组在基础治疗基础上予以大黄泄浊方,每日1剂,分早晚2次温水冲服,2组患者均治疗2个月。分别于治疗前及治疗后2个月记录观察组和对照组患者的中医证候总积分、血压和24 h尿蛋白定量(UTP)、尿素氮(BUN)、血肌酐(SCr)[按慢性肾病流行病学合作研究(CKD-EPI)公式计算肾小球滤过率(eGFR)]、血尿酸(SUA)、肾小管功能指标[尿α1-微球蛋白(α_(1)-MG)、尿β_(2)-微球蛋白(β_(2)-MG)、尿液中的肾损伤分子-1(KIM-1)、中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)],并于治疗2个月评定2组患者的临床疗效。结果:治疗2个月后,观察组总有效率为81.48%(22/27),对照组的总有效率为50.00%(14/28),观察组明显高于对照组,差异具有统计学意义(χ^(2)=6.661,P<0.05)。与本组治疗前比较,观察组和对照组患者的中医证候总积分、UTP、SUA均明显降低(P<0.05);与对照组治疗后比较,观察组降低更明显(P<0.05)。与本组治疗前比较,观察组和对照组患者的血压均明显降低(P<0.05);与对照组治疗后比较,治疗后2组患者血压差异无统计学意义。与本组治疗前比较,2组患者尿α_(1)-MG、β_(2)-MG、KIM-1和NGAL水平均明显降低(P<0.05);与对照组治疗后比较,观察组患者降低更明显(P<0.05)。2组患者BUN、SCr、eGFR水平治疗前后组内和组间比较差异均无统计学意义。2组患者治疗前后血常规、肝功能、电解质均无明显异常,未出现过敏等不良反应。结论:大黄泄浊方可有效改善脾肾两虚浊瘀互结证IgA肾病合并HUA(CKD1~2期)患者的临床症状,降低血尿酸水平,缓解肾小管损伤,进而保护肾脏,疗效优于基础治疗。

艾灸对脾肾两虚兼血瘀证低中危特发性膜性肾病肾功能及高凝状态的影响

目的:比较艾灸联合基础治疗与单纯基础治疗对脾肾两虚兼血瘀证低中危特发性膜性肾病(IMN)患者临床症状、肾功能及高凝状态的影响。方法:将60例脾肾两虚兼血瘀证低中危IMN患者随机分为观察组(30例,脱落2例)和对照组(30例,脱落1例)。对照组给予降压、调脂、抗凝常规基础治疗,观察组在对照组基础上予艾灸肾俞、脾俞、关元、足三里、三阴交治疗,每天1次,每周连续施灸5 d,休息2 d。两组均治疗6个月。分别于治疗前及治疗3、6个月记录两组患者中医证候总积分和肾功能指标[24 h尿蛋白定量(UTP)、白蛋白(ALB)、尿素氮(BUN)、血肌酐(Scr)]、凝血指标[纤维蛋白原(FIB)、D二聚体(D-D)、P-选择素、血管性血友病因子(v WF)]及血脂指标[总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)]水平,并于治疗3、6个月评定两组临床疗效。结果:观察组治疗3、6个月的有效率分别为78.6%(22/28)、89.3%(25/28),高于对照组的62.1%(18/29)、75.9%(22/29,P<0.05)。治疗3、6个月,两组中医证候总积分均较治疗前降低(P<0.05),且观察组低于对照组(P<0.05)。治疗3个月,观察组UTP、FIB、D-D、P-选择素、v WF水平较治疗前下降(P<0.05),ALB水平较治疗前升高(P<0.05),对照组UTP、FIB水平较治疗前下降(P<0.05),观察组ALB水平高于对照组(P<0.05),FIB、v WF水平低于对照组(P<0.05)。治疗6个月,两组UTP、FIB、D-D、P-选择素、v WF、TC、TG水平均较治疗前下降(P<0.05),ALB水平均较治疗前升高(P<0.05),观察组UTP、FIB、D-D、P-选择素、v WF、TC、TG水平低于对照组(P<0.05),ALB水平高于对照组(P<0.05)。结论:艾灸联合基础治疗可有效改善脾肾两虚兼血瘀证低中危特发性膜性肾病患者临床症状、高凝状态和肾脏微循环,疗效优于单纯基础治疗。

益肾通络方对MN大鼠miR-514a-5p/TNFSF15信号通路的影响及机制

目的:基于miR-514a-5p/肿瘤坏死因子超家族成员15(TNFSF15)信号通路探讨益肾通络方抑制膜性肾病(MN)大鼠肾小球足细胞凋亡的分子机制。方法:80只SD大鼠采用预免疫和尾静脉注射阳离子化牛血清白蛋白(C-BSA)的方法建立MN大鼠模型,并使造模成功的MN大鼠随机分为模型组,益肾通络方高、中、低剂量组(26.44,13.22,6.61 g·kg^(-1))和贝那普利组(10 mg·kg^(-1)),每组各10只,取健康大鼠20只作为正常组,各组分别予对应药物灌胃,每日1次,连续干预4周。给药结束后,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测大鼠肾组织中miR-514a-5p及TNFSF15 mRNA表达水平;免疫组化(IHC)检测大鼠肾组织中足细胞标志蛋白足细胞裂孔膜蛋白(Nephrin),膜蛋白(Podocin),足萼蛋白(Podocalyxin),突触足蛋白(Synaptopodin),TNFSF15及足细胞凋亡相关蛋白B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)相关X蛋白(Bax),Bcl-2关联死亡启动子重组蛋白(BAD),大分子B细胞淋巴瘤(Bcl-XL)的表达水平;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测大鼠肾组织中TNFSF15,Bax,BAD,Bcl-2,Bcl-XL的表达水平;原位末端标记法(TUNNEL)检测大鼠肾组织细胞凋亡率。结果:与正常组比较,模型组大鼠肾组织中miR-514a-5p水平明显降低(P<0.05),TNFSF15 mRNA水平明显升高(P<0.05);足细胞标志蛋白Nephrin,Podocin,Podocalyxin,Synaptopodin表达明显降低(P<0.05);TNFSF15,Bax,BAD蛋白表达水平明显升高(P<0.05),Bcl-2,Bcl-XL蛋白表达水平明显降低(P<0.05);凋亡细胞明显增多(P<0.05)。与模型组比较,益肾通络方各剂量组和贝那普利大鼠肾组织中miR-514a-5p水平明显升高(P<0.05),TNFSF15 mRNA水平明显降低(P<0.05);足细胞标志蛋白Nephrin,Podocin,Podocalyxin,Synaptopodin表达明显升高(P<0.05);TNFSF15,Bax,BAD蛋白表达水平明显降低(P<0.05),Bcl-2,Bcl-XL蛋白表达水平明显升高(P<0.05);凋亡细胞明显减少(P<0.05)。结论:益肾通络方可能通过miR-514a-5p/TNFSF15信号通路,减轻大鼠肾组织足细胞凋亡,缓解MN大鼠肾损伤。

益肾通络方对低中危特发性膜性肾病患者肾小管功能的影响

目的:观察益肾通络方对低中危特发性膜性肾病(IMN)患者的临床疗效及肾小管功能的影响。方法:本研究将60例低中危IMN患者依随机数字表法划分为对照组、观察组,每组30例,对照组给予西医基础治疗,观察组在上述疗法上加服益肾通络方。两组均治疗3个月,观察两组病人治疗前后的疗效、中医证候总积分、N-乙酰-β-D氨基葡萄糖糖苷酶(NAG)、尿α1-微球蛋白(α1-MG)、尿β2-微球蛋白(β2-MG)、尿Kim-1、尿NGAL、24 h尿蛋白定量(UTP)、白蛋白(ALB)、总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、血肌酐(Scr)及安全性指标的变化。结果:观察组的临床有效率、中医证候总积分均明显优于对照组(P<0.05)。与治疗前相比,治疗后两组尿NAG、尿α1-MG、尿β2-MG、尿Kim-1、尿NGAL、UTP、TC、TG含量下降幅度明显(P<0.05);两组ALB明显升高(P<0.05);治疗后与对照组比较,观察组的尿NAG、尿α1-MG、尿β2-MG、尿Kim-1、尿NGAL、UTP、TC、TG含量均明显降低(P<0.05),观察组患者ALB含量明显升高(P<0.05)。结论:益肾通络方治疗低中危IMN,能有效改善临床症状,缓解肾小管损伤,进而保护肾脏,具有一定的临床推广价值。

基于miR-29a/MDM2通路探讨益肾通络方对膜性肾病大鼠足细胞的影响

目的:探讨益肾通络方对膜性肾病大鼠足细胞的影响及作用机制。方法:将36只SD大鼠随机分为正常组(12只)和造模组(24只),造模途中死亡1只,取正常组、造模组大鼠各2只检测肾脏结构,确定造模成功,然后再随机分为模型组(11只)和益肾通络方组(10只),各组大鼠均分别给对应药物4周后,测定其24h尿白蛋白排泄量(UTP),及血清中总胆固醇(TC)、总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)的水平;留取肾脏组织,光镜下观察肾小球基底膜增厚及"钉突"形成情况,电镜下观察足细胞结构情况,免疫荧光法检测IgG的沉积状态;RT-qPCR法检测肾组织中MDM2 mRNA、miR-29a的表达情况;Western Blot检测肾组织中MDM2、Nephrin及Podocin、Bax、Bcl-2、Caspase-3蛋白的表达水平。结果:与正常组比较,模型组大鼠UTP、TC均显著上升(P<0.05),TP、ALB均显著下降(P<0.05);病理检测示肾组织病理明显改变;肾组织中miR-29a mRNA表达下降(P<0.05),MDM2 mRNA表达上升(P<0.05),MDM2、Bax、Caspase-3蛋白表达上调(P<0.05),Bcl-2、Nephrin、Podocin蛋白表达下调(P<0.05)。与模型组比较,益肾通络方组UTP、TC均显著下降(P<0.05),TP、ALB均显著上升(P<0.05);肾小球基底膜增厚程度减轻,"钉突"减少,足细胞内足突融合缓解,IgG荧光强度减弱;肾组织中miR-29a mRNA表达上升(P<0.05),MDM2 mRNA表达下降(P<0.05),MDM2、Bax、Caspase-3蛋白表达下调(P<0.05),Bcl-2、Nephrin、Podocin蛋白表达上调(P<0.05)。结论:益肾通络方可基于miR-29a/MDM2信号通路,调节Bax、Bcl-2、Caspase-3的表达水平,进而抑制足细胞的凋亡,从而延缓膜性肾病进展。

基于TLR4/NF-κB、Raf/MEK通路探讨加味升降散抑制糖尿病大鼠肾脏炎症和纤维化的作用机制

目的:探讨加味升降散对糖尿病肾病(Diabetic nephropathy,DN)大鼠肾脏Raf/MEK通路蛋白的影响及其炎症和纤维化改善的可能机制。方法:DN大鼠随机分为模型对照组、厄贝沙坦0.014 g/kg组、加味升降散4.4、8.7、17.5 g/kg组,另设正常对照组,各组分别灌胃相应药物或生理盐水,1次/d,连续给药8 w。检测大鼠尿蛋白含量,血清中Glu、Bun、Scr含量、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、C-反应蛋白(CRP)含量;HE、Masson染色和电镜观察肾脏病理变化;免疫组化(IHC)检测肾组织核因子-κB蛋白(NF-κB)、髓样分化因子(MyD88)、Toll样受体4(TLR4)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、转化生长因子-β1(TGF-β1)、E-钙黏附蛋白(E-cadherin)的表达;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测肾组织Raf蛋白激酶(Raf)、丝裂原活化细胞外信号调节激酶(MEK)、细胞外调节蛋白激酶(ERK)、核因子κB(NF-κB)蛋白的表达。结果:与正常对照组比较,模型对照组大鼠尿蛋白含量显著升高,血清Glu、Bun、Scr、IL-6、TNF-α、CRP含量显著升高(P<0.01),模型对照组大鼠肾组织细胞产生了病理损伤;与模型对照组比较,各给药组大鼠尿白蛋白含量显著降低,血清Glu、Bun、Scr、IL-6、TNF-α、CRP含量显著降低(P<0.01);在HE、Masson染色和电镜下观察可见给予厄贝沙坦和加味升降散治疗后,肾组织细胞的病理损伤逐渐改善。与正常对照组比较,模型对照组大鼠肾脏NF-κB、MyD88、TLR4、α-SMA、TGF-β1、p-Raf、p-MEK、p-ERK、p-NF-κB蛋白表达明显上调,E-cadherin蛋白表达明显下调(P<0.05);与模型对照组比较,厄贝沙坦组和加味升降散8.7、17.5 g/kg组大鼠肾脏NF-κB、MyD88、TLR4、α-SMA、TGF-β1、p-Raf、p-MEK、p-ERK、p-NF-κB蛋白表达明显下调,E-cadherin表达明显上调(P<0.05)。结论:加味升降散可明显减轻糖尿病肾病大鼠肾组织损害,其机制可能与下调TLR4/NF-κB、Raf-MEK通路蛋白表达,抑制肾脏炎症状态、改善肾脏纤维化有关。

温经通络中药热膏摩联合痛泻药方治疗肝郁脾虚证腹泻型肠易激综合征疗效观察

目的:观察温经通络中药热膏摩联合痛泻药方治疗肝郁脾虚证腹泻型肠易激综合征(IBS-D)的临床疗效。方法:将96例肝郁脾虚证IBS-D患者随机分为两组,每组48例。治疗组予温经通络中药热膏摩联合痛泻要方治疗,对照组予匹维溴铵片治疗,两组疗程均为4周。观察两组患者治疗前后胃肠道症状评分、肠易激综合征严重程度评分(IBS-SSS)量表、生活质量评价量表(IBS-QOL)评分及中医证候评分,对比IBS-SSS及中医证候疗效,进而判定临床疗效。结果:治疗4周后,两组患者胃肠道症状评分、IBS-SSS评分及腹痛、腹泻、胁肋胀痛、食欲不振、腹胀、肠鸣中医证候评分较治疗前均显著降低(P<0.05);IBS-QOL量表评分均较治疗前升高(P<0.05)。治疗组IBS-SSS总有效率(80.00%)高于对照组(58.14%)(P<0.05),中医证候疗效治疗组总有效率(86.67%)高于对照组(65.12%)(P<0.05)。结论:温经通络中药热膏摩联合痛泻药方治疗肝郁脾虚证IBS-D疗效优于常规匹维溴铵治疗,可以明显减轻胃肠道不良症状,改善患者生活质量,临床疗效显著。

温经化浊中药热膏摩辅助治疗慢性萎缩性胃炎(CAG)疗效观察

慢性萎缩性胃炎(chronic atrophic gastritis,CAG)是以胃黏膜上皮和腺体萎缩,数目减少,胃黏膜变薄,黏膜基层增厚,或伴幽门腺化生和肠腺化生,或伴有异型增生为特征的慢性消化系统疾病。常表现为上腹部隐痛、胀满、嗳气、食欲不振、消瘦、贫血等。目前CAG的西医治疗主要为根除Hp、补充叶酸、维生素及对症治疗。国医大师李佃贵教授在30年理论与临床研究基础上,总结出浊毒内蕴为CAG关键病机,采用化浊解毒方治疗CAG,治愈有效率达到70%[1]。但CAG治疗周期长,临床症状缓解较慢,在内服汤药基础上配合中医外治疗法——中药热膏摩,可以迅速缓解患者临床症状,减轻身心痛苦。