人LIGHT和HSV-TK-EGFP基因共转染的MSCs抗肿瘤免疫的体内研究

目的研究与单纯疱疹病毒的糖蛋白D竞争结合单纯疱疹病毒进入介导物(herpes virus entry mediator,HVEM)的淋巴毒素类似物(homologous to lymphotoxins,exhibits inducible expression,and competes with HSV glycoprotein D for HVEM,a receptor expressed by T lymphocytes,LIGHT)基因和单纯疱疹病毒胸苷激酶(herpes simplex virus thymidine kinase,HSV-TK)基因共转染的骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)在体内的抗肿瘤免疫功能。方法将pIRES2-LIGHT基因和HSV-TK-EGFP基因共转染小鼠骨髓间充质干细胞(MSCs/LT组),以转染空载体和转染HSV-TK-EGFP基因的骨髓间充质干细胞作对照。流式细胞仪检测LIGHT分子和HSV-TK-EGFP分子在稳定转染的骨髓间充质干细胞上的表达。体内迁移实验观察MSCs/LT在小鼠体内迁移情况。观察更昔洛韦注射前后MSCs/LT对荷瘤小鼠体内肿瘤的治疗作用。ELISA法检测小鼠肿瘤组织中IFN-γ,IL-2和IL-10的水平。结果流式细胞仪检测发现,MSCs/LT能稳定高表达LIGHT分子。MSCs/LT有特异地向肿瘤组织趋化的特性。MSCs/LT和MSCs/T有较好的抑制肿瘤生长的能力,但在更昔洛韦诱导后,MSCs/LT的抗肿瘤效应下降甚至消失。同时,MSCs/LT可促使T细胞进入肿瘤组织,并促进T细胞分泌IL-2、IFN-γ,抑制IL-10分泌(P<0.05)。结论共转染人LIGHT和HSV-TK-EGFP基因的骨髓间充质干细胞能稳定高表达LIGHT分子,能特异性地向荷瘤小鼠体内肿瘤组织趋化并抑制肿瘤的生长,这种体内抗肿瘤功能可能与促进T淋巴细胞IL-2、IFN-γ等细胞因子的分泌,改善局部免疫抑制环境有关。

实验红鲫C1HD系的生化遗传标记

目的建立实验红鲫C1HD系生化遗传标记。方法采用聚丙烯酰胺梯度凝胶垂直电泳法,分析实验红鲫C1HD系与普通红鲫的苹果酸脱氢酶(MDH)和超氧化物歧化酶(SOD)等同工酶。结果实验红鲫C1HD系和普通红鲫血清蛋白电泳可分离出25条以上蛋白带,分为A、B、C等3个区段。在A、B区段,实验红鲫C1HD系分别具有SP-A1谱带和SP-B1、SP-B3~8谱带,但缺少SP-A2、SP-A3和SP-B2谱带。实验红鲫C1HD系具有8条SOD同工酶电泳谱带,比普通红鲫多出SOD-3、SOD-8两条特征带。两种红鲫均具备MDH-1、MDH-2和MDH-3电泳谱带,且带型一致;普通红鲫额外具备MDH-4和MDH-5两条电泳谱带。结论血清蛋白SP-A1和超氧化物歧化酶SOD-3、SOD-8电泳谱带可以作为实验红鲫C1HD系的生化遗传标记。

鱼类实验动物的生物学特性及应用

本文阐述了鱼类实验动物的生物学特性,并综述了其作为实验动物在生物医学研究中的应用现状.

郴州市第一人民医院350例药品不良反应报告分析

目的：了解郴州市第一人民医院药品不良反应（ADR）发生的特点及规律,促进临床合理用药。方法：收集该院2013年上报的350例ADR报告,按患者年龄、性别、给药途径、临床表现、所涉及的药品等进行统计分析。结果：350例ADR报告中,患者以40-60岁为主,女性较男性多;给药途径以静脉注射（占54.86%）居多;临床表现以皮肤及其附件损害最常见,占33.43%;ADR涉及药品172种,其中抗感染药引发的ADR最多,占31.14%。结论：临床应重视ADR的监测工作,加强对患者用药过程的观察,提高合理用药水平。

某儿童医院静脉用药调配中心非整支粉针剂精准配制药液量变化探讨

目的:为静脉用药调配中心(PIVAS)非整支粉针剂的精准配制提供合理的稀释溶媒量参考。方法:通过模拟实际药品稀释过程,采用精确的测量方法,通过统计分析得出合理的稀释溶媒量。结果:总结我院常用54种粉针剂的稀释溶媒量,得出如下规律:精准配制后,剂量<0.40 g的粉针剂药液增量为0,剂量0.40~0.60 g药液增量0.3 mL,剂量1.00~1.20 g药液增量0.6 mL,剂量1.50~2.25 g药液增量1.0 mL。结论:粉针剂的精准稀释有一定的规律,通过引入相对误差分析,能得出更合理的稀释溶媒量,有利于儿童医院PIVAS的精准调配。

严重药品不良反应128例报告分析

目的了解医院严重药品不良反应（ADR）发生情况，促进临床用药安全。方法对我院2012年～2013年严重药品不良反应128例报告进行回顾性分析。结果128例严重ADR中，患者以10岁以下的儿童居多；给药途径以静脉注射（78．13％）居多；临床表现以全身性损害最为常见；涉及药品73种，抗感染药最多，占36．27％。结论临床应重视ADR的监测工作，加强对患者用药过程的观察，提高合理用药水平。

DC-CIK联合化疗加靶向治疗对晚期结肠癌的临床疗效观察

目的:观察DC-CIK联合化疗加靶向治疗治疗晚期结肠癌的疗效及安全性。方法:选取晚期结肠癌患者,DC-CIK联合化疗加靶向治疗(奥沙利铂+卡培他滨+贝伐单抗)为联合治疗组(30例),同期进行化疗加靶向治疗(奥沙利铂+卡培他滨+贝伐单抗)的晚期结肠癌患者为化疗加靶向治疗组(30例),比较两组患者治疗后的免疫功能、近期疗效、1年生存率、生活质量,并观察DC-CIK细胞治疗的安全性。结果:成功培养患者的DC-CIK细胞,其中CD3+CD8+、CD3+CD56+细胞比例较培养前显著提高(P<0.05)。与化疗加靶向治疗组相比,联合治疗组患者治疗后外周血细胞CD3+CD8+、CD3+CD56+细胞比例明显升高(P<0.05)。与治疗前相比,联合治疗组患者治疗后T细胞分泌IFN-γ、IL-2水平显著升高(P<0.05)。化疗加靶向治疗组患者治疗后外周血各T细胞亚群比例和T细胞分泌IFN-γ、IL-2水平较治疗前降低,但均无统计学差异(P>0.05)。联合治疗组患者的疾病控制率显著高于化疗加靶向治疗组(86%vs 60%,P<0.01)。联合治疗组患者1年生存率与化疗加靶向治疗组比较无统计学差异(62%vs 56%,P>0.05)。治疗后毒副反应(包括骨髓抑制、恶心呕吐、周围神经毒性)联合治疗组明显轻于化疗加靶向治疗组(P<0.05),治疗后体力食欲改善明显(P<0.05)。结论:与化疗加靶向治疗组相比,DC-CIK联合化疗加靶向治疗治疗晚期结肠癌安全有效,可以提高缓解率,延长生存期,改善患者的生活质量。

DC-CIK联合靶向治疗及化疗在局部晚期乳腺癌新辅助治疗中的临床疗效分析

目的研究DC-CIK联合靶向治疗及化疗在局部晚期乳腺癌新辅助治疗中的临床疗效及安全性。方法选取2013年4月-2014年9月就诊于湖南省郴州市第一人民医院肿瘤科的30例局部晚期乳腺癌患者,采用DC-CIK联合靶向治疗及化疗(表柔比星+环磷酰胺4周期—曲妥珠单抗+多西他赛4周期)为联合治疗组;选取临床资料相近的同期进行靶向治疗及化疗(表柔比星+环磷酰胺4周期—曲妥珠单抗+多西他赛4周期)的30例局部晚期乳腺癌患者为对照组;比较两组患者治疗后的免疫功能、近期疗效、1年生存率、生活质量,并观察DC-CIK细胞治疗的安全性。结果成功培养患者的DC-CIK细胞,其中的CD3^+CD8^+、CD3^+CD56^+细胞比例较培养前显著提高(P<0.05)。与对照组比较,联合治疗组患者治疗后外周血细胞CD3^+CD8^+、CD3^+CD56^+细胞比例显著升高(P<0.05)。与治疗前比较,联合治疗组患者治疗后T细胞分泌IFN-γ、IL-2水平显著升高(P<0.05)。对照组患者治疗后外周血各T细胞亚群较治疗前降低,但差异无统计学意义(P>0.05)。对照组患者IL-2、IFN-γ水平较治疗前稍降低。联合治疗组患者的RR为70%,显著高于对照组的56.6%(P<0.05);联合治疗组患者1年生存率为62%,与对照组56%的差异无统计学意义(P>0.05)。联合治疗组患者的不良反应(包括骨髓抑制、恶心呕吐、周围神经毒性)明显轻于对照组(P<0.05),联合治疗组患者治疗后体力食欲较对照组改善明显(P<0.05)。结论与对照组比较,DC-CIK联合靶向治疗及化疗晚期乳腺癌安全有效,可以提高缓解率,改善患者的生活质量。

人LIGHT和HSV-TK-EGFP基因共转染的MSCs体外抗肿瘤免疫研究

目的研究与单纯疱疹病毒的糖蛋白D竞争结合单纯疱疹病毒进入介导物(herpes virus entry mediator,HVEM)的淋巴毒素类似物(homologous to lymphotoxins,exhibits inducible expression,and competes with HSV glycoprotein D for HVEM,a receptor expressed by T lymphocytes,LIGHT)基因和单纯疱疹病毒胸苷激酶(herpes simplex virus thymidine kinase,HSV-TK)基因共转染的骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)在体外的抗肿瘤免疫功能。方法将p IRES2-LIGHT基因和HSV-TK-EGFP基因共转染小鼠骨髓间充质干细胞(MSCs/LT组),以转染空载体(MSCs/mock组)和转染HSV-TK-EGFP基因(MSCs/T组)的骨髓间充质干细胞作对照。流式细胞仪检测LIGHT分子和HSV-TK-EGFP分子在稳定转染的骨髓间充质干细胞上的表达。MTT法和ELISA法检测3组骨髓间充质干细胞在体外对T淋巴细胞的增殖以及其分泌细胞因子白介素-2(interleukin-2,IL-2)、干扰素-γ(interferon-gamma,IFN-γ)和IL-10的影响,并进一步观察3组细胞在体外向乳腺癌细胞株TUBO的迁移情况。结果流式细胞仪检测发现,MSCs/LT能稳定高表达LIGHT分子和HSV-TK-EGFP分子,在加入20μmol/L更昔洛韦诱导3天后99.6%细胞发生凋亡。体外细胞共培养实验表明,与MSCs/mock和MSCs/T组比较,MSCs/LT组骨髓间充质干细胞能显著地促进抗人CD3单抗刺激的T细胞增殖(P<0.05);同时能明显促进T细胞分泌IL-2、IFN-γ和IL-10(均P<0.05)。体外迁移实验结果表明,MSCs/LT、MSCs/mock和MSCs/T组细胞均有向乳腺癌细胞株迁移的特性,3组间差异无统计学意义(P>0.05)。结论共转染人LIGHT和HSV-TK-EGFP基因的骨髓间充质干细胞稳定高表达LIGHT和HSV-TK-EGFP分子,通过促进T淋巴细胞增殖和IL-2、IFN-γ和IL-10等细胞因子的分泌而发挥抗肿瘤免疫功能。

红鲫C1HD近交系RAPD标记的建立

目的建立红鲫C1HD近交系的RAPD标记。方法从80条随机引物中筛选出20条扩增效果和多态性较好的引物,对8尾红鲫C1HD近交系和8尾普通红鲫基因组DNA进行RAPD扩增。结果S333引物扩增出一条特异性条带,大小约为2.1 kb。结论S333引物扩增出的特异性条带可以作为区分普通红鲫与红鲫C1HD近交系的分子遗传标记。

红鲫与金鱼对洞庭湖外睾吸虫感染的对比实验

目的建立洞庭湖外睾吸虫的宿主动物模型。方法将红鲫与金鱼分别投放於含有洞庭湖外睾吸虫尾蚴钉螺的去氯自来水中自然感染,分阶段解剖观察。结果红鲫与金鱼对洞庭湖外睾吸虫尾蚴的感染率均为100%,并且尾蚴发育成成熟囊蚴。实验过程中,金鱼死亡3尾,而红鲫无一尾死亡。结论红鲫与金鱼均可作为洞庭湖外睾吸虫的宿主动物模型。红鲫作为洞庭湖外睾吸虫宿主动物模型更理想。