新型Bcl-2小分子抑制剂的设计、合成与初步活性评价

目的设计并合成一系列新型Bcl-2小分子抑制剂,测试其对Bcl-2和Bcl-2 G101V(Bcl-2突变体)与BH3-only蛋白相互作用的抑制活性,初步探究其构效关系,为后续相关研究提供参考。方法以临床化合物BGB-11417为先导化合物,通过骨架跃迁等方法,设计新型含螺环结构的Bcl-2小分子抑制剂。以苯甲醛为原料,通过取代、环化和偶联等反应合成目标化合物,并通过1H NMR和LC-MS进行结构确定。采用时间分辨荧光共振能量转移(TR-FRET)评价目标化合物对Bcl-2和Bcl-2 G101V(Bcl-2突变体)与BH3-only蛋白相互作用的抑制能力。结果共合成8个新型螺环Bcl-2小分子抑制剂,其中29a[IC_(50)(Bcl-2):0.8 nmol·L^(-1),IC_(50)(Bcl-2 G101V):55.41 nmol·L^(-1)],29d[IC_(50)(Bcl-2):0.27 nmol·L^(-1),IC_(50)(Bcl-2 G101V):18.65 nmol·L^(-1)]对Bcl-2和Bcl-2 G101V与BH3-only蛋白的相互作用有较好的抑制活性。结论建立了一种新型螺环Bcl-2小分子抑制剂合成方法,发现了对Bcl-2和Bcl-2 G101V(Bcl-2突变体)与BH3-only蛋白相互作用有较好抑制活性的新化合物,其中29d具有进一步研究的价值。

新型BTK PROTAC降解剂的设计合成及活性评价

目的设计合成系列以伊布替尼类似物为布鲁顿酪氨酸激酶(bruton′s tyrosine kinase,BTK)激酶配体的蛋白降解靶向嵌合体(proteolysis targeting chimeras,PROTAC)降解剂,并初步评价其体外活性。方法以3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺为起始原料,通过取代、还原胺化、脱保护和水解等反应合成一系列新型PROTAC;通过MTS法和蛋白免疫印迹法(Western-blot)分别测定目标化合物对OCI-LY10细胞的增殖抑制能力和BTK降解活性;通过分子对接考察分子配体与BTK蛋白的结合模式。结果共合成了14个BTK PROTAC降解剂,大部分化合物都具有一定的体外活性,其中化合物15a表现出了较好的细胞增殖抑制活性(IC_(50)=7.15 nmol·L^(-1))和BTK降解活性(DC_(50)<10 nmol·L^(-1))。结论合成了结构新颖、活性较好的BTK PROTAC降解剂,对其构效关系进行了初步探索,可为BTK PROTAC降解剂的进一步研究提供参考。

冬凌草的化学成分及其抗肿瘤活性

目的研究冬凌草的抗癌活性成分。方法利用硅胶柱色谱对冬凌草的乙醇冷浸提取物进行分离,根据化合物的理化性质和光谱数据确定其结构并进行冬凌草甲素和冬凌草乙素的抗癌活性对比。结果分离得到12个化合物,分别鉴定为α香树脂醇(1)、β谷甾醇(2)、熊果酸(3)、齐墩果酸(4)、水杨酸(5)、sideritoflavone(6)、冬凌草甲素(7)、冬凌草乙素(8)、冬凌草丙素(9)、胡萝卜苷(10)、enmenol1αOβDglucoside(11)、葡萄糖(12)。冬凌草甲素对人黑色素瘤细胞A375S2、小鼠纤维肉瘤细胞L929、人红白血病细胞系K562、人组织淋巴瘤细胞U937以及人早幼粒白血病细胞HL60都有较好活性而对人外周血单核细胞(PBMC)杀伤作用较弱。结论Sideritoflavone为首次从该植物中分离得到。冬凌草甲素比冬凌草乙素有更好的抗癌活性,且其抗癌活性有较强的选择性。

血竭素高氯酸盐诱导人宫颈癌HeLa细胞凋亡的机制

目的 研究血竭素高氯酸盐诱导HeLa细胞凋亡机制。方法 MTT法测定血竭素高氯酸盐对HeLa细胞 的细胞毒作用。通过显微镜,荧光染色观察细胞形态学变化,用琼脂糖凝胶电泳检测DNA片断化。用Western印迹 法分析药物对蛋白质表达的影响。结果 血竭素高氯酸盐明显抑制HeLa等细胞的增殖,诱导HeLa细胞调亡。 Caspase 1, 3, 8, 9及家族抑制剂可明显抑制血竭素高氯酸盐诱导的凋亡。Western印迹结果显示血竭素高氯酸盐 作用12h后Bax及Bcl XL的表达明显改变,caspase 3, 8前体及caspase 3底物ICAD和PARP发生降解。结论 血 竭素高氯酸盐(60μmol·L-1)通过改变Bax/Bcl XL的表达激活caspase途径诱导HeLa细胞凋亡。

冬凌草甲素通过线粒体途径诱导人黑色素瘤A375-S2细胞凋亡

目的 研究冬凌草甲素诱导人黑色素瘤 A375 - S2细胞凋亡的作用机制。方法 MTT法检测冬凌草甲素对 A375 - S2细胞生长的影响及各种 Caspase抑制剂、佛波酯 (PMA)、PKC抑制剂 H- 7对冬凌草甲素作用的影响 ;DNA凝胶电泳法检测细胞凋亡 ;L DH法测定乳酸脱氢酶 (L DH)活力。结果 冬凌草甲素对 A375 - S2细胞生长有显著抑制作用 ,并能显著诱导 A375 - S2细胞发生凋亡 ,其作用呈明显的量效关系和时间依赖性。形态学观察可见凋亡小体的形成 ,琼脂糖凝胶电泳可见凋亡典型的 DNA梯带 ;Caspase家族抑制剂 ,Caspase- 9抑制剂能显著抑制冬凌草甲素诱导 A375 - S2细胞的凋亡。大剂量 PMA(4 0 0 ng/m L)显著抑制 34.3μmol/L 冬凌草甲素诱导 A375 - S2细胞凋亡 ,而小剂量 PMA(10 ng/m L)与冬凌草甲素有协同杀死细胞的作用 ,且 PKC抑制剂 H- 7也可下调这种凋亡作用。 Caspase- 3的抑制剂可抑制 Caspase- 3的活力升高。结论 适宜浓度的冬凌草甲素 (34.3μm ol/L )诱导A375 - S2细胞凋亡 ,这种作用是通过线粒体调节 Caspase的激活来实现的。

冬凌草甲素通过改变Bax/Bcl-xL表达激活caspase-3诱导A375-S2细胞凋亡

目的 研究冬凌草甲素诱导人黑色素瘤A375 S2细胞凋亡的作用原理。方法 形态学观察 ,DNA凝胶电泳法及WesternBlot法。结果 冬凌草甲素能明显诱导A375 S2细胞发生凋亡 ,其作用呈明显的量效关系和时间依赖性。形态学观察可见凋亡小体的形成 ,琼脂糖凝胶电泳可见凋亡典型的DNA梯带 ;caspase 3的抑制剂能阻止caspase 3的活力升高 ;免疫印迹结果显示冬凌草甲素作用A375 S2细胞 12h改变Bax与Bcl xL蛋白的表达 ;且发现caspase 3的底物PARP蛋白在 12h时被降解。结论 冬凌草甲素 (34 3μmol·L-1)诱导A375 S2细胞凋亡 ,这种作用是通过改变了Bax/Bcl xL的表达比率 ,激活caspase 3而实现的。

水飞蓟宾对异丙肾上腺素引起的大鼠乳鼠心肌细胞损伤的保护作用及其机制

水飞蓟宾(silibinin)为从菊科植物水飞蓟(Silybum marianum)的种子和果实中提取得到的黄酮类单体成分。本研究观察水飞蓟宾对β-肾上腺素受体激动剂异丙肾上腺素对培养乳鼠心肌细胞损伤的影响,并对其机制进行研究。采用MTT法测定细胞存活率,酶联法测定细胞丙二醛(maleic dialdehyde,MDA)和细胞培养液中乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)的含量以及超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)的活性,流式细胞仪测定线粒体膜电位(ΔΨ),以及Western blotting检测与线粒体相关蛋白的表达。与模型组相比,水飞蓟宾使细胞受损伤的程度降低,并且增加SOD的活性,抑制了细胞膜电位的降低,并且改善Bcl-2家族蛋白中Bax/Bcl-2的表达比率,上调Bax上游去乙酰化酶SIRT1蛋白的表达。水飞蓟宾通过上调线粒体上游Bax/Bcl-2的表达比率与SIRT1蛋白的表达,改善了线粒体的功能,从而对由异丙肾上腺素引起的培养乳鼠心肌细胞损伤有明显的保护作用。

紫草素诱导HeLa细胞凋亡经过caspase激活的机制

目的 研究紫草素诱导HeLa细胞凋亡的作用机制。方法 MTT法测定紫草素对HeLa细胞的生长抑制实验 ,荧光染色等观察细胞形态学变化 ;DNA电泳、LDH法研究细胞死亡的途径。免疫印迹实验检测相关蛋白的表达。结果 紫草素具有明显的抑制HeLa细胞生长的作用 ,并呈明显的量效关系和时间依赖性 ,4 0 μmol·L- 1 的紫草素在 2 4h内可诱导细胞凋亡 ,凋亡途经与死亡受体信号途径相似 ,经历了半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶 3和 8(caspase 3和caspase 8)的激活。结论 4 0 μmol·L- 1 的紫草素可明显地诱导HeLa细胞凋亡 。

去甲斑蝥素通过半胱氨酸天冬氨酸酶诱导HeLa细胞凋亡

目的 :研究去甲斑蝥素 (NCTD)通过半胱氨酸天冬氨酸酶 (caspase)途径诱导人宫颈癌HeLa细胞凋亡的机制。方法 :采用MTT法、形态学观察、DNA凝胶电泳、乳酸脱氢酶 (LDH)检测及Westernblot检测法。结果 :去甲斑蝥素能显著诱导HeLa细胞发生凋亡 ,caspase -家族、caspase - 3、- 8、- 10抑制剂可以部分地抑制NCTD诱导的细胞死亡。细胞凋亡时caspase - 3、- 8、- 9酶活力升高 ,而且caspase - 3的作用底物 -caspase - 3激活的DNA酶抑制物 (ICAD)蛋白表达下降。结论 :去甲斑蝥素通过激活caspase途径诱导HeLa细胞凋亡。

吴茱萸碱诱导人黑色素瘤A375-S2细胞的两种死亡机制

目的 研究吴茱萸碱诱导A375 S2细胞死亡机制。方法 MTT法测定吴茱萸碱对A375 S2的细胞毒作用。通过倒置光显微镜 ,荧光染色 ,DNA电泳观察细胞形态学变化。应用流式细胞分析技术研究药物对细胞周期的影响。结果 吴茱萸碱明显抑制A375 S2生长 ,在 2 4h前可诱导A375 S2凋亡 ,亚二倍体峰出现 ,caspase蛋白酶被激活 ,2 4h后启动坏死途径 ,caspase蛋白酶抑制剂不能抑制细胞死亡。结论 吴茱萸碱诱导A375 S2死亡时早期启动了caspase依赖性的非经典凋亡途径 。

土槿皮乙酸体外诱导A375-S2细胞凋亡

目的 :研究土槿皮乙酸 (pseudolaricacidB)诱导A375 S2细胞凋亡的作用 ,探讨其抗癌作用机制。方法 :采用噻唑蓝 (MTT)法、形态学观察、DNA凝胶电泳及Westernblot检测法。结果 :土槿皮乙酸可剂量 时间依赖性的诱导A375 S2细胞凋亡 ,5 μmol·L-1土槿皮乙酸处理 36h的细胞 ,Hoechst 332 5 8荧光染色后有明显的凋亡小体出现 ;凝胶电泳法显示有明显的DNAladder出现。细胞内抑制凋亡蛋白Bcl 2 ,Bcl xL和caspase激活的DNA酶抑制物(ICAD)表达量时间依赖性地减少 ,而促凋亡蛋白Bax表达量增加。结论 :土槿皮乙酸对A375 S2细胞的杀伤作用主要通过诱导细胞凋亡 ,降低Bcl 2 ,Bcl xL和ICAD蛋白的表达 ,增加Bax蛋白表达为其诱发A375

紫草素诱导A375-S2细胞凋亡的分子机制研究

目的 研究紫草素诱导人黑色素瘤A375 S2细胞凋亡的分子机制。方法 MTT法、Hoechst33258荧光染色、DNA片段化分析、Westernblot、流式细胞分析以及caspase活力分析等。结果 10μmol·L-1紫草素可明显地抑制A375 S2细胞的生长,其半数有效抑制浓度IC50为 (10 9±1 8)μmol·L-1。10μmol·L-1紫草素可诱导A375 S2细胞凋亡,并经历了caspase 9和caspase 3的激活。紫草素促进p53蛋白的积聚,Bax蛋白表达的上调和Bcl xL蛋白表达的下调,进而导致细胞色素C的释放,致使细胞凋亡。紫草素可使细胞周期停止在G1 期。结论 紫草素可诱导A375 S2细胞周期停止在G1 期,其诱导细胞凋亡的途径经过p53介导的Bax和caspase 9的激活。

去甲斑蝥素诱导小鼠肺纤维瘤L929细胞凋亡

目的:研究去甲斑蝥素 (norcantharidin,NCTD)抑制小鼠肺纤维瘤 (L929)细胞的作用机制。方法:用MTT法测定细胞生长抑制率。采用Hoechst33258染色、DNA凝胶电泳和乳酸脱氢酶 (LDH)活力检测细胞凋亡。用免疫印迹法(Westernblot)分析了细胞外信号调节激酶 (extracellularsignal regulatedkinase, ERK)和磷酸化ERK、c JunN 末端激酶 (C JunN terminalkinase, JNK)和磷酸化JNK蛋白表达的变化。结果:NCTD诱导L929细胞凋亡。JNK抑制剂 (SP600125)与ERK抑制剂(PD98059),可明显抑制NCTD对细胞的杀伤作用。同时磷酸化ERK和磷酸化JNK表达增加。结论:NCTD对L929细胞的细胞毒作用是通过诱导其凋亡而发生的,且呈时间剂量依赖性。这种作用可能与JNK,ERK通路激活有关。

针灸治疗实验性骨质疏松症对肿瘤坏死因子基因表达的影响

目的 :通过肿瘤坏死因子 (TNFα)基因表达 ,研究针灸治疗绝经后骨质疏松症的作用机理。方法 :8个月龄SD雌性大鼠 40只 ,双侧卵巢切除后 ,均分为模型、针刺、艾灸、西药四组。相同水、饲料喂养 3个月后 ,针刺、艾灸、西药组治疗 3个疗程。将 40只鼠断头取血 ,检测血清中骨钙素(BGP)、雌二醇 (E2 )含量 ;取双侧股骨测骨密度 ;无菌条件下取出大鼠右侧胫骨 ,分离骨髓细胞 ;利用对L92 9细胞的杀伤作用检测TNFαmRNA生物活性 ;利用RT PCR技术检测TNFαmRNA表达。结果 :针刺、艾灸组BGP、E2 较模型组有显著增高 (P <0 0 5) ;L92 9死亡率较模型组明显减少(P <0 0 0 1) ;RT PCR显示TNFαmRNA表达较模型组明显减少。结论 :针刺、艾灸治疗绝经后骨质疏松症是在基因转录后水平上进行的 ,即针灸治疗绝经后骨质疏松症是通过调控TNFαmRNA表达 。

去甲斑蝥素诱导人黑色素瘤A375S2细胞凋亡

目的:研究去甲斑蝥素(NCTD)诱导人黑色素瘤A375-S2细胞凋亡的机制。方法:采用MTT法、形态学观察、DNA凝胶电泳及Westernblot检测法。结果:去甲斑蝥素可诱导A375-S2细胞发生凋亡。半胱氨酸天冬氨酸酶(caspase)-3,-9抑制剂可以部分的抑制NCTD诱导的细胞死亡。细胞凋亡时caspase-3,8,-9酶活力升高,caspase3底物caspase-3激活的DNA酶抑制物(ICAD)蛋白表达下降,同时Bcl2/Bax、BclxL/Bax蛋白表达比率明显降低。结论:去甲斑蝥素通过激活caspase和Bcl-2家族诱导A375-S2细胞凋亡。

冬凌草甲素通过激活caspase诱导HeLa细胞凋亡

目的 研究冬凌草甲素诱导人子宫颈癌HeLa细胞凋亡的作用机制。方法 采用形态学观察、DNA凝胶电泳及LDH法。结果 冬凌草甲素能显著诱导HeLa细胞发生凋亡 ,其作用呈明显的量效关系和时间依赖性。形态学观察可见凋亡小体的形成 ,琼脂糖凝胶电泳可见凋亡典型的DNA梯带 ;caspase家族抑制剂 ,caspase 1和 3抑制剂能抑制冬凌草甲素诱导HeLa细胞的凋亡 ,6 8 7μmol·L-1冬凌草甲素作用HeLa细胞 12h使caspase 3的活力提高 2倍。 结论 适宜浓度以下 ,冬凌草甲素 (6 8 7μmol·L-1)诱导HeLa细胞凋亡具有浓度与时间依赖性 ,大剂量 (137 4 μmol·L-1)时 ,冬凌草甲素诱导HeLa细胞坏死的程度强于凋亡 ,且通过激活caspase途径诱导HeLa细胞凋亡。

吴茱萸碱部分通过人白介素1所介导的途径诱导人黑色素瘤A375-S2细胞死亡

目的研究吴茱萸碱(evodiamine)诱导人黑色素瘤A375S2细胞死亡的作用机制及其与细胞因子人白介素1(interleukin1,IL1)信号转导途径之间的关系。方法MTT检测法,DNA凝胶电泳法及Westernblot法。结果IL1受体拮抗因子(IL1receptorantagonist,IL1ra)在24h时能够部分抑制吴茱萸碱诱导的A375S2细胞死亡。吴茱萸碱在诱导A375S2细胞死亡的过程中,Fas配体(Fasligand,FasL)的蛋白表达量升高,激活其下游的caspase8和caspase3,进而引起DNA的损伤并激活p53蛋白,同时Bax/Bcl2的蛋白表达比例被上调。在经过IL1ra预处理后,这些变化均被部分的抑制或逆转。结论吴茱萸碱诱导A375S2细胞死亡的作用是部分通过IL1介导的信号转导途径而实现的。

吴茱萸碱诱导人宫颈癌HeLa细胞凋亡过程中非caspase调控因素

目的 研究吴茱萸碱 (evodiamine)诱导人宫颈癌HeLa细胞凋亡机制中非caspase调控因素。方法 MTT法 ,WesternBlot免疫印迹法 ,流式细胞术。结果 虽吴茱萸碱对HeLa细胞杀伤作用介于化疗药物放线菌素D (actino mycineD)、顺铂 (cisplatin)和 5 氟尿嘧啶 (5 fluorouracil,5 Fu)之间 ,但对细胞撤除药物后的继续增殖能力的影响相似。MAP激酶 (MAPK)抑制剂中ERK和p38的抑制剂不影响细胞死亡 ,而JNK抑制剂 (SP6 0 0 12 5 )可协同吴茱萸碱杀死细胞 ,但吴茱萸碱并未影响JNK及磷酸化JNK蛋白表达。吴茱萸碱可将HeLa细胞周期阻滞在G2 /M期 ,发生大量凋亡。结论 对JNK激酶的抑制可协同促进吴茱萸碱对HeLa细胞的杀伤作用 ,而且吴茱萸碱可将细胞周期阻滞在G2 /M期发生凋亡。