小鼠肾移植模型:3种创新术式

目的:小鼠肾移植模型手术难度大,成功率低,难以掌握,本研究拟改良并探索新型小鼠肾移植模型,为移植免疫基础研究提供借鉴。方法:分别建立小鼠腹部缝合法原位肾移植模型、腹部套管法原位肾移植模型和颈部套管法异位肾移植模型共57对供受体。供受体采用BALB/c小鼠或C57BL/6小鼠;供受体均选用8~12周龄、体重20~25 g的雄性无特定病原级小鼠。总结和比较3种模型的技术特点和手术时间、并发症、病理学检查等术后早期指标。结果:成功建立3种不同手术方式的小鼠肾移植模型。3组小鼠供肾热缺血时间比较差异无统计学意义(P=0.5104),腹部缝合组的供体手术总时间与腹部套管组和颈部套管组比较最短[(18.3±3.6)min vs(26.2±4.7)min和(22.8±2.5)min;均P<0.0001]。冷缺血时间比较3组差异有统计学意义(P<0.0001),腹部套管组、颈部套管组及腹部缝合组分别为(88.8±6.7)、(60.8±4.1)及(43.3±5.0)min。受体由于吻合方式不同,颈部套管用时最短[(17.6±2.7)min],腹部套管用时最长[(38.8±5.4)min]。受体的总手术时间比较差异有统计学意义(P<0.0001),腹部缝合组、颈部套管组及腹部套管组分别为(44.0±6.9)、(64.1±5.2)及(80.0±6.0)min。在并发症发生方面,32只腹部缝合组中6只发生术中出血,其中1只因为动脉内膜损伤出血,5只为血管开放后出血;6只小鼠发生输尿管并发症,包括输尿管膀胱吻合口狭窄、坏死以及肾盂积水;2只小鼠术后发生腹腔感染。腹部套管组未发生术中出血,但6只出现动脉轻度狭窄,5只静脉狭窄,4只动脉损伤,4只动脉血栓,2只输尿管并发症,没有小鼠在术后发生感染。在颈部套管组中,13只小鼠均未发生术中出血、动脉内膜损伤、动脉/静脉狭窄以及血栓,5只发生输尿管并发症,包括输尿管坏死和感染,是颈部套管组最主要的并发症。3组小鼠在移植后7 d肾功能保持稳定;苏木精-伊红和过碘酸希夫染色显示3种手术方式的移植物在急性排斥反应方面差异均无统计学意义(均P>0.05)。结论:3种术式均能成功建立小鼠肾移植模型,在近期移植物生存期和排斥反应方面未见明显差别。改良后的腹部缝合法以及腹部套管法在研究应用中各有优势,首创的小鼠颈部套管法异位肾移植模型的制备相对简单、小鼠创伤较小,可为异种移植、二次移植及局部淋巴引流探索等研究提供更多选择,但供肾摘取难度大,输尿管感染发生率高,远期存活还需更多模型验证。本研究为不同研究需求下选择小鼠肾移植模型的类型提供了重要借鉴意义。

单细胞测序揭示心脏移植物中树突状细胞和B细胞的抗原提呈特性

目的探讨心脏移植物中树突状细胞(DC)和B细胞的抗原提呈特性。方法将BALB/c小鼠的心脏移植到C57BL/6J小鼠腹腔内,术后5 d(急性排斥反应早期)提取并流式分选心脏移植物中的CD45+细胞,进行单细胞RNA测序。以心脏移植物中的DC和B细胞的亚群为主要对象,通过生物信息学分析和流式细胞术,研究其在心脏移植后变化趋势、抗原提呈能力及其与T细胞之间的胞间通讯情况。采用基因本体(GO)功能富集差异分析佐证细胞亚群特异性功能和细胞亚群注释可信度。结果生发中心样B细胞(GC-L B)是急性排斥反应期心脏移植物中增幅最大、比例高达87%的B细胞亚群,经典DC(cDC)2是心脏移植急性排斥期间唯一大量增多的DC亚群,占44%,是心脏移植后与T细胞的胞间通讯中占据最高通讯强度的DC亚群;单核样DC(moDC)与记忆性B细胞(MBC)是未心脏移植中T细胞输入信号的主要发出者,而在心脏移植后急性排斥反应期中,转变为cDC2与GC-L B;其中MBC与GC-L B分别是心脏移植前后的主要T细胞输入信号来源。结论在未移植心脏和移植心脏指向T细胞的胞间通讯中,与DC相比,B细胞均占据更高的通讯数量和权重,推测在心脏移植急性排斥反应早期,B细胞的抗原提呈活动比DC更加活跃,强度更大。

81例成人IgA肾病肾移植的临床疗效

目的:免疫球蛋白A肾病(immunoglobulin A nephropathy,IgAN)是最常见的肾病类型之一,肾移植手术是终末期肾病最有效的治疗手段。本研究旨在分析成人IgA肾病肾移植的临床疗效,探讨IgA肾病肾移植围手术期及中远期的有效性与安全性。方法:回顾性纳入2018年1月至2022年1月中南大学湘雅二医院实施的所有81例成人IgA肾病肾移植的临床资料和随访数据。受者年龄(34.1±9.9)岁,其中男性47例(58.0%),体重指数为(20.8±3.2)kg/m2,人白细胞抗原错配数为(3.5±1.2)个。总结受者肾移植手术后第1、5、7天以及出院时的估算肾小球滤过率(estimated glomerular filtration rate,eGFR)及每日24 h尿量情况,综合评估其移植肾恢复情况以及并发症发生情况。评估随访第6、12、24、36、48个月的eGFR、尿蛋白、尿隐血等指标。结果:随访(25.7±15.8)个月。围手术期所有患者均未发生原发性移植肾无功能,51例(62.9%)患者属于移植物功能立即恢复,16例(19.8%)患者属于移植物功能缓慢恢复,两者占总数的82.7%;14例患者出现了移植物功能延迟恢复,占17.3%。共发生19例围手术期并发症,包括急性排斥反应9例、尿瘘5例、双下肢血管血栓1例、淋巴瘘4例。随访第6、12、24、36及48个月的eGFR分别为(65.3±22.9)、(67.6±23.0)、(64.3±21.8)、(65.9±24.7)及(68.7±31.2)mL/(min·1.73 m2)。中长期随访eGFR均保持较高水平,最长随访至56个月,eGFR波动仍较小;末次随访尿蛋白阳性率与尿隐血阳性率较低。移植肾IgAN复发4例,占总患者的4.94%,未出现严重肾功能不全。3例患者因重症肺炎、排斥反应、移植肾结石出现移植肾失功能,总体移植肾存活率达95%以上,随访至2022年1月所有患者存活率100%。结论:成人IgAN肾病肾移植近期效果显著,受者受益明显,中远期效果良好,IgAN复发率较低,且很少引起严重肾功能损害。

成人供肾双肾移植的临床疗效

目的探讨成人供肾双肾移植(DKT)的临床疗效。方法回顾性分析2016年9月至2020年12月中南大学湘雅二医院收治的13例成人供肾DKT手术供受者的病例资料。13例供者年龄(53.5±12.4)岁, 体质量指数(BMI)(24.3±2.8)kg/m^(2), 3例有糖尿病史, 8例有高血压病史。13例中, 11例符合美国器官共享联合网络(UNOS)双肾移植标准, 6例符合Remuzzi评分双肾移植标准, 入院时和获取供肾前血清肌酐(SCr)分别为(132.9±54.1)μmol/L和(228.7±112.4)μmol/L。13例受者年龄(39.3±8.9)岁, BMI(20.2±2.4)kg/m^(2)。所有受者均接受ABO血型相合的肾移植, 2例双肾分别放置于双侧髂窝。12例移植肾开放血运后颜色鲜红、充盈迅速, 输尿管立即可见尿液流出, 1例双肾颜色偏暗, 血管搏动弱。记录受者围手术期移植肾功能恢复时间(从手术当天至SCr自然降至正常范围的时间)、移植肾功能延迟恢复(DGF)、急性排斥(AR)、输尿管并发症、手术切口并发症情况, 以及受者末次随访时的SCr、估算肾小球滤过率(eGFR)、尿蛋白和移植物结局。采用单因素logistic回归分析评估影响受者结局的危险因素。结果本组13例受者中, 10例出院时SCr降至正常范围内, 移植肾功能恢复时间(13.8±13.0)d;3例出院时SCr分别为300.0、149.0、152.5 μmol/L。4例发生DGF, 4例发生AR;并发症分别为输尿管狭窄1例, 尿瘘1例, 术后切口裂开1例, 分别予抗排斥、置入双J管、持续导尿维持膀胱空虚治疗和切口二次缝合, 出院前均治愈。术后中位随访28(15.5, 31.0)个月, 10例移植物功能良好, 2例出现移植肾功能不全, 1例移植肾失功。除移植肾失功患者外, 末次随访时SCr(144.2±101.3)μmol/L, eGFR(52.9±21.2)ml/min;4例末次随访尿蛋白阳性。单因素分析结果显示, 供者的年龄、BMI、糖尿病史、高血压病史、入院时SCr均与DGF和移植肾功能损伤无明显相关性(P>0.05)。结论成人供肾DKT的近期和中期效果良好。

婴幼儿供肾成人双肾移植42例

目的回顾性分析单中心婴幼儿供肾成人双肾移植临床疗效,探讨供、受者选择及不同手术方式的效果差异。方法回顾性总结2012年12月至2019年5月中南大学湘雅二医院实施的婴幼儿供肾成人双肾移植42例,根据供肾是否满足三"5"标准(供者年龄>5个月、供者体重>5 kg、供肾长径>5 cm)分为两组,两组受者再根据采用不同的手术方式分为术式A亚组(经典En-bloc术式)、术式B亚组(分离式双肾移植)、术式C亚组(改良术式)。分析其临床资料及预后。结果经中位随访时间56个月(11~92个月)。供肾满足三"5"标准组受者均未发生栓塞事件;末次随访估算肾小球滤过率:术式A为123.4 ml/min(92.2~156.6 ml/min)、术式B为97.2 ml/min(81.3~116.6 ml/min)、术式C为133.9 ml/min(133.9~133.9 ml/min);供肾不满足三"5"标准的受者中,术式A和术式C受者均未发生栓塞事件(0%),术式B中3例受者发生移植物栓塞(2例单肾栓塞、1例双肾栓塞)(3/5,60%),显著高于术式A、C组(P<0.05);末次随访尿蛋白(+):术式A 1例(1/2,50%)、术式B 3例(3/5,60%),术式C 0例,术式C受者尿蛋白阳性率显著低于术式A、B(P<0.05);末次随访估算肾小球滤过率:术式A为82.4 ml/min(80.9~83.9 ml/min)、术式B为71.8 ml/min(46.1~114.2 ml/min)、术式C为122 ml/min(83.3~142.4 ml/min)。满足三"5"标准供者组和不满足三"5"标准供者组的受者1年移植肾存活率分别为100%和89.5%;3年移植肾存活率分别为100%和84.2%。结论婴幼儿供肾可以加以利用,满足三"5"标准的供肾对术式的要求不高,预后较好;不满足三"5"标准的极低龄、极低体重供者的供肾,采用利用主动脉远端建立流出道的改良术式似可降低栓塞的发生率、改善近期预后,并减轻移植物高灌注损伤、改善远期预后。

外周血相关指标与肾移植术后BK病毒感染患者预后的相关性

目的探讨肾移植术后BK病毒感染患者预后与外周血相关指标的相关性。方法回顾性分析2018年8月至2021年8月中南大学湘雅二医院收治的131例肾移植术后首次感染BK病毒患者的病例资料,男93例(71.0%),女38例(29.0%)。年龄(37.5±11.3)岁。尸体供肾移植109例(83.2%),亲属供肾移植22例(16.8%)。肾移植术后首次感染BK病毒时间为(188.7±16.6)d。血清肌酐(127.5±39.5)μmol/L。血、尿BK病毒同时阳性25例(19.1%),仅尿BK病毒阳性106例(80.9%)。131例感染BK病毒后的治疗方案中,70例调低他克莫司血药浓度,12例将他克莫司换为环孢素,49例不详。25例血BK病毒阳性患者BK病毒DNA载量为5.6(2.4,12.3)×10^(3)拷贝/ml,感染时白细胞计数(WBC)(5.8±2.0)×10^(9)/L,血红蛋白(Hb)(122.0±22.4)g/L,血小板计数(PLT)(187.1±63.1)×10^(9)/L,中性粒细胞计数(NEUT)(3.9±1.7)×10^(9)/L,淋巴细胞计数(LYM)(1.5±0.8)×10^(9)/L,单核细胞计数(MONO)(0.4±0.2)×10^(9)/L,中性粒细胞与淋巴细胞比值(NLR)2.2(1.7,3.5),衍生中性粒细胞与淋巴细胞比值(dNLR)1.7(1.3,2.6),血小板与淋巴细胞比值(PLR)121.3(86.3,227.3),单核细胞与淋巴细胞比值(MLR)0.2(0.1,0.4),淋巴细胞与单核细胞比值(LMR)4.7±2.6。106例尿BK病毒阳性患者BK病毒DNA载量为20.4(0.4,2570.0)×10^(5)拷贝/ml,感染时WBC 6.6(4.8,9.1)×10^(9)/L,Hb(129.0±24.5)g/L,PLT 188.0(147.3,226.5)×10^(9)/L,NEUT 4.6(3.0,6.6)×10^(9)/L,LYM(1.7±0.8)×10^(9)/L,MONO 0.4(0.3,0.5)×10^(9)/L,NLR 2.8(1.9,3.9),dNLR 2.1(1.5,3.0),PLR 120.5(87.0,163.2),MLR 0.2(0.1,0.4),LMR 4.5(2.8,6.7)。根据70例调低他克莫司血药浓度患者治疗前后血、尿BK病毒DNA载量变化情况(分组原则优先考虑血BK病毒DNA载量,其次是尿BK病毒DNA载量),将患者分为BK病毒升高组和BK病毒下降组,比较两组治疗后WBC、Hb、PLT、NEUT、LYM、MONO、NLR、dNLR、PLR、MLR、LMR、他克莫司血药浓度及变化差值、血肌酐及变化差值的差异。结果25例血BK病毒阳性患者BK病毒DNA载量与NLR(r=0.5062,P=0.0098)、dNLR(r=0.5738,P=0.0027)相关,与WBC(r=-0.0185,P=0.9302)、Hb(r=0.0912,P=0.6646)、PLT(r=-0.3931,P=0.0519)、NEUT(r=0.2438,P=0.2401)、LYM(r=-0.3035,P=0.1402)、MONO(r=-0.3279,P=0.1096)、PLR(r=0.1054,P=0.6161)、MLR(r=0.0738,P=0.0.7257)、LMR(r=-0.0738,P=0.7257)无相关性。106例尿BK病毒阳性患者BK病毒DNA载量与WBC(r=0.0222,P=0.8209)、Hb(r=-0.0323,P=0.7423)、PLT(r=0.0847,P=0.3881)、NEUT(r=0.0417,P=0.6713)、LYM(r=0.0010,P=0.9916)、MONO(r=0.0224,P=0.8196)、NLR(r=0.0170,P=0.8623)、dNLR(r=-0.0013,P=0.9892)、PLR(r=0.0387,P=0.6934)、MLR(r=-0.0070,P=0.9433)、LMR(r=0.0070,P=0.9433)均无相关性。70例中,BK病毒上升组37例,BK病毒下降组33例,两组的年龄[(38.4±12.0)岁与(39.0±9.0)岁]、性别[男/女:23/14例与27/6例]、血型[A+/B+/AB+:22/13/2例与26/6/1例]、捐献类型[亲属捐献/尸体捐献:29/8例与27/6例]、治疗后血肌酐[123.0(98.4,140.5)μmol/L与132.0(107.1,162.4)μmol/L]、治疗后血肌酐变化差值[0(-15.7,10.5)μmol/L与-2.0(-9.1,15.0)μmol/L]、治疗后他克莫司血药浓度[(6.7±2.0)ng/ml与(6.5±1.5)ng/ml]、治疗后他克莫司浓度变化差值[-1.4(-3.8,0.6)ng/ml与-1.2(-2.2,1.3)ng/ml]差异均无统计学意义(P>0.05)。BK病毒上升组和BK病毒下降组的MONO差异有统计学意义[0.3(0.2,0.5)×10^(9)/L与0.4(0.3,0.6)×10^(9)/L,P=0.033],两组间WBC[6.6(4.1,8.8)×10^(9)/L与6.8(5.4,8.9×10^(9)/L]、Hb[(133.2±25.3)g/L与(131.6±20.6)g/L]、PLT[185.0(151.0,231.5)×10^(9)/L与196.0(149.0,234.0)×10^(9)/L]、NEUT[4.3(2.4,6.4)×10^(9)/L与4.2(3.1,5.5)×10^(9)/L]、LYM[1.7(1.1,2.2)×10^(9)/L与1.8(1.1,2.3)×10^(9)/L]、NLR[2.5(1.9,3.8)与2.4(1.9,3.7)]、dNLR[2.0(1.5,2.8)与1.9(1.4,2.5)]、PLR[114.9(85.1,159.4)与111.3(77.1,159.6)]、LMR(4.6±2.6与5.2±2.4)、MLR[0.2(0.2,0.4)与0.2(0.2,0.4)]差异均无统计学意义(P>0.05)。结论在感染BK病毒的肾移植受者中,血BK病毒DNA载量与外周NLR、dNLR呈正相关。MONO升高与BK病毒感染预后好转相关。

同卵双生子间活体肾移植的诊治

同卵双生子同胞间活体肾移植术后效果较好,但鲜有报道。2019年10月至2021年2月中南大学湘雅二医院收治2例受者,分别接受其孪生姐妹的肾脏行肾移植。2例受体的原发病分别为急进性肾小球肾炎1例,糖尿病肾病1例。2例术后均接受他克莫司/环孢素+吗替麦考酚酯+甲泼尼松龙三联抗排斥治疗。术后分别随访3.0年和1.5年,移植肾功能均良好。