猪伪狂犬病诊断方法与疫苗研究进展

猪伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus, PRV)可引起妊娠母猪繁殖障碍和新生仔猪神经症状,可感染人类并引起脑炎,使感染者出现严重的神经症状,直接危害人类健康,因此对该病的研究具有重大意义。近年该病在世界范围内广泛分布,对世界养猪业造成了巨大的经济损失,受到国内外学者的高度关注,对该病的研究也日益深入,在诊断方法及防控机制等方面取得了重要进展。论文就近年来猪伪狂犬病诊断方法及疫苗的发展进行综述,以期为在猪伪狂犬病诊断方法和疫苗选择上提供参考。

猪伪狂犬病病毒感染及复制影响因素的研究

猪伪狂犬病(Porcinepseudorabies,PR)是由PR病毒(PRV)引起猪的病毒性传染病,对世界养猪业造成了重大经济损失。猪作为PRV唯一的自然宿主,可引起母猪产死胎、木乃伊胎和屡配不孕;公猪睾丸萎缩、精液质量下降,丧失种用功能;新生仔猪高热、出现神经症状且两周龄以内的仔猪病死率可达100%[1]。2011年之前,由于Bartha-K61株疫苗在我国的广泛使用,PR在我国得到了较好的控制。但自从2011年PRV出现变异之后,现有的PR商品化疫苗只能对动物机体提供部分的免疫保护作用并且尚无特效药物治疗[2]。基于此,本文对影响PRV感染与复制的各类因素的最新研究进展作综述,以期为开发高效抗PRV的新型药物或疫苗提供参考依据。

贵州省2017年~2023年PEDV和PoRVA流行病学调查及PoRVA VP7、VP4基因的遗传演化分析

为了解贵州省猪流行性腹泻病毒(PEDV)和猪A群轮状病毒(PoRVA)的流行情况,本研究对2017年~2023年来自贵州省9个地区139个猪场的165份仔猪粪便样品进行Taq Man RT-qPCR检测,并对PoRVA阳性样品VP7、VP4基因进行RT-PCR扩增、测序,遗传进化分析及其编码氨基酸序列的变异分析。结果显示,PEDV、PoRVA和PEDV+PoRVA的感染率分别为67.88%(112/165)、38.79%(64/165)和21.21%(35/165),且在不同年份、不同地区和不同季节均检出三者的感染。PCR结果显示,本实验扩增出27株PoRVA VP7基因和22株VP4基因;遗传进化分析结果显示共鉴定出6种G型和3种P型,其中G9(29.63%)和P[13](68.18%)为优势基因型,G3、G4、G5、G11、G26、P[6]和P[23]分别占7.41%、22.22%、22.22%、3.70%、14.81%、13.64%、18.18%。21份PoRVA样品鉴定出10种G/P组合基因型,G9P[13](19.05%)为优势组合基因型,G4P[13]、G5P[13]、G3P[13]、G4P[6]、G5P[23]、G9P[23]、G11P[13]、G26P[6]、G26P[13]分别占14.29%、14.29%、9.52%、9.52%、9.52%、9.52%、4.76%、4.76%及4.76%。同源性分析结果显示,27株VP7基因和22株VP4基因序列与NX疫苗株相应基因序列之间的同源性分别为75.5%~94.0%和68.5%~75.6%,氨基酸序列的同源性分别为78.3%~96.6%和72.0%~82.5%,部分PoRVA上述基因序列与国外、人源RVA的同源性最高。氨基酸位点变异分析结果显示,与NX疫苗株相比,所测PoRVA VP7和VP4氨基酸序列均存在特征性位点的变异,其中G型PoRVA VP7无氨基酸位点的缺失和插入,G9型PoRVA VP7存在3处(I^(208)T、K^(212)A/V/T、V^(271)I)变异,G3、G4、G5、G11和G26型PoRVA VP7存在17处(S^(28)R/K、A^(29)I/T/M/V、L^(40)I/V、V^(44)L、S^(71)T、Q^(73)G/N/S/E、S^(90)A/Q/K/R、G^(94)N/S/A/K、N^(100)D/E、T^(122)A/S、T^(147)A/G/N/D、Q^(189)S/T、I^(208)L/Q/T、K^(212)T/I/P/N、A^(213)N/T/D、E^(267)D/N、V^(271)I)变异;3株P[6]型PoRVA VP4在aa136缺失T,13株P[13]型PoRVA VP4在aa188~aa189插入E/D~Y/F,P[6]、P[13]和P[23]型PoRVA VP4存在26处(I^(92)V、Q^(94)E、Q^(113)T/P/N、T^(114)N/Q/S/R、T^(115)Q/E、N^(116)S/L/T、P^(148)A/Q/V/S/I、T^(180)E/N/D、P^(162)T、I^(174)V/L、C^(269)Y、R^(281)N、A^(286)L/S、T^(302)N、A^(340)S/V、T^(379)S、T^(403)A、S^(438)P、R^(553)K、A^(569)A、M^(570)L、A^(608)S、E^(660)D、I^(726)F、K^(733)N、S^(739)T)变异。上述结果表明,2017年~2023年贵州省PEDV和PoRVA感染率高且基因型复杂,其中PoRVA存在以G9型、P[13]型为主的流行,优势组合基因型为G9P[13]。本研究丰富了贵州省PEDV和PoRVA的流行病学资料,尤其为PoRVA感染的防控和候选疫苗株的筛选提供了参考数据。

日本脑炎病毒免疫逃逸分子机制研究进展

日本脑炎(Japanese encephalitis, JE)是由日本脑炎病毒(Japanese encephalitis virus, JEV)引起的一种蚊媒性人兽共患传染病,虽然已有商品化疫苗,但疫苗的预防具有一定的局限性且至今尚无有效药物治疗,一旦暴发将威胁人们的生命健康和公共安全,造成重大经济损失。JEV含有数量众多具有免疫逃逸功能的编码蛋白,这些蛋白逃逸宿主免疫功能的机制多样且复杂,但其机制仍不完全清楚。同时,JEV复杂的免疫逃逸机制可能是阻碍疫苗免疫保护效果的关键因素。因此,本文主要对JEV通过抑制干扰素反应,调节细胞凋亡、焦亡、自噬及宿主miRNA等多种途径逃逸机体先天免疫和适应性免疫机制进行概述,以期为JEV致病机理的研究和疫苗研发提供思路与理论基础。

引起典型PDNS的PCV-2病原分子特征分析

为了了解引起贵州省贵定县某猪场育肥猪群出现的典型猪皮炎肾病综合征(PDNS)的PCV-2的分子特征,试验首先对采自该猪场患病猪血清进行PCR扩增和克隆测序,然后采用多种分子生物学软件及网站对PCV-2的基因型、基因结构、推导蛋白等进行研究。结果表明:PCR扩增得到大小为1767 bp的条带,与GenBank中CZ246毒株序列(登录号为MZ995482)的相似性最高,将获得的毒株命名为PCV-2 GZGD2022。PCV-2 GZGD2022株为PCV-2d基因型,与PCV-2d参考株NLControl4(登录号为AY484410)相比,含10个开放阅读框(ORF),缺失ORF8,其ORF5终止密码子提前,大小仅为21 bp。该毒株在基因组第1042位有1个碱基T的缺失,但导致Cap蛋白C末端延伸的是脯氨酸(P)而非赖氨酸(K)。与疫苗株(LG株、DBN-SX07-2株、ZJ株、SH株)相比,在Cap蛋白的抗原表位区有7个特异性突变点(F53I、R59K、A68N、T134N、A190T、A68N、T134N)。上述疫苗株之间磷酸化位点的差异主要集中在Cap蛋白上,在88 aa处多了1个丝氨酸磷酸化位点,在47 aa、134 aa、149 aa处少了1个苏氨酸磷酸化位点,在55 aa和218 aa处少了1个酪氨酸磷酸化位点。Rep蛋白有3个N糖基化位点(23NPS25、256NQT258和286NAT288),Cap蛋白有1个N糖基化位点(143NYS145)。Rep、Cap蛋白为混合型蛋白。此外,Rep、Cap蛋白有一些特殊功能结构域,如前者的PH-LIKE、NACHT等结构域和后者的乙酰化修饰位点(1MTYPR6)与核定位信号(NLS)。说明引起贵州省贵定县某猪场猪群出现典型PDNS的致病株为PCV-2d基因型,该毒株缺失ORF8,编码蛋白的氨基酸、抗原表位和磷酸化位点的改变可能是导致其毒力较强、引起典型PDNS的原因。

猪圆环病毒3型Cap重组蛋白的低温诱导表达研究

为了提高猪圆环病毒3型(PCV-3)Cap重组蛋白的可溶性表达量,试验采用PCR方法扩增PCV-3 Cap基因,将其插入原核表达载体pET-32a(+)中构建重组原核表达载体pET-32a(+)-Cap,再将重组原核表达载体转化至大肠杆菌Rosetta(DE3)感受态细胞中,分析不同浓度IPTG和温度的诱导表达效果,并通过Western-blot鉴定重组蛋白。结果表明:PCR扩增出大小为645 bp的Cap基因片段,与预期结果一致;构建的重组原核表达载体pET32a(+)-Cap可在大肠杆菌Rosetta(DE3)感受态细胞中表达,重组蛋白分子量约为43.1 ku;不同浓度IPTG诱导表达可溶性蛋白的表达量不同,IPTG终浓度为0.1 mmol/L时重组蛋白可溶性表达量较高;37℃诱导时重组蛋白主要在沉淀中表达,而20℃诱导时重组蛋白主要在上清液中表达;表达的重组蛋白能与带His标签的抗体特异性结合。说明试验成功构建了重组蛋白,低温诱导可获得了更多的可溶性蛋白。

犬实验性感染乙脑病毒的研究

为探讨犬感染乙型脑炎病毒(JEV)的免疫应答及临床症状。用乙型脑炎病毒强毒株贵州分离株(JEV GZ株)和乙型脑炎病毒弱毒株(SA14-14-2株)感染3月龄比格犬,感染一定时间后检测血液中免疫球蛋白M(IgM)、免疫球蛋白G(IgG)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、干扰素-γ(IFN-γ)水平和T淋巴细胞亚群CD4+/CD8+T淋巴细胞变化;RT-PCR检测血液中的乙脑病毒;制作组织切片观察组织病变情况。乙型脑炎病毒强、弱毒株感染犬后,犬血清中IgM、IgG、TNF-α、IFN-γ水平升高,CD4+/CD8+比值升高;RT-PCR未检出病毒;组织切片无明显病变。犬感染乙型脑炎病毒强、弱毒株后,可产生免疫应答,无临床症状,且在组织中未检出病毒。因此,犬作为与人紧密接触的伴侣动物,非常适合作为评估人类JEV感染风险的哨兵动物。

日本脑炎病毒感染睾丸间质细胞对干扰素调节因子3相关信号通路的影响

旨在探究日本脑炎病毒(JEV)感染睾丸间质细胞后通过激活视黄酸诱导基因Ⅰ型(RIG-Ⅰ)和Toll样受体3(TLR3)等模式识别受体后引发的先天免疫机制。建立JEV感染睾丸间质细胞模型,利用荧光定量PCR和Western blot技术检测不同感染时段细胞的RIG-Ⅰ、TLR3和干扰素调节因子3(IRF3)的转录和蛋白表达、IRF3的磷酸化以及干扰素β(IFN-β)的转录情况。结果显示:JEV感染后细胞中RIG-Ⅰ和IRF3的mRNA和蛋白表达水平均有显著升高(P<0.05),TLR3蛋白表达水平极显著上调(P<0.01),IRF3磷酸化水平极显著上调(P<0.001),IFN-β转录水平显著升高(P<0.05)。结果表明:JEV感染可激活睾丸间质细胞的RIG-Ⅰ和TLR3受体,进而激活IRF3磷酸化,启动IFN-β的分泌,启动机体的先天性免疫抗病毒免反应。

猪繁殖与呼吸综合征病毒结构蛋白和非结构蛋白研究进展

猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)主要引起以母猪流产、产死胎、弱胎、木乃伊胎以及仔猪呼吸困难、败血症为特征的猪繁殖与呼吸综合征(PRRS),该病传播快、传染性强,是规模化养猪场常见的接触性传染病之一。PRRSV基因组编码GP2a、E、GP3、GP4、GP5、GP5a、M、N等8种结构蛋白和NSP1α、NSP1β、NSP2-NSP8、NSP9-NSP12等至少13种非结构蛋白。论文从三个角度对PRRSV结构蛋白和非结构蛋白进行综述,包括PRRSV感染宿主后结构蛋白和非结构蛋白发挥的作用、它们对宿主信号通路的影响和基于两类蛋白的检测方法,以期为进一步研究PRRSV的致病机制以及防治猪繁殖与呼吸综合征病毒病奠定理论基础。

1株H1N1亚型猪流感病毒的进化分析及分子特征研究

【目的】鉴定贵州省猪流感病毒(Swine influenza virus,SIV)的流行株及其分子生物学特征,为猪流感的病原学研究和流行病学调查提供重要参考。【方法】从贵州省部分养殖场采集猪鼻腔拭子70份,采用RT-PCR和接种犬肾上皮细胞(MDCK)对疑似猪流感的阳性样品进行病毒分离鉴定,对分离株进行克隆测序获得全基因组序列,运用生物信息学在线软件分析毒株的遗传重组情况和关键氨基酸分子特征。【结果】试验分离到1株H1N1亚型SIV,命名为A/swine/Guizhou/ZY/2022(H1N1)。经全基因组测序和遗传进化分析结果显示,该毒株属于G4型欧亚类禽H1N1 SIV。生物信息学在线预测发现,分离株的HA和NA基因属于欧亚类禽H1N1分支,NS基因属于北美重组分支,其余基因片段属于2009年大流行H1N1分支。分离株的HA蛋白裂解位点为PSIQSR↓GL,存在4个潜在糖基化位点,其受体结合位点和抗原位点与欧亚类禽H1N1 SIV高度一致;NA蛋白结构完整,存在5个潜在糖基化位点;分离株PB2蛋白发生了Q ^(591) R、R ^(251 )K突变,PB1蛋白和M2蛋白分别发生了N^( 375) S、L^( 473 )V和S^( 31) N突变。【结论】从贵州省分离到1株三源重排H1N1亚型SIV,属于G4型欧亚类禽H1N1病毒,其与人源唾液酸α2,6-Gal受体的结合能力可能有所增强,提示需加强对猪流感的流行监测。

JEV感染对小鼠睾丸间质细胞信号通路、炎症因子及睾酮分泌影响的研究

为探究日本乙型脑炎病毒(JEV)感染睾丸间质细胞(LC)后对其信号通路、炎症反应和睾酮分泌水平的影响,本研究以MOI 1的JEV感染小鼠LC(TM3细胞)后不同时间采用荧光定量PCR(qPCR)检测TM3细胞中Toll样受体3(TLR3)、维甲酸诱导基因-Ⅰ(RIG-I)、NF-κB及干扰素调节因子3(IRF3)信号通路相关蛋白基因mRNA的转录水平并确定JEV的最佳感染时间。结果显示,与空白对照组相比,JEV感染后12 h各蛋白基因mRNA的转录水平均显著升高(P<0.05),随着JEV感染时间的延长各蛋白基因mRNA转录水平逐渐降低至与空白对照组无显著差异,因此选择12 h作为后续JEV感染细胞的最佳时间。将JEV感染TM3细胞12 h后,采用western blot检测TM3细胞中TLR3、RIG-I、其下游信号通路相关蛋白NF-κB、IRF3及NF-κB和IRF3的磷酸化水平;采用间接免疫荧光试验(IFA)检测TM3细胞中NF-κB和IRF3蛋白的入核;通过间接ELISA检测TM3细胞中睾酮的分泌水平。Western blot结果显示,JEV感染TM3细胞后12 h TLR3、RIG-I、NF-κB、IRF3蛋白的表达及NF-κB、IRF3的磷酸化水平均显著升高(P<0.05)。IFA结果显示,空白对照组细胞核形态完整,绿色荧光均弥散分布于细胞和细胞质之中,而JEV感染后12 h出现CPE的TM3细胞核溶解和破碎,有些细胞核变形,绿色荧光出现在细胞核中,且荧光信号明显增强。ELISA结果显示,JEV感染后12 h TM3细胞上清中IL-6、IFN-β分泌水平极显著升高(P<0.01),睾酮分泌水平显著下降(P<0.05)。利用TLR3和RIG-I siRNA转染TM3细胞,以干扰TLR3和RIG-I的表达,采用western blot检测这两个siRNA分别对TLR3和RIG-I的干扰效果;干扰TLR3和RIG-I表达后以MOI 1的JEV感染TM3细胞,12 h后经ELISA检测细胞上清中IL-6、IFN-β和睾酮的分泌水平。SiRNA干扰试验结果显示,与空白对照细胞及转染siNC的细胞相比,目的基因siRNA转染的TM3细胞中TLR3和RIG-I蛋白的表达水平均极显著降低(P<0.01);ELISA结果显示,与JEV感染的细胞相比,siRNA+JEV组细胞中IL-6和IFN-β的含量显著或者极显著降低(IL-6:P<0.05;IFN-β:P<0.01),睾酮分泌水平显著升高(P<0.05)。上述结果表明JEV感染TM3细胞后能够通过刺激TLR3、RIG-I的表达,激活NF-κB和IRF3信号通路,诱导NF-κB和IRF3的磷酸化并入核,刺激细胞炎症因子和干扰素的分泌并降低睾酮的分泌水平。本研究为深入探究JEV感染LC后引起雄性动物生殖障碍的机制奠定了基础。

伪狂犬病病毒贵州分离株与疫苗株遗传进化和抗原表位分析

【目的】了解贵州省猪群伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus,PRV)毒株与疫苗株的分子特征,探究贵州省PRV变异株的遗传演化情况并对比其与疫苗株抗原差异性。【方法】通过分子克隆和生物信息学技术对本实验室在2015-2021年间贵州省分离到的5株PRV毒株的gB、gC、gD基因和商品化疫苗株(C株和HB2000株)进行克隆测序,利用本实验室序列库中的2株PRV贵州株及GenBank上登录的疫苗毒株序列,进行系统遗传进化和B细胞线性抗原表位差异性分析。【结果】结果显示,7株贵州株与疫苗株gB、gC、gD全基因组的核苷酸序列相似性分别为98.1%~100%、94.7%~100%和98.8%~100%,7株贵州株与疫苗株gB、gC、gD全基因组的氨基酸序列相似性分别为96.4%~100%、90.9%~100%和97.0%~100%;氨基酸替换分析结果显示,7株PRV贵州株和疫苗毒株间gB、gC、gD基因存在56、68和23处氨基酸位点差异,其中gC基因氨基酸位点差异最大;GZQX2017株缺失gE基因,在遗传进化树中GZQX2017株与Bartha-K61、Becker和NIA3等国外株位于同一大进化分支,属于PRVⅠ型;其余6株贵州株gE基因在第48和496位各插入1个天冬氨酸(D),符合流行变异株的基因特征,与国内流行PRV变异株位于另一大进化分支,属于PRVⅡ型;以GZQX2017株gB、gC、gD全基因作为目标基因,以Bartha-K61株作为主要亲本、Fa株作为次要亲本,gB、gC全基因均能检测到重组信号,gD全基因重组信号不明显;相比Bartha-K61株,gB、gC、gD蛋白抗原表位数量和位点存在差异。【结论】7株PRV贵州株中,GZQX2017株与疫苗Bartha-K61株、C株属于PRVⅠ型,GZQX2017株可能是由Bartha-K61株为主要亲本进行重组产生的gE基因自然缺失株,后续有望将其作为候选疫苗株进行进一步研究;其余6株贵州株与Fa株、HB2000株等属于PRVⅡ型,具有流行变异毒株的流行特征。本研究结果对了解中国贵州省流行PRV毒株分子特征具有十分重要的意义。

猪A群轮状病毒GZAS2020株与NX疫苗株的差异性分析

为比较实验室分离保存的猪轮状病毒田间株(GZAS2020株)与猪三联腹泻活疫苗NX株的差异,参照已发表的A群猪轮状病毒VP4、VP6、VP7序列设计合成3对扩增全基因的通用引物,分别克隆测序GZAS2020株和NX株的VP4、VP6、VP7全基因。采用DNAStar对GZAS2020株和NX株VP4、VP6、VP7这3个主要基因进行核苷酸、氨基酸同源性分析以及遗传进化树构建,结果显示,GZAS2020株与NX株VP4、VP6、VP7基因核苷酸同源性分别为75.2%、90.0%和79.4%,氨基酸同源性分别为78.5%、74.1%和82.4%,根据G/P分类命名法,GZAS2020株属于G5P[13]。与NX疫苗毒株相比,GZAS2020株的VP4基因在359、360、750 bp处存在C、A、C碱基的缺失,在347、348、570、571、572、579、580、581、757 bp处分别插入了C、C、C、A、A、G、G、G、C碱基;VP6基因不存在插入和缺失;VP7基因在258、1 029 bp处分别存在T、A碱基的插入,266 bp处存在1个C碱基的缺失。结果表明,GZAS2020株和NX株在核苷酸位点上有一定的插入、缺失以及突变,导致编码氨基酸有意义突变,致使蛋白抗原表位出现差异。研究结果可为临床疫苗的选用、诊断方法的建立及猪轮状病毒疫苗候选株的筛选提供参考,也丰富了贵州省猪轮状病毒病的流行病学资料。

猪繁殖与呼吸综合征病毒感染对宿主细胞信号转导通路影响的研究进展

猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)是动脉病毒科包膜病毒家族的成员,为有囊膜、病毒粒子呈球型的单股正链RNA病毒。该病毒引起母猪以繁殖障碍和呼吸系统症状为特征的一种急性、高度传染性疫病,给中国养猪业造成严重危害。妊娠母猪感染PRRSV后主要表现为繁殖障碍,母猪怀孕前期感染发生流产,怀孕中期母猪感染后会产死胎、木乃伊胎、弱胎、畸形胎,哺乳母猪则表现为产后无乳;公猪感染后表现为性欲减弱、精液质量下降、射精量少等症状;仔猪感染后多表现为呼吸困难、关节肿大、败血症等[1]。PRRSV传播快、传染性强,被世界动物卫生组织(World Organization for Animal Health,WOAH)列入93种法定报告动物疫病之一。

PRRSV受体蛋白CD163及其表达影响因素的研究进展

猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)引起的一种以母猪出现繁殖障碍及仔猪出现严重呼吸道症状的急性传染病,给养殖业带来了严重的经济损失。众多科研人员通过对PRRSV受体的研究逐步了解到该病毒的受体种类和作用机制,在受体蛋白CD169、硫酸乙酰肝素、波形蛋白、DC-SIGN(CD209)、CD151、CD163和NMHC II-A(或MYH9)中,PRRSV主要是通过CD163受体入侵感染,而这过程中又有很多因素增强或减弱CD163的表达,从而增强或抑制PRRSV的感染。本文通过对PPPSV受体蛋白CD163的功能、CD163结构域与PRRSV感染之间的关系进行总结,进一步了解PRRSV的作用机制,以及通过对影响CD163表达因素的研究进行综述,以期为PRRSV受体蛋白CD163的后续研究提供一些思路及参考。

贵州省部分PEDV流行株ORF3基因克隆与遗传进化分析

为探究贵州省猪流行性腹泻病毒(PEDV)流行毒株的遗传进化情况,对2017—2022年贵州省不同地区13份PEDV阳性腹泻样本进行ORF3全基因扩增、克隆、测序,使用DNAstar、MEGA 7.0软件,对所得序列核苷酸和氨基酸同源性以及突变和遗传进化情况进行分析。结果显示:13份PEDV阳性样品的ORF3基因序列全长均为675 bp,编码224个氨基酸;13条克隆序列的核苷酸和氨基酸同源性分别为95.1%~100%和96.4%~100%;13条克隆序列与经典毒株CV777株ORF3基因的核苷酸和氨基酸同源性分别为95.9%~97.3%和94.7%~96.4%,同源性较低;与经典毒株CV777株相比,13条克隆序列在G160A、C243T、C274T、G301A、C450T、A497G存在相同的核苷酸突变,存在4个相同的氨基酸位点突变(V21A、V54I、A101T、N166S);13条克隆序列所在毒株在遗传进化上全部属于GⅡ型,其中GZ220514、GZ342、GZ224、GZ219、GZ423隶属于GⅡb亚型,GZ210112、GZ210129、GZ210220、GZ210714、GZ407、GZ210525、GZ330、GZ370属于GⅡa亚型(表明13份PEDV阳性样品所含毒株均为变异毒株);同一基因型的PEDV毒株ORF3基因相对较保守,但不同基因型差异较大;对所有参比株ORF3基因推导的氨基酸序列与CV777株进行比对,分析认为可以将25S、70V/F、80F、107F/V/L氨基酸突变模式作为GⅡa亚型的分子标记。本试验为分析贵州省PEDV流行以及遗传变异情况提供了参考,并丰富了贵州省PEDV ORF3基因序列。

中西结合治疗摩拉斗牛哮喘兼前胃弛缓

牛哮喘病是养牛生产中常见的一种病症,多发于抵抗力较差的犊牛或瘦弱牛,主要由于天气寒冷、环境恶劣、机械因素以及呼吸道感染(病毒、细菌、支原体、寄生虫等)导致呼吸道黏膜发生炎症而发病,严重时可引起牛的死亡。牛前胃驰缓是神经体液调节机能絮乱。

乙型脑炎病毒贵州分离株E基因原核表达及其免疫原性的研究

收集某猪场1例发病种公猪的睾丸病料,处理后采用细胞培养与乳鼠脑内接毒相结合的方法盲传并结合RT-PCR方法分离鉴定,命名为乙型脑炎病毒(JEV)贵州分离株(GZ株),然后根据GenBank登录的日本乙型脑炎病毒SA14和SA14-14-2株全基因序列设计并合成1对扩增E基因的特异性引物,用RT-PCR方法扩增出JEV贵州分离株E基因,并将E基因克隆到pMD19-T载体上,构建重组质粒pMD19-T-E,经双酶切鉴定、测序及序列分析鉴定后,再将E基因亚克隆到pET-32a(+)原核表达载体上,成功构建乙脑病毒E基因原核表达质粒pET-32a-E,将构建好的原核表达质粒pET-32a-E转化至宿主菌BL21(DH3)中,诱导表达目的蛋白,表达产物经SDS-PAGE电泳和Western blot分析,得到了约59ku条带,与预期大小相符,进一步提取、纯化和浓缩目的蛋白,并将其加入弗氏佐剂后免疫小鼠,免疫后采血检测抗体。结果显示:乙型脑炎病毒贵州分离株E基因原核表达目的蛋白能诱导小鼠产生一定抗体水平,该研究为乙型脑炎亚单位疫苗的研究奠定了基础。

猪瘟病毒贵州流行株E2基因原核表达及其免疫原性的研究

本研究根据GenBank登录的猪瘟病毒Shimen和C株的E2基因序列设计1对特异引物,采集来自贵州的疑似猪瘟病死猪组织,提取总RNA,进行RT-PCR扩增,将扩增产物测序后进行核苷酸序列比较分析。并将RT-PCR产物克隆到pMD18-T载体上,构建重组质粒pMD18-T-E2,经双酶切鉴定、核苷酸序列分析后,将E2基因亚克隆到pET-32a(+)原核表达载体上,成功构建猪瘟病毒E2基因原核表达质粒pET-32a-E2,将构建好的原核表达质粒pET-32a-E2转化至宿主菌BL21中,诱导表达目的蛋白,表达产物经SDS-PAGE电泳、Western blot分析,得到了约58ku的条带,与预期大小相符,进一步提取、纯化目的蛋白,将目的蛋白加入弗氏佐剂免疫小鼠,免疫后采血检测抗体,结果显示目的蛋白能诱导小鼠产生一定抗体水平,该研究为猪瘟亚单位疫苗的研究奠定了基础。

液态工业黄磷磷蒸气压的测定和关联

在１１６～２３４℃范围内用饱和气流法测定了工业黄磷的磷蒸气压，并拟合得到磷蒸气压方程：ｌｎＰｖｒ＝ － ０．８４５９９４－ ［７．０１８４０４（１－ Ｔｒ ）１．５ － ０．９６４２５６（１－ Ｔｒ ）６ ］／Ｔｒ， 其平均绝对相对误差为０．５５％ ，最大相对误差为１．０５％ 。用它导出的磷气化热计算式与文献报导的计算结果极一致。