共刺激分子B7-H6在结直肠癌中的表达及其对结直肠癌细胞增殖侵袭的促进作用

目的研究结直肠癌组织中共刺激分子B7-H6的表达与临床病理特征之间的关系;研究共刺激分子B7-H6对结直肠癌细胞增殖和侵袭能力的影响。方法免疫组化和RT-qPCR分别检测癌组织和正常癌旁组织中B7-H6的蛋白和mRNA表达水平。统计分析B7-H6的表达水平与结直肠癌患者的肿瘤大小、分化程度、TNM分期和淋巴结转移等临床病理特征之间的相关性。构建shRNA慢病毒载体,建立低表达B7-H6的人结肠癌细胞株。免疫荧光验证慢病毒转染效率。流式细胞术和RT-qPCR分别检测转染前后B7-H6蛋白及mRNA的表达水平。MTT实验检测结直肠癌细胞的增殖能力。Transwell实验检测结直肠癌细胞的侵袭能力。结果结直肠癌组织中B7-H6蛋白的阳性表达率明显高于正常癌旁组织(72.5%vs 22.5%,P<0.001)。结直肠癌组织中B7-H6 mRNA的表达水平明显高于正常癌旁组织(P<0.001)。结直肠癌组织中B7-H6的阳性表达与结直肠癌患者肿瘤分化程度、TNM分期和淋巴结转移有关(P<0.05),而与年龄、性别、肿瘤大小无明显相关性(P>0.05)。shRNA慢病毒载体转染可以成功构建稳定低表达B7-H6的结直肠癌细胞株。敲低组(SW620-sh-B7-H6、LOVO-sh-B7-H6)相较于阴性对照组(SW620-NC、LOVO-NC),肿瘤细胞增殖和侵袭的能力明显减弱(P<0.001)。结论B7-H6在结直肠癌组织中异常高表达与结直肠癌患者的TNM分期、分化程度和淋巴结转移情况有关;敲低B7-H6可以抑制结直肠癌细胞的增殖与侵袭。

新农科建设引领的土壤肥料学课程改革探索

在新农科建设背景下,传统课程教育亟需转变教学与人才培养模式,加速培养能够引领未来农林发展的新型人才。该文以土壤肥料学课程为研究对象,紧密结合现代农业发展需求,开展课程结构优化和革新提升路径的探索。首先分析当前课程教学内容、模式和人才培养方面存在的问题,从更新教学内容、优化教学模式、强化课程建设、突出学科融合和建立实践基地等方面提出改革路径,构建“厚基础、增潜力、重创新、强实践”的农业人才培养模式,以期提高教学质量和学科竞争力,助力农业强国建设、实现农业农村现代化。

利用膜进样质谱法测定不同氮肥用量下反硝化氮素损失

利用膜进样质谱仪(MIMS)测定了太湖流域典型稻田不同氮肥施用梯度下,土壤反硝化氮素损失量,同时也对氨挥发通量进行了观测。根据两年的田间试验结果得到:在常规施氮处理(N300)下,每年平均有54.8 kg/hm^2 N通过反硝化损失,有约54.0 kg/hm^2 N通过氨挥发损失,分别占肥料施用量的18.3%和18.0%,两者损失量相当。通过反硝化和氨挥发损失的氮素量随着氮肥用量增加而增加,田面水的NH_4^+-N、NO_3~–-N、DOC和pH浓度影响稻田土壤反硝化速率。在保产增效施氮处理(N_270)下,氮肥施用量比常规减少10%,水稻产量增加了5.5%,而通过反硝化和氨挥发损失的氮素量分别下降了1.1%和3.1%,氮肥利用率提高了约5.5%。在增施氮肥处理(N375)下,因作物产量增加使得氮肥利用率比N300增加,但通过氨挥发和反硝化的氮素损失量也最大。因此,通过综合集约优化田间管理措施,降低氮肥用量,可实现增产增效的目的。

新型HCVEIA诊断试剂盒的研制

丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）基因组结构区核壳蛋白（Ｃ）区抗原、膜蛋白Ｅ１和Ｅ２区抗原，以及非结构区ＮＳ３－ＮＳ５区抗原的区段，已经在原核细胞中获得有效的表达。同时，相应区段中的优势抗原表位肽也经化学合成法大规模地制备。ＨＣＶ基因组上各区段抗原性的分析发现，由Ｃ区和ＮＳ３区分别编码的Ｃ抗原和Ｃ３３ｃ抗原是ＨＣＶ基因组上两个优势抗原区段。其相应的抗体出现早（感染后６周可检出抗Ｃ３３ｃ抗体），阳转率高（约９９％阳性检出率），特异性和重复性均优于其它区段抗原。以中国人ＨＣＶ的Ｃ３３ｃ重组蛋白和分支状合成肽ＭＡＰ－Ｃ－１９为复合抗原，研制了适合我国抗ＨＣＶ抗体检测的新型丙型肝炎病毒酶免疫测定（ＨＣＶＥＬＡ）诊断试剂盒。它同当代美国Ａｂｂｏｔｔ／ＵＢＩＨＣＶＥＬＡ诊断试剂的符合率约９８％，同加拿大ＹＥＳ公司ＨＣＶＥＩＡ诊断试剂的符合率约９７．８％，阳性检出率提高了约２％，３次重复性达１００％，表明其特异性、敏感性和重复性均达到了当代第二代ＪＣＶＥＬＡ诊断试剂的水平。我国人群中抗ＨＣＶ抗体的分布情况为：正常人群的检出率１％－２％；外科类住院病人检出率约２８．８％；肝炎患者抗ＨＣＶ阳性率为３４．４％，慢活肝、肝硬化和重症肝炎患者?

工作场所中巴豆醛的气相色谱测定方法研究

目的:HP-1毛细管柱分离、氢火焰检测器检测、气相色谱法直接测定工作场所中巴豆醛,探索检测条件,进行方法学研究.方法:建立工作场所中巴豆醛的气相色谱测定方法,为制订标准检验方法提供依据.结果:该方法最低检测浓度:乙醛 1.08 mg/m3,巴豆醛 0.54 mg/m3;总不确定度为 8.58%;相对标准偏差在 2.71%～9.31%之间;平均回收率达 97.2%～104%.结论:该方法简单、灵敏、适用,重现性好,结果令人满意.

气相色谱法同时测定工作场所中丙烯醛、丙烯酸和甲苯

目的:探讨一次采样气相色谱同时测定工作场所中丙烯醛、丙烯酸和甲苯的方法.方法:用活性炭管采集、二硫化碳解吸、HP-1型毛细管柱分离、氢火焰检测器检测、气相色谱法同时测定工作场所中丙烯醛、丙烯酸和甲苯,探索检测条件,并进行方法学研究.结果:该方法最低检测浓度:丙烯醛 0.039 mg/m3,丙烯酸 0.13 mg/m3,甲苯 0.37 mg/m3;相对标准偏差丙烯醛在 0.96%～3.2% 之间,丙烯酸在 0.85%～1.7% 之间,甲苯在 2.4%～5.4% 之间;平均采样效率为丙烯醛 99.6%,丙烯酸 98.4%,甲苯 96.5%;平均解吸效率为丙烯醛 96.8%,丙烯酸 97.6%,甲苯 95.5%.结论:该方法简单、适用,重现性好,灵敏度高.

从中国病人克隆丙型肝炎病毒基因组C区基因及其在大肠杆菌中的表达

本文通过逆转录（ＲＴ）－聚合酶链式反应（ＰＣＲ），从两份分别来自湖南省娄底地区丙型肝炎病人和河北省秦皇岛市职业献血员丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）ＲＮＡ打点杂交阳性的血清中，扩增并克隆到１段５６３ｂｐ的ＨＣＶ基因组Ｃ区抗原基因Ｃ２６９／８３１，并通过ＰＣＲ得到了３个表达片段Ｃ８３１、Ｃ８０１和Ｃ５８７。测定Ｃ２６９／８３１基因的全序列后发现，中国人ＨＣＶ湖南分离株与ＨＣＶ－Ⅰ型株ＨＣＶ－ＵＳ和Ⅱ型株ＨＣＶ－ＢＫ在该基因区段的核苷酸／氨基酸序列的同源性，分别为９０．３％／９４．６％和９５．２％／９４．６％。利用原核高效表达载体ｐＢＶ２２０在大肠杆菌中有效地表达了非融合的Ｃ区抗原基因重组蛋白ＣＬ、ＣＭ和ＣＳ。通过免疫筛选法及Ｗｅｓｔｅｍ印迹法对约占菌体可溶性蛋白１１％的表达产物进行了鉴定。采用ＴｒｉｔｏｎＸ－１００和盐析处理表达产物，再进行离子交换层析纯化，得到可用于检测ＨＣＶ血清抗体的核壳蛋白（Ｃ）抗原。通过不同分子量抗原的表达，发现由Ｃ区Ｎ端８９个氨基酸组成的多肽ＣＳ其抗原性与由１５８或１６８个氨基酸组成的多肽ＣＭ或ＣＬ相同，但抗原的稳定性和表达量显著优于后两种抗原。本研究为研制ＨＣＶ抗体诊断试剂盒奠定了重要基础。

气相色谱法同时测定工作场所中甲醇和苯系物

目的：探讨一次采样气相色谱同时测定工作场所中甲醇、苯、甲苯和二甲苯的方法。方法：用活性炭管采集、二硫化碳解吸、HP123-0732（DB-1701）型毛细管柱分离、氢火焰检测器检测、气相色谱法同时测定工作场所中甲醇、苯、甲苯和二甲苯,探索检测条件,并进行方法学研究。结果：该方法最低检测浓度：甲醇0.047 mg/m3,苯0.033 mg/m3,甲苯0.037 mg/m3,二甲苯0.041 mg/m3;相对标准偏差：甲醇在0.46%～1.89%之间,苯在0.855～4.74%之间,甲苯在1.35%～3.45%之间,二甲苯在1.87%～5.68%之间;平均采样效率为甲醇97.6%,苯94.4%,甲苯98.5%,二甲苯100.8%;平均解吸效率为甲醇98.8%,苯95.6%,甲苯97.5%,二甲苯99.8%。结论：该方法简单、适用,重现性好,灵敏度高,结果令人满意。

狂犬病疫联合干扰素的应用研究

目的研究IFN＋2-2-1程序和2-2-1程序应用的可行性，探讨IFN的免疫调节作用。方法IFN＋2-2-1程序：于0、7、14天分别注射5．0、5．0、2．5IUPHKCV，于0天同时加注20万IUα-IFN；2-2-1程序：于0、7、14天分别注射5．0、50、2．5IUPHKCV；对照：应用WHO推荐的常规程序。结果①3种程序免疫后的GWT：7天时分别为1．71、1．57、1．21（P＜0．05）；14天时分别为62．77、58．79、28．36（P＜0．01）；45天时分别为76．64、72．90、62．77。②各组的阳转率：7天时分别为55．00％、33．3％、20．00％（P＜0．05）；14天时全部达到100％。③各组的各种副反应发生率（在0～55％之间）均无显著性差别。结论小剂量的IFN有增强免疫应答的作用；首次免疫时用双倍剂量的疫苗有显著的高免疫应答效应；IFN＋2-2-1程序优于2-2-1程序，后者又优于常规程序。

肝癌m^(6)A RNA甲基化调控因子风险预测模型的构建及其临床意义

目的建立肝癌N^(6)-甲基腺嘌呤(N^(6)-methyladenosine,m^(6)A)RNA甲基修饰调控因子风险预测模型,并探讨其临床意义。方法通过收集癌症基因组图谱(TCGA)和国际癌症基因组联盟(ICGC)数据库中肝癌病人mRNA表达谱及临床资料相关数据,分析肝癌中18种m^(6)A调控因子在肿瘤组织与正常组织中的表达差异;使用单因素Cox比例风险回归分析方法筛选预后相关m^(6)A调控因子并利用LASSO算法建立风险预测模型。结果与正常组织相比,肝癌组织中18种m^(6)A调控因子中除METTL14外,其余表达水平差异均有统计学意义(P<0.05);筛选^(6)个调控因子(YTHDF2,LRPPRC,YTHDF1,METTL3,KIAA1429,ZC3H13)建立风险预测模型,发现其与肝癌病人临床病理特征及预后密切相关。结论m^(6)A调控因子风险预测模型与肝癌病人临床病理特征及预后密切相关,有望用于指导肝癌的临床治疗。

致食物中毒葡萄球菌生物学特性研究报告

[目的 ]研究致食物中毒葡萄球菌的生化特征以及产肠毒素与不产肠毒素的金黄色葡萄球菌在性质上的差异。 [方法 ]将病人呕吐物和剩余食品分离培养、纯菌种生化特性试验和毒力试验。 [结果 ]在病人呕吐物、剩余食品中分离出金黄色葡萄球菌 4株 ( 2个生型 ) ,第 1生化型对幼猫有强烈致病性 ,第 2型则致病性较弱 ,且前者精氨酸双水解酶阴性而后者为阳性 ;还分离出家畜葡萄球菌byicas亚种 3株 ,有 2株对幼猫有弱致病性。能产生毒力不同的耐热肠毒素。[结论 ]金黄色葡萄球菌和家畜葡萄球菌能够产生耐热肠毒素。

依那普利对糖尿病大鼠心肌IGF-1表达的影响

为观察马来酸依那普利对糖尿病大鼠心肌中胰岛素样生长因子1(IGF-1)表达的影响,探讨马来酸依那普利对糖尿病心肌病可能具有的保护作用及机制。方法把实验大鼠60只适应性喂养2周后随机分为2组,正常(NC)组10只给予普通饲料饲养。待造模组50只,利用腹腔注射链脲佐菌素(STZ)造模,给予高糖高脂饮食,两周后将成模的40只大鼠随机分为2组。糖尿病(DM)组20只继续给予高糖高脂饮食。药物干预(DS)组20只给予马来酸依那普利灌胃10 mg/kg/d,8周后对比3组大鼠以下指标:一般状况(体重、饮食、尿量、毛色、精神状态)、血液生化检查(TC、TG、FBG、Hb A1c水平)、大鼠心肌切片HE染色心肌结构变化、石蜡包埋心肌组织行免疫组织化学染色测定IGF-1含量。结果一般状况:DM组和DS组比NC组体重明显减轻(P<0.05),饮食尿量增多,毛色干枯、精神萎靡不好动。而DM和DS两组间差异无统计学意义。血生化指标:DM和DS组TG、TC、FBG、Hb A1c值较NC组有明显升高(P<0.01),而DM和DS两组间差异无统计学意义(P>0.05)。心肌切片HE染色:DM组较NC组有心肌肥大及心肌纤维化改变趋势,而DS组心肌变化介于DM和DS之间。心肌切片IGF-1免疫组织化学染色:DM组较NC组IGF-1含量增高(P<0.01),而DS组低于DM组(P<0.05)高于NC组(P<0.05)。结论马来酸依那普利可以通过减少糖尿病大鼠心肌中IGF-1因子,抑制糖尿病心肌中心肌细胞的肥大和纤维化趋势。

半对数回归在测定麻疹及风疹病毒抗体水平中的应用

[目的]建立半对数回归ELISA法测定麻疹及风疹病毒的抗体水平。[方法]在常规ELISA法的基础上,以阳性参考血清的不同稀释度的对数为横坐标,与其492nm处的相应吸光度(OD值)进行线性回归,制定标准曲线。根据被测血清标本的吸光值推算其抗体滴度。[结果]统计学分析表明,抗体滴度的对数与其相应的吸光值呈显著线性相关(P﹤0.001)。用半对数回归推算的结果与常规ELISA法进行比较,差异无统计学意义(P﹥0.05)。[结论]该方法简便经济,用在进行大批量测定工作时,可节省大量的工作量和实验成本。

IFN-α对人体液免疫功能调节作用的实验研究

目的：以狂犬病疫苗为抗原进行人体免疫实验，了解低剂量干扰素－α对人体的体液免疫功能的影响，并探讨其影响机制。方法：试验组：将疫苗于０、７、１４天时分别接种５．０、５．０、２．５ＩＵ，并在０天同时注射２０万单位的人白细胞干扰素（ＩＦＮ－α）；对照Ⅰ组：除不注射ＩＦＮ－α外，同试验组；对照Ⅱ组：仅按常规方法接种狂犬病疫苗。结果：抗体ＧＭＴ在７、１４天检测时，试验组均高于对照Ⅰ、Ⅱ组，尤较对照Ⅱ组有显著性；抗体阳转率在第７天时即显著高于对照Ⅰ、Ⅱ组；而达到保护水平的达标率在第７天时，试验组为１０％，对照Ⅰ、Ⅱ组均为０。结论：低剂量２０万单位的ＩＦＮ－α可使人体接受狂犬病疫苗免疫后的抗体产生速度加快、产量增高，即可有效增强人的体液免疫功能。

狂犬病毒非临床型感染初探

目的 :探讨狂犬病毒非临床型感染的可能性。方法 :收集病例资料和检测暴露人群血清中的狂犬病毒抗体。结果 :(1)收集到的 2例患者 ,在被犬咬伤 ,愈后又复发不良反应 ,同时伴有血清中狂犬病毒抗体 4倍增长的现象 ;(2 )检测的暴露人群 4 9例中 (无疫苗接种史 ) ,检出狂犬病毒抗体 7例 (14 .2 8% )。结论 :狂犬病毒可以引起非临床型感染即隐性感染 (亚临床感染 )。

一种快速有效的丙型肝炎病毒cDNA克隆的筛选和鉴定方法

在丙型肝炎病毒(HCV)eDNA克隆的过程中,将eDNA的PCR产物克隆入载体pGEM-3Zf的SmaI酶切位点,使用PCR法标记的Digoxigenin cDNA探针,通过原位杂交筛选特异的重组体。实验证明用此法进行cDNA克隆具有高度的特异性和实用价值,尤其适用于cDNA PCR产物量小的情况。改进的方法比其它方法更为快速、简便。应用该法,我们成功地克隆并表达了HCV基因组的两个区(C和NS3基因)。

颈内静脉血氧饱和度监测在治疗重型颅脑损伤患者中的应用价值

目的研究颈内静脉血氧饱和度监测在重型颅脑损伤患者中的应用价值。方法选取ICU收治的重型颅脑损伤患者60例,分为对照组与观察组,每组30例。对照组接受常规甘露醇治疗,观察组则根据患者颈内静脉血氧饱和度监测结果予以甘露醇治疗,对比2组格拉斯哥评分(GCS评分)、格拉斯哥预后评分(GOS)评分、颈内静脉血氧饱和度及不良反应发生率等。结果2组患者治疗后3 d和7 d的GCS评分与治疗前相比明显升高(P<0.05),且观察组治疗后3 d和7 d的GCS评分均高于对照组(P<0.05);2组患者治疗后3 d和7 d的颈内静脉氧饱和度与治疗前相比明显降低(P<0.05),且观察组治疗后3 d和7 d颈内静脉氧饱和度均低于对照组(P<0.05);观察组患者出现不良反应3例,而对照组有不良反应10例,2组比较差异有统计学意义(P<0.05);观察组机械通气时间和住院时间均低于对照组(P<0.05);观察组GOS评分良好率(86.67%)高于对照组(63.33%),中度致残率(6.67%)低于对照组(30.00%)(P<0.05);2组GOS评分重度致残率相比较,差异无统计学意义(P>0.05);2组GOS评分植物生存或死亡率均为0.00%。结论颈内静脉血氧饱和度监测可以有效应用于重型颅脑损伤患者的治疗中,能改善GCS评分,降低不良反应发生率,有利于缩短患者的治疗时间,且预后效果较佳,可以为临床治疗提供依据。

无偿献血员中人类T淋巴细胞病毒感染状况调查

目的 :调查盐城市输血员中人类 T淋巴细胞病毒 ( HTL V- )的感染状况。方法 :采用酶联免疫吸附试验 ( EL ISA)测定血清中 HTL V- 抗体 ,阳性结果采用蛋白印迹法 ( Westem blot,WB)确证。结果 :14 3 6份采自无偿献血员的血清中检出抗体可疑阳性 5份 ,WB试验证实为假阳性。结论 :调查的献血员中没有 HTL V- 感染者 ,提示本市人群中 HTL V-