重组分泌型Fas配体对肝癌细胞株HepG2凋亡的影响

目的构建重组表达Fas配体(FasL)基因(N端含有IL2信号肽)的慢病毒,探讨其介导肝癌细胞凋亡的可行性及其可能的分子机制。方法将含有IL2信号肽的FasL基因克隆至慢病毒载体pCDH-CMV-MCS-EF1-GFP+Puro(简称pCDH)中,然后将重组pCDH-IL2sig-FasL与慢病毒辅助质粒共同转染至HEK293细胞中,获得重组慢病毒LV-IL2sig-FasL,阴性对照为LV,分别感染HepG2细胞。最后将成功构建的稳转细胞HepG2-LV-IL2sig-FasL及HepG2-LV同时培养至96 h,采用实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)检测细胞中相关凋亡信号因子的转录水平,Western blot检测蛋白表达水平,MTT检测细胞增殖抑制水平。结果HepG2-LV-IL2sig-FasL细胞相对于阴性对照株HepG2-LV,其凋亡因子转录及表达水平均上调;MTT检测结果显示HepG2-LV-IL2sig-FasL细胞生长明显受到抑制。结论外源表达IL2sig-Fas基因可诱导肿瘤细胞HepG2凋亡,有可能作为肿瘤基因治疗的新途径。

多药耐药铜绿假单胞菌16SrRNA甲基化酶、氨基糖苷类修饰酶基因研究

目的研究铜绿假单胞菌连续分离株的16S rRNA甲基化酶及氨基糖苷类修饰基因的分布状况。方法以K-B法检测铜绿假单胞菌对17种抗菌药物的耐药性;以PCR法检测20株铜绿假单胞菌16S rRNA甲基化酶及氨基糖苷类修饰酶基因;以PCR直接全自动荧光法进行阳性基因测序。结果20株铜绿假单胞菌检出1种16S rRNA甲基化酶基因(rmtB);检出5种氨基糖苷类修饰酶基因,分别为:aac(3)-Ⅱ、aac(6′)-Ⅰb、aac(6′)-Ⅱ、ant(3″)-Ⅰ、ant(2″)-Ⅰ;1号株和3号株进行甲基化rmtB基因测序,将测得序列翻译成氨基酸序列与美国核酸库已登录的rmtB氨基酸序列比较,均存在氨基酸序列差别,因此均可确认为新亚型。结论医院铜绿假单胞菌氨基糖苷类抗菌药物耐药主要与16S rRNA甲基化酶编码基因rmtB及5种氨基糖苷类修饰基因有关,并发现两种铜绿假单胞菌16S rRNA甲基化酶编码基因rmtB新亚型。

243株假丝酵母菌属MIC结果分析

目的分析临床常见假丝酵母菌属对常用抗真菌药物的耐药性。方法采用法国生物梅里埃公司提供的ATB FUNGS 2试验板条,测定243株临床常见假丝酵母菌属的最低抑菌浓度(MIC)值。结果243株假丝酵母菌属以白色假丝酵母菌为主,占64.6%,其他依次为光滑假丝酵母菌(14.4%)、热带假丝酵母菌(11.1%)、近平滑假丝酵母菌(5.8%)、克柔假丝酵母菌(4.1%);上述5种常见假丝酵母菌对5-氟胞嘧啶、两性霉素B、氟康唑和伊曲康唑4种抗真菌药物均产生了耐药性,其中克柔假丝酵母菌耐药率较高,对4种抗真菌药物的耐药率分别为20.0%、50.0%、30.0%和40.0%;上述5种常见假丝酵母菌对伊曲康唑耐药率均较对氟康唑高。结论临床常见假丝酵母菌属对常用抗真菌药物已具有一定的耐药性,应加强监测与控制。

多药耐药铜绿假单胞菌耐药基因研究

目的研究1株多药耐药铜绿假单胞菌的β-内酰胺酶基因、菌膜蛋白OprD_2基因、整合子和转座子介导的各种耐药基因、16S rRNA甲基化酶及氨基糖苷类修饰基因以及氯霉素与四环素相关耐药基因的的存在情况。方法以K-B法测量其对抗菌药物的耐药性;以PCR法检测其相关耐药基因;以PCR直接全自动荧光法进行阳性基因测序。结果该株铜绿假单胞菌检出TEM基因OXA-10基因,且伴有OprD_2缺失;转座子遗传标记MerA阳性,Ⅰ类整合子遗传标记qacE△1-Sul1阳性;耐氨基糖苷类基因aac(3)-Ⅱ、aac(6′)-Ⅱ、rmtB阳性,耐氯霉素基因cmlA阳性。结论造成本株铜绿假单胞菌多药耐药的主要原因是该菌株存在多种抗生素相关耐药基因。

生物化学分析仪检测结果的临床评价

目的通过对Roche生物化学(下称生化)和美国NOVA16急诊生化分析仪的急诊生化指标测定结果进行方法比对和偏倚评估,探讨不同检测系统间急诊生化指标测定结果的可比性,以及结果是否能被临床所接受。方法以Roche生化分析仪、原装试剂和校准品、质控品组成的检测系统作比较,美国NOVA16急诊生化分析仪及其配套试剂、质控品组成的检测系统为试验方法,检测患者新鲜血清中钾、钠、氯(Cl)、尿素(Urea)、肌酐(Cr)、葡萄糖,按文件进行方法间离群值检查,计算试验方法和比较方法之间的相对偏差,并进行偏倚评估;同时用回归统计法分析二者的相关性,并计算出医学决定水平处的系统误差,以美国CLIA′88允许误差范围的1/2为标准,判断不同检测系统的临床可接受性。结果Urea、Cr在高值处离群值较多,剔除离群值标本后,除Cl外,其他项目的检测结果偏差临床均可接受。结论实验室同一检验项目存在2个以上的检测系统时,应进行方法比对和偏倚评估,判断其临床可接受性,以保证检验结果的可比性,为临床诊疗提供一致、可靠的检验数据。

乙型肝炎病毒感染与白细胞介素27的相关性研究

目的探讨乙型肝炎病毒(HBV)感染与白细胞介素27(IL-27)的相关性,并在体外通过RT-PCR基因表达探讨HBV对IL-27水平的影响。方法采用酶联免疫吸附法(ELISA)和转染HBV感染性克隆后,检测HBV感染患者和健康对照组血清IL-27的水平。结果 IL-27的水平在HBV感染患者明显高于健康对照组(P<0.001);IL-27的水平在肝纤维化患者和肝癌患者较急、慢性肝炎患者高(P<0.05);HBV e抗原影响IL-27的表达;此外,体外试验表明,转染HBV感染性克隆后,IL-27mRNA和蛋白水平上调。结论 IL-27水平可能是HBV感染患者临床诊断的1个新的细胞因子,可作为HBV的试验疗效监测指标。

凝固时间法测定血浆AT-Ⅲ活性

目的介绍凝固时间法测定血浆AT-Ⅲ活性的实验方法。方法将校正血浆用含肝素缓冲液稀释成不同浓度(即不同活性AT-Ⅲ),加入纯品纤维蛋白原共同孵育后,测定其凝固时间;根据不同AT-Ⅲ活性与相应凝固时间制作标准曲线;测定待检血浆凝固时间,查标准曲线即可得到待检血浆AT-Ⅲ活性。结果该法AT-Ⅲ活性在25%～125%范围内线性良好;日内变异系数为3.2%,日间变异系数为4.9%;凝固时间法与发色底物法比较相关性良好(r=0.999,P<0.05);检测178例健康人血浆AT-Ⅲ活性为105.4%±18.8%。结论该方法重复性好,结果可靠,简便实用,可用于常规检验。

高肾负荷人工配制乳液对乳婴儿肾功能的影响

目的探讨肾外性失水增加的乳婴儿喂养高肾负荷共同体人工配制乳液造成的肾脏损伤。方法实验分析人工配制乳液肾负荷与尿液微量清蛋白、尿液视黄醇结合蛋白的t检验和相关性。结果肾外性失水增加的乳婴儿喂养高肾负荷人工配制乳液时尿液微量清蛋白、尿液视黄醇结合蛋白明显高于其他组,且呈正相关。结论高肾负荷人工配制乳液喂养肾外性失水增加的乳婴儿的肾脏损害程度明显高于肾外性失水不增加的乳婴儿。

糖尿病肾病患者尿液NAG活性、β_2-MG含量的临床意义

为探讨糖尿病肾病患者尿液 NAG活性、β2 -MG含量改变的实验诊断价值 ,利用日立 7170 A全自动生化分析仪和Denley Dragon Wellscan MK2 酶标比色计分别采用速率法和 ELISA法测定了 3 6例糖尿病肾病患者、42例正常人尿液 NAG活性及β2 -MG含量。结果显示 ,糖尿病肾病组较正常对照组尿液 NAG活性、β2 -MG含量明显增高 ,具有显著性差异 (P<0 .0 1)

ELISA底物溶液中H_2O_2浓度的选择

ELISA 大都应用H_2O_2为底物氧化邻苯二胺显色作为指示系统.然而,市售H_2O_2的标示含量虽为大于300ml/L,实际上由于H_2O_2的不稳定性,其真实含量很不准确,且瓶间差异较大,致使阴性血清对照孔显色的A 值波动大,从而影响实验结果的判断,不利于室内质控的开展.本文就此问题进行探讨,现报告如下.

216株酵母样真菌MIC结果分析

要目的要了解临床常见酵母样真菌对常用抗真菌药物的耐药性。方法要对临床送检标本中分离出的216株酵母样真菌进行MIC值测定。结果要216株酵母样真菌中以白色假丝酵母菌为主,其次为光滑假丝酵母菌。酵母样真菌对4种抗真菌药物均有一定的耐药性,克柔假丝酵母菌耐药性较高;对伊曲康唑的耐药性较对氟康唑的高。结论要对临床常见酵母菌进行药敏试验,有利于监测其耐药趋势,更好地指导临床用药。

真空管残余负压对SE-9000血液分析仪结果的影响分析

目的:探讨真空定量采血管内残余负压对血液分析结果的影响。方法:用SE-9000全自动血液分析仪检测真空定量EDTA-K2抗凝管采集的有残余负压的全血标本,并与无残余负压的全血标本进行比较分析。结果:管内有残余负压的全血标本检测时间长于无残余负压的全血标本,且有29份(24%)全血标本经2次检测仍无结果;有残余负压标本的红细胞计数、血红蛋白、红细胞压积、白细胞计数、血小板计数结果明显低于无残余负压标本的对应值(P<0.01)。结论:真空定量采血管内残余负压对血液分析有明显的干扰,需除去残余负压后进行血液分析。

磁性分离酶联免疫法测定血清hCG实验方法评价

对磁性分离酶联免疫法测定人血清 h CG含量的实验方法进行了评价 ,分析了 IEMA测定血清 h CG的标准曲线、线性范围、灵敏度、回收试验、重复性试验、稀释效应以及实验显色稳定性。结果显示 ,采用 IEMA测定血清中 h

FDP、D-Dimer胶乳凝集试验弱阳性质控血清的研制

为研制纤维蛋白降解产物 ( Fibrin degradation product,FDP)、D-二聚体 ( D-Dimer)胶乳凝集试验中弱阳性质控血清 ,利用血浆纤维蛋白溶解机理和正交试验的原理 ,选定了提取 FDP、D-Dimer胶乳凝集试验中弱阳性质控血清的作用时间。

249名健康体检者幽门螺杆菌感染情况分析

目的:了解健康体检者幽门螺杆菌(Hp)感染情况。方法:采用金标法检测249名健康体检者血清Hp尿素酶抗体。结果:249名健康体检者Hp感染率为27.71%,男女性别Hp感染率经χ2检验差异无统计学意义(P>0.05);各年龄组Hp感染情况经χ2检验也无统计学意义(P>0.05)。结论:应该重视Hp的高感染率和其高致病性,建议实行分餐制或进行预防性抗Hp治疗来提高人类的健康水平。

血清3项肿瘤标志物联合检测在早期卵巢恶性肿瘤诊断中的临床应用

目的探讨恶性肿瘤特异性生长因子(TSGF)、糖类抗原125(CA125)及癌胚抗原(CEA)联合检测在早期卵巢恶性肿瘤诊断中的临床应用。方法对102例经病理检查证实的卵巢恶性肿瘤患者、86例良性肿瘤患者及91例健康人进行血清TSGF、CA125、CEA 3种肿瘤标志物的联合检测。结果卵巢恶性肿瘤组血清TSGF、CA125、CEA检测结果和阳性率均明显高于良性肿瘤组和健康对照组(P<0.01),联合检测肿瘤标志物阳性率高于单项检测。结论血清TSGF、CA125、CEA的联合检测可提高早期卵巢恶性肿瘤诊断阳性率,对卵巢恶性肿瘤早期临床诊断有一定应用价值。

灵芝酸G对小鼠巨噬细胞免疫活性的研究

目的研究灵芝酸G对小鼠巨噬细胞活化及肿瘤细胞的杀伤作用。方法流式细胞仪测定小鼠巨噬细胞的表面分子表达;ELISA法检测小鼠腹腔巨噬细胞分泌IL-1和TNF的水平;MTT法检测巨噬细胞因子对肿瘤细胞的抑制能力。结果灵芝酸G经过3天刺激能激活小鼠巨噬细胞表面分子CD68;体外实验显示,1μg/mL灵芝酸可以诱导小鼠巨噬细胞分泌IL-1和TNF-a;灵芝酸G诱导巨噬细胞因子抑制肿瘤细胞的能力与5μg/mL吉西他滨没有显著不同,但二者明显高于空白对照组。结论灵芝酸G能诱导小鼠巨噬细胞产生M1型细胞因子,杀伤肿瘤细胞。

艾叶多糖预防对乙酰氨基酚肝中毒机理的研究

目的通过肌肉注射艾叶多糖来研究对乙酰氨基酚在体内吸收曲线,从而推测艾叶多糖在预防肝中毒方面的机理。方法比色法测出不同时间点的对乙酰氨基酚浓度;己糖激酶法(GLUHK)测定血液中血糖浓度。结果兔子肌肉注射对乙酰氨基酚后1.5 h产生吸收峰,其中提前2 h注射的效果最明显;提前注射艾叶多糖也能引起血糖值变化,血糖值与兔子体内对乙酰氨基酚的吸收峰值呈高度相关,与没有注射艾叶多糖相比较,有明显差异。结论艾叶多糖预防对乙酰氨基酚肝中毒的机理可能是艾叶多糖升高了血糖浓度,导致肝脏细胞的能量增加、提供还原性辅酶II、增加还原性谷胱甘肽的数量,从而使肝组织细胞免受损伤。