中效原理在顺铂、足叶乙甙对人肺癌细胞株(PAa)相互作用中的应用

目的 :利用中效原理观察顺铂、足叶乙甙配伍在体外对人肺癌细胞株 (PAa)的相互作用 ,判断联合用药的效果。方法 :采用MTT法利用中效原理判断联合用药的效果。结果 :两种药物单独应用时随药物剂量增加 ,其效应也增加 ,两种药物合用时产生协同作用 ,两种药物合用时的浓度比例及给药时间次序不同均会影响效应大小。结论 :上述两种药物合用产生协同作用 。

As_2O_3联合H_(22)源exosome的抗肿瘤作用研究

目的:探讨三氧化二砷(As2O3)联合小鼠肝癌(H22)源exosome对小鼠皮下种植性肝癌(H22)模型的抗瘤作用。方法:超速离心及密度梯度离心法提取exosome,Bradford法蛋白定量;建立BALB/c小鼠皮下荷瘤模型,实验分4组:空白成瘤对照组、As2O3组、As2O3联合exosome组和exosome组。观察As2O3、exosome、及其联合应用的体内抗瘤效应;监测在体肿瘤的生长情况;计算抑瘤率、生存率:免疫组织化学法检测肿瘤组织中浸润的CD4+、CD8+T淋巴细胞。结果:与空白成瘤对照组比较,As2O3组、及其与exosome联合组的肿瘤生长明显放缓(P<0.05)。其抑瘤率分别为44.58%、66.27%。As2O3组及As2O3联合exosome组肿瘤组织中浸润的CD4+、CD8+T淋巴细胞明显增加(P<0.05)。结论:As2O3与exosome联合应用对小鼠皮下种植性实体性肝癌(H22)有协同治疗效应。

人血清Ⅳ型胶原ELISA检测法的建立与初步应用

本文研制了鼠抗人Ⅳ型胶原单克隆抗体与兔抗人Ⅳ型胶原多克隆抗体，用双抗体夹心法建立了人血清Ⅳ型胶原的酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）检测法。本法灵敏度为１６ｎｇ／ｍｌ，批内变异系数为１０．０２％，批间变异系数为９．１４％，回收率为９２．６８％。与Ⅰ型胶原无交叉反应。经５０例健康成人血清Ⅳ型胶原浓度测定，其范围在５～７３ｎｇ／ｍｌ，均值为３１．０６±１８．８１ｎｇ／ｍｌ。临床初步应用于肝硬化及肝癌患者血清Ⅳ型胶原的测定，其均值分别为８７．２７±５１．０８ｎｇ／ｍｌ及１４６±５８．８６ｎｇ／ｍｌ，具有一定的诊断意义。

顺铂和依托泊苷对人肺癌细胞株PAa、PG的药效动力学

目的 利用中效原理观察化疗药物顺铂和依托泊苷配伍在体外对人肺癌细胞株PAa与PG的相互作用 ,判断联合用药的效果。方法 采用四甲基偶氮唑盐 (MTT)法利用中效原理判断联合用药的效果。结果 两种药物单独应用时随药物剂量增加 ,其效应也增加 ,两种药物合用时产生协同作用 ,两种药物合用时的给药时间次序会影响效应大小。结论 上述两种药物合用产生协同作用 。

抗Ⅳ型胶原单克隆抗体CⅣ的研制与鉴定

用人胎盘Ⅳ型胶原（ＣｏｌⅣ）免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，以杂交瘤技术建立了一株能稳定分泌抗ＣｏｌⅣ单抗（ＩｇＧ亚类为ＩｇＧ＿１）的杂交瘤细胞株。其染色体众数为８７。用胚胎及成人组织的免疫组化（ＡＢｃ＾Ｅｃ法）显示：皮肤、肾小球、肾小管、血管内皮、乳腺、肺组织、胎盘、眼球角膜的基底膜均呈特异性阳性染色，命名为Ｃ刊。此抗体的制成，对于较理想、可靠地显示基底膜，判断肿瘤的良恶性及探讨其浸润机制有重要意义。

在病理生理教学中注重学生综合素质培养

在高等医学教育中,为培养适应21世纪医疗卫生事业发展需要的高素质医学人才,我们在病理生理学教学实践中探索出了一些方法。

浅谈教研室教学管理

科学规范的教学管理对教研室保持保量完成各项工作可起到重要的促进作用,以多年的教学秘书工作经历,简要阐述如何做好教研室的教学管理工作.

乳腺癌MDA-MB-231细胞源Exosomes对内皮细胞增殖的影响及MAPK/ERK和PI3K/Akt信号通路的作用

目的研究人乳腺癌MDA-MB-231细胞源Exosomes对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)的促增殖作用,并初步探讨MAPK/ERK和PI3K/Akt信号转导通路在此过程中的作用。方法低温超速离心及密度梯度离心法提取乳腺癌MDA-MB-231细胞源Exosomes。采用MTT法分别检测50、100、200、400μg/ml Exosomes对HUVECs促增殖作用的影响,流式细胞仪测定200μg/ml Exosomes对HUVECs细胞周期的影响,Western blotting检测200μg/ml Exosomes诱导下HUVECs细胞内细胞外调节蛋白激酶(ERK)和蛋白激酶B(Akt)蛋白的表达水平。结果乳腺癌MDA-MB-231细胞源Exosomes可促进HUVECs细胞增殖,且呈时间和剂量依赖性。200μg/ml Exosomes作用HUVECs细胞24h后,S期细胞比例(27.8%±3.37%)较对照组(15.34%±0.71%)增加(P<0.05),G1/S期细胞比例(2.22%±0.37%)与对照组(4.67%±0.47%)比较下降(P<0.05)。Western blotting结果显示,200μg/ml Exosomes作用HUVECs细胞24、48、72h后,磷酸化ERK表达(0.3378±0.0415,0.4967±0.0511,0.9205±0.0462)与磷酸化Akt蛋白表达(0.4091±0.0361,0.5484±0.0382,0.7496±0.0481)与对照组(磷酸化ERK 0.1836±0.0324,磷酸化Akt 0.2582±0.0215)相比有所增加(P<0.05)。结论乳腺癌MDA-MB-231细胞源Exosomes能促进HUVECs的增殖,其机制可能与细胞周期改变,以及MAPK/ERK和PI3K/Akt信号通路的持续活化有关。

熊果酸诱导人食管癌细胞Eca-109凋亡的作用及机制

目的研究熊果酸(Ursolicacid,UA)抑制人食管癌Eca-109细胞增殖、诱导细胞凋亡的作用及机制。方法MTT比色法检测熊果酸对Eca-109细胞的增殖抑制作用;透射电镜观察经熊果酸处理后Eca-109细胞超微结构的改变;流式细胞术检测细胞周期变化及细胞凋亡率;Westernblot法检测P27kip1蛋白、凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax的表达。结果20～50μmol/L熊果酸对Eca-109细胞具有显著的抑制作用(P<0.01);电镜下,18.32～36.65μmol/L熊果酸处理过的Eca-109细胞可见典型的凋亡形态及坏死形态;流式细胞检测显示细胞凋亡率及G0/G1期细胞随着熊果酸浓度的增加而增多,S期细胞逐渐减少;Westernblot检测结果提示熊果酸能使Bcl-2表达下降而Bax、P27kip1增加。结论熊果酸对人食管癌细胞系Eca-109具有显著的增殖抑制、诱导细胞凋亡作用。其作用与提高P27kip1蛋白的表达,将细胞阻滞在G0/G1期,下调Bcl-2的表达和增加Bax的表达有关。

UO-126对HeLa细胞增殖及对FBW7表达的影响

目的:观察UO-126对人类宫颈癌细胞株HeLa细胞增殖及对F-盒和含蛋白7的WD重复结构域FBW7表达的影响。方法:采用MTT法观察不同浓度的UO-126对HeLa细胞增殖的影响;免疫荧光法检测FBW7在HeLa细胞中的定位和表达;RT-PCR、Western blot检测FBW7 mRNA及蛋白在UO-126阻断丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein ki-nases,MAPK)信号通路前后的表达情况。结果:MTT结果显示各浓度UO-126具有抑制HeLa细胞增殖的作用,且具有剂量依赖性和时间依赖性(P<0.05)。免疫荧光检测显示UO-126处理HeLa细胞后FBW7阳性表达增强。RT-PCR及West-ern blot结果显示,UO-126作用后HeLa细胞FBW7 mRNA及蛋白表达水平较未处理HeLa细胞明显增高(P<0.05)。结论:MAPK信号通路阻断剂UO-126抑制HeLa细胞增殖,FBW7位于MAPK信号通路的下游。

胎儿生长发育与成年期冠心病生物学危险因素的关系

目的 探讨中国人群中冠心病生物学危险因素的水平与低出生测量指标间的关系。方法 对628名1948～1954年在北京协和医院出生的活产单生子进行追访调查。结果 成年期发生冠心病(CHD)心肌缺血症状的风险概率随出生体重的降低而增加(β=-0.0018,P<0.01);随着出生体重和出生体重指数(PI)降低,患高血压风险加大,出生消瘦组(PI≤24kg/m3)的OR(oddsratio)值是PI>28kg/m3组的5.9倍;成年期发生糖耐量低减(IGT)的风险随出生体重和PI降低而逐渐增大。空腹血浆胰岛素水平(反映胰岛素抵抗)随出生体重和头围的降低而显著升高(趋势检验,P<0.01)。血清甘油三脂(TG)水平随出生体重、PI和头围升高而下降(趋势检验P<0.01,P<0.01,P<0.05),而高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平随出生体重和头围升高而上升(趋势检验P<0.05,P<0.01)。上述出生指标与CHD生物学危险因素间的关系与胎龄和成年期生活方式无关。血清总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平与出生指标无关。结论 我国人群中,以低出生测量指标反映的宫内发育迟缓可能使成人期发生高血压、糖尿病、胰岛素抵抗、高血清TG和低HDL-C等冠心病生物学危险因素的风险增加。

奇异变形杆菌、洛菲氏不动杆菌16s rRNA3’-23s rRNA 5’间序列的克隆及测序

目的:对奇异变形杆菌、洛菲氏不动杆菌16s rRNA 3’~23s rRNA 5’间序列(16S^23S rRNA intergenic spacer region,ISR)进行克隆测序,为分子探针技术鉴定两菌奠定基础。方法:针对临床常见致病菌16s rRNA 3’~23s rRNA 5’间序列两端的16S及23S rRNA保守序列设计PCR扩增的通用引物,对两菌进行扩增,利用PMD-18TVector质粒对两菌的PCR产物进行T载体克隆构建,测序后申报Genbank。结果:两菌的通用引物扩增产物构建的T载体克隆,测序结果经Blast分析,确定为两菌的ISR序列,申报Genbank获得接收。结论:成功的对奇异变形杆菌、洛菲氏不动杆菌ISR序列进行了克隆测序,该序列可以用于两种菌的通用引物PCR扩增技术鉴定。

顺铂联合exosomes抗小鼠肝癌效应的实验研究

目的:评价顺铂(DDP)与exosomes联用的抗肿瘤效果,研究其可能机制。方法:采用MTT法检测顺铂对小鼠肝癌H22细胞增殖的影响,用H22源exosomes瘤苗免疫小鼠,3H-TdR释放法检测exosomes诱导产生的CTL活性及顺铂对CTL杀伤的增敏作用,RT-PCR检测顺铂作用后H22细胞中Fas及exosomes免疫后脾淋巴细胞FasL的mRNA表达水平,Western blot检测顺铂对H22细胞Fas的蛋白表达水平的影响。以小鼠肝癌H22细胞接种BALB/c小鼠建立动物模型,观察顺铂联合exosomes治疗对小鼠生存期的影响。结果:顺铂抑制H22细胞生长呈量效关系;exosomes免疫小鼠可诱导产生针对H22细胞的CTL反应,经2.5mg/L顺铂预处理24h的H22细胞对CTL杀伤的敏感性增强(P<0.05)。顺铂在mRNA和蛋白水平,显著增强H22Fas的表达;exosomes免疫小鼠后,脾淋巴细胞FasL表达增加。顺铂联合exosomes组小鼠生存期较单独治疗组及对照组明显延长(P<0.05)。结论:顺铂与exosomes联合治疗有协同抑制肿瘤的作用,产生协同作用的机制与增强CTL活性有关。

热休克小鼠肝癌细胞(H_(22))源Exosomes的制备及其蛋白组成的初步研究

目的：探讨热休克对小鼠肝癌细胞H22分泌的Exosomes产量及蛋白组分的影响，为进一步研究Exosomes在生产和免疫治疗方面的改进提供理论依据。方法：经超速分级离心和蔗糖密度梯度离心纯化得到H22细胞分泌的Exosomes和经热休克处理后H22细胞分泌的Exosomes（Heat shocked Exosomes，HS—Exo），透射电镜观察其形态，SDS—PAGE电泳分析其蛋白带组成，Western Blot检测两者所含有的免疫分子情况。结果：在透射电镜下，HS—Exo与Exosomes形态相似，直径约20～90nm的膜性囊泡，结构完整；经热休克处理后小鼠肝癌细胞H22分泌的Exosomes产量增多，且在HS—Exo中表达的热休克蛋白70（HSP70）、热休克同源蛋白70（HSC70）、热休克蛋白60（HSP60）、粘附相关蛋白（ICAM—1）与在Exosomes中的表达相比显著上调（P〈0．05）。结论：超速分级离心及蔗糖密度梯度离心提取纯化热休克小鼠肝癌细胞H22源的Exosomes的方法具有可行性；HS—Exo中HSP70、HSC70、HSP60、ICAM—1的表达比Exosomes更为丰富，提示HS—Exo可能比Exosomes具有更强的免疫活性。

H_(22)源exosomes瘤苗在小鼠体内的抗肿瘤及免疫调节作用

目的:探讨exosomes瘤苗对小鼠免疫功能及肝癌移植瘤生长的影响。方法:从培养的小鼠肝癌H22细胞上清中分离exosomes瘤苗,以H22细胞接种BALB/c小鼠建立动物模型,随机分为exosomes瘤苗接种组及PBS对照组。15d后处死小鼠,测量移植瘤体重量,计算抑瘤率;分别称取脾重、胸腺重,检测荷瘤小鼠脾脏指数和胸腺指数;用MTT法检测小鼠脾淋巴细胞增殖情况和细胞毒活性;酶连免疫吸附试验(Enzyme-linked immunoabsorbent assay,ELISA)检测脾淋巴细胞产生IL-2、INF-γ的能力。结果:接种exosomes瘤苗能显著抑制肿瘤生长,抑瘤率达42.26%;与对照组比较,实验组荷瘤鼠胸腺指数、脾指数显著提高(P<0.05);exosomes促进脾淋巴细胞增殖并增强其细胞毒活性,同时脾淋巴细胞培养上清中IL-2、INF-γ的水平升高。结论:exosomes瘤苗可能通过增强小鼠的免疫功能抑制小鼠肝癌移植瘤生长。

大蒜素诱导鼠肝癌细胞MM45T.Li细胞株凋亡

目的探讨大蒜素对体外培养的鼠肝癌细胞MM45T.Li生长的抑制和诱导细胞凋亡的作用。方法用MTT法检测药物效应,透射电镜及流式细胞仪观察大蒜素处理MM45T.Li细胞后细胞凋亡和细胞周期的改变。结果①MTT法证实大蒜素对MM45T.Li细胞生长有抑制作用,呈浓度、剂量-效应关系。②DAN琼脂糖凝胶电泳可见细胞凋亡特征性“DAN梯形”。③流式细胞仪检测发现大蒜素处理MM45T.Li细胞后细胞周期滞留于G0/G1期,对照组及实验组细胞凋亡率分别为(4.98±4.841)%、(20.91±5.272)%,并可见凋亡峰。④透射电镜可见MM45T.Li细胞出现凋亡细胞形态学改变。结论大蒜素对鼠肝癌细胞MM45T.Li有抑制作用,其抑制作用可能与诱导肝癌细胞凋亡、阻抑细胞周期有关。

小鼠肝癌细胞(H_(22))源外泌体的体内抗肝癌作用研究

目的在荷瘤动物模型观察小鼠肝癌细胞(H22)来源的外泌体(exosomes)激发宿主抗肝癌免疫应答的效应。方法用自行分离纯化的小鼠肝癌细胞H22源外泌体免疫小鼠,然后给小鼠皮下注射H22肿瘤细胞,观察肿瘤的生长状况。用MTT法检测小鼠脾细胞增殖情况和细胞毒活性;用免疫组织化学法检测肿瘤组织中CD4+、CD8+T淋巴细胞浸润情况。结果该外泌体使肿瘤出现时间延迟,肿瘤生长缓慢,小鼠生存率提高。促进脾淋巴细胞增殖并增强其细胞毒活性,促进CD4+和CD8+T细胞活化。结论小鼠肝癌细胞(H22)源外泌体能诱导抗肿瘤应答,有效地诱导特异性的杀伤肿瘤细胞活性,有针对亲本细胞的免疫保护作用。

改革教学方法,提高病理生理实验教学质量

提高学生动手能力、综合分析问题的能力,提高实验教学质量是当前教学改革的一项重要任务.本文介绍在病理生理实验教学方法改革中的探索与体会.

5-氟脲嘧啶及丝裂霉素对人胃癌细胞株BGc-823的相互作用

目的 体外观察 5 氟脲嘧啶及丝裂霉素合用对人胃癌细胞株 (BGc 82 3)的相互作用。方法 采用MTT法利用中效原理判定两药合用的效果。结果 两种药单独应用时随着药物剂量增加 ,其效应也增加 ;两药大剂量 (大于中效剂量 )合用时协同作用 (CI<1) ,小剂量 (小于中效剂量 )合用时为拮抗作用 (CI>1) ;两药给药时间次序不同不会影响效应大小。结论 上述两种药合用大剂量是协同小剂量拮抗 ,且效应大小与给药时间次序无关。