早幼粒细胞白血病蛋白与TAK1结合蛋白相互作用的生物信息学分析与验证

目的通过生物信息学方法预测早幼粒细胞白血病蛋白与TAK1结合蛋白的相互作用,并通过免疫共沉淀方法进行实验验证。方法使用Rosetta软件,采用比较建模的方法,构建TAB1蛋白的三维模型;在PDB数据库中检索PML蛋白二级结构,并解析其晶体结构和三维结构。Zdock3.0.2软件进行PML与TAB1的蛋白-蛋白对接,并提取最佳构象进行对接模型的分子结构分析。α-MMC处理的M1炎性巨噬细胞,利用免疫共沉淀技术检测两种蛋白的相互作用。结果以PML的6IMQ为对接部位时,PML蛋白与TAB1蛋白能形成3个盐桥、6个氢键和6个疏水作用;以PML的5YUF为对接部位时,PML蛋白与TAB1蛋白能形成1个氢键、3个静电相互作用和9个疏水作用,两种对接模式皆能形成良好的分子对接和相互作用;在α-MMC处理4h后,其PML-IP组的细胞裂解沉淀液中分别能检测到显著的PML和TAB1阳性蛋白条带。结论PML蛋白与TAB1蛋白能发生较强的相互作用。

α-苦瓜素对巨噬细胞炎性细胞因子风暴的选择性抑制作用

目的α-苦瓜素(α-momorcharin,α-MMC)能受体依赖性靶向作用于单核细胞,调节其细胞因子表达而发挥免疫调节作用,但对巨噬细胞是否具有选择性调节作用尚不清楚。本实验通过细菌脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的M1型炎性巨噬细胞模型,观察α-MMC对其炎性细胞因子风暴的抑制作用,并探讨其可能的靶向作用机制。方法Western blot法检测WIL2-S B淋巴细胞、H9 T淋巴细胞、THP-1单核细胞和M0巨噬细胞LRP1受体蛋白表达;CCK-8法检测4种细胞的生存率;ELISA检测M1巨噬细胞炎性细胞因子的表达水平;Western blot法检测M1巨噬细胞TLR4信号通路相关蛋白的表达。结果巨噬细胞具有与单核细胞一致的高密度LRP1受体;α-MMC在4个细胞上的存活率与该受体的密度呈正相关;α-MMC以剂量和时间依赖性抑制M1巨噬细胞的炎性细胞因子TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-8、MIP-1α和MCP-1表达;α-MMC对TLR4信号通路的TAK1/p-TAK1、p-JNK、p-AP1和p-p65信号蛋白有明显的抑制作用,这种抑制作用能被LRP1受体阻断剂阻断。结论α-MMC通过LRP1受体介导,抑制TLR4信号通路的TAK1,进而抑制下游NF-κB和MAPK通路,从而选择性抑制巨噬细胞炎性细胞因子表达。α-MMC对巨噬细胞的选择性免疫抑制作用可能使其成为治疗急性感染巨噬细胞激活综合征(macrophage activation syndrome,MAS)的非常有前途的药物。

特异性溶瘤重组腺病毒KH901的体外特异性抗肿瘤作用研究

目的研究特异性溶瘤重组腺病毒KH 901在体外培养的人肿瘤细胞中的选择性复制和杀伤作用。方法以感染复数(M O I)=2 PPC的KH 901和野生型腺病毒(A d5)感染人肿瘤和正常细胞,72 h后采用病毒滴定法测定病毒滴度;以M O I=10 PPC和1 PPC的KH 901感染人肿瘤和正常细胞,24 h后通过EL ISA法和TF-1依赖细胞株/M TT比色法测定粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)的免疫活性和生物活性;以M O I分别为0、0.1、1、10、100、1000 PPC的KH 901和野生型A d5感染人肿瘤和正常细胞,采用M TT法测定各细胞活力,计算半数药物有效浓度(EC50)。结果野生型A d5在正常细胞和肿瘤细胞中均大量复制,均表现出明显的杀伤作用;KH 901在肿瘤细胞中大量复制〔(2526.4±136.8)^(2796.6±104.6)TC ID50/ce ll〕,表达大量的人GM-CSF〔(1177.793±6.62)^(3924.497±17.79)IU/(106细胞.24 h)〕,并显示出明显的杀伤作用〔EC50为(0.31±0.06)^(0.19±0.01)p fu/ce ll〕,在正常细胞中KH 901复制较差〔(56.8±9.2)^(90.1±14.4)TC ID50/ce ll〕,只有少量的GM-CSF产生〔(13.397±0.82)IU/(106细胞.24 h)〕,杀伤作用轻微〔EC50为(92.33±9.12)^(121.20±19.94)p fu/ce ll〕,两者间差异有统计学意义(P<0.05)。结论KH 901具有肿瘤选择性复制和杀伤作用,并能表达具有生物活性的GM-CSF,显示出治疗实质性肿瘤的潜力。

新城疫病毒合用中药黄芪诱生内源性干扰素的研究

目的研究新城疫病毒(NDV)合用中药黄芪在小鼠体内诱生内源性干扰素-α及对小鼠的免疫调节作用。方法实验分3部分,实验1:分别以NDV、黄芪及二者合用予小鼠口腔喷洒给药,连续10日后以ELISA法测定小鼠唾液中干扰素-α和SIgA的含量;实验2:分别以NDV、黄芪及二者合用予小鼠腹腔注射给药(黄芪灌胃方式给药),ELISA法测定给药10日后血清干扰素-α的含量;实验3:分为NDV、黄芪及二者合用的高、中、低三种剂量,给药方法同第二组,6天后MTT法测定脾脏NK细胞的活性。每组分别设置阴性对照。结果NDV和黄芪口腔给药能升高小鼠唾液干扰素-α(35.54±10.20IU/ml,5.69±1.35IU/ml)和SIgA含量(68.88±15.47ng/ml,44.32±9.87ng/ml),腹腔给药能诱生血清干扰素-α(120.54±29.21IU/ml,10.69±6.35IU/ml),并能激活NK细胞活性(50.4%,32.1%)。NDV合用黄芪组的诱生效果远高于单独使用组(98.55±16.95IU/ml,101.31±27.59ng/ml,262.55±26.91IU/ml,75.6%),显示出较强的协同作用。结论NDV合用黄芪能诱生小鼠内源性干扰素,并能发挥对小鼠SIgA和NK细胞的免疫调节作用。

特异性溶瘤重组腺病毒KH901对荷瘤鼠肿瘤生长的抑制作用和表达GM-CSF的研究

目的探讨特异性溶瘤重组腺病毒KH901的抗肿瘤效果及表达人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)的水平。方法裸鼠皮下接种人肝细胞癌(Hep3B)细胞或人前列腺癌(LNcap)细胞,建立相应裸鼠移植瘤模型。KH901瘤体内注射给药,同时设阳性对照〔5-氟尿嘧啶(5-FU)或顺铂尾静脉注射〕和阴性对照〔生理盐水(NS)尾静脉注射〕,以相对肿瘤增殖率(T/C%)和抑瘤率观察抗肿瘤效果;建立人肺癌(A549)裸鼠移植瘤模型,瘤体内注射KH901,分别于首次给药后第2、7、11、14、18、36d各取3只动物眶静脉采血并摘取肿瘤,以ELISA法测定血清和肿瘤匀浆液上清中GM-CSF含量。结果1在Hep3B裸鼠抑瘤实验中,KH901高剂量(3×1010VP/鼠)组的T/C%和抑瘤率分别为7.31%、93.61%,与KH901低剂量(3×108VP/鼠)组(40.27%、68.76%)和5-FU组(37.33%、61.49%)相比显示出较强的抑瘤效果(P<0.05)。2在LNcap裸鼠抑瘤实验中,KH901多次给药(3×1010VP/鼠×3)组的T/C%和抑瘤率分别为5.47%、95.29%,其抑瘤效果强于顺铂组(25.47%、71.93%),但与KH901单次给药(3×1010VP/鼠×1)组(12.94%、87.94%)相比差异无统计学意义。3在A549裸鼠移植瘤模型中,肿瘤和血清中的GM-CSF分别在第7d〔(47.72±9.21)ng/mg〕和第11d〔(92.45±18.64)ng/mL〕出现高峰,随后,GM-CSF表达量逐渐降低。结论KH901有明显的抗肿瘤作用,在体内肿瘤中表达高水平的GM-CSF,并渗入血管到循环系统,形成血液GM-CSF的高峰。

“论文式实验报告”撰写模式的教学实践

目的评估"论文式实验报告"教学模式在医学检验专业本科班中的教学效果。方法将2009级检验本科班学生随机分为实验组(28人)和对照组(27人),在《临床免疫学检验》和《临床治疗药物监测技术》教学中,实验组采用"论文式实验报告"教学模式,对照组采用传统教学模式。教学效果评价指标包括实验考核成绩、实习成绩、毕业论文和课终理论成绩等。结果实验组毕业论文成绩显著优于对照组(P<0.05),在《临床治疗药物监测技术》教学中,实验组在实验成绩、理论考试和总评成绩均优于对照组,且有显著的统计学差异(P<0.05)。结论"论文式实验报告"教学模式能在提高学生的论文写作能力和巩固理论知识等方面发挥积极作用。

增设“食品药品检验学”新专业的论证

食品药品检验学专业是融合食品检验学与药品检验学为一体的新型检验学专业。本专业的开展可以满足我国与日俱增的对食品、药品检验专业技术人才的需求,从而有利于应对日益泛滥的食品、药品与化妆品安全问题。本文分析了增设"食品药品检验学"新专业的必要性,展示了本专业建设的紧迫性,并对专业培养目标、服务方向、主干学科和主要课程提出了相应的建议。

医学检验专业增设“治疗药物监测”学科方向的论证

治疗药物监测(TDM)是在临床药理学、临床毒理学和现代分析化学的基础上发展起来的一门边缘学科,其根本目的是促进临床安全有效用药,对那些安全范围窄、个体差异大或需要长期使用的药物,通过开展TDM,将有助于优化临床治疗药物的选择和个体给药方案的设计。本文分析了医学检验专业增设TDM学科方向的必要性和可行性,展示了本学科建设的紧迫性,并对专业培养目标和服务方向、主干学科和主要课程提出了相应的建议。

长春新碱传递体对荷Burkitt’s淋巴瘤裸鼠的抑瘤活性评价

目的评价长春新碱传递体(vincristine loaded transfersom es,VCR-T)对荷Burk itt’s淋巴瘤裸鼠的抑瘤效果。方法建立荷Burk itt’s淋巴瘤的裸鼠模型,将VCR-T分为高(0.8 mg.kg-1)、中(0.2 mg.kg-1)、低(0.05 mg.kg-1)剂量以及单次给药和3次给药组,长春新碱溶液(vincristine solution,VCR-Sol)以0.8 mg.kg-1的剂量分3次静脉注射,比较各组荷瘤裸鼠的相对肿瘤增殖率、肿瘤生长曲线、抑瘤率,并进行瘤体组织学检查考察VCR-T的抑瘤效果。结果各治疗组对肿瘤的生长均有一定的抑制作用,且随着给药剂量及给药次数的增加,对肿瘤的抑制作用也相应的增加;VCR-T以0.8 mg.kg-1剂量单次给药则可达到与VCR-Sol相同的效果,而0.2 mg.kg-1剂量3次给药的疗效则优于VCR-Sol;所有VCR-T组裸鼠100%存活,VCR-Sol组裸鼠存活率仅75%。结论VCR-T透皮给药具有比VCR-Sol静注给药更好的抑瘤效果。

苦瓜蛋白RIP的免疫毒性研究

目的分离纯化苦瓜籽核糖体失活蛋白(RIP),对RIP在动物体内急性毒性和免疫毒性进行研究。方法采用离子交换层析、凝胶过滤层析等方法提取苦瓜籽RIP,对其进行小鼠急性毒性实验,确定小鼠半数致死量(LD50),并通过豚鼠全身主动过敏试验和大鼠被动皮肤过敏试验,探讨苦瓜籽RIP的免疫毒性。结果苦瓜籽RIP对小鼠的LD50为25.2 mg/kg,全身主动过敏试验中,RIP高、低剂量组豚鼠出现明显过敏反应,多数迅速死亡,被动皮肤过敏试验中,RIP组大鼠皮肤出现明显蓝斑。结论苦瓜籽核糖体失活蛋白具有较强的免疫毒性。

宫颈炎患者进行线索细胞检查的临床价值

目的探讨线索细胞检查对宫颈炎患者的临床价值。方法湿片检查法和免疫荧光检测法对753例宫颈炎患者和503例健康妇女的白带分别进行常规检查和线索细胞检查。结果健康对照组清洁度Ⅲ度以上为9．54％，慢性宫颈炎组100．00％，急性宫颈炎组99．32％；健康对照组线索细胞阳性率0．40％，急性宫颈炎组4．76％，慢性宫颈炎组12．56％。结论慢性宫颈炎中线索细胞阳性率与清洁度呈正相关；慢性宫颈炎组与其他组比较，线索细胞阳性率差异有显著性；31～40岁年龄段的线索细胞检出率与其他年龄段差异存在显著性。

重组人促红细胞生成素的基本特性研究

重组EPO细胞灌注法培养的收获液,用Q SepharoseXL,C4反相疏水和Superdex75层析柱纯化表达的EPO.经SDS PAGE、PAGE和HPLC分析纯度达98%以上,总回收率为17%.经SDS PAGE分析其表观分子量为32～40kD.用IEF方法测得pI为3.75～4.15.网织红细胞计数法测得体内比活大于1.5×105IU,用ELISA测得体外活性为1.5×106～1.6×106IU.纯化的EPO的氨基酸组成和其它一些性质也进行了研究.

PEG-EPO在大鼠体内的药代动力学研究

目的:探讨聚乙二醇化促红细胞生成素(PEG-EPO)在大鼠体内的药代动力学。方法:采用放射性核素125I对PEG-EPO进行标记,测定高、中、低(27,9,3μg·kg-1)3个剂量组大鼠静脉注射125I-PEG-EPO后不同时间血浆中药物的放射性浓度,用DAS软件拟合放射性浓度-时间曲线,并计算药代动力学参数。结果:低、中、高3个剂量组给药后0.017h(1min)血药浓度分别为(24.800±3.535),(80.971±16.368),(269.620±26.360)ng·mL-1,与剂量呈正相关,r=0.9998;血中药物消除半衰期T1/2β分别为(27.22±3.67),(28.40±1.61),(33.12±1.83)h,随剂量的增加无显著变化;AUC0-120h分别为(69.22±7.13),(218.77±34.57),(470.42±65.88)ng·h·mL-1,与剂量呈正相关,r=0.9909。结论:PEG-EPO在大鼠体内的代谢过程呈线性动力学特征,符合二室开放模型。

MAP30蛋白结构功能的生物信息学研究

使用protparam、PHDhtm、PredictProtein等生物信息学在线服务器,对MAP30蛋白进行全面分析预测,研究MAP30蛋白具有的抗HIV活性,为临床应用提供抗科学依据和理论基础。结果表明:MAP30蛋白为稳定的碱性疏水蛋白,序列上存在三段跨膜螺旋结构和一段无序化位区域,肽链上的二硫键可使分子间形成聚集体,是一种分泌蛋白。MAP30蛋白序列包含信号肽、低复杂度区域和RIP样活性区域3个区域,具有细胞外被膜、异构酶、免疫应答三种功能。序列上分布着N-糖基化位点、N-豆蔻酰化位点、Shiga/ricin核糖体失活蛋白活性位点和多段蛋白激酶磷酸化位点。

α-苦瓜素经LRP1受体介导的JNK信号通路诱导肝细胞L02早期凋亡的机制研究

目的:探讨α-苦瓜素诱导肝细胞L02(简称"L02细胞")早期凋亡的信号通路。方法:制备并纯化α-苦瓜素。采用流式细胞术检测0(阴性对照)、160、80μg/mLα-苦瓜素作用L02细胞2～8 h后的细胞凋亡率。小干扰RNA(siRNA)沉默低密度脂蛋白受体相关蛋白1(LRP1)得到LRP1-siRNA细胞,然后采用液相芯片分析术检测α-苦瓜素(160μg/mL)分别作用L02细胞(正常组)和LRP1-siRNA细胞(沉默组)0、0.25、0.5、1、2 h后c-Jun氨基末端激酶(JNK)信号通路中促调蛋白磷酸化JNK(p-JNK)、磷酸化凋亡前体蛋白(p-Bad)、胱天蛋白酶9(Caspase-9)及抑调蛋白磷酸化蛋白53(p-p53)、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)、磷酸化B淋巴细胞瘤2(p-Bcl-2)、Caspase-8的表达情况,分析α-苦瓜素对L02细胞JNK信号通路的作用。结果:制备并纯化得到α-苦瓜素(纯度>97%);与阴性对照组比较,160μg/mLα-苦瓜素作用8 h时,可显著诱导细胞早期凋亡(P<0.05),80μg/mLα-苦瓜素诱导的早期凋亡不明显(P>0.05);与0 h比较,作用后0.25 h促调蛋白p-JNK、p-Bad和Caspase-9表达量显著增加(P<0.05),而抑调蛋白pp53、p-Akt、p-Bcl-2和Caspase-8表达量无变化;与正常组相比,沉默组各时间点的p-JNK、p-Bad和Caspase-9的表达均显著减少(P<0.05)。结论:α-苦瓜素可能通过LRP1受体介导JNK信号通路诱导肝细胞凋亡,为揭示其肝毒性提供了参考。

深静脉穿刺置管在血液透析患者中的应用进展

血液净化需要体外血液循环,建立合适的血液通路是血液净化治疗的必备条件之一。因此,临时性血管通路是终末期肾病患者在动静脉内瘘未成熟前和急性肾衰患者行血液透析治疗必不可少的前提条件。早期临床上常采用的直接浅表动、静脉穿刺常因血流量不足或穿刺困难导致透析不充分或透析失败。由于血液通路难以建立,插入深静脉导管可以说是唯一的选择。而目前双腔中心静脉置管作为血液净化的临时血液通路已被广泛应用。那么,选择哪一部位作为最佳的深静脉血透通路成为了长期以来临床医生讨论的重点。就这一问题,笔者参考近年相关文献对此作一综述。

β-苦瓜蛋白质分子结构模建研究

使用DNAMAN软件分析β-苦瓜蛋白质氨基酸组成,亲水、疏水性,用生物信息学在线网站预测其基本特性,二、三级结构,卷曲螺旋区域,PEST序列,并用生物信息学软件分析其表面电位、可及性,建立Ramachandran图对模建结果进行结构质量分析与检测评价.结果发现:β-苦瓜蛋白质有249个氨基酸,等电点9.19,亲水区域和疏水区域交错分布;消光系数为280 nm,属于稳定蛋白质,平均亲水性是-0.138;二级结构中α-螺旋占42.57%,延伸链占20.48%,不规则卷曲占36.95%;分布着3段卷曲螺旋区域,存在5段非PEST序列,无稳定二聚体、三聚体卷曲螺旋;β-苦瓜蛋白质的三级结构、表面电位和可及性的空间分布得到了模建,Ramachandran图检测表明此模型结构符合立体化学规则.

苦瓜核糖体失活蛋白广泛的生物学功能

核糖体失活蛋白（ribosomal inactivating proteins，RIPs）广泛存在于植物界，目前已从350余种植物中筛选到110多种RIPs，少数细菌和真菌中也分离出了RIPs。苦瓜RIPs是从苦瓜籽或果肉中分离纯化得到的碱性蛋白质，具有抗病毒、抗肿瘤、抗细菌及真菌和抗生育等广泛生物活性，其中因其抗HIV等病毒及抗肿瘤作用而受到广泛关注和研究，现就苦瓜RIPs的生物学功能作一总结。

临床免疫学检验实验教学及考核改革初探

近年来,免疫学已发展成为生命科学前沿领域中最为活跃的学科之一,不断有新方法、新技术和新仪器出现,这就给临床免疫学检验的教学工作带来了新的挑战,尤其是在实验教学方面。当前教学现状和临床实际相脱节的矛盾日趋明显,学生学习的积极性和主动性不强,因此,进行实验教学和考核改革势在必行，下面就对实验改革情况做一简单介绍。