束缚应激致高脂血症ApoE^(-/-)小鼠心肌损伤的分子靶标筛选与机制分析

目的采用蛋白质组学技术筛选慢性束缚应激致高脂血症小鼠心肌损伤的标志物及其潜在机制。方法通过束缚ApoE-/-小鼠建立高脂血症合并慢性应激模型,运用蛋白质组学与生物信息学等技术描绘慢性应激对高脂血症小鼠心肌损伤的特征性分子改变及相关调控机制,并从中探索潜在的诊断标志物。结果蛋白质组学分析结果显示,与高脂血症组相比,高脂血症合并束缚应激组小鼠共有43个显著上调与58个显著下调的差异表达蛋白质。其中,GBP2、TAOK3、TFR1、UCP1是极具诊断潜力的分子标志物。KEGG通路富集分析结果表明,铁死亡是加剧高脂血症合并束缚应激模型心肌损伤的重要机制通路。mmu_circ_0001567/miR-7a/Tfr-1和mmu_circ_0001042/miR-7a/Tfr-1可能是该模型中与铁死亡相关的重要circRNA-miRNA-mRNA调控网络。结论慢性束缚应激可能通过铁死亡加剧高脂血症小鼠的心肌损伤,本研究筛选出4个具有潜在应用价值的心肌损伤分子诊断标志物,为高脂血症合并应激致心脏性猝死的研究提供了新的方向。

39例性别重置术后法医临床性别鉴定案例分析

目的 分析易性症人群性别重置术后法医临床性别鉴定案例的特点,结合国内外性别变更政策及相关案例,探讨我国对性别重置术人群的性别鉴定要点,旨在规范相关鉴定。方法 收集复旦大学上海医学院司法鉴定中心近年39例法医临床性别鉴定案例,对性别比例、鉴定时间、手术地点、第二性征等进行统计分析。结果 跨性别女性案例占97.4%,手术地点在泰国者占94.9%,全部案例均在完成性别重置术后进行鉴定,均至少有一项第二性征与术后第一性征相符,辅助检查应用案例仅有2例。结论 法医临床性别鉴定应以第一性征、第二性征与变更后的性别相符为原则。

类胰蛋白酶与过敏性休克死亡的法医学鉴定

目的探讨类胰蛋白酶与过敏性休克的关系。方法从类胰蛋白酶的生物学特性、正常人分布、检测方法及其与过敏性休克的关系,并应用ELISA方法检测三例尸体血清类胰蛋白酶的浓度,对三例过敏性休克死亡的案例作回顾性分析。结果两例血清中类胰蛋白酶的含量分别为52ng/ml和121ng/ml(高于正常值10倍以上),另一例浓度为0.73ng/ml。结论诊断过敏性休克,类胰蛋白酶含量的检测是很有意义的,但不能单凭检测结果下结论。

体外培养FBs损伤模型的建立及细胞免疫组化研究

首次应用培养人胎肺成纤维细胞 (FBs)损伤模型 ,体外研究创缘FBs合成细胞型纤维连接蛋白 (cellu larfibronectins,cFn)的变化与损伤时间的关系。结果表明 ,损伤使处于静息状态的融合FBs成为具有运动能力和增殖能力的活跃细胞。应用免疫组化ABC法结合图像分析技术 ,观察伤后不同时间创缘FBs内cFn的含量变化。伤后 1h ,可以检测到cFn有变化 ,且在伤后 6h内 ,cFn逐渐增多 ,其变化与损伤时间呈正相关。这对今后应用cFn与损伤时间推断的研究提供了科学依据 ,同时为法医学损伤时间研究开辟了新的途径。

大鼠尺神经损伤平面和修复时间对爪内肌细胞凋亡的影响

目的研究尺神经损伤修复后靶肌功能恢复的影响因素。方法42只SD雄性大鼠分为肘部、腕部2组实验组和1组正常对照组;实验组在肘部和腕部完全离断两前肢尺神经后即刻、1个月、3个月修复一侧神经(另一侧为对照侧),应用免疫组织化学染色和电镜技术,观察和比较大鼠爪内肌细胞凋亡及细胞超微结构变化。结果即刻修复组大鼠爪内肌促细胞凋亡基因Fas、Caspase-3表达与正常组之间的差异无统计学意义;随修复时间延长,其表达逐渐增高,且组间有显著性差异(P<0.05)。抑细胞凋亡基因Bcl-2蛋白表达随修复时间延长而逐渐降低。伤后即刻、1月组实验侧Fas和Caspase-3蛋白表达较相应对照侧低(P<0.05);而3月组实验侧与相应对照侧比较无明显差异(P>0.05);相同修复时间,不同损伤平面组间表达差异均无统计学意义。结论靶肌超微结构改变及细胞凋亡的发生与神经损伤后修复时间有密切关系,与损伤平面关系较小。在法医学鉴定时机认定方面,尚需进一步研究验证。

损伤对培养人胎肺FBs分泌Fn的影响及与损伤时间的关系

为了探讨损伤对FBs分泌Fn的影响及与损伤时间的关系 ,在本室建立的体外培养人FBs损伤模型的基础上 ,应用酶联免疫组织化学检测技术 (双抗体夹心法ELISA)对损伤后不同时间培养液中Fn的含量变化进行检测 ,结果表明 :伤后培养人胎肺FBs合成分泌的cFn的量 ,在伤后6h内与损伤时间呈正相关。

正中神经与尺神经吻合的解剖学研究及法医学鉴定意义

目的探讨中国人群正中神经-尺神经吻合(Martin-Gruber anasmotosis,MGA)情况及其对尺神经损伤法医学鉴定的影响。方法通过105例中国人上肢正中神经、尺神经解剖,观察MGA变异情况,对MGA的分型、走行及位置等进行分析,了解该变异对尺神经损伤法医学鉴定的影响。结果105例中发现24例MGA,MGA出现率为22.9%,男性出现率略高于女性,单双侧及左右侧无明显个体差异。24例MGA中,I型>Ⅱ型>Ⅳ型>Ⅲ型(分别占45.8%,25%,16.7%和12.5%)。正中神经起始点位于内外髁连线上4.11cm至连线下9.95cm,平均前臂连线下3.05cm;尺神经止点位置均在连线3cm以远,最远至连线下14.7cm,平均连线下8.05cm。结论中国人群存在MGA的位置多见于尺神经损伤的常见部位,对尺神经损伤的法医学鉴定有一定的影响。

复旦大学基础医学院法医学系简介

复旦大学基础医学院法医学系是我国重要的法医学教学科研基地之一，博士授予点，前身为上海医科大学法医学教研室。1984年为落实“全国高等法医学专业教育座谈会”会议精神。我校成为全国首批设立法医学系的高等院校，并于同年招收法医学专业本科生及硕士研究生。

体外培养成纤维细胞创伤愈合过程研究及其法医学应用前景

细胞培养(cell-culture)指的是从机体内取出组织细胞,模拟体内生理环境,在无菌、适当温度和一定营养条件下使之生存、生长繁殖,并维持其结构和功能的方法。Harrison(1907年)和Carrel(1912年)开始建立培养组织细胞的基本模式系统,到1953年Dubreu利用胰蛋白酶(trypsin)消化处理和液体培养方法,获得单层培养细胞。在此基础上,至今已建立起多种细胞系,如WI-38人胚肺成纤维细胞(fibroblasts,FBs)、HL-7702上皮型细胞等。

大鼠心肌组织中microRNA和18S rRNA的降解与死亡时间的相关性

目的探讨大鼠死后心肌组织中microRNA和18S rRNA的含量变化与死亡时间的关系。方法将SD大鼠断颈处死后置于25℃室温、50%湿度的环境中,于死后不同时间提取心肌组织中总RNA。利用实时荧光定量PCR检测大鼠心肌组织中miR-1-2和18S rRNA的含量变化,结果用循环阈值(Ct值)表示,分析死亡时间与Ct值的关系,最终建立死亡时间推断的回归分析方程。结果大鼠死后120h内心肌组织中miR-1-2含量无明显变化,此后开始下降;而18S rRNA含量在96 h内逐渐增多,随后开始缓慢下降。大鼠死后不同时间18S rRNA的Ct值以及18S rRNA和miR-1-2的ΔCt值与PMI呈非线性相关,二次曲线拟合的R2值分别为0.9487、0.8072。结论 18S rRNA的Ct值和18S rRNA与miR-1-2的ΔCt值与PMI之间存在明显非线性关系,可以作为早期死亡时间推断的指标。

家兔急性心肌梗死CTnI免疫组织化学实验研究

目的研究CTnI诊断急性心肌梗死的法医病理学意义。方法结扎兔心脏左冠状动脉左旋支的左室支制作心肌梗塞动物模型。应用免疫组织化学法检测心肌梗塞区域CTnI的变化,与HE染色法进行比较。结果早期心肌梗塞组织,HE染色组尚未出现特征性梗死表现,免疫组织化学染色法可见CTnI分布以及含量变化,并且随着时间延长,变化区域扩大,且近心内膜心肌细胞同时出现变化。结论CTnI免疫组织化学检测可以应用于急性心肌梗死的诊断。

24例长期服用精神类药物致猝死的法医学分析

目的分析24例精神病患者因长期服用精神类药物猝死的法医学特征。方法收集2011—2016年精神病患者猝死的案例,通过系统的案情调查、尸体解剖及毒(药)物检验结果,对精神病患者猝死的法医学特征进行回顾性分析。结果 24例因长期服用精神类药物致猝死的精神病患者中,男女性比例为1.7∶1,平均年龄为(59.0±8.8)岁。15例患者有明确的患病年限[(14.4±8.2)年],另9例已知患病年限超过3年。62.5%患者的死亡时间是工作日白天,91.7%患者的死亡地点在家中,大多数患者死亡前有不同程度的躯体不适主诉。精神分裂症患者(20例)最常见,其次为抑郁症患者(4例)。患者均有服用精神类药物史,以氯氮平及氯丙嗪最多见。死亡原因以循环系统疾病(15例)为主,最常见的为心肌炎(11例),其次为肺炎(4例)。结论对精神病患者尤其是精神分裂症患者,需要警惕使用精神类药物引起猝死的风险。

实时RT-PCR常用内对照在死亡早期人心肌内的稳定性

目的探讨实时RT-PCR方法常用内对照表达水平在死亡早期人体心肌组织中的稳定性。方法选取10例具有一致的外界环境(平均存放温度25℃)、不同死亡时间(4.3～22.3 h)的个体,提取心肌组织的总RNA。选择6个常用内对照:β-actin、GAPDH、B2M、U6、18S rRNA、HSA-miR-1,通过实时RT-PCR检测其在心肌组织的表达水平。利用genormPLUS软件评估内对照在死亡早期表达水平的稳定性,挑选出最稳定的内对照并且分析其表达水平与相关因素(年龄、性别、死因)的关系。结果死亡早期心肌组织中U6表达水平最稳定,其表达量与年龄、性别及死因无关(P>0.05)。结论 U6可以作为实时RT-PCR方法研究死亡时间与心肌组织中核酸降解之间规律的理想内对照。

大鼠死后脑、心肌和肾组织β-actin mRNA的降解与早期死亡时间的关系

目的研究SD大鼠脑、心肌和肾组织细胞内β-actin mRNA的降解与早期死亡时间的关系,为早期死亡时间的推断寻找新的指标。方法大鼠处死后置于20℃的环境中,分别于死后不同时间点提取脑、心肌、肾的总RNA,采用实时荧光定量RT-PCR方法检测总RNA中β-actin mRNA的水平(Ct值),分析死后经过时间与Ct值的线性关系,并建立推断早期死亡时间的线性回归方程。结果随死亡时间的延长,3种组织内β-actin mRNA的水平均发生了显著的下降,心肌和肾组织中β-actin mRNA死后24h内的降解速率更显著,而脑组织中β-actin mRNA的降解速率变化不明显。各组织的Ct值变化与死亡时间之间存在一定的线性关系。结论大鼠死亡早期脑、心肌和肾组织内β-actin mRNA降解明显,可以通过其降解规律来推断早期死亡时间。

人体皮肤切创纤维连接蛋白EDA、EDB的表达与损伤时间关系的研究

目的研究纤维连接蛋白(fibronectin,FN)可变剪接片段EDA、EDB在人体皮肤切创的表达情况,并摸索EDA、EDBmRNA在离体皮肤上最长检出时限,以期为早期损伤时间的推断提供实用的参考指标。方法采用DIG标记的反意RNA探针,原位杂交检测人体皮肤在损伤早期(从30min开始)FNEDA、EDBmRNA表达的变化。结果正常人体皮肤无EDA、EDBmRNA表达;在损伤早期(≤3h)FNEDA、EDB的表达随时间的延长而呈现一种不断上升的趋势;EDA、EDBmRNA主要出现在表皮基底层细胞;EDA、EDBmRNA在标本离体后4h就不能检测到。结论FNEDA、EDB可作为早期损伤时间推断的较理想的参考指标,但原位杂交的检测方法不适用于实际应用。

婴儿猝死综合征的法医学鉴定

近20多年来,婴儿猝死综合征(sudden infant death syndrome,SIDS)一直是西方发达国家医学界尤其是法医学和儿科学领域研究的热点。目前,随着对SIDS广泛而深入的研究,对其病因、发病特点、危险因素以及致病机制等都有了更明确的认识。虽说近年来SIDS的发病率已有明显下降,在欧美洲、澳洲等发达国家,SIDS仍然是导致1个月到1岁婴儿死亡的首要原因。在亚洲国家和地区,尤其是发展中国家SIDS的报道很少见。本文通过总结文献并结合美国马里兰州近20年(1990—2006)来对SIDS的调查研究资料,介绍SIDS的发展历史、研究现状和新的发展趋势,并对SIDS法医学鉴定程序及鉴定要素进行讨论。

皮肤成纤维细胞纤维连接蛋白及其EDA、EDB表达与损伤时间的关系

目的研究培养的皮肤成纤维细胞纤维连接蛋白(fibronectin,FN)及其可变剪接片段EDA、EDB在损伤后的mRNA水平,为推断早期损伤时间提供参考指标。方法培养人体皮肤成纤维细胞,换无血清培养液培养24h后,采用划痕法制作细胞损伤模型,损伤后0、0.5、1、2、6、24h收集细胞,抽提RNA,实时RT-PCR定量检测总FN及其EDA、EDB的mRNA水平的变化。结果皮肤成纤维细胞中总FN及其EDA、EDB的mRNA水平随损伤时间的延长而升高,EDA mRNA在损伤后1h达到高峰,EDB mRNA在损伤后6h达到高峰,FN mRNA在损伤后2h达到高峰;在损伤1h后总FN及其EDA、EDB的mRNA表达变化随时间的延长而呈现一种不断上升的趋势。结论纤维连接蛋白EDA、EDB可作为早期损伤时间推断的较理想的参考指标。