铁死亡诱导剂RAS合成致死分子3抑制病理性瘢痕成纤维细胞的纤维化

背景:病理性瘢痕主要表现为异常的细胞外基质积累和过度的成纤维细胞增殖,成纤维细胞过度增殖就会产生大量以胶原纤维为主的细胞外基质。因此深入探讨成纤维细胞纤维化在病理性瘢痕形成中的作用,将为揭示病理性瘢痕的机制和生物学治疗提供新思路。目的:探讨铁死亡诱导剂RAS合成致死分子3(RAS-selective lethal small molecule 3,RSL3)对人病理性瘢痕成纤维细胞纤维化的影响。方法:收集10例宁夏医科大学总医院烧伤整形美容科提供的病理性瘢痕组织和同一个体正常皮肤组织,提取人病理性瘢痕成纤维细胞和人正常皮肤成纤维细胞用于后续实验;苏木精-伊红染色观察病理性瘢痕组织和正常皮肤组织的形态;倒置显微镜观察病理性瘢痕成纤维细胞和正常皮肤成纤维细胞的外观形态;免疫荧光实验验证所提取的细胞是否为成纤维细胞;用不同浓度的RSL3(1,3,5,7,9,11,13μmol/L)干预细胞,CCK-8法检测RSL3作用于成纤维细胞的半数抑制浓度(IC_(50));设置对照组(不做处理)和RSL3干预组(用7μmol/L的RSL3干预细胞24 h),qRT-PCR和Western blot检测谷胱甘肽过氧化物酶4、Ⅰ型胶原蛋白、Ⅲ型胶原蛋白和α-平滑肌肌动蛋白的mRNA和蛋白的表达;检测细胞丙二醛浓度;划痕试验检测细胞划痕后24 h剩余划痕面积,并计算剩余划痕面积百分比。结果与结论:①与正常皮肤组相比,病理性瘢痕组的谷胱甘肽过氧化物酶4高表达(mRNA:t=3.252,P<0.01;蛋白:t=5.075,P<0.01);②与正常皮肤成纤维细胞组相比,病理性瘢痕成纤维细胞组的谷胱甘肽过氧化物酶4高表达(mRNA:t=10.32,P<0.01;蛋白:t=26.22,P<0.01);③与对照组相比,RSL3干预组谷胱甘肽过氧化物酶4表达减少(mRNA:t=2.798,P<0.05;蛋白:t=4.643,P<0.01),丙二醛浓度上升(t=2.917,P<0.05),Ⅰ型胶原蛋白(mRNA:t=15.84,P<0.01;蛋白:t=4.610,P<0.01)、Ⅲ型胶原蛋白(mRNA:t=28.86,P<0.01;蛋白:t=7.713,P<0.01)和α-平滑肌肌动蛋白(mRNA:t=2.671,P<0.05;蛋白:t=7.417,P<0.01)的表达减少,迁移能力减弱(t=14.06,P<0.01);④提示RSL3通过抑制谷胱甘肽过氧化物酶4的表达,进而抑制病理性瘢痕成纤维细胞的纤维化和迁移能力。

RNA pull-down联合质谱分析lncRNA HSFAS在增生性瘢痕中的作用及机制

背景:课题组前期研究发现,增生性瘢痕特异性长链非编码RNA HSFAS是一种可用于增生性瘢痕诊断的新型生物标志物,但其如何在增生性瘢痕中发挥作用尚不清楚。目的:探讨长链非编码RNA HSFAS在增生性瘢痕中的作用及机制。方法:临床收集3例行增生性瘢痕组织切除手术患者的新鲜增生性瘢痕皮肤组织和增生性瘢痕旁正常皮肤组织标本,应用免疫荧光技术检测两种皮肤组织冰冻切片中长链非编码RNA HSFAS的表达。应用酶消化法体外分离增生性瘢痕皮肤组织与正常皮肤组织原代成纤维细胞,采用qRT-PCR检测细胞中长链非编码RNA HSFAS mRNA表达,通过RNA pull-down联合质谱技术检测与长链非编码RNA HSFAS相互结合的蛋白,利用GO和KEGG分析长链非编码RNA HSFAS参与增生性瘢痕进展的主要功能和通路,通过catRAPID和RPISeq网站分析确定长链非编码RNA HSFAS与蛋白的靶向结合。结果与结论:①与正常皮肤组织相比,增生性瘢痕组织中的长链非编码RNA HSFAS表达升高(P<0.05);与正常皮肤组织来源成纤维细胞相比,增生性瘢痕组织来源成纤维细胞中长链非编码RNA HSFAS mRNA表达升高(P<0.05);②RNA pull-down联合质谱技术明确与长链非编码RNA HSFAS相互结合的蛋白有510个;GO和KEGG分析结果显示:这些蛋白主要涉及RNA剪接和加工、染色体合成和分离、细胞周期等过程,其中涉及RNA剪接和加工的蛋白有支架附着因子B2和DICER1,并且与长链非编码RNA HSFAS的结合分数较高;生物信息学技术分析验证结果显示,长链非编码RNA HSFAS与支架附着因子B2和DICER1蛋白存在相互结合;③结果显示,长链非编码RNA HSFAS可能通过与支架附着因子B2和DICER1蛋白相互结合调控RNA剪接和加工修饰影响基因表达,从而促进增生性瘢痕的发生发展。

紫草素调控MicroRNA-382-5p抑制人增生性瘢痕成纤维细胞纤维化

背景:目前已有研究表明紫草素具有治疗增生性瘢痕的潜力,且miRNA参与增生性瘢痕的病理机制调控,猜测紫草素有可能通过影响miRNA调控增生性瘢痕的发生发展。目的:探讨紫草素通过影响MicroRNA-382-5p对人增生性瘢痕成纤维细胞纤维化的作用机制。方法:收集宁夏医科大学总医院烧伤整形外科提供的增生性瘢痕组织及瘢痕旁正常皮肤组织(瘢痕旁3 cm以内),并分别分离出人增生性瘢痕成纤维细胞和正常成纤维细胞用于后续实验。苏木精-伊红染色鉴定正常皮肤和增生性瘢痕;免疫荧光鉴定成纤维细胞;采用实时荧光定量PCR从组织水平检测MicroRNA-382-5p相对表达水平。将增生性瘢痕成纤维细胞随机分为紫草素组(紫草素溶于二甲基亚砜配成浓度为13.46μmol/L的药物干预细胞24 h)、二甲基亚砜组、MicroRNA-382-5p阴性对照组、MicroRNA-382-5p抑制组、紫草素+MicroRNA-382-5p阴性对照组及紫草素+MicroRNA-382-5p过表达组。实时荧光定量PCR检测Ⅰ型胶原蛋白α1、Ⅲ型胶原蛋白α1和α-平滑肌肌动蛋白mRNA表达;Western blot检测Ⅰ型胶原蛋白α1、Ⅲ型胶原蛋白α1和α-平滑肌肌动蛋白的蛋白表达;CCK-8法检测细胞活性;划痕实验检测细胞迁移能力。结果与结论:①与正常皮肤成纤维细胞相比,增生性瘢痕成纤维细胞增殖活性更强(P<0.01);②与二甲基亚砜组相比,紫草素组可以下调增生性瘢痕成纤维细胞中Ⅰ型胶原蛋白α1、Ⅲ型胶原蛋白α1和α-平滑肌肌动蛋白的表达水平(mRNA:P<0.01,蛋白:P<0.01),并抑制增生性瘢痕成纤维细胞迁移(P<0.05);③与正常皮肤相比,MicroRNA-382-5p在增生性瘢痕中呈高表达(P<0.01),且紫草素能下调增生性瘢痕成纤维细胞中MicroRNA-382-5p的表达(P<0.01);④敲低MicroRNA-382-5p能下调增生性瘢痕成纤维细胞中Ⅰ型胶原蛋白α1、Ⅲ型胶原蛋白α1和α-平滑肌肌动蛋白的表达水平(mRNA:P<0.01,蛋白:P<0.01),并抑制增生性瘢痕成纤维细胞迁移(P<0.05);⑤过表达MicroRNA-382-5p能上调在紫草素影响下增生性瘢痕成纤维细胞中Ⅰ型胶原蛋白α1、Ⅲ型胶原蛋白α1和α-平滑肌肌动蛋白的表达水平(mRNA:P<0.01,蛋白:P<0.01),并促进增生性瘢痕成纤维细胞迁移(P<0.01);⑥提示紫草素可通过下调MicroRNA-382-5p的表达抑制增生性瘢痕成纤维细胞的纤维化和迁移。

PTEN介导紫草素抑制人增生性瘢痕成纤维细胞的胶原沉积

目的从PTEN角度探讨紫草素对人增生性瘢痕成纤维细胞胶原沉积的影响。方法苏木精-伊红染色(HE染色)和马松染色(Masson染色)鉴定增生性瘢痕组织,免疫荧光鉴定人增生性瘢痕成纤维细胞(HSFBs);Western blot检测人增生性瘢痕(HS)和同一个体正常皮肤(NS)组织中PTEN表达水平;将HSFBs随机分组为:DMSO组、shikonin组、control组、si-NC组、si-PTEN组、shikonin+si-NC组和shikonin+si-PTEN组;Western blot检测各组中PTEN和胶原相关蛋白(Col1、Col3、α-SMA)的表达。结果与正常皮肤组织相比,PTEN在增生性瘢痕组织中呈低表达(P<0.05);用IC50浓度(13.46μmol/L)的紫草素干预人增生性瘢痕成纤维细胞24 h后,人增生性瘢痕成纤维细胞中Col1、Col3和α-SMA的表达降低(P<0.05),而PTEN的表达升高(P<0.05);转染si-PTEN后,与si-NC组相比,人增生性瘢痕成纤维细胞中Col1,Col3和α-SMA的表达升高(P<0.05);共转染shikonin+si-PTEN后,与shikonin+si-NC组相比,人增生性瘢痕成纤维细胞中Col1、Col3和α-SMA的表达升高(P<0.05)。结论紫草素可通过上调PTEN的表达抑制增生性瘢痕成纤维细胞的胶原沉积。

miR-382-3p抑制人增生性瘢痕成纤维细胞的增殖

背景:目前多项研究证实了miRNA影响增生性瘢痕的发生发展,STAT1参与瘢痕成纤维细胞的增殖过程,猜测miR-382-3p也有可能与增生性瘢痕的发生发展有关系。目的:探讨miR-382-3p对人增生性瘢痕成纤维细胞增殖的作用机制。方法:收集宁夏医科大学总医院烧伤整形外科提供的增生性瘢痕和同一个体正常皮肤,提取人增生性瘢痕成纤维细胞和人正常皮肤成纤维细胞;细胞转染分别设置:①对照组(不做处理)、miR-382-3p阴性对照组、miR-382-3p过表达组;②对照组(不做处理)、STAT1干扰对照组(si-NC)和STAT1干扰组(si-STAT1-1、si-STAT1-2、si-STAT1-3)。苏木精-伊红染色鉴定正常皮肤和增生性瘢痕;免疫荧光鉴定成纤维细胞;qRT-PCR检测miR-382-3p、STAT1、增殖细胞核抗原及细胞周期依赖性激酶抑制物(p27)mRNA表达;Western blot检测STAT1、增殖细胞核抗原及p27蛋白表达;CCK8、EdU检测细胞增殖活力和增殖水平;Targetscan预测miR-382-3p的下游靶基因,双荧光素酶验证miR-382-3p与STAT1的结合情况。结果与结论:①与正常皮肤和正常皮肤成纤维细胞相比,miR-382-3p在增生性瘢痕和增生性瘢痕成纤维细胞中呈低表达(组织:P<0.01,细胞:P<0.01),STAT1在增生性瘢痕和增生性瘢痕成纤维细胞中呈高表达(组织水平mRNA:P<0.01,组织水平蛋白:P<0.01;细胞水平mRNA:P<0.01,细胞水平蛋白:P<0.01);②过表达miR-382-3p后细胞增殖能力减弱(P<0.05),EdU阳性细胞数减少(P<0.01),增殖细胞核抗原的表达减少(mRNA:P<0.01,蛋白:P<0.05),p27的表达增加(mRNA:P<0.05,蛋白:P<0.05);③miR-382-3p能够靶向调控STAT1的表达(P<0.01),过表达miR-382-3p可导致STAT1的表达减少(mRNA:P<0.01,蛋白:P<0.01);④干扰STAT1后可导致增殖细胞核抗原的表达减少(P<0.05),p27的表达增加(P<0.05),EdU阳性细胞数减少(P<0.01);⑤结果表明:miR-382-3p可通过抑制STAT1的表达进而抑制增生性瘢痕成纤维细胞的增殖,为未来增生性瘢痕的治疗寻找有效靶点提供一定的理论依据。

铁死亡诱导剂抑制增生性瘢痕成纤维细胞的增殖

背景:增生性瘢痕是各种原因导致的皮肤创伤后愈合过程中出现的一种病理性瘢痕,目前缺乏特效治疗方法。目的:探讨铁死亡诱导剂Erastin对人增生性瘢痕成纤维细胞增殖的影响。方法:收集宁夏医科大学总医院烧伤整形外科提供的增生性瘢痕组织和同一个体正常皮肤,提取人增生性瘢痕成纤维细胞进行后续实验。将细胞分为对照组(不做处理)和铁死亡诱导剂组(用20μmol/L的Erastin干预细胞24 h),Western blot检测铁蛋白(Ferritin)的表达,铁离子检测试剂盒测定细胞铁离子浓度,丙二醛检测试剂盒检测细胞丙二醛水平;将细胞分为对照组(不做处理)、铁死亡诱导剂组(用20μmol/L的Erastin干预细胞24 h)和铁死亡诱导剂+铁死亡抑制剂组(用20μmol/L的Erastin和20μmol/L的Ferrostatin-1同时干预细胞24 h),qRT-PCR检测PCNA及p27的mRNA表达,Western blot检测PCNA及p27的蛋白表达,CCK-8、EdU检测细胞增殖活力和增殖水平。结果与结论:①与对照组相比,铁死亡诱导剂组铁蛋白减少(P<0.01),铁离子增多(P<0.05),丙二醛增多(P<0.01);②与对照组相比,铁死亡诱导剂组PCNA的表达降低(P<0.01),p27的表达增加(P<0.05),细胞增殖能力减弱(P<0.01),EdU阳性细胞数减少(P<0.01);③与铁死亡诱导剂组相比,铁死亡诱导剂+铁死亡抑制剂组PCNA的表达增加(P<0.05),p27的表达降低(P<0.05),细胞增殖能力增强(P<0.01),EdU阳性细胞数增多(P<0.05);④结果表明,铁死亡诱导剂Erastin通过诱导增生性瘢痕成纤维细胞发生铁死亡进而抑制其增殖。

紫草油剂对大鼠创面组织金属蛋白酶-9和血管内皮生长因子表达的影响

目的观察紫草油剂对大鼠急性创面组织中基质金属蛋白酶-9(metalloproteinase-9,MMP-9)和血管内皮生长因子(VEGF)的影响,探讨其促进大鼠创面愈合的可能机制。方法选取清洁级SD大鼠56只,麻醉后在大鼠背部切去3cm×3cm大小全厚皮(深达深筋膜层),根据随机数字表法将大鼠分为紫草油剂组和凡士林油纱组。两组大鼠创面分别给予紫草油纱布或凡士林纱布隔天换药治疗,观察两组大鼠的创面愈合率;选取术后第14天两组大鼠的创面组织行HE染色观察组织形态学变化,免疫组化染色观察VEGF的表达情况,选取术后第3、7、14和21天两组大鼠创面组织行荧光定量RT-PCR方法检测MMP-9 mRNA和VEGF mRNA的表达情况。结果术后第3天和第7天紫草油剂组大鼠创面愈合率与凡士林油纱组差异无统计学意义(P>0.05),术后第14天和第21天紫草油剂组大鼠创面愈合率高于凡士林油纱组(P<0.05);术后第14天,创面组织形态学显示紫草油剂组大鼠创面肉芽组织生长旺盛,新生毛细血管及成纤维细胞数目较多;免疫组化结果显示,紫草油剂组大鼠创面组织VEGF表达高于凡士林油纱组;RT-PCR结果显示,在术后第3、7、14和21天凡士林油纱组MMP-9 mRNA水平低于紫草油剂组(P均<0.05),术后第3、7和14天紫草油剂组VEGF mRNA表达高于凡士林油纱组(P<0.05)。结论紫草油剂可能通过上调急性创面组织中MMP-9 mRNA及VEGF的表达,加快大鼠皮肤创面的愈合。

烧伤病房病原菌分离鉴定及耐药性分析

目的了解烧伤科病房感染的病原菌分布特点及对抗菌药物的耐药性,为临床合理使用抗生素及治疗提供更好的依据。方法调查收治烧伤患者的创面分泌物、血液、导管尖端、痰液、尿液、粪便等标本分离的2 580株病原菌,分析其分布特点及耐药情况。结果在分离的2 580株病原菌中,革兰氏阳性菌1 697株,占65.8%;革兰氏阴性菌863株,占33.4%;真菌20株,占0.8%。主要阳性菌为金黄色葡萄球菌,分离到821株,占31.8%,其中MRSA的比例达74.4%,只对万古霉素、替考拉宁、利奈唑胺敏感,其余抗生素几乎均耐药。阴性菌以阴沟肠杆菌最多,但耐药率逐渐下降,对多数药物敏感;鲍曼不动杆菌的分离率逐渐上升,且严重耐药,对头孢类耐药90%以上。结论此治疗中心细菌感染以革兰氏阳性菌为主,其中MRSA感染严重,有扩散趋势,且耐药率高,选择抗生素范围窄,问题不容忽视,急需解决;阴性菌鲍曼不动杆菌比例高,且呈多重耐药,治疗困难。

小剂量氯胺酮复合右美托咪定在大面积烧伤换药中的应用

目的观察小剂量氯胺酮复合右美托咪定在烧伤重症监护病房中非插管患者大面积烧伤换药时的麻醉效果。方法将38例大面积烧伤患者分两组,换药时分别给予单纯氯胺酮(对照组)、氯胺酮联合右美托咪定(试验组)麻醉,监测患者的心率、血压、呼吸、脉搏氧饱和度、术后镇痛效果及不良反应。结果对照组心率、血压在给药前较给药后5min、换药结束后20min升高(P<0.05),试验组无明显变化;试验组在氯胺酮用量、术后VAS评分、神经精神症状及术后呕吐发生率等方面低于对照组(P<0.05)。结论小剂量氯胺酮复合右美托咪定应用于有自主呼吸的大面积烧伤患者的换药中,对患者的呼吸循环影响更小,术中、术后并发症少,镇痛镇静效果良好。

FGF生物蛋白海绵治疗烧伤残余肉芽创面的疗效

目的观察成纤维蛋白生长因子(FGF)生物蛋白海绵促进烧伤残余肉芽创面的修复作用。方法选取烧伤治疗后期形成残余肉芽创面的患者52例,随机分为两组:生理盐水组和FGF生物蛋白海绵组,前者采用常规生理盐水湿敷创面治疗,后者外用FGF生物蛋白海绵贴敷+生理盐水湿敷创面治疗,常规每2天换药1次,观察治疗时间终止点为20d。观察两组患者创面愈合时间及愈合率、创面治愈率。结果共计46例患者纳入完成实验;FGF生物蛋白海绵组在20d内创面愈合率(0.89±0.012)%及创面治愈率(86.1%)均明显高于生理盐水组(0.45±0.038)%和(46.5%)(P<0.05),FGF生物蛋白海绵组在20d内愈合时间(12.41±2.1)d小于对照组(16.24±3.5)d(P<0.05);治疗中两组患者均未发现有皮肤过敏等不良反应。结论 FGF生物蛋白海绵在治疗烧伤残余肉芽创面能明显缩短创面愈合时间、提高愈合率、减少患者手术植皮率、且无不良反应,是一种较好的医用生物辅料,值得临床推广应用。

1997例小儿烧伤临床分析

为总结小儿烧伤的防治经验,对我院1987年1月1日～2002年12月31日16年间收治的(不包括门诊及急诊治疗的未住院的小儿患者人数)1997例12岁以下小儿烧伤的病历资料进行了回顾性分析。结果,1～5岁年龄段为小儿烧伤高峰期;烫伤是主要致伤原因达88.5%;主要死亡原因是侵袭性感染和烧伤后低血容量性休克。我院小儿烧伤住院患儿呈逐年增多趋势,以农村小儿居多。因此普及烧伤知识,提高防范意识,高度重视1～5岁儿童的护理,给予及时、正确的治疗。

局部应用血管内皮生长因子基因对大鼠皮瓣不同部位作用的实验研究

目的局部应用血管内皮生长因子基因转染大鼠皮瓣,初步探讨其对皮瓣成活率的影响及对皮瓣不同部分促血管作用效果。方法将30只SD大鼠作为实验模型,随机分为3组,每组10只,制作背部随意皮瓣,分别注入脂质体包裹的PcDNAVEGF165(目的基因组,实验组),PcDNA(空白质粒组,对照组),NS(生理盐水组,对照组)。术后4d断蒂,断蒂后7d处死大鼠观察:(1)各组皮瓣成活率比较。(2)取皮瓣远端活组织标本行常规HE染色,检测平均微血管数目及内径。(3)取皮瓣远端活组织标本行VEGF免疫组化染色观察VEGF表达情况。(4)取目的基因组皮瓣远段,中段,近段成活组织标本常规HE染色,检测平均微皮瓣血管数目。结果目的基因组皮瓣平均成活率明显高于空白质粒组和生理盐水组两对照组,平均微血管数目明显多于两对照组,且为管径较小的新生血管,均具有统计学意义(P<0.05)。免疫组化染色强度高于两对照组。目的基因组皮瓣远端血管数目多于近端,具有统计学意义(P<0.05)。结论局部注射VEGF基因后可以增加缺血皮瓣血管新生,提高皮瓣成活率,在皮瓣不同部位促血管增生作用不同。

皮肤软组织扩张术的并发症及其预防

为探讨皮肤软组织扩张术的并发症及其预防措施,分析了34例皮肤软组织扩张术中出现的并发症原因,结果皮肤软组织扩张术并发症的发生与术者对局部解剖的熟悉程度、手术操作技巧、切口的选择、术区消毒、扩张器的放置及手术部位均有密切关系。熟悉局部解剖关系,熟练手术操作技巧,根据不同的手术部位选择不同的手术切口,严格消毒,正确放置扩张器是预防皮肤软组织扩张术并发症的关键。

医院感染病原菌及耐药性分析

目的 了解医院感染病原菌的分布及耐药情况。方法 对临床分离的医院感染病原菌及耐药性和社区感染病原菌进行分析。结果 该年度共出院 15 5 4 2人次 ,10 2 7人发生医院感染 10 77次 ,医院感染发病率为6 .6 % ,例次发病率为 6 .9%。 10 2 7名病人中 ,共分离出病原菌 132株 ,3/ 4的病原菌为革兰阴性菌 ,其中铜绿假单胞菌所占比例最高 ,达总数的 2 2 .7%。铜绿假单胞菌对羧苄青霉素耐药率达 6 6 .7% ,对庆大霉素的耐药率更高达77.3% ,而对头孢哌酮的耐药率也达到 5 0 .0 %。结论 医院感染病原菌主要为革兰阴性条件致病菌 ,对常用的抗菌药物耐药率较高 。

不同采血部位监测血糖在维持性血液透析患者中的应用研究

目的采用2个不同采血部位检测快速血糖值水平在维持性血液透析患者中的应用,并探讨其所测得血糖值的差异,为临床选择更好的采血方法提供依据。方法选取自愿参加此实验的50例应用动静脉内瘘为血管通路的维持性血透患者作为研究对象,患者透析开始后2 h,分别在体外循环血路管动脉端在线和传统指端末梢2个部位采血,利用快速血糖仪检测血糖水平,比较不同部位采血所得血糖检测结果的差异性。结果血透开始后2 h,同一时间点对50例患者489例次采用体外循环血路管动脉端在线采血点采血所测得血糖值为(7.17±2.67)mmol/L,指端末梢部位采血所测得血糖值为(6.95±2.54)mmol/L,二者比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论采用血路管在线采血可以替代指端末梢采血进行快速血糖检测,此方法无创,能够减轻患者痛苦,减少感染、出血等并发症,并且护士操作更简便,能够快速、有效地采取血样进行后续检测的方法,为临床工作改进创新提供了依据。

miR-148a-5p参与了高蛋氨酸饮食诱导ApoE^-/-小鼠的肝细胞凋亡

背景:高蛋氨酸饮食可以导致ApoE^-/-小鼠发生肝损伤,微小RNA(miRNA)参与细胞存活、分化和细胞凋亡等各种细胞过程,具有重要意义。目的:探讨miR-148a-5p在高蛋氨酸饮食诱导ApoE^-/-小鼠肝细胞凋亡中的作用。方法:12只ApoE^-/-小鼠随机分为2组,每组6只,ApoE^-/-对照组为普通饮食,ApoE^-/-高蛋氨酸组为高蛋氨酸饮食。苏木精-伊红染色观察2组肝组织形态学变化;TUNEL染色观察肝细胞的凋亡情况;Western blot测定Bax、Bcl-2的表达改变;荧光定量PCR检测miR-148a-5p的表达;运用Target Scan靶基因预测软件预测miR-148a-5p的靶基因;双荧光素酶活性实验明确其靶向关系。结果与结论:①与对照组相比,ApoE^-/-高蛋氨酸组肝脏组织肝小叶结构发生明显紊乱,部分细胞呈胞浆疏松化变性,肝细胞凋亡增加,Bax的表达明显上升且Bcl-2的表达显著下降(P<0.01);②荧光定量PCR结果显示,ApoE^-/-高蛋氨酸组miR-148a-5p的表达增加(P<0.05);③靶基因预测软件提示,Bcl-2为miR-148a-5p的潜在靶基因;④双荧光素酶活性实验确定了miR-148a-5p与Bcl-2的靶向关系(P<0.05);⑤肝细胞中过表达miR-148a-5p后Bax的表达显著上升且Bcl-2的表达明显下降(P<0.01);⑥提示在高蛋氨酸饮食诱导的ApoE^-/-小鼠肝细胞中,miR-148a-5p通过负调控Bcl-2促进肝细胞凋亡,这可能是造成肝损伤的机制之一。

长链非编码RNA SNHG1对增生性瘢痕成纤维细胞增殖的影响

目的探讨长链非编码RNA核仁小RNA宿主基因1(lnc RNA SNHG1)对人增生性瘢痕成纤维细胞增殖的影响。方法纳入2019-2021年在宁夏医科大学总医院烧伤整形外科接受手术治疗的22例增生性瘢痕患者,收集其增生性瘢痕组织与瘢痕旁正常皮肤组织(瘢痕旁3 cm以内),从中分离培养成纤维细胞。采用q RT-PCR从组织和细胞水平检测SNHG1m RNA和mi R-382-3p相对表达水平。将增生性瘢痕成纤维细胞随机分为对照组、SNHG1阴性对照组(转染慢病毒空载体)、模拟物对照组(转染对照模拟物)、SNHG1阴性对照+模拟物对照组(转染慢病毒空载体和对照模拟物)、SNHG1过表达组(转染过表达慢病毒)、mi R-382-3p过表达组(转染mi R-382-3p模拟物)、SNHG1过表达+模拟物对照组(转染过表达慢病毒和对照模拟物)与SNHG1过表达+mi R-382-3p过表达组(转染过表达慢病毒和mi R-382-3p模拟物),采用q RT-PCR检测各组SNHG1、PCNA、p27 m RNA和mi R-382-3p的相对表达水平;CCK-8法检测各组细胞增殖能力;Ed U染色法检测各组细胞增殖水平;Western blotting检测各组p27和PCNA蛋白表达水平。结果与正常皮肤组织及其成纤维细胞相比,SNHG1 m RNA在增生性瘢痕组织(3.21±2.65 vs.1.14±0.61,P<0.001)及其成纤维细胞中呈高表达(0.91±0.08 vs.0.54±0.08,P<0.01),而mi R-382-3p表达下调(组织:0.53±0.34 vs.1.15±0.61,P<0.001;细胞:0.84±0.09 vs.1.01±0.004,P<0.05)。与SNHG1阴性对照组相比,SNHG1过表达组细胞增殖能力增强(0.23±0.03 vs.0.16±0.01,P<0.001),Ed U阳性细胞百分比明显增高(30.01%±5.70%vs.7.13%±4.40%,P<0.001),PCNA m RNA和蛋白相对表达水平增高(m RNA:2.97±0.33 vs.0.98±0.25,P<0.01;蛋白:2.20±0.09 vs.0.88±0.20,P<0.05),p27 m RNA和蛋白相对表达水平降低(m RNA:0.30±0.03 vs.1.42±0.15,P<0.001;蛋白:0.47±0.11 vs.1.13±0.19,P<0.05),mi R-382-3p相对表达水平降低(0.05±0.01vs.1.03±0.12,P<0.001);与SNHG1过表达+模拟物对照组相比,SNHG1过表达+mi R-382-3p过表达组细胞增殖能力减弱(0.15±0.02 vs.0.26±0.01,P<0.001),Ed U阳性细胞百分比下降(5.97%±0.33%vs.11.70%±0.87%,P<0.001),PCNA m RNA和蛋白相对表达水平降低(m RNA:0.64±0.09 vs.3.33±0.38,P<0.001;蛋白:1.70±0.36 vs.2.34±0.16,P<0.05),p27 m RNA和蛋白相对表达水平升高(m RNA:1.01±0.44 vs.0.09±0.04,P<0.05;蛋白:1.38±0.31 vs.0.50±0.09,P<0.05)。结论 SNHG1在增生性瘢痕中呈高表达,可负向调控mi R-382-3p的表达,进而促进增生性瘢痕成纤维细胞的增殖,有望成为治疗增生性瘢痕的新靶点。

同型半胱氨酸通过激活beclin 1调节的自噬激活分子(AMBRA1)促进人肝细胞自噬

目的探讨beclin 1调节的自噬激活分子(AMBRA1)在同型半胱氨酸(Hcy)引起肝细胞自噬中的作用。方法体外培养肝细胞,分为对照组(0μmol/L Hcy处理)和100μmol/L Hcy处理组。Western blot法检测自噬相关蛋白微管相关蛋白1轻链3B(LC3BⅡ、LC3BⅠ)的表达水平;使用(0、25、50、100)μmol/L氯喹(CQ)处理肝细胞,CCK-8法检测CQ对肝细胞增殖的抑制作用,Western blot法检测LC3B和AMBRA1的表达;采用AMBRA1小干扰RNA感染肝细胞后,实时荧光定量PCR和Western blot法检测肝细胞AMBRA1表达干扰效率。敲低AMBRA1后肝细胞用Hcy处理,Western blot法检测LC3B蛋白表达水平,转染表达双荧光蛋白和LC3的腺病毒(mRFP-GFP-LC3),激光共聚焦显微镜观察细胞内自噬流的变化。结果与对照组相比较,Hcy处理组LC3BⅡ/LC3BⅠ的比值升高;50μmol/L CQ对肝细胞增殖的抑制率接近于50%;与对照组相比,Hcy组LC3BⅡ/LC3BⅠ比值、AMBRA1的表达明显升高,而Hcy联合CQ组的LC3BⅡ/LC3BⅠ比值、AMBRA1的表达比Hcy组明显降低;敲低AMBRA1后,肝细胞LC3BⅡ/LC3BⅠ比值下降;与对照组相比,Hcy组自噬体和自噬溶酶体增加,敲低AMBRA1后,自噬体和自噬溶酶体减少。结论Hcy可通过激活AMBRA1促进肝细胞自噬。

儿童烧烫伤后惊厥62例临床分析

目的总结小儿烧烫伤后发生惊厥的原因、预防和处理措施。方法对烧伤后发生惊厥患者病因及治疗情况进行分析。结果本组62例患者经积极抢救短时间内全部治愈。结论小儿烧烫伤后发生惊厥是常见而严重的并发症之一,早期诊断,及时防治,可以有效地减少后遗症的发生。

国产化“恒温拖链”在海洋钻井平台的应用

本文介绍了国产化"恒温拖链"在海洋钻井平台的应用。对海洋平台电缆桥架做了背景介绍,对产品性能工艺做了详细的解析,最后分析了海洋平台电缆桥架国产化的现实意义。