江苏省肉种鸡场禽多杀性巴氏杆菌流行病学调查

为了解江苏省禽多杀性巴氏杆菌流行情况,促进肉种鸡场的禽多杀性巴氏杆菌病防控,研究通过细菌鉴定方法、PCR检测、荚膜血清学分型、致病性分析以及药物敏感性试验,对分离自江苏省17个肉种鸡场的禽多杀性巴氏杆菌进行菌落形态、培养特性、生化发酵、荚膜型、菌落荧光型、药敏性等生物学特性研究,并对部分种鸡场进行血清学检测。结果显示:共鉴定13株禽多杀性巴氏杆菌,所有分离株荚膜分型均为A型,菌落荧光观察均属于强毒株;分离株对氨基糖苷类药物和氯霉素类药物具有一定的耐药性,而对β-内酰胺类药物高度敏感;确诊种鸡场阳性率显著高于未确诊种鸡场(P<0.01)。研究表明,江苏省部分地区肉种鸡场存在荚膜A型多杀性巴氏杆菌流行,强毒株比例较高,但耐药性较弱。

江苏部分地区鸡胚源沙门氏菌的分离鉴定及耐药性分析

为调查江苏部分地区未出壳鸡死胚中沙门氏菌感染情况,试验通过细菌分离培养鉴定、MLST分型对来自13家种鸡场的2433个未出壳的鸡死胚进行沙门氏菌分离鉴定,并通过药物敏感性试验确定分离株对不同药物的敏感程度和多重耐药性。结果显示:未出壳鸡死胚沙门氏菌感染率为3.00%,其中鸡白痢沙门氏菌占50.68%(37/73)、肠炎沙门氏菌占41.10%(30/73),同时分离到少量海德尔堡沙门氏菌、科特布斯沙门氏菌和鼠伤寒沙门氏菌,分别占4.11%(3/73)、1.40%(1/73)和2.74%(2/73);鸡白痢沙门氏菌、肠炎沙门氏菌、海德尔堡沙门氏菌、科特布斯沙门氏菌和鼠伤寒沙门氏菌分别对应ST92、ST11、ST15、ST582和ST19型;分离株对萘啶酸、链霉素等耐药率较高,分别达86.30%(63/73)和82.19%(60/73),对头孢他啶、厄他培南、氨曲南、阿米卡星表现为敏感,且存在多重耐药性,多重耐药菌株占71.23%(52/73)。结果表明:江苏省部分养鸡场存在一定程度的沙门氏菌感染,尤其是鸡白痢沙门氏菌和肠炎沙门氏菌,分离株耐药情况较为严重,需进一步规范抗菌药的使用。

改性纳米SiO_(2)-苯丙乳液混凝土复合防护涂层的制备及性能研究

采用硅烷偶联剂KH560对纳米SiO_(2)进行接枝改性,通过傅里叶红外变换光谱、热重分析及微观形貌分析等方法研究了KH560对纳米SiO_(2)改性机理的影响,探究了改性SiO_(2)-苯丙乳液复合涂层中掺入一定质量分数的改性纳米SiO_(2)对混凝土抗硫酸盐溶液冻融性能的影响,并分析了改性纳米SiO_(2)对苯丙乳液涂层的增强机理。结果表明:采用KH560改性后,纳米SiO_(2)颗粒的团聚状态得到了显著改善,热稳定性提高;当改性纳米SiO_(2)的质量分数为4%时,C4复合涂层对混凝土的防护作用最好,此时混凝土抗硫酸盐溶液冻融等级由F100~F150提升到F300以上;300次硫酸盐溶液冻融循环后,混凝土的质量损失率仅为0.35%,相对动弹性模量为96.2%,此时混凝土内部结构并未发生明显破坏。

改性硅溶胶对路用泡沫混凝土力学性能的影响及应用研究

采用硅烷偶联剂KH560作为硅溶胶改性剂,研究了改性硅溶胶及未改性硅溶胶掺入质量对泡沫混凝土7d、28d抗折强度、抗压强度、导热系数及过度路桥段载荷沉降值的影响。实验结果表明,KH560可以显著降低硅溶胶的团聚程度,降低纳米硅溶胶的平均粒径,提升纳米溶胶的表面活性。当泡沫混凝土中加入质量分数为3%的改性硅溶胶时,泡沫混凝土力学性能及保温隔热性能达到最优,此时泡沫混凝土28d龄期抗折强度、抗压强度分别为13.7、57.9MPa,28d龄期导热系数为0.24W·(m·K)^(-1),同时在过度路桥段具有实际使用价值。

地方特色蛋鸡配套系亲本群中不同亚群禽白血病病毒的混合感染

采用ELISA、病毒分离和多聚酶链式反应(PCR)方法对江苏某地方特色蛋鸡亲本群的禽白血病病毒(ALV)p27抗原、ALV-A/B和ALV-J抗体以及病原核酸进行了检测,结果显示该配套系母本群泄殖腔拭子p27抗原阳性率为40.6%,ALV-A/B抗体阳性率为3.8%;父本群泄殖腔p27抗原阳性率为24.4%,ALV-J抗体阳性率为19.4%;细胞培养物IFA检测显示父本分离株JS12JD03能与J亚群特异单克隆抗体Je-9反应,在荧光显微镜下产生绿色荧光,而母本分离株JS12JD01和JS12JD02则无;gp85氨基酸序列同源性分析显示母本鸡群分离株JS12JD01属于A亚群、JS12JD02属于B亚群,父本鸡群分离株JS12JD03属于J亚群ALV,提示了该地方特色蛋鸡亲本群存在A、B、J亚群ALV的混合感染。

家禽科学与产业研究新动态——第十届亚太家禽会议掠影

第十届亚太家禽会议2014年10月在韩国召开,会议探讨了未来的家禽科学与产业研究,从遗传育种、饲料营养、疾病控制、饲料安全、动物福利等方面展示了最新的成果,同时关注平胸鸟和小规模家禽养殖的相关研究,可为我国家禽科学与产业研究提供借鉴。

基于RAD-seq简化基因组测序的19个地方鸡种遗传进化研究

旨在基因组水平上揭示地方鸡种的遗传进化,发掘重要种质特性基因。本研究利用简化基因组RAD-seq测序鉴定19个地方鸡种(每个品种按照家系选取30个个体,10公、20母)基因组SNP标记,计算观察杂合度(Ho)、核苷酸多样度(Pi)、近交系数(Fis)、遗传分化系数(Fst)和基因流(Nm)等遗传统计量指标,分析地方鸡种的遗传多样性和遗传结构,并通过选择信号检测鉴定基因组受选择基因。结果表明,在19个地方鸡种中鉴定出400562个SNPs标记。瓢鸡(PJ)和文昌鸡(WC)的遗传多样性最为丰富,观察杂合度(Ho)分别为0.2468、0.2430,核苷酸多样度(Pi)分别为0.2781、0.2655;河南斗鸡(DJ)的遗传多样性相对匮乏,Ho为0.1560,Pi为0.1752;东乡绿壳蛋鸡(DX)和边鸡(BJ)的近交系数最高(Fis>0.1600)。瓢鸡与文昌鸡、惠阳胡须鸡(HX)、藏鸡(ZZ)、大围山微型鸡(WX),惠阳胡须鸡与文昌鸡,藏鸡与茶花鸡(CH)间的遗传分化最低(Fst<0.1000),对应的基因流最高(Nm>0.2400)。河南斗鸡与其它品种间的遗传分化均处于较高水平,与其中15个品种间的Fst>0.2000、Nm<1.0000。遗传聚类分析(2个引入品种做外群)将地方鸡种总体上分为5类,与品种形成历史和地理分布基本吻合。通过选择信号分析,在19个地方鸡种合并群体中检测出9个常染色体上的26个区域受到选择作用,包含31个受选择基因。这些受选择基因广泛参与免疫系统调节、生殖机能调控、应激响应、代谢等生物学过程。利用基因组SNP标记能更全面准确地揭示地方鸡种的遗传多样性和遗传结构,选择作用主要体现在对地方鸡种抗逆抗病特性、配子活力及行为等方面的塑造。

磷酸对肉鸡消化道pH值、消化酶活性和蛋白消化率的影响

试验旨在研究日粮添加不同剂量磷酸对肉鸡消化道p H值、消化酶活性及蛋白消化率的影响,以确定肉鸡日粮适宜磷酸添加量。将720只1日龄AA肉公鸡分成6组(1个对照组和5个处理组),每组6个重复,每个重复20只鸡,对照组饲喂基础饲粮,处理组分别在基础日粮中添加0.05%、0.10%、0.15%、0.20%、0.25%磷酸。结果表明:磷酸浓度显著影响肉鸡42日龄嗉囊、肌胃+腺胃和回肠的p H(P<0.05),且呈显著二次曲线关系(P<0.05);显著影响肉鸡42日龄腺胃和肌胃胃蛋白酶的总酶、酶原、酶活和激活度(P<0.05),除了肌胃酶原呈一次线性关系(P<0.05),其他均呈显著二次曲线关系(P<0.05);显著影响肉鸡42日龄十二指肠、空肠和回肠内胰蛋白酶及十二指肠糜蛋白酶的活性(P<0.05),且十二指肠、空肠胰蛋白酶与磷酸浓度呈一次线性关系(P<0.05),回肠胰蛋白酶和十二指肠糜蛋白酶与磷酸浓度呈显著二次曲线关系(P<0.05);显著影响肉鸡蛋白质和干物质消化率(P<0.05),且呈显著一次线性关系(P<0.05)。由此可知,日粮添加不同剂量磷酸对肉鸡消化道p H值、消化酶活性及蛋白消化率都有显著影响,达到最佳消化道p H值、消化酶活性及蛋白消化率的磷酸浓度为0.15%。

商品蛋鸡J亚群禽白血病病毒分离鉴定及序列分析

为了解商品蛋鸡群中J亚群禽白血病病毒(ALV-J)流行情况和病毒特性,本实验对感染血管瘤与髓细胞瘤混合型ALV-J的商品海兰褐蛋鸡进行了病毒分离,对2个分离株的致瘤关键基因序列LTR与gp85进行了测定,并与参考毒株进行比对,分析结果表明这两株病毒的LTR及gp85均存在显著的变异。在这两个基因的遗传进化树中均形成一个单独的分支:LTR的U3序列与参考毒株的同源性低至89.7%～92.4%,而参考毒株之间的同源性高达90.7%～99.6%,这两株病毒的U3区变异产生了一个与肿瘤形成与转移间接相关的调控元件TCF11(Transcription Factor11),但Y box、TATA box、CArG box都很保守;两株病毒的gp85氨基酸序列均在第179位缺失一个Lys,两个毒株的gp85蛋白序列与肉鸡分离毒株之间的同源性很低,为86%～89%,而与参考蛋鸡分离毒同源性相对较近,为89.2%。本研究证实从多种肿瘤类型并发的蛋鸡自然发病病例中分离到ALV-J病毒,其关键序列发生了显著的变异。

种公鸡精液禽白血病病毒检测方法研究及初步应用

研究旨在探讨种公鸡精液禽白血病病毒（ALV）检测的可行胜与实用性，为种禽场禽白血病净化材料的选择与方案制定提供参考依据。对绿壳蛋鸡种公鸡精液不同处理和检测方法效果，以及不同精液稀释度对病毒分离效果的影响进行了研究，并将确定的检测方法应用于绿壳蛋鸡、矮脚鸡和芦花鸡3个地方鸡种合计551只种公鸡的检测净化中，同时与血浆病毒分离或血浆斑点杂交检测结果进行比较。结果显示，以血浆病毒分离为标准，精液样品经稀释离心后，取上清接种DF-1细胞，确保在培养基中最终稀释度为1：28-1：56时病毒分离效果最佳。初步应用结果显示，不同鸡种精液p27抗原ELISA检测阳性率均最高，但并不能将血浆和精液病毒分离检测为阳性的鸡均检出，存在“假阴性”；同一鸡种血浆和精液病毒分离阳性率高低不同，在绿壳蛋鸡和矮脚鸡种公鸡中，二者阳性符合率均低于50％，两种方法不可互相取代；芦花种公鸡精液病毒分离阳性率显著高于血浆病毒分离，亦高于血浆斑点杂交，二者阳性符合率分别为100％-36．4％，精液病毒分离效果优于血浆病毒分离。结果表明，对种公鸡精液进行ALV检测具有可行性和必要性，由于不同鸡种净化进程不同、带毒排毒状态不一，检测方法也应灵活运用。

J亚群禽白血病病毒TD-PCR检测方法的建立及初步应用

采用J亚群禽白血病病毒(ALV-J)感染DF1细胞提取的总DNA作为模板,以H5和H7为特异性引物,建立检测ALV-J的降落PCR(TD-PCR)方法,并对反应体系进行优化。结果表明:建立TD-PCR方法灵敏度高、特异性强,可检测0.105 ng的DNA,该方法与网状内皮组织增生症病毒、马立克病病毒、鸡贫血病毒及I群禽腺病毒没有交叉反应。运用TD-PCR、ELISA以及病毒分离对临床病料进行检测,TD-PCR方法与ELISA检测结果一致(100%),均比病毒分离检出率(75%)高。证明TD-PCR检测ALV-J的方法具有快速、灵敏、特异等优点,可满足临床、生产实际检测的需要。

间接ELISA检测抗禽白血病病毒抗体方法的建立

禽白血病病毒(Avian leukosis virus,ALV)是禽白血病的病原,可引起鸡的免疫抑制和肿瘤。净化种鸡群是控制ALV的主要方法之一。本研究将ALV的p27基因克隆到表达载体pGEX-6P-1,在大肠杆菌中获得了高效表达,以纯化后的p27-GST融合蛋白为抗原包被,经过条件优化,建立了检测鸡血清中抗ALV抗体的间接ELISA方法。与IFA检测结果比较,该方法比IDEXX ELISA试剂盒有更高的符合率。可用于禽白血病病毒感染根除的大规模检测,并具有低成本、易操作的特点,能同时检测到针对ALV所有亚群的抗体。

腹腔镜完全腹膜外腹股沟疝修补术的临床体会(附85例报告)

目的:探讨腹腔镜完全腹膜外腹股沟疝修补术(totally extraperitoneal prosthesis,TEP)的可行性,并评价术中、术后并发症、复发率等临床效果。方法:回顾分析2012年1月至2012年6月全麻下为85例(96侧)患者行腹腔镜TEP的临床资料。结果:84例(95侧)手术获得成功,1例(1侧)中转开腹。1例术后发生远端疝囊血清肿,经穿刺抽吸治疗后好转,并发症发生率为1.2%。术后平均随访(7±0.8)个月,无复发,患者无明显不适感。结论:腹腔镜TEP安全、可行,并发症发生率低,复发率低,优势明显。

商品蛋鸡血管瘤和髓细胞瘤型J亚群禽白血病的分子诊断及病理学研究

对江苏商品蛋鸡6个鸡场临床表现严重血管瘤鸡群的送检样品进行了病理学分析，结果发现，送检的6只商品蛋鸡均可见体表血管瘤，内脏主要在肝、脾、肌胃和肠系膜表面的大小不等的血管瘤，引起严重的肝破裂、脾脏失血和肌胃失血，6个病例中有4个病例出现血管瘤和髓样细胞瘤并存。追踪检测父母代蛋鸡表明，父母代蛋鸡场的各个日龄鸡群均存在不同程度的丁亚群禽白血病病毒（Avian Leukosis Vivus SubgroupJ，ALV-J感染；而送检商品病鸡均呈现病毒血症而抗体阴性，提示垂直传播的可能；ALV-J特异性RT-PCR结果显示，6个样品均存在ALV-J感染；对扩增克隆的部分序列分析可见，此六株病毒之间同源性为97．9％～99．6％，而与原型毒HPRS103之间的同源性则较低（94．6％～95．2％），与同为蛋鸡分离毒株AY360088和SD07LK1同源性为94．2％～95．0％。

笼养蛋鸡养殖环境指标调查分析

通过对江苏地区3个笼养蛋鸡场养殖环境的现场调查,了解和分析蛋鸡的养殖环境参数,为今后合理科学控制鸡舍环境提供参考依据。调查结果表明,饲养设备与饲养管理措施对蛋鸡舍内环境指标影响较大,也间接影响蛋鸡的生产性能。采用层叠式蛋鸡笼的鸡舍环境指标低于阶梯式,如有害气体浓度值较高(层叠式:CO2:658.88mg/kg,NH3:4.00mg/kg;阶梯式:CO2:587.75mg/kg,NH3:1.20mg/kg),密闭式鸡舍较半密闭式能更有效地降低外环境影响,维持舍内环境指标值的稳定与可控性。

卫星搭载牛膝种子SP1植株的生物学特性

利用返回式卫星搭载牛膝种子为材料,研究卫星搭载对其SP1植株生物学特性的影响。种子发芽出苗后调查植株的部分农艺学性状、测定某些生理生化指标并分析几种同工酶谱的变化。搭载种子获得的牛膝植株生长旺盛,植株株高比对照高;叶绿素a、叶绿素b、可溶性糖、脯氨酸、可溶性蛋白质以及赤霉素含量与对照相比均有不同程度的差异;卫星搭载的牛膝中有1株的SOD同工酶谱缺失一条谱带;有3株的CAT同工酶谱带比对照牛膝明显减少;Amy的同工酶谱带与对照牛膝基本一致,但有3株的Amy活性高于对照。由卫星搭载牛膝种子获得的SP1植株与对照植株有明显差异。

地方蛋鸡配套系禽白血病净化的初步研究

基于地方蛋鸡配套系禽白血病流行病学调查结果,采用ELISA试剂盒检测抗原抗体与病毒分离相结合的方法对地方蛋鸡配套系进行了禽白血病净化研究。结果显示,经过一个世代的净化更替,父系净化组鸡群p27抗原阳性率由第一世代的23.3%、21.7%下降到7.1%、6.8%,ALV-J抗体阳性率由第一世代的21.7%、23.3%下降到8.2%、8.6%,病毒分离阳性率由第一世代的7.5%、6.7%下降到3.2%、3.1%;而母系净化组p27抗原阳性率由第一世代的40.8%、38.3%下降到9.6%、10.1%,ALV-A/B抗体阳性率由第一世代的7.5%、6.7%下降到3.7%、3.2%,鸡群病毒分离阳性率由9.2%、9.2%下降到2.6%、4.0%;净化组配套系鸡群所产的商品代鸡群ALV阳性率也明显低于对照组,父系净化1组(FJ1)和母系净化1组(MJ1)杂交后所产的"净商品1"鸡群胎粪p27抗原阳性率为4.3%,ALV-A/B抗体阳性率为2.4%,ALV-J抗体阳性率为3.0%,病毒分离阳性率为3.0%。结果表明该净化程序效果明显,适于进一步推广应用。

基于RAD-seq测序的狼山鸡基因组选择信号分析

试验旨在分析狼山鸡基因组选择信号,发掘狼山鸡重要种质特性基因。采用简化基因组RAD-seq测序鉴定狼山鸡及其他18个地方鸡种基因组SNP标记,构建系统进化树阐明狼山鸡的遗传结构,采用ZHp选择信号检测方法鉴定狼山鸡基因组受选择区域(基因)。结果显示,在狼山鸡中鉴定出320874个SNPs。19个地方鸡种总体上聚为五大类,与品种形成历史和区域分布基本一致。狼山鸡16个常染色体上的46个区域受到选择作用(ZHp<-3.5),包含122个受选择基因,其中部分区域在遗传聚类同分支的安义瓦灰鸡(15个区域)、边鸡(14个区域)、大骨鸡(11个区域)和北京油鸡(13个区域)中也受到选择。GO分析结果显示,狼山鸡122个受选择基因显著富集在血细胞生成、转录调控、嗜酸性粒细胞趋化、骨化等生物学过程(P<0.05)。KEGG分析结果显示,狼山鸡122个受选择基因显著富集在心肌细胞肾上腺素能信号传导、Toll样受体信号通路、Ca2+信号通路、细胞质DNA传感通路、NOD样受体信号通路等(P<0.05)。选择作用主要体现在对狼山鸡刺激响应、先天免疫、代谢、神经系发育等方面的塑造。研究结果可为狼山鸡品种评价、保护及利用提供重要遗传信息。

规模化蛋鸡场禽白血病净化成绩评估

采用IDEXX禽白血病病毒检测试剂盒对盐城市4个父母代种鸡场进行禽白血病抗原、抗体的检测,结果表明,4个父母代鸡群所产的商品代p27抗原平均阳性率由净化前的21.56%下降至净化后的12.23%,A/B亚群禽白血病病毒平均抗体阳性率由净化前的8.77%下降至净化后的3.44%,J亚群禽白血病病毒平均抗体阳性率由净化前的12.21%下降至5.05%。净化实施后鸡群生产性能显著提高。

腹腔镜全腹膜外疝修补术331例临床分析

目的：探讨腹腔镜全腹膜外疝修补术（totally extraperitoneal,TEP）的手术技巧及术后并发症的防治。方法：回顾分析2012年5月至2014年6月为331例（428侧）患者行TEP的临床资料,总结手术疗效与操作技巧,以减少并发症的发生。结果：330例顺利完成TEP,1例中转为腹腔镜经腹腹膜前疝修补术。手术时间30~75 min,平均（40.3±4.6）min。术后6 h即可下床活动、进半流质饮食。术后1~3 d出院,术后平均住院（1.5±0.3）d。术中出现6例腹壁下血管损伤出血。术后随访1~24个月,无复发病例及切口感染、补片感染。术后血清肿68侧（15.9%）,其中11例经穿刺抽液治愈。腹股沟区慢性疼痛（疼痛超过1个月）5例,术后3个月内疼痛均消失。结论：腹腔镜TEP可作为无全麻禁忌初发腹股沟疝患者的优先选择术式。