沈生荣：脂肪肝与脂代谢

人物档案 沈生荣:理学博士,美国FDA和芝加哥大学博士后.浙江大学分子营养学教授,博士生导师.《Lipids in Health&Disease》、《肿瘤代谢与营养电子杂志》副主编.国家重点研发计划项目与自然科学基金评审专家、中国保健品协会特医食品应用委员会委员脂代谢异常营养学组组长、中国抗癌协会肿瘤营养专业委员会常委、中国抗癌协会肿瘤营养专委会临床研究学组委员、中国医学营养整合联盟常务理事、中国检验检疫学会卫生检验与检疫特聘专家、中国医促会结核病分会结核病营养学组(筹)组长.

儿茶素抗氧化作用的协同增效效应

用电子自旋共振(ESR)和化学发光技术,研究了(-)-EGCG、(-)-ECG、(-)-EC、(-)-EGC 4种儿茶素及其不同组合,对超氧阴离子自由基(O(?))的清除作用。结果表明,单一儿茶素以(-)-EGCG 的清除能力最强,其纳摩尔清除率为316.3,其次为(-)-ECG,纳摩尔清除率为262.9;两两不同组合对O(?)的清除率以(-)-EGCG+(-)-ECG 效果最佳,比各自单独存在时要增效,三三组合时以(-)-EGCG+(-)-ECG+(-)-EC 组合效果最佳,增效效果明显,且强于两两组合。这些组合的增效效果与体系中存在的儿茶素的摩尔浓度呈高度的线性正相关。4种儿茶素组成不同的比例,以茶叶天然组成增效效果最明显。用伏安法测得的各儿茶素第一还原电位由高到低的次序为:(-)-EGCG>(-)-ECG>(-)-EGC≈(-)-EC,这一电位次序是儿茶素构成抗氧化循环的根本所在。

茶多酚复合体及(一)——EGCG对氧自由基的清除作用

用 ESR 自旋捕集技术和化学发光法研究了茶多酚复合体及(-)-EGCG 在黄嘌呤—黄嘌呤氧化酶系统中产生的 O_2的清除作用,结果表明,它们的清除能力强于 V_E 和 V_C,并随浓度增加而加强,至6×10^(-3)mg/ml 时,清除率达到最高(>97%),以后则随浓度的加大而下降。对于Fenton 反应产生的·OH,在最适浓度(0.043—0.10 mg/ml)范围内清除率可达99%,一般只有4%—20%,在高浓度下甚至还可发生助氧化作用。茶多酚对 PMA 刺激 PMN 引起的细胞呼吸暴发时产生的活性氧自由基,清除效果显著,并具量效关系。本文还对茶多酚复合体及(-)-EGCG 在高浓度下的助氧化作用进行了讨论。

石杉碱甲提取工艺研究

系统研究了石杉碱甲的提取工艺.系用有机酸浸提、萃取、反萃取、脱色和重结晶等化学分离技术从千层塔中提取、纯化石杉碱甲.结果表明:1pH对石杉碱甲的存在形态有很大影响;2一定酸度下的液液萃取除杂效果理想;3活性炭的用量及吸附条件对除杂效果影响显著;4低温下氯仿的重结晶可得到纯度大于99%的高纯度石杉碱甲.

茶多酚体外助氧化作用的自由基机理

从茶叶中分离得到的茶多酚及其主体成分(-)-表没食子儿茶素没食子酸酯——(-)-EGCG在体外碱性条件诱发下能产生O_2^(?)和多酚类半醌阴离子自由基,(-)-EGCG 的产生能力强于茶多酚复合体,茶多酚的这一特性可能是在高浓度时产生毒性反应的实质,是高浓度下清除自由基作用减弱的原因。

EGCG和GCG清除单线态氧效果的ESR鉴别

利用ESR技术研究了EGCG及其对应体GCG对单线态氧的作用效果。结果表明 ,高浓度下 ,两者对单线态氧均有较强的清除作用 ,无显著差异 ;小于 0 1mmol L浓度时 ,GCG的清除能力强于EGCG ;浓度越低 ,差异越明显。造成这种差异的主要原因是两种儿茶素的空间构象不同 ,GCG比EGCG更稳定。

茶多酚及其儿茶素单体对过氧化氢诱导的线粒体通透性改变孔道开放的影响

线粒体是细胞内重要的细胞器 ,是生成ATP的主要场所 .线粒体通透性改变孔道 (PT孔道 )的开放会引起线粒体许多功能的紊乱而导致细胞死亡 .对茶多酚及其单体儿茶素对过氧化氢诱导的线粒体膨胀及膜电势变化过程中PT孔开放的影响进行了研究 .实验结果表明茶多酚及其儿茶素单体对PT孔开放的影响显著不同 :茶多酚及其主要成分EGCG和ECG能够有效地抑制PT孔道的开放 ;而ECG ,(+) C和EGC却加速PT孔道的开放过程 .从总体效果来看 。

儿茶素类与羟自由基的作用动力学

用脉冲辐解技术研究了儿茶素与羟自由基作用的动力学。结果表明：ＥＧＣＧ与ＥＣＧ与羟自由基反应后在３３０ｎｍ与４４０ｎｍ处分别生成羟基加合物与酚氧自由基峰，ＥＧＣ与ＥＣ则在３４０ｎｍ与５００ｎｍ处生成羟基加合物与酚氧自由基峰；羟基加合物在脉冲后０．９～１．５μｓ达峰值，酚氧自由基在脉冲后１０～１５μｓ达峰值；酚氧自由基是羟基加合物的分解产物；４种儿茶素与羟自由基反应的速率常数依次是：ＥＣ为９．０×１０９ｄｍ３ｍｏｌ－１ｓ－１，ＥＧＣ为９．６×１０９ｄｍ３ｍｏｌ－１ｓ－１，ＥＣＧ为１．２×１０９ｄｍ３ｍｏｌ－１ｓ－１，ＥＧＣＧ为１．６×１０９ｄｍ３ｍｏｌ－１ｓ－１，羟基越多，反应速率越大，没食子酰基是稳定酚氧自由基的重要结构因子。

铁存在下儿茶素的抗自由基效应

用荧光偏振、ＥＳＲ波谱分析技术及紫外分光光度法，分析了铁存在下儿茶素抗自由基效应。结果表明：铁对红细胞膜的损伤无阈值存在。儿茶素对铁存在下自由基损伤红细胞膜的保护作用存在阈值，即：ＥＧＣＧ为０．０２ｍｍｏｌ／Ｌ，ＥＣＧ为０．０２５ｍｍｏｌ／Ｌ，ＥＧＣ为０．０２８ｍｍｏｌ／Ｌ，ＥＣ为０．０５ｍｍｏｌ／Ｌ。高浓度的儿茶素在铁的存在下能明显损伤红细胞膜。儿茶素能有效清除脂类自由基，且与铁有较强的螯合作用。儿茶素对铁存在下自由基损伤红细胞膜的保护作用与清除启动因子自由基及脂质过氧化次级自由基和对铁的较强络合作用有关。

茶多酚保护生物大分子的自由基机理

采用脂类、蛋白质和ＤＮＡ为研究对象，以香烟烟雾、重金属离子和辐照为损伤诱导手段，利用自旋标记电子顺磁共振和荧光探针技术，研究了茶叶主要生物活性成分茶多酚（ＴＰ）对自由基诱发下生物大分子损伤的保护作用，结果表明，ＴＰ可抑制气相烟自由基引起的膜脂类分子的过氧化，维护细胞膜的流动性；一定浓度范围内的ＴＰ可抑制Ｃｒ￣（６＋）参与的膜蛋白巯基构象变化；ＴＰ能防止由￣６０Ｃｏγ辐照诱发的ＤＮＡ损伤。这些效应均与ＴＰ强清除自由基能力密切相关。

茶多酚和L-EGCG的抗烟致脂质过氧化作用

从茶叶中提取的天然多酚类化合物茶多酚和L-表没食子儿茶素没食子酸酯(L-EGCG)对由香烟气相物质诱发的大鼠肺细胞的脂质过氧化有很强的抑制作用,且复合体茶多酚及其主要单体L-EGCG抑制效果接近,同时两者对超氧阴离子自由基和羟自由基都有十分明显的清除作用,表明茶多酚与L-EGCG的抗脂质过氧化机理之一是有效地清除了脂质过氧化的启动子氧自由基.

茶多酚复合体及L-EGCG清除超氧阴离子自由基特性的研究

用自旋捕集电子顺磁共振技术(ESR)和化学发光法,研究了茶多酚复合体和L-EGCG对超氧阴离子自由基的清除特性.结果表明,茶多酚复合体和L-EGCG对超氧阴离子自由基有强的清除作用.在6.0×10^(-3)mg/mL时清除率达最大(>97％),低于6.0×10^(-3)mg/mL时,具量效关系,高于6.0×10^(-3)mg/mL时清除率下降.清除超氧阴离子自由基时,化学发光强度随时间增加平稳下降,表明清除超氧阴离子自由基后无新的自由基存在.高浓度下茶多酚复合体和L-EGCG的助氧化作用是清除率低的原因,助氧化作用的产生是由药物在空气O_2和碱的作用下产生自由基造成的,pH10.1时产生超氧阴离子自由基,pH12.0时L-EGCG产生L-EGCG自由基.清除速率常数TPⅠ为3.82×10~9,TPⅡ为2.91×10~9,L-EGCG为3.35×10~9mg/mL·s,相同浓度下TPⅠ的清除速率为最大.此外,儿茶素类清除超氧阴离子自由基的反应中心是不同的,没食子儿茶素通常发生在连苯三酚结构上.

EGCG抑制PC12凋亡的细胞生物学研究

以神经毒素 6_OHDA诱导PC12细胞凋亡长期被用作帕金森氏病 (PD)研究模型。由于氧应激在PD发病中起重要作用 ,在 6_OHDA处理前提前 3 0min加入不同剂量的保护剂EGCG ,对 6_OHDA造成的PC12细胞损伤有一定的保护作用 ;流式细胞术检测细胞凋亡率 ,结果表明EGCG表现出剂量依赖的保护作用 ,且在 2 0 0 - 4 0 0 μM时保护作用最佳 ;

生物抗氧化剂茶多酚与机体自由基失衡的调控

从茶叶中提取的天然多酚类化合物——茶多酚(TP),能高效清除活性氧自由基,有效清除脂类自由基,对活细胞产生的活性氧自由基呈量效清除效应.在高浓度时或自由基诱发下,TP还能产生自由基.对茶多酚复合体中各组分起顺序自由基修复以及保护生物大分子的作用.此外,还能调动机体内源性抗氧化剂.茶多酚可调控机体自由基的平衡,发挥着多药效的功能.

儿茶素对羟自由基诱发 SOD 基因序列改变的影响

利用基因克隆与测序技术 ,研究了儿茶素对羟自由基诱发 SOD基因序列改变的影响 ,结果表明 :Fe( ) /H2 O2 产生的羟自由基可诱导西红柿叶片 SOD基因中 G→ A,G→ C间的颠换 ,且 Fe( )浓度越高 ,颠换率越高 ,尤其是 G→ C的颠换 ,但儿茶素的加入明显抑制这种颠换 ,且 (一 ) - EGCG>(一 ) -ECG>(一 ) - EGC>(一 ) - EC,呈浓度—效应关系 ,而儿茶素本身不能使

遮荫对蒸青绿茶香气成分的影响

气相色谱分析遮荫茶与露天茶的香气组成,结果表明:露天茶不含β-檀香醇和苯甲酸及其所生成的酯,除低级脂肪族化合物含量较高外,其他香气成分遮荫茶比露天茶明显提高。其中芳樟醇、橙花醇、香草醇。香叶醇及其环化生成的萜品烯和醇等单萜烯类提高1.39～1.53倍,茉莉酮及其甲酯提高1.70～1.85倍,百里香酚提高3.64～11.26倍。两种覆盖处理相比,简易草覆虽含有较高的芳香族化合物和茉莉酮、芳樟醇、百里香酚等芳香成分,但大棚草覆茶的萜烯总量、紫萝酮系化合物、香豆素、十八烷醇以及高级脂肪酸的酯含量较高。这些增香剂以及定香剂使后者的香气较为持久。

儿茶素的分子修饰

本文通过用油酸酸氯酸化的办法将水溶性EGCG修饰成油溶性的EGCG，修饰后产物油溶性好，对AMVN启动的卵磷脂过氧化产生的脂自由基有较好的清除作用，明显优于水溶性EGCG，与TBHQ接近；对食用大豆色拉油的过氧化有明显的抑制作用，与VE、TBHQ接近，且抗氧化作用稳定。

油溶性茶多酚对色拉油的抗氧化作用

经用油酸改性后的水溶性茶多酚，对大豆色拉油有明显的抗氧化作用，效能与TBHQ接近，抗氧化效果随添加量增加而加强，随过氧化时间延长抗氧化作用更显著，且对油品质量没有影响；经急性毒性试验，半致死剂量为8000mg／kg，属无毒性。

儿茶素对dGMP羟基加合物的电子转移修复效应

用脉冲辐解动态研究技术，分析了由绿茶中提取的儿茶素对氧化型ｄＧＭＰ羟基加合物的电子转移修复效应。结果表明，ｄＧＭＰ中性Ｎ２Ｏ饱和水溶液在儿茶素存在下脉冲辐解后３１０ｍｍｄＧＭＰ－ＯＨ生长明显减慢，儿茶素酚氧自由基逐渐形成，儿茶素对ｄＧＭＰ－ＯＨ的修复速率常数依次是：ＥＧＣＧ为７．２×１０８ｄｍ３ｍｏｌ－１ｓ－１，ＥＧＣ为４．７×１０８ｄｍ３ｍｏｌ－１ｓ－１，ＥＣＧ为５．６×１０８ｄｍ３ｍｏｌ－１ｓ－１，ＥＣ为２．９×１０８ｄｍ３ｍｏｌ－１ｓ－１。

绿茶颗粒对水中Cr^(3+)吸附行为的研究

经福尔马林处理后的茶叶对Cr^(3+)的吸附,比未处理茶效果更好,其饱和吸附量为40.7ppm/g,且能迅速建立吸附平衡。处理茶对Cr^(3+)的吸附量随pH值的降低明显减少,在pH4.0～4.5有最佳吸附行为,对低浓度Cr^(3+)的吸附效果优于活性炭。用0.1NHCl处理吸附了Cr^(3+)的处理茶,解吸率达93％,解吸后的处理茶重复使用效果良好。Cu^(2+)、Ni^(2+)、Zn^(2+)、Hg^(2+)、Pb^(2+)等共存离子对Cr^(3+)的吸附无抑制作用。处理茶对Cr^(3+)的吸附机理可分为物理吸附、化学吸附与疏水吸附。