小鼠孤雌生殖的胚胎干细胞的初步研究

比较去透明带孤雌桑葚胚和留透明带孤雌囊胚、体内受精胚胎、体外受精胚胎在饲养层上囊胚的扩张率、贴壁生长率.结果表明去透明带孤雌桑葚胚比留透明带孤雌囊胚的扩张率显著(p<0.05)提高,而贴壁率则极其显著地(p<0.01)提高,此外前者还发生增殖.但孤雌胚胎的囊胚扩张率、贴壁率和增殖率均极其显著地(p<0.01)低于体内受精胚胎和体外受精组;体内受精胚胎的体外发育最佳.说明去透明带孤雌桑葚胚比留透明带孤雌囊胚更利于在饲养层上贴壁生长,为建立孤雌生殖的胚胎干细胞系提供了基础.

腺病毒介导的RNA干扰降低VEGF受体FLT-1,KDR转录抑制血管形成

本研究用细菌内同源重组的方法构建了针对VEGF受体FLT-1,KDR的siRNA表达重组腺病毒Ad H1-siRNA/FLT-1和Ad H1-siRNA/KDR,感染HUVEC细胞,观察两种病毒对HUVEC细胞体外增殖和形成微血管的干扰作用.通过RT-PCR实验表明,Ad H1-siRNA/FLT-1和Ad H1-siRNA/KDR均可特异性地下调血管内皮细胞(HUVEC)中的FLT-1mRNA和KDR mRNA水平.与对照组相比,FLT-1的mRNA水平下降为40%,KDR的mRNA水平下降为52%.Ad H1-siRNA/FLT-1和Ad H1-siRNA/KDR对HUVEC细胞增殖均有干扰作用,加入病毒9 d后,对照组的细胞平均计数为31.5×104/μL,Ad H1-siRNA/FLT-1干扰病毒对照组为28×104/μL,Ad H1-siRNA/KDR干扰组为21.5×104/μL.Ad H1-siRNA/FLT-1和Ad H1-siRNA/KDR对HUVEC细胞在Matrigel上形成微血管均有干扰作用,对照组每HPF形成微血管数量为10.75条,Ad H1-siRNA/FLT-1干扰病毒对照组为10.25条,实验组Ad H1-siRNA/KDR每HPF形成微血管数量为7条.证明Ad H1-siRNA/FLT-1,Ad H1-siRNA/KDR均可干扰血管形成.

腺病毒介导的RNA干扰降低VEGF转录抑制血管形成的研究

用细菌内同源重组的方法构建了针对VEGF的siRNA表达重组腺病毒AdH1-siRNA/VEGF,感染HUVEC细胞,观察该病毒对HUVEC细胞体外增殖和形成微血管的干扰作用.通过Real-timeRT-PCR实验表明,AdH1-siRNA/VEGF可特异性地下调血管内皮细胞(HUVEC)中的VEGFmRNA水平.与对照组相比,VEGF的mRNA水平下降为50%,AdH1-siRNA/VEGF对HUVEC细胞增殖有干扰作用.加入病毒9d后,对照组的细胞平均计数为31.5×104/μL,干扰病毒对照组为28×104/μL,AdH1-siRNA/VEGF干扰组为21.5×104/μL.AdH1-siRNA/VEGF对HUVEC细胞在Matrigel上形成微血管有干扰作用,对照组每HPF形成微血管数量为10.75条,干扰病毒对照组为10.25条,实验组AdH1-siRNA/VEGF每HPF形成微血管数量为7条.证明AdH1-siRNA/VEGF可以干扰血管形成.

镉对小鼠卵母细胞成熟和体外受精的影响

采用小鼠卵母细胞体外培养、体外受精的方法研究了ＣｄＣｌ２对小鼠卵母细胞的生发泡破裂（ＧＶＢＤ）、第一极体释放及体外受精（ＩＶＦ）的影响．结果表明，ＣｄＣｌ２对ＧＶＢＤ没有影响，但可以抑制卵母细胞第一极体的释放，影响卵母细胞的存活率并可降低ＩＶＦ频率ＣｄＣｌ２影响极体释放和ＩＶＦ率可能是其对纺锤体的破坏，使得减数分裂不能正常进行，同时还可能影响微丝等细胞骨架成分，阻止正常胞质分裂实验结果还显示，ＣｄＣｌ２这种抑制作用可能是可逆的，或者仅仅是对减数分裂的延迟作用．

低氧对人肺腺癌A549细胞迁移和黏附的影响

目的:探讨低氧对人肺腺癌A549细胞迁移以及与血管内皮细胞黏附的影响。方法:细胞划痕实验和Transwell实验检测低氧对A549细胞迁移和浸润的影响;细胞黏附实验检测低氧对A549细胞与血管内皮细胞黏附的影响;免疫荧光法观察低氧对A549细胞中E-cadherin、β-catenin、纤维状肌动蛋白(F-actin)分布的影响;荧光素酶报告基因检测低氧对A549细胞中依赖于缺氧诱导因子-1(hypoxia-inducible factor-1,HIF-1)的转录活性的影响。结果:低氧可以促进A549细胞的迁移、浸润和与血管内皮细胞的黏附,影响A549细胞中E-cadherin和β-catenin的分布及F-actin细胞骨架的重排,上调A549细胞中依赖于HIF-1的报告基因的表达。结论:低氧促进A549细胞的迁移、浸润和与血管内皮细胞的黏附可能是通过调控A549细胞中依赖于HIF-1基因的表达,进而影响细胞中E-cadherin和β-catenin分布和F-actin细胞骨架的重排。

汞对雌性小鼠生殖功能及脏器的影响

为探讨汞化合物对脏器及生殖的毒性,采用卵母细胞体外培养、体外受精的方法研究了汞对小鼠脏器系数、卵母细胞成熟和受精能力的影响。结果表明,0.5和1.5mg/kgBW汞对小鼠的肝脏、肾脏有明显的毒性作用,1.5mg/kgBW组还对卵巢有明显的毒性作用,并能显著降低超排卵的卵母细胞数;汞对体内卵母细胞生发泡破裂没有影响,但可以抑制卵母细胞第一极体的释放,影响卵母细胞的存活率并降低体外受精(IVF)率。结果提示,氯化汞可以影响卵母细胞的成熟,明显破坏卵母细胞的体外受精能力,损伤或降低小鼠的生殖能力。

铝对体外培养小鼠卵母细胞减数分裂的影响

本实验采用小鼠卵母细胞体外培养的方法研究了３～６０ｍ ｇ／ Ｌ 的硝酸铝对小鼠卵母细胞减数分裂的影响。结果表明，铝对卵母细胞生发泡破裂（ Ｇ Ｖ Ｂ Ｄ）没有影响，但可以抑制卵母细胞第一极体的排出，３０ｍ ｇ／ Ｌ和 ６０ｍ ｇ／ Ｌ的两个剂量组可降低卵母细胞的存活率。实验结果提示铝对小鼠卵母细胞的减数分裂有破坏作用。

6种金属元素对小鼠卵母细胞成熟和体外受精的影响

为研究镉、铅、镍、锰、铬、铝元素的生殖毒性 ,采用卵母细胞体外培养、体外受精的方法 ,观察它们对卵母细胞成熟和受精能力的影响。结果显示除了铝外 ,其它各金属元素均可以明显降低小鼠超排卵数 ;6个剂量组均可以抑制卵母细胞的成熟 ,显著降低卵母细胞第一极体释放率、体外受精率和细胞存活率 ,对体内卵母细胞的生发泡破裂没有影响 ,但是对体外培养卵母细胞的生发泡破裂有明显的抑制作用 (铝组除外 )。结果提示 ,这些金属元素被人体过量吸收后 ,可以破坏育龄妇女卵母细胞正常成熟 ,使受精能力下降 。

香烟烟雾水溶物对小鼠卵母细胞成熟和IVF的影响

采用小鼠卵母细胞体外培养、体外受精的方法研究不同产地 3种香烟的烟雾水溶物对小鼠卵母细胞成熟和受精能力的影响。结果显示 3种香烟烟雾水溶物对卵母细胞生发泡破裂都没有影响 ,但可以显著地抑制卵母细胞第一极体的释放、降低卵母细胞的体外受精率和体外存活率。结果提示 ,香烟烟雾中影响生殖作用的主要成分是其中的水溶性成分 ,它们可以破坏卵母细胞的成熟、降低卵细胞的受精能力 ,对生殖细胞和生育能力有一定的毒性作用 ;不同产地、不同品牌香烟烟雾水溶物毒性作用相似。

三氯化铬对小鼠卵母细胞成熟和体外受精的影响

采用小鼠卵母细胞体外培养 ,体外受精的方法研究了三氯化铬对小鼠卵母细胞成熟和受精能力的影响 .结果表明 ,三氯化铬可以抑制卵母细胞第一极体的释放 ,降低小鼠超排卵数和卵母细胞的存活率和体外受精率 .对小鼠体内生发泡破裂没有影响 ,但可以抑制体外培养卵母细胞的生发泡破裂 ;随着在正常培养液中培养时间的延长 ,卵母细胞的第一极体的释放率和体外受精率 (除了 6.0 mg· kg-1组外 )均有显著提高 ,且与对照组相比已经无显著性差异 .结果提示 ,三氯化铬可以破坏卵母细胞的成熟 ,降低卵母细胞的受精能力 。

香烟烟雾水溶物对雌性小鼠生殖毒性的研究

为了研究香烟的生殖毒性 ,采用灌服香烟烟雾水溶物后观察其对小鼠怀孕率和胚胎发育的影响 ,以及取出卵母细胞进行体外培养和体外受精的方法 ,观察香烟烟雾水溶物对超排卵的卵母细胞数目、卵母细胞的成熟和受精能力等的影响。结果表明 ,香烟烟雾水溶物可以极显著地降低小鼠的妊娠率 ,抑制胚胎发育 ,显著性地抑制卵母细胞的体内成熟 ,降低第一极体的释放率和卵母细胞的体外受精率 ,使卵母细胞存活率显著降低。结果还显示 ,香烟烟雾水溶物对小鼠生殖作用的损害和对卵母细胞成熟的抑制作用可能是可逆的 ,停止灌服香烟烟雾水溶物和将卵母细胞以及受精卵培养在正常的培养液中 ,小鼠的生育能力又能基本恢复正常 ,卵母细胞的第一极体的释放率以及体外受精率都明显提高。提示 ,香烟烟雾水溶物可以破坏卵母细胞的成熟和减数分裂 ,降低小鼠的生殖能力和生育能力 ,但这种毒性作用是可以逆转的 ,戒烟后又可恢复正常。香烟中对生殖毒性较大的物质可能是其中的一些含量较高的重金属元素。

芪芍合剂对关节炎大鼠炎症及血管新生相关因子的影响

目的研究中药组方芪芍合剂对大鼠II型胶原诱导型关节炎(C IA)炎症及血管新生相关因子的影响。方法用II型胶原和完全弗氏佐剂建立C IA模型,造模次日始用芪芍合剂(40 g.kg-1.d-1×4周)灌胃,模型对照组分别给予等量的生理盐水。于造模第4周大鼠心脏采血分离血清进行W estern B lot检测大鼠体内IL-1,βTNF-,αVEGF,MMP-2以及MMP-9的相对表达水平。结果中药可以降低大鼠IL-1,βTNF-,αVEGF,MMP-2,MMP-9的表达。结论IL-1β,TNF,αVEGF,MMP-2,MMP-9共同促进C IA大鼠炎症的形成和发展,中药可能通过抑制它们的表达而发挥抗炎及抗血管新生作用。

镍对小鼠卵母细胞成熟和体外受精的影响

为了研究镍的生殖毒性 ,采用卵母细胞体外培养、体外受精的方法研究镍对小鼠卵母细胞的成熟和体外受精率的影响。结果 :氯化镍对卵母细胞生发泡破裂没有影响 ,但抑制卵母细胞第一极体的排放 ,降低体外受精率 ,并降低卵母细胞的存活率。实验结果提示 ,氯化镍破坏小鼠卵母细胞的减数分裂 ,影响小鼠的生殖功能。

被动吸烟对雌性小鼠生殖功能的影响

为了探索被动吸烟对生殖功能的影响。采用体内实验和卵母细胞体外培养、体外受精的方法 ,研究被动吸烟对小鼠生殖力的影响。结果 :被动吸烟可以显著降低小鼠的妊娠率 ,抑制胚胎发育和卵母细胞的体内成熟 ,降低第一极体的释放率和卵母细胞的体外受精率 ,使卵母细胞的质量和存活率显著降低 ,影响卵巢与体重比例 ,但对生发泡破裂无影响。实验结果还显示 ,停止被动吸烟和将卵母细胞以及受精卵培养在正常培养液中 ,小鼠的生殖能力又能基本恢复 ,卵母细胞的第一极体的释放率以及体外受精率都明显提高。结论 :被动吸烟可以抑制卵母细胞的成熟 ,降低小鼠的生殖能力 ,香烟烟雾中的某些成分被育龄妇女吸收后 ,会导致生殖能力下降 ,甚至导致不孕 ,但香烟烟雾的这种毒性作用可能是短暂的、可逆的。

不同日龄小鼠卵丘颗粒细胞对卵泡刺激素/缺氧诱导因子-1信号通路的影响

目的研究不同日龄小鼠颗粒细胞对卵泡刺激素(FSH)诱导的缺氧诱导因子-1/血管内皮细胞生长因子(HIF-1/VEGF)信号通路的影响。方法超排卵方法取出卵母细胞和颗粒细胞,进行体外受精;荧光素酶报告基因实验检测常氧和低氧培养条件下,不同日龄小鼠卵丘颗粒细胞对FSH诱导的HIF-1/VEGF信号通路的应答;蛋白质免疫印迹技术检测FSH受体的表达水平。结果雌性小鼠超排卵数和卵母细胞体外受精能力与小鼠日龄数呈负相关;FSH上调小鼠卵丘颗粒细胞HIF-1α的转录活性;免疫印迹结果显示小鼠颗粒细胞中FSH受体的表达水平随着日龄数的增加呈下降趋势。结论小鼠卵丘颗粒细胞对FSH诱导的HIF-1/VEGF信号通路的应答反应随小鼠天日龄数增加而下降,与颗粒细胞表面FSH受体的表达下降相一致。雌性小鼠随着年龄增加引起的生殖能力下降可能与颗粒细胞表面FSH受体表达减少有关。

砷对小鼠卵母细胞成熟和体外受精的影响

目的 探讨三氧化二砷（Ａｓ２Ｏ３） 对小鼠生殖作用的影响。方法 采用小鼠卵母细胞体外培养、体外受精的方法研究Ａｓ２Ｏ３ 对卵母细胞成熟和体外受精的影响。结果 Ａｓ２Ｏ３ 对小鼠卵母细胞生发泡破裂、超排卵的卵母细胞数目没有影响， 但可以抑制卵母细胞第一极体的释放， 降低体外受精率和卵母细胞的存活率。结论 Ａｓ２Ｏ３ 可以破坏卵母细胞的成熟、降低卵母细胞的受精能力， 对生殖细胞和生育能力有一定的毒性作用。

铅对小鼠卵母细胞成熟和体外受精的影响

目的 :探讨铅对小鼠生殖作用的影响。方法 :采用小鼠卵母细胞体外培养、体外受精的方法研究了铅对小鼠卵母细胞的成熟和体外受精的影响。结果 :铅对小鼠卵母细胞生发泡破裂没有影响 ,但可以抑制卵母细胞第一极体的释放 ,影响卵母细胞的存活率并可降低体外受精率和超排卵的卵母细胞数量。随着培养时间的延续 ,卵母细胞的第一极体的释放率和体外受精率都有显著提高。结论 :铅可以破坏卵母细胞减数分裂进行 ,降低卵母细胞的受精能力 。

综合性大学医学院细胞生物学教学改革实践

就如何提高综合性大学医学院校中细胞生物学的教学质量进行了讨论,从如何合理组织优化教学内容,充分应用现代教学手段和教学方法提高课堂教学效果,开展实践性教学环节的改革,不断提高学生的分析问题和解决问题的能力等方面介绍了细胞生物学教学改革的方法和措施,并就如何进一步提高教学质量、激发学生学习积极性等方面进行探讨。

锰对小鼠卵母细胞成熟和体外受精的影响

目的 研究锰的生殖毒性。方法 采用小鼠卵母细胞体外培养、体外受精的方法研究了硫酸锰对小鼠卵母细胞成熟和受精能力的影响。结果 硫酸锰可以抑制卵母细胞第一极体的释放 ,降低小鼠平均超排卵的卵母细胞数和卵母细胞的存活率和体外受精率。对小鼠体内生发泡破裂 (GVBD)没有影响 ,但可以抑制体外培养卵母细胞的GVBD ;硫酸锰还可以抑制受精卵的卵裂。结论 本实验结果提示 ,硫酸锰可以破坏卵母细胞的成熟 ,降低卵母细胞的受精能力 。