废弃烟叶可溶性蛋白的提取工艺

集合超声波、超滤、弱碱性等电点沉淀技术,开发了一种从废弃烟叶中提取可溶性蛋白的新工艺,并构建了一套物理、化学、生物参数评价体系.经优化后的工艺路线如下:在0.085 mol/L磷酸缓冲液(pH=7.85)条件下,以1∶8料液比进行超声波提取,经分级离心、过滤/超滤,并通过0.11 mol/L[H^(+)]溶液调节等电点pH=5.5,成功提取了分子量约为55 kDa及大于200 kDa的混合蛋白,其氨基酸组成分析能满足成人必需氨基酸需求.红外光谱分析未见明显果胶、多糖特征.采用温和弱碱-等电点提取技术结合物理提取方法,有效解决了传统提取方法存在的问题,展现了良好的通用性,为废弃烟叶的资源化利用及工业化生产提供了新的思路.

烟草废弃物提取物的双水相萃取及其化妆品功效研究

采用双水相萃取法制备烟草废弃物提取物,探究不同萃取条件对其中上相多酚得率的影响,并探讨其抗氧化活性、紫外吸收特性和细胞毒性。结果表明:当料液质量比为1∶60,搅拌时间为30 min,(NH4)2SO4质量分数为23.3%,乙醇质量分数为23.5%时,上相多酚得率最高,为48.59 mg/g;该萃取条件下,烟草废弃物提取物具有较好的抗氧化活性,当质量浓度为2 mg/mL时,对DPPH自由基清除率达98%,对ABTS自由基清除率达78%;当提取物质量浓度为0.5 mg/mL时,具有较好的紫外吸收特性,有一定的光防护功效;当提取物质量浓度在0~1.2 mg/mL范围内时,对Hacat细胞无细胞毒性,有望成为天然无刺激的功效型化妆品原料。

马来酸替加色罗中有机溶剂残留量的气相色谱法测定

目的 测定马来酸替加色罗中甲醇、乙醇、丙酮、乙醚、石油醚、乙酸乙酯、碘甲烷、冰醋酸、戊胺、草酸二乙酯和二甲基甲酰胺的含量。方法 采用毛细管气相色谱法,色谱系统为:HP—5色谱柱;程序升温;载气为氮气;检测器为FID;外标法计算含量。结果 在各色谱条件下,测得各溶剂的线性良好(r>0.99);平均回收率86.87％～98.45％;RSD 1.34％～6.56％;最低检出量0.29～1.06ng;4批样品中11种有机溶剂残留量均符合要求。结论 经方法学试验验证,该方法灵敏、准确、可靠,适用于本品有机溶剂残留量的测定。

高效液相色谱法及紫外分光光度法测定替加色罗片的含量

目的 :建立替加色罗片剂含量测定的HPLC法和UV法。方法 :HPLC法———采用C18柱 ,流动相为乙腈∶1%十二烷基硫酸钠缓冲溶液 (含0 .95 %冰醋酸 ) =5 6∶4 4。流速 :2mL·min- 1。检测波长 :314nm。柱温 :4 0℃。UV法———在 314nm处测定替加色罗的吸收度。结果 :HPLC法在 0 .1～ 12 0mg·L- 1的范围内 ,将峰面积A与浓度C进行回归处理 ,A =2 8.93C - 14 .4 6 (r =0 .9999,n =6 ) ,日内RSD≤ 1.11% ,日间RSD≤ 3.0 9% ,回收率在 10 0 .4 2 %～ 10 3.82 %之间。UV法在 2～ 2 0mg·L- 1范围内线性良好 ,回归方程为A =5 4.2 8C +0 .0 14 8(r =0 .9998,n =7) ,日内RSD≤ 0 .70 % ,日间RSD≤ 0 .92 % ,回收率在 10 1.0 6 %～ 10 3.0 2 %之间。 2种方法测得 3批样品的标示量百分含量均在规定范围内 (90 %～ 110 % )。结论 :HPLC法和UV法均适用于替加色罗片剂的含量测定 ,由于UV法更简便易行 ,在对有关物质进行了较好控制的情况下 。

中红外和近红外数据融合的香型风格判别

烤烟香型的判别一直是烟草行业的关注焦点。利用中红外和近红外光谱对189份不同香型的烟叶进行分析。分别从中红外谱图数据中提取21个特征波数处以及近红外谱图数据中13个特征波数处的吸光值作为影响因素。通过主成分分析方法分别对选取的中红外、近红外数据进行烟叶清香型、中间香型和浓香型三种香型风格的定性分析。结果表明基于中红外和近红外数据PCA投影图中三种香型混淆严重,区分界面不清晰。随后,将中红外、近红外数据进行融合,将提取的34个特征波数处的吸光值同时代入主成分分析,得到基于中红外和近红外融合数据的PCA投影图。该投影图可以将不同香型的烟叶明显地区分出来。随后利用后退法和遗传算法对中红外和近红外融合后的34个吸光度值进行变量选择,后退法选择出了24个变量,遗传算法选择出了19个变量。对比34,24和19个变量的烟叶三种香型风格的主成分投影图,遗传算法虽然选择了比较少的变量,但其仍然可以将烟叶进行准确的分类。利用遗传算法对中红外和近红外融合后数据进行变量选择,剔除对烟叶香型分类影响小的因素。最后,利用支持向量机建立烟叶清香型、中间香型和浓香型分类判别模型。该模型的建模结果准确率为92.72%,其中清香型、中间香型和浓香型的准确率分别为93.75%,92.11%和91.84%。内部交叉验证留一法结果准确率为88.74%,其中清香型、中间香型和浓香型的准确率分别为90.63%,86.84%和87.76%。对未知样本预报结果的准确率为86.84%,其中清香型、中间香型和浓香型的准确率分别为88.24%,85.71%和85.71%。无论是建模结果、留一法结果和预报结果其准确率都大于85%。研究结果表明中红外和近红外数据融合可以提供更多的特征信息,利用这些信息可以建立烟叶香型风格的分类判别模型,为烟叶香型风格快速鉴别提供帮助。

基于支持向量机的烟叶不同部位6种化学成分差异性分析

基于143个烟叶样品的6种化学成分(莨菪亭、芸香苷、苹果酸、柠檬酸、果糖、蔗糖)建立中部和上部烟叶的支持向量机分类判别模型,并利用该模型对独立的36个烟叶样品进行预报。结果表明,基于烟叶中6种化学成分建立的中部和上部烟叶的支持向量机分类模型的建模、留一法和预报准确率分别为89.51%、85.31%和83.33%。进一步考察了143个烟叶样品在主成分分析投影图中的空间分布及中部和上部烟叶的主要化学成分差异性,得出6种化学成分中蔗糖、莨菪亭和芸香苷是影响中部和上部烟叶差异的主要成分。研究结果表明,改变上部烟叶中的蔗糖、莨菪亭和芸香苷含量,可以扩大其在实际生产中的应用范围。

RP-HPLC测定母体及胎儿血浆中罗哌卡因和布比卡因的药物浓度

目的 :建立罗哌卡因、布比卡因血浆药物浓度的反相高效液相 (RP HPLC)测定方法 ,并测定其母体和 (或 )胎儿血药浓度 ,为临床合理用药提供参考。方法 :采用AgilentHPLC系统 ;色谱柱 :Dikma C18(5 μm ,4 .6× 15 0mm)。以罗格列酮作为内标 ,流动相为磷酸二氢钠缓冲液 (10mmol·L- 1,pH3.0 )∶乙腈 =78∶2 2 ,流速 1.0mL·min- 1,λ =2 10nm。结果 :罗哌卡因线性关系为Y =0 .0 2 95X -0 .0 2 98(n =7,r =0 .9998) ;最低检测浓度为 0 .0 1mg·L- 1;平均回收率为 99.82 % ;日内、日间RSD分别小于 2 .4 7% ,3.75 % ;布比卡因线性关系为Y =0 .0 2 87X + 0 .0 2 71(n =7,r =0 .9998) ;最低检测浓度为 0 .0 1mg·L- 1;平均回收率为 10 1.0 1% ;日内、日间RSD分别小于 2 .6 9% ,4 .75 %。测定 6 0个血样 ,罗哌卡因浓度为 0 .15～ 0 .7mg·L- 1,布比卡因为 0 .1～ 0 .5 8mg·L- 1。结论 :RP HPLC法简便、灵敏、准确 ,可以用来测定临床血样中罗哌卡因、布比卡因的药物浓度 ,可为临床合理用药提供参考。

雷替曲塞中有机溶剂残留量的毛细管气相色谱法测定

目的 :建立雷替曲塞中甲醇、乙醚、石油醚、乙酸乙酯、二氯甲烷、氯仿和二甲基甲酰胺残留量的测定方法。方法 :采用毛细管气相色谱法 ,色谱柱为HP INNOWax ;柱温采取程序升温的方法 ;载气为氮气 ;检测器为FID ;外标法计算含量。结果 :在该色谱条件下 ,测得各溶剂的线性均良好 (r =0 .9999) ;平均回收率 93.33%～ 10 1.92 % ;RSD0 .34%～ 4 .96 % ;最低检出量 2 .96～ 3.4 6ng ;3批样品中 7种有机溶剂残留量均符合要求。结论 :毛细管气相色谱法灵敏、准确、可靠 。

高分辨质谱技术研究DART离子化条件下的背景离子及潜在应用

运用高分辨质谱技术对实时直接分析(DART)离子化条件下的多种背景离子进行研究和表征,追溯了这些信号可能的来源。研究表明:背景离子主要在阳离子条件下产生,且主要来自实验室环境中微量的增塑剂和聚二甲基硅氧烷,其中聚二甲基硅氧烷可能来自泵油挥发。了解和掌握这些背景离子有助于利用DART技术开展研究和测试方面的工作:(1)这些背景信号较弱,在DART的样品分析时不会产生显著干扰。可在不额外加入内标化合物的情况下,考察高分辨质谱质量轴的稳定性和准确度。(2)了解这些背景离子有助于DART质谱分析复杂体系时避免误判。

反相高效液相色谱法测定猪脑提取物中神经生长因子的含量

目的 建立猪脑提取物中神经生长因子含量测定的方法。方法 采用高效液相色谱法,色谱柱为Dia monsil C18(150 mm×4.6 mm,5 μm),流动相为乙腈:(0.5％三氟乙酸水溶液:甲醇=52:48)=30:70,10 min后 梯度升至50:50。柱温30℃,流速1.0 mL／min,波长280 nin,进样量20μL。标准曲线法计算含量。结果 在 该色谱条件下,测得神经生长因子的线性良好(r=0.999 4);平均回收率100.9％-102.4％;日内精密度RSD 1.36％-1.77％,日间精密度RSD 1.85％-2.40％;最低检测浓度0.25 mg／L;3批样品中神经生长因子含量分 别为0.326％、0.321％0.332％(mg／100 g)。结论 该方法灵敏、准确、可靠,适用于本品中神经生长因子含量的 测定。

降解上部烟叶大分子物质的复合酶配制与条件优化

为降低上部烟叶中淀粉和蛋白质等大分子成分含量,提高其吸食品质,本研究在统一评价酶活力的基础上,选用4种酶制剂(淀粉酶Ⅳ、蛋白酶Ⅰ、果胶酶Ⅰ和纤维素酶Ⅱ)配制复合酶制剂,采用单因素法和Box-Benhnken响应面分析法对影响酶解效果的复合酶量、缓冲液pH、含水量和酶解时间等因素进行优化。分析显示,4个因素对上部烟叶中淀粉和蛋白质降解率的影响顺序为:缓冲液pH>酶解时间>含水量>复合酶量。响应面分析结果确定最优酶解条件为:复合酶量1.1单位(即淀粉酶Ⅳ 33 U/g烟叶,蛋白酶Ⅰ 550 U/g烟叶,果胶酶I 220 U/g烟叶,纤维素酶Ⅱ 220 U/g烟叶)、缓冲液pH 7.7、含水量54%、酶解时间5.5 h,此时淀粉和蛋白质降解率分别为19.54%和20.03%。本研究中的复合酶制剂及酶解条件可以很好地结合于烟草打叶复烤工艺过程中,具有较好的应用前景。

基于捕集柱阵列的制备型二维液相色谱纯化烟草中的4个组分

二维液相色谱(2D-LC)因具有较高的峰容量,在复杂样品的分离分析中获得了广泛的关注。然而,制备型2D-LC以纯化高纯单体为目标,在方法开发和设备构成等方面与分析型2D-LC有较大的不同,目前尚未得到充分的开发,在大规模的制备纯化中应用较少。本文以一套制备液相色谱模块为分离系统,以稀释泵、切换阀和捕集柱阵列为接口,构建了新型的制备型2D-LC系统,旨在规模化纯化多个活性成分。以烟叶中可以用作医药原料的烟碱、绿原酸、芦丁和茄尼醇等组分为目标物,考察了不同类型填料对样品的捕集效率、过载条件下的色谱保留行为等,优化了制备色谱条件。进而利用在线2D-LC系统实现了烟叶提取物的纯化,通过一次运行获得了4个高纯化合物。该系统具有中压色谱纯化成本低、系统在线运行自动化程度高、稳定性好及容易放大等优点。烟叶中活性化学成分的回收利用对促进烟草行业的发展及带动地方农业经济开发具有重大的意义。

不同卷烟原料物理保润机理研究

为考察不同卷烟原料的物理保润性能,通过动态水分吸附系统、重量法吸附仪和扫描电子显微镜,分别从失水曲线、水吸附量、水吸附焓和微观物理结构进行分析,从机理上阐明了其保润性能的差异性。水分子吸附研究结果表明,在25.2℃,3.0Kpa时,吸附量大小依次为叶丝>膨胀叶丝>膨胀梗丝>薄片,采用Sips模型拟合后计算其初始吸附焓大小为膨胀梗丝>膨胀叶丝>叶丝>薄片。结合卷烟原料动态水分评价及微观结构差异分析,得出如下结论:梗丝基于其超大孔结构及亲水性表面,随环境湿度的变化表现出吸湿快、解湿快的特点;叶丝基于其较丰富的油份及内含物的作用,保润性能最好;膨胀烟丝和薄片经过工艺处理后,对水分子的吸附量以及保持力都劣于叶丝。

保润剂对烟草吸湿特性的影响研究

为探明保润剂对烟草吸湿特性的影响,采用环境扫描电子显微镜技术和恒温恒湿箱方法,对添加保润剂的烟草进行吸湿特性研究,结果表明:5种保润剂都有助于显著增加烟草水分含量,保润剂使得叶表面气孔的保卫细胞有一定程度的膨大,气孔的宽度都有不同程度的变窄,孔隙的面积有所缩小,烟样表面沟槽纹理增多,并且烟丝截面宽度增加;丙二醇和丙三醇的解湿和吸湿平衡含水率都比较高,其次是木糖醇、芦荟多糖和山梨醇;保润剂会加剧烟草的吸湿滞后现象,并且对上部烟叶B2F的影响要大于中部烟叶C2F;保润剂能增强烟草持水性能,不利于解湿过程。

气相色谱-质谱联用法测定烟草及烟草制品中的麦角甾醇

为准确测定烟草及烟草制品中麦角甾醇的含量,建立了以7-去氢胆固醇为内标,将麦角甾醇和7-去氢胆固醇衍生后进行GC/MS同步选择离子检测/全扫描的定量检测方法,并采用该法测定了不同种类烟叶及卷烟中的麦角甾醇含量。结果表明:该方法在2.0～200.0μg/mL之间具有良好的线性关系,R2=0.9995。方法的检出限和检测限分别为0.46和1.53 mg/kg,回收率在85.6%～91.3%之间。该方法适用于烟草及烟草制品中麦角甾醇的定量检测。

动态水分吸附分析系统在烟草中的应用

利用动态水分吸附分析系统对不同烟草原料(上中下部叶丝、膨胀烟丝和膨胀梗丝)进行了等温吸湿-解湿行为的研究。结果表明:①烟丝的等温吸湿-解湿曲线呈III型吸附曲线,解湿时伴有较明显的滞后现象;②不同部位叶丝的等温吸湿-解湿性质基本一致;③叶丝、膨胀烟丝和膨胀梗丝之间的等温吸湿-解湿差别很大:当相对湿度不小于60%时,膨胀梗丝吸水最多,叶丝其次,膨胀烟丝最少;当相对湿度不大于40%时,膨胀梗丝失水最多,膨胀烟丝其次,叶丝失水最少。

拉曼光谱结合偏最小二乘同时测定烟草中叶黄素和β-胡萝卜素含量

色素是烟草中的重要组成成分,烟草的外观质量和内在品质都与色素相关。色素主要分为绿色素、黄色素和黑色素。在生长期,烟草中的绿色素主要是叶绿素,成熟期的烟草中黄色素则主要为叶黄素和胡萝卜素,黑色素则存在于成熟的烟叶中,或在调制和发酵的过程中产生。色素的检测对于烟草原料评价和成品质量都非常重要。鉴于烟草色素基于液相色谱的传统检测方法耗时较长、样品制备过程复杂,以及拉曼光谱操作简单、测定时间短、能提供有关分子官能团信息的特点,开发了一种应用拉曼光谱同时定量检测烟草中叶黄素和β-胡萝卜素的快检方法。烟草样品的有机溶剂提取物,密封在透明玻璃瓶中,将激光聚焦于瓶内溶液样品直接测定拉曼光谱。研究发现,不同于常见的514和785nm激发波长,在短波455nm激光作用下,可获得更理想的拉曼信号,光谱强度较高,荧光干扰较低。对色素萃取溶剂、焦平面与光学平台间的距离等实验条件进行了优化。考虑到不同检测日期仪器操作条件的变化可对拉曼光谱产生影响,以溶剂峰为内标峰,对光谱进行归一化处理,以校正因测定条件不稳定而引起的物理干扰。为了解决荧光干扰,以及色素分子之间的拉曼光谱干扰问题,采用偏最小二乘法(PLS)建立光谱分析的多元校正模型。建模中对波长区域以及光谱预处理方法进行了优化。研究结果表明,光谱归一化处理显著降低了因物理因素产生的光谱干扰,光谱求导运算对建模影响不大,而波长选择能明显改善模型的预测能力。利用798.2~1 752.8cm^-1波段建立叶黄素的PLS定量模型时,预测效果最佳,预测集的均方根误差(RMSEP)为6.68μg·g-1;对于β-胡萝卜素,798.2~1 752.8cm^-1组合2 254.2~2 784.5cm^-1用来建模时得到的RMSEP最小,为2.56μg·g^-1。该方法操作简便、耗时少、结果准确可靠,为烟草样本中色素的定量分析提供了一种切实有效的新途径。

乳化玉米油的制备及其保润性能

采用乳剂技术制备高浓度玉米油保润剂,并通过星点设计-效应面优化法优化其制备工艺。以烟丝干基含水率为指标,采用动态水分吸附系统评价其保润性能,并进行卷烟感官评价。结果表明:①星点设计法优化玉米油保润剂的处方工艺,方法简便且实验次数少;采用三维效应面进行数据处理与非线性拟合,效果良好。②玉米油烟草保润剂制备工艺简单,制得的保润剂黏度为(35.2±1.2)mPa·s、粒径为1.16μm。③与对照丙二醇相比,添加40%玉米油保润剂的膨胀烟丝在干燥环境中前2 h的失水速率明显降低。④添加玉米油保润剂卷烟样品的感官评吸结果好于丙二醇。

烟草及烟草制品中霉菌数量检验用培养基的开发与应用

为开发适用于烟草及烟草制品中霉菌数量检验用的培养基,以烟草及烟草制品中8种常见的污染霉菌(黄曲霉、黑曲霉、局限曲霉、桔青霉、产黄青霉、总状毛霉、匍枝根霉和绿色木霉)为试验菌种,采用5种常见的霉菌培养基(孟加拉红琼脂、察氏琼脂、高盐察氏琼脂、含20%蔗糖的高渗察氏琼脂和马铃薯葡萄糖琼脂培养基)及4种研发的新型培养基进行烟草及烟草制品中霉菌数量检验用培养基的初筛和复筛研究。结果表明:与其他培养基相比,Ⅰ号改良马铃薯葡萄糖琼脂培养基(马铃薯200 g,葡萄糖20.0 g,NaCl 30.0 g,琼脂16.0 g,氯霉素0.1 g和蒸馏水1000 mL)具有检验霉菌菌相全面、获得霉菌数量结果准确等优点,适用于烟草及烟草制品中霉菌数量的检测。

反相高效液相色谱法测定丙泊酚血药浓度

目的 :建立测定丙泊酚人血药浓度的反相高效液相色谱 荧光检测分析方法。方法 :使用Agi lent 110 0型高效液相色谱仪、PhenomenexSecurityGuard ( 4mm× 3mm )保护柱、DiamonsilC18( 15 0mm× 4 .6mm ,5 μm)色谱柱。在血样中加入麝香草酚 (内标 )的甲醇溶液沉淀蛋白后 ,离心取上清液 ,进行HPLC分析。流动相 :乙腈∶水 =5 6∶4 4(V/V) ;流速 :1.5mL·min- 1;荧光检测 :λex=2 76nm ,λem=312nm。结果 :本法标准曲线线性方程为Y =1.787C - 0 .0 31(r =0 .9997,n =9,线性浓度范围为 0 .0 2～ 8.0mg·L- 1) ;最低检测浓度为 4 μg·L- 1(S/N =2 ) ;平均方法回收率为 98.71%;日内、日间精密度RSD( %)均小于 4 .2 %。结论 :本方法简便、灵敏、准确 ,可用于临床上丙泊酚的血药浓度监测。