重组病毒巨噬细胞炎性蛋白对HIV-1_(SF1)的体外抑制作用

目的:研究重组病毒巨噬细胞炎性蛋白(rvMIP)体外的抗HIV-1SF1作用效果和机制。方法:分别在HIV-1SF1接种前后将敏感的MT-4细胞系与rvMIP作用,检测MT-4细胞系病变情况和培养上清的P24抗原水平,用有限稀释PCR法测定前病毒DNA水平。结果:预先用rvMIP处理过的细胞,病毒感染后细胞病变程度很轻,培养上清的P24抗原和前病毒水平明显低于对照组,P24抗原抑制率可达90%;先感染病毒再用rvMIP处理组病毒P24抗原水平和细胞内前病毒DNA水平也显著降低,但降低程度不如先用rvMIP预处理组。结论:rvMIP能阻止病毒进入靶细胞,同时可能也通过某种机制抑制已感染细胞HIV病毒的复制。

人胚胎滋养细胞和胎盘间充质干细胞的分离与纯化

背景:胎盘的细胞成分较复杂,其中所包含的滋养细胞在母胎免疫耐受过程中起重要作用,胎盘间充质干细胞具有多向分化潜能以及抑制淋巴细胞增殖的特性,常规分离方法通常难以获得大量且纯度较高的上述两种细胞。目的:拟建立一次操作即可同时获得大量、较高纯度的滋养细胞和胎盘间充质干细胞的操作方案。方法:人胎盘组织洗净剪碎,采用胰蛋白酶和DNAseⅠ共同消化,分3个阶段,每个阶段在恒温37℃下180r/min消化2min。重悬消化产物,200目筛网过滤后采用Percoll密度梯度分离液分离,分别收集滋养细胞层和胎盘间充质干细胞层。滋养细胞层以差速贴壁法去除成纤维细胞,胎盘间充质干细胞直接接种于75cm2培养瓶中培养。观察胎盘组织消化情况,计数滋养细胞数量及其细胞角蛋白7的表达,观察胎盘间充质干细胞生长增殖、表型及成骨分化潜能。结果与结论:经胰蛋白酶和DNAseⅠ消化后,胎盘组织仅剩少许残渣。差速贴壁后,滋养细胞数达(5.48±1.98)×108个,细胞角蛋白7阳性率为(90±4.36)%。胎盘间充质干细胞接种19～21d达90%融合,细胞数为(1.96±0.24)×106个,强表达CD29,CD44和HLA-ABC,不表达CD34,CD45,CD14和HLA-DR,诱导后茜素红染色呈鲜艳橙红色,可向成骨细胞方向分化。提示采用胰蛋白酶和DNAseⅠ共同消化胎盘组织,并结合Percoll不连续密度梯度分离液分离细胞,可同时一次性获得大量的滋养细胞和较多的胎盘间充质干细胞,细胞纯度和活性均较好。

人胎盘间充质干细胞的超微结构及其吞噬功能

背景:胎盘间充质干细胞组织来源丰富,与骨髓间充质干细胞有着类似的形态、表面标记物、潜在分化能力,是人体理想的间充质干细胞来源之一。目前对胎盘间充质干细胞超微结构和吞噬功能的研究较少,对其在胎盘组织中的生理功能也鲜有探讨。目的:了解胎盘间充质干细胞的超微结构和吞噬功能。方法:分离培养5个正常娩出胎盘来源的胎盘间充质干细胞,经体外培养后在透射电子显微镜下观察细胞的超微结构;在培养上清中添加荧光微球,孵育3 h后用流式细胞仪检测细胞的吞噬能力。结果与结论:胎盘间充质干细胞在透射电镜下表现为细胞核比较大,核仁明显;核膜折叠、内陷显著,常染色质多,核浆比例正常。内质网系统发达,可见大量狭小或扩张的粗面内质网。胞浆内高尔基器、溶酶体常见;细胞表面微绒毛发达,偶可见细胞间连接。5个标本的胎盘间充质干细胞中均有部分细胞能吞噬荧光微球,最多有49.6%,最少有18.4%。上述胎盘间充质干细胞的超微结构特点提示细胞功能活跃,可合成和分泌大量蛋白质,并具有吞噬功能;而吞噬实验进一步验证胎盘间充质干细胞吞噬异物的能力,提示胎盘间充质干细胞在胎盘中可能起着维持微环境稳态、清除异物的功能。

人胎盘间充质干细胞雌、孕激素受体的表达

背景:有研究表明骨髓间充质干细胞受雌、孕激素的调控,并表达雌激素受体。胎盘局部组织雌、孕激素水平较高,可能对胎盘间充质干细胞的生理功能存在影响。目的:检测人胎盘间充质干细胞的雌、孕激素受体的表达情况。方法:体外分离和培养人胎盘间充质干细胞,用流式细胞仪检测表面标记物,并做成骨和成脂诱导分化;用反转录荧光定量PCR方法和免疫组织化学方法检测胎盘间充质干细胞的雌、孕激素受体的表达。结果与结论:人胎盘间充质干细胞阳性表达CD29、CD44、CD73、CD90、CD105和HLA-ABC,阴性表达CD34,CD45,CD14和HLA-DR,具有成骨和成脂诱导分化潜能;PCR结果显示雌激素受体β-mRNA扩增效率最低(△Ct:25.2±0.71);雌激素受体α-mRNA扩增效率比较低(△Ct:20.64±2.27);孕激素受体-mRNA扩增效率较好(△Ct:16.11±1.9)。免疫组化结果显示部分细胞孕激素受体抗体染色阳性,阳性率为(18.81±9.16)%;但雌激素受体抗体染色均为阴性。结果提示:人胎盘间充质干细胞部分表达孕激素受体,低水平表达雌激素受体α,基本不表达雌激素受体β。

子痫前期患者胎盘间充质干细胞抑制淋巴细胞增殖的研究

目的纯化和体外培养子痫前期患者的胎盘间充质干细胞(p MSCs),研究子痫前期患者p MSCs的免疫抑制能力。方法从子痫前期患者及正常妊娠者胎盘组织中纯化培养p MSCs,应用Transwell板将p MSCs与混合淋巴细胞共培养,检测淋巴细胞数,计算淋巴细胞增殖抑制率。在培养基中加入干扰素γ,分别从mRNA水平和蛋白质水平检测p MSCs的吲哚胺双加氧酶(indoleamine 2,3-dioxygenase,IDO)表达水平。结果来源于子痫前期患者的PMSCs和正常妊娠者的形态相同,表达CD44、CD29、CD73、CD90、CD105、HLA-I类分子,极少表达CD34、CD45、CD14及HLA-Ⅱ分子。能够在体外被诱导分化为成骨细胞及成脂细胞。细胞释放的可溶性分子具有抑制淋巴细胞增殖的作用;细胞表达低水平的IDO,但当受到IFN-γ刺激后,表达水平显著提高(P<0.05)。对照正常妊娠组和子痫前期组p MSCs对淋巴细胞增殖的抑制率和表达IDO水平,差异均不具有显著性(P>0.05)。结论 p MSCs所表达的IDO和释放的可溶性分子可能与PE的发生、发展无关;由于现有体外培养技术不能反映p MSCs在体内的状态,也可能导致原本存在的差异难以体现出来。

剖宫产手术不影响孕鼠体内骨髓间充质干细胞的归巢

背景:剖宫产术后远期并发症(前置胎盘、胎盘植入、瘢痕处妊娠、子宫破裂)危及孕产妇生命,剖宫产术切口瘢痕处的子宫内膜及平滑肌缺损、蜕膜形成不良可能是主要病因。间充质干细胞具有修复组织损伤的功能,归巢于损伤部位的细胞量有可能影响组织修复的效果。目的:在大鼠剖宫产手术模型中探讨间充质干细胞输入后在体内的分布、归巢情况。方法:体外分离雄性大鼠骨髓间充质干细胞并鉴定。取雌性Wistar大鼠随机分为2组:剖宫产手术组大鼠于受孕第21天进行剖宫产术,术后即时经尾静脉注射制备好的雄性大鼠间充质干细胞;对照组大鼠自然分娩后即注射等量雄性大鼠间充质干细胞。分别于注射后第7,28天处死大鼠,通过SRY-PCR技术检测其心、肺、肝、肾、以及子宫瘢痕组织中SRY基因含量,间接反映组织中雄性大鼠骨髓间充质干细胞的存留量及相对分布水平。结果与结论:剖宫产手术组细胞注射后第7天,SRY基因在肺组织中含量最高,其次是肝,在肾组织中也有一定量的分布,而在心脏和子宫瘢痕处的SRY基因含量较少;注射后第28天SRY基因在肺、肝和肾中的含量均有一定程度的下降(P<0.05),而在心脏和子宫瘢痕处,SRY基因的含量未见显著变化(P>0.05)。非手术对照组注射后第7,28天SRY基因的检测结果和剖宫产手术组基本一致,心脏和子宫组织的SRY基因含量均较低。结果提示:异体骨髓间充质干细胞进入大鼠体内主要分部于血流丰富的肺、肝、肾组织,并且随着时间干细胞量逐渐减少;心脏和子宫组织中的骨髓间充质干细胞数量较少,随时间变化不明显。剖宫产手术损伤并没有影响骨髓间充质干细胞在孕鼠体内的分布,也没有增加骨髓间充质干细胞在子宫手术瘢痕处的归巢和定植。

大肠杆菌表达的vMIP-Ⅱ包涵体的纯化与复性研究

目的纯化、复性大肠杆菌表达的vMIPⅡ包涵体蛋白。方法用8molL尿素缓冲液变性溶解vMIPⅡ包涵体,然后加入十二烷基磺酸钠(SDS)进一步促溶,利用金属亲和层析和分子筛层析纯化,再利用柱层析去除SDS,纯化后透析复性;通过荧光和单核淋巴细胞趋化抑制实验检测复性蛋白的结构和抑制单核淋巴细胞趋化的活性。结果重组vMIPⅡ纯化和复性后,仍具有完整的高级结构和抑制单核细胞趋化的活性。结论已获得了重组vMIPⅡ活性蛋白,为进一步研究应用奠定基础。

妊娠合并流行性出血热7例报道

目的:研究妊娠合并流行性出血热(EHF)的临床特点及对母婴预后影响,为临床诊治提供参考.方法:总结7例妊娠合并流行性出血热患者的临床资料,对其特征性临床表现、辅助检查及母儿预后情况进行分析.结果:(1)临床表现:6例(85.7%)患者有发热,5例(71.4%)有不同形式的出血.(2)辅助检查:7例患者均出现血小板减少、凝血功能障碍、APTT与TT延长、肝酶升高、低血钾及EHF-IgM抗体阳性.(3)预后情况:孕妇4例痊愈、2例遗留肾功异常、死亡1例.而胎儿-新生儿预后:2例新生儿健康,1例早产儿合并先心病、坏死性小肠炎,3例胚胎-胎儿死亡;1例胎心好孕22周患者失访.结论:妊娠合并EHF母儿病死率均高,主要临床表现为发热、出血,特征性表现为血小板减少、凝血功能障碍、肝酶升高及低血钾,确诊的依据为EHF-IgM阳性.

磁共振在诊断妊娠胎盘植入的临床意义

目的探讨磁共振在诊断妊娠胎盘植入的临床意义。方法妊娠胎盘植入患者57例,比较超声与磁共振(MR)表现,以及联合检查的情况。结果 MR对妊娠胎盘植入的诊断符合率为84.2%(48/57),超声对妊娠胎盘植入的诊断符合率为78.9%(45/57),两者比较差异无统计学意义(P>0.05)。MR联合超声检查的诊断符合率为98.2%(56/57),显著高于MR、超声二者单独检查的诊断符合率(P<0.05)。结论 MR对妊娠胎盘植入具有一定的临床诊断价值,但与超声联合检查能够进一步提高妊娠胎盘植入的检出率,有助于术前做出正确诊断,避免误诊和漏诊,为临床治疗提供可靠的参考依据。

孕妇HBV感染对胎儿生长发育的影响

目的研究孕妇HBV感染对胎儿生长发育的影响。方法分别选取我院HBsAg阳性(阳性组)与健康产妇(阴性组),对其胎儿出生时的体重、身长、FGR发生率以及胎盘的体积进行研究,采用t检验和x2检验统计分析各组之间的差异性,P<0.05差异具有统计学意义。结果 HBsAb阳性组新生儿的体重、身长、胎盘体积小于阴性组,FGR发生率明显高于阴性组,HBeAg阳性组胎盘体积小于阴性组,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论孕妇HBV感染会影响胎儿的生长发育,导致新生儿出生体重偏低,孕妇胎盘体积有所缩小,另外新生儿HBsAb可对胎盘进行保护。

vMIP-Ⅱ对SIV感染的食蟹猴TCRVβ基因表达的影响

目的检测感染SIV初期用病毒巨噬细胞炎症蛋白-Ⅱ(vMIP-Ⅱ)治疗的食蟹猴外周血T细胞TCRVβ优势表达,分析特异性Vβ亚家族表达水平的变化及T细胞克隆性质的改变。方法11只食蟹猴感染前后外周血PBMC样本共22例通过半定量RT-PCR技术分析其中14个TCRVβ亚家族T细胞的表达情况,运用基因扫描技术分析用药组与感染组差异表达的T细胞TCRVβ7亚家族基因中CDR3的长度了解其克隆性。结果与感染前正常食蟹猴外周血T细胞的14个TCRVβ亚家族中表达(除去表达量极低的10个亚家族)相比较,感染后SIV组中部分样品Vβ7、8、14、16的表达量与感染前比较有上升趋势;vMIP-Ⅱ组中TCRVβ亚家族的表达量上升更加明显。基因扫描结果显示感染前、后标本中Vβ7亚家族的表达由多克隆向寡克隆变化的趋势。结论体内实验研究表明,SIV感染初期的食蟹猴体内部分TCRVβ亚家族有特异性的增生,且克隆性发生改变。vMIP-Ⅱ对此种Vβ亚家族的表达的增生有促进的作用,推测其促使特异性应答的免疫细胞的增生。

血气分析对羊水Ⅲ度粪染新生儿胎粪吸入综合征的预测价值

目的:探讨脐动脉和桡动脉血气分析对羊水Ⅲ度粪染新生儿胎粪吸入综合征(MAS)的预测价值。方法:选择2010年7月至2012年7月无合并症的足月羊水Ⅲ度粪染新生儿100例作为粪染组。随机选择同期分娩的230例足月妊娠无合并症羊水清的新生儿作为对照组。结果:①粪染组脐动脉血pH 7.21±0.11、HCO322.56±3.47 mEq/L都明显低于对照组7.26±0.07、23.83±2.19 mEq/L,差异有统计学意义(P<0.01)。粪染组脐动脉血PaCO255.74±9.96 mmHg、BE-5.44±4.62 mmol/L均明显高于对照组52.94±8.01 mmHg和-3.18±2.51 mmol/L,差异有统计学意义(P<0.01)。②桡动脉血pH<7.30新生儿MAS发生率为73.08%,与桡动脉血pH≥7.30新生儿MAS发生率22.97%比较,差异有统计学意义(P<0.01)。以桡动脉血pH<7.30为异常指标预测MAS发生的阳性预测值为73.08%,敏感性52.77%,特异性89.06%。③粪染组新生儿缺氧缺血性脑病(HIE)6例,均显示脐动脉血pH<7.10且桡动脉血pH<7.30。结论:桡动脉血pH<7.30对预测MAS发生有一定的价值。羊水Ⅲ度粪染胎儿缺氧发生几率明显增高。脐动脉血气pH<7.10且桡动脉血pH<7.30的新生儿发生HIE几率明显升高。

脐带血联合动脉血pH值对新生儿缺血缺氧性脑病的预测价值

目的探讨脐带血联合动脉血pH值对新生儿缺血缺氧性脑病(HIE)的预测价值。方法选取2009年4月至2011年1月在深圳市人民医院分娩的无严重畸形的7 456例活产婴儿作为研究对象,对其脐动脉血pH值与新生儿缺血缺氧性脑病的相关性进行分析,并随机选择481例新生儿于出生后1 h行桡动脉血气分析。结果 7 456例脐动脉血pH为7.10～7.42。以脐带血pH<7.10为指标预测新生儿HIE的阳性预测值为35.57%,敏感性42.06%。脐带血联合出生后1 h动脉血pH值预测HIE的敏感性为60.00%,阳性预测值71.79%。联合检测与单项检测临床符合率比较,差异有统计学意义(P<0.01)。结论脐带血pH<7.10且出生1 h动脉血pH<7.3对新生儿缺血缺氧性脑病有预测意义。脐动脉血pH<7.10的新生儿应常规于出生后复查桡动脉血pH值。

复杂型可变减速脐动脉血气分析的临床意义

目的:探讨胎心电子监护复杂型可变减速脐动脉血气分析的临床意义。方法:对2007年10月至2011年2月在我院分娩并行产时胎心电子监护可变减速的270例患者进行回顾性分析。其中单纯型可变减速123例(单纯型组),复杂型可变减速147例(复杂型组),以正常胎心电子监护病例176例作为对照组。比较分析各组间脐动脉血气分析结果和分娩结局。结果:复杂型组脐动脉血pH值(7.21±0.07)与单纯型组(7.25±0.09)和对照组(7.26±0.06)比较,差异有统计学意义(P<0.05),单纯型组和对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。复杂型组碱剩余水平(4.68±2.85mmol/L)与单纯型组(3.62±2.78mmol/L)和对照组(3.30±2.76mmol/L)比较,差异有统计学意义(P<0.05),单纯型组和对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。复杂型组新生儿窒息(11例)发生例数与单纯型组(1例)及对照组(1例)比较,差异有统计学意义(P<0.05)。复杂型组脐动脉血pH<7.0和碱剩余<-12mmol/L的发生率较单纯型组和对照组高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:复杂型可变减速与脐动脉血pH值和碱剩余水平密切相关,提示胎儿可能存在酸中毒,新生儿发生不良结局可能性大。

541例妇女人乳头状瘤病毒多重感染检测结果分析

目的:了解广州市妇女生殖道人乳头状瘤病毒多重感染状况和基因亚型分布。方法:采用核酸分子快速导流杂交基因芯片分型技术(HybriMax)对广州地区6936例女性进行人乳头状瘤病毒多重感染检测,并对HPVDNA亚型、多重感染率和年龄分布进行分析。结果:6936例女性共检出HPV多重感染患者541例,多重阳性率为7.80%。高危混合型、高低危混合型和低危混合型分别是55.45%、41.59%、2.96%。多重阳性感染者中,双重感染最多,为399例,占73.75%。21个亚型中共有20个亚型被检出。在各年龄组中,≤20岁女性多重阳性感染率最高,为22.73%,各年龄组HPV感染差异有统计学意义(χ2=65.136,P=0.000<0.05)。结论:广州地区女性HPV的多重感染率较低,但以高危混合型为主;用HybriMax法对HPVDNA进行多重感染的检测和分型,对宫颈病变的防治具有重要意义。

RNAm6A去甲基化酶FTO在体外培养肝细胞中的脂肪代谢作用研究

目的研究脂肪与肥胖相关基因(FTO)编码的RNAm6A去甲基化酶在肝细胞中的代谢作用及FTO如何调节肝细胞代谢。方法构建FTO过表达载体FTO-OE及干扰载体FTO-sh,研究CCK-8分析甲基激活剂三甲基甘氨酸(TMG)与抑制剂环亮氨酸(cycloleucine)分别对肝细胞的增殖效果;试剂盒分析甘油产生水平;qPCR实验分析TMG与cycloleucine对肝细胞脂肪代谢相关基因表达水平(脂肪分解相关基因ATGL、成脂分化基因c/EBPβ、脂肪酸从头合成相关基因FAS);甲基化检测试剂盒分析细胞总RNA甲基化水平。结果FTO过表达显著促进脂肪细胞增殖(P<0.05)、促进其甘油水平提高(P<0.05)、引起代谢基因ATGL水平降低(P<0.05)、c/EBPβ与FAS水平升高(P<0.05)、降低RNAm6A甲基化水平(P<0.05)。结论FTO具有调控肝细胞脂肪代谢,其通过m6A调控肝细胞脂肪代谢。

脂肪与肥胖相关基因FTO对肝细胞增殖效果研究

目的:研究脂肪与肥胖相关基因(FTO)对肝细胞的增殖效果。方法:构建FTO慢病毒过表达载体FTO-OE、慢病毒干扰载体FTO-sh,转染到肝细胞,western blot与qPCR分别分析其表达效果;CCK-8检测其对肝细胞抑制率;分析FTO对甘油及甘油三酯代谢的调控;qPCR检测肝细胞脂肪代谢相关基因的表达,脂肪分解相关基因(ATGL)、成脂分化基因(c/EBPβ)、脂肪酸从头合成相关基因(FAS)。结果:CCK-8结果显示,FTO-OE促进肝细胞增殖活性,FTO-sh抑制肝细胞增殖活性(P<0.05)。western blot与qPCR结果显示,FTO-OE能有效促进其表达,FTO-sh能有效沉默其表达,证实载体构建的有效性(P<0.05)。FTO-OE有效提高甘油及甘油三酯水平,FTO-sh降低甘油及甘油三酯水平(P<0.05)。qPCR结果显示,FTO-OE降低ATGL的表达、提高c/EBPβ与FAS的表达水平(P<0.05);FTO-sh提高ATGL的表达、降低c/EBPβ与FAS的表达水平(P<0.05)。结论:FTO具有促进肝细胞增殖的效果。

妊娠合并恶性肿瘤误诊漏诊原因分析

目的探讨妊娠合并恶性肿瘤的常见误诊漏诊原因。方法对2008年1月至2010年12月在深圳市人民医院产科分娩的6例妊娠合并恶性肿瘤患者的病例资料进行回顾性分析。结果总分娩人数15 216例,妊娠合并恶性肿瘤6例,发病率0.04%,其中肺癌2例,鼻咽癌1例,乳腺癌1例,宫颈癌1例,1例转移性肝癌原发部位不详,6例确诊时均为中晚期病变,其中5例曾有漏诊和误诊情况,漏诊误诊率83.33%。结论妊娠合并恶性肿瘤漏诊误诊率高,应高度重视早期异常情况,提高妊娠合并恶性肿瘤的早期诊断率,改善产妇预后。

妊娠合并恶性肿瘤6例临床分析

目的探讨妊娠合并恶性肿瘤的发病特点及常见误诊漏诊原因。方法回顾性分析2008年1月1日至2010年12月31日在我院产科分娩的6例妊娠合并恶性肿瘤的病例资料。结果3年问我院产科总分娩人数15216人，妊娠合并恶性肿瘤6例，发病率0．04％．其中肺癌2例，鼻咽癌1例，乳腺癌1例，宫颈癌1例，1例转移性肝癌原发部位不详。诊断为恶性肿瘤时的孕周31-40^＋6周。6例均于诊断为恶性肿瘤后1周内行剖宫产术终止妊娠。新生儿Apgar评分，1分钟评分：8分1例，9分1例，10分4例，5分钟评分均为10分。随访至今均无异常。产妇产后3个月内死亡3例，产后9个月死亡1例。2例仍在后续治疗，目前病情稳定。6例诊断时均为中晚期病变，其中5例有诊断贻误情况。结论妊娠合并恶性肿瘤漏诊误诊率高，应高度重视早期异常情况，提高妊娠合并恶性肿瘤的早期诊断率，改善产妇预后。

广州4194份脐带血HLA-A、B、DRB1等位基因型和单倍型频率研究

目的对广州脐血库10年来保存的脐血人类白细胞抗原（human leukocyte antigen，HLA）等位基因及单倍型分布特征进行分析。方法采用单克隆板，序列特异引物聚合酶链反应，PCR序列特异性寡核苷酸探针和DNA测序分型方法对广州脐血库内4194份脐带血进行mA-A、B、DRB1等位基因分型。用Arlequin软件计算HLA基因频率和单倍型频率。结果在广州脐血库中，mA．A、B、DRB1等位基因型分别有18，43，13种。累积频率〉50％的显著高频率等位基因是：A＊11，A＊02，A＊24，A＊33，B＊40，B＊15，B＊46，B＊13，DRB1＊12，DRB1＊15，DRB1＊09，DRBl＊04；最常见的单倍型为：A2-B46、B6-DR9、A11-DR12、A2-B6-D1L9。结论广州脐血库脐血捐献者mA．A、B、DRBl等位基因型及单倍型分布具有典型南方人群的特点，此资料有助于为临床移植寻找合适匹配的供受对。