新型抗感染生物活性物质——昆虫抗菌肽的研究进展

概述了昆虫抗菌肽的种类、生物活性、作用机理及应用前景.

一株高水平表达重组蛋白昆虫细胞系的建立

报道了一株来自粉纹夜蛾Trichoplusiani脂肪体的传代细胞系 ,在辅以 5%胎牛血清的商品无血清培养基Excell 4 0 0中 ,细胞群体倍增时间为 2 2 9h ,最高密度可达 2 2× 10 6 mL ,该细胞对苜蓿丫纹夜蛾多粒包埋型多角体病毒 (AcMNPV)极为敏感 ,增殖AcMNPV多角体平均每个细胞达86个 ,表达由AcMNPV构建的重组蛋白的水平较高 ,β 半乳糖苷酶的表达水平为 ( 2 2 5 5± 13 4 )IU mL ;碱性磷酸酶的表达水平为 ( 4 7± 0 61)IU mL ,是一株高水平表达重组蛋白的传代细胞系 ,命名为HNU Tn FB1。

几种离体动物细胞抗菌肽的诱导及抗菌活性的初步研究

分别选取几种离体培养的昆虫细胞、哺乳动物细胞和肿瘤细胞,用热灭活的大肠杆菌DH 5a诱导细胞产生抗菌肽,诱导的上清液经三氯乙酸沉淀提取诱导蛋白,采取抑菌圈法测定其抗菌活性.对从不同种细胞中诱导产生的抗菌肽的抗菌活性进行比较,发现5B 1、SF-9、V ero、293、PK-15和IBRS-2细胞均能产生抗菌活性物质,其中V ero细胞产生的抗菌肽活性最强.经T ric ine-SDS-PAGE、银染后发现,各种细胞产生的抗菌肽分子量为7 000左右.

病毒杀虫剂的发展

昆虫病毒对宿主昆虫有较高的致病性，对天敌安全，不污染环境，尤其是它能在害虫种群中形成流行病而长期控制虫口以及不产生抗药性等明显优于其它杀虫剂的特点，决定了它具有强大的生命力。然而病毒杀虫剂的应用有三个问题尚待解决，其一是杀虫范围太窄；其二是生产困难；...

粉纹夜蛾离体细胞抗菌肽的诱导和抗菌活性测定

以每细胞1 000 个灭活的大肠杆菌诱导粉纹夜蛾传代细胞,诱导细胞的上清液经三氯醋酸沉淀提取诱导蛋白,抗菌活性用液体培养抑制测定法进行检测.试验证明:细胞诱导后第8 h开始产生抗菌物质,第12 h 达最高峰;提取的抗菌物质经100℃处理4 h,仍然保持抗菌活性.

菜青虫(Pieris rapae)感染苏云金杆菌晶体毒素后中肠上皮细胞的免疫酶标电镜观察

用双相法提纯青虫菌(Bacillus thuringiensis var.galleriae)的晶体,碱解后免疫家兔获晶体蛋白抗体,然后用纯化的晶体感染莱青虫,半小时至1小时取中肠上皮细胞作酶标电镜观察,结果表明仅在细胞膜上看到抗原的存在。

苏云金芽孢杆菌晶体毒素感染敏感昆虫离体与活体细胞的病理学比较研究

用苏云金芽孢杆菌蜡螟变种81—6菌株的晶体毒素感染菜青虫幼虫和家蚕离体细胞 感染早期两类细胞的线粒体都发生内脊膨大鼓起,随后细胞质内出现较大的空泡,感染后期线粒体膜和细胞质膜都发生溶解和破裂,细胞解体死亡。研究结果表明:离体细胞和活体细胞在感染苏云金芽孢杆菌晶体毒素后,细胞的病变过程相同。

三种苏云金芽孢杆菌晶体蛋白火箭免疫电泳的研究

本文以火箭免疫电泳技术检测HD—1、81—6、187三种苏云金芽孢杆菌的晶体蛋白,结果表明:这种方法可以快速、特异性地检测晶体蛋白的含量。在抗血清浓度为3％的凝胶上抗原抗体所形成的免疫沉淀线峰高与晶体蛋白的浓度呈明显的线性关系。本文还就火箭免疫电泳沉淀线峰高与一些条件的关系进行了讨论。

酶联免疫吸附测定法检测青虫菌工业产品中晶体蛋白的含量

苏云金杆菌(Bacillus thuringiensis)的研究和应用在国内有很大进展。用于生物防治的青虫菌(B.t.subsp.galleriae)已进入工业化生产,其产品中伴孢晶体蛋白含量的检测方法在探索中。酶联免疫吸附测定法(ELISA),作为一项新兴的免疫化学技术,具有灵敏、精确、迅速的特点,已被用于苏云金杆菌晶体蛋的测定。

低等白蚁肠道共生微生物的多样性及其功能

低等白蚁肠道里存在着复杂的微生物区系,包括真核微生物鞭毛虫和原核生物,细菌及古细菌。低等白蚁的后肠以特别膨大的囊形胃及其氢氧浓度的明显梯度分布和丰富的微生物区系为特征,是白蚁进行木质纤维素消化的主要器官。后肠内的鞭毛虫能将纤维素水解并发酵为乙酸,二氧化碳和氢,为白蚁提供营养和能源。系统发育研究表明,低等白蚁肠道共生细菌的主要类群为白蚁菌群1、螺旋体、拟杆菌,低G+C mol%含量的革兰氏阳性菌和紫细菌等。而古细菌主要为甲烷短杆菌属的产甲烷菌。共生原核生物与二氧化碳的还原和氮的循环等代谢有关。但肠道共生微生物的具体功能和作用机制还有待进一步的揭示。

昆虫细胞程序性死亡的研究进展

在昆虫发育和抵抗病原微生物的入侵过程中,细胞凋亡与自噬性死亡现象十分常见。昆虫细胞凋亡的研究已经取得了许多的成果,但是有关细胞自噬程序性死亡的研究还正在深入。昆虫细胞凋亡的信号通路至少有3条:一条类似于线虫细胞的凋亡信号通路,另一条类似于哺乳动物细胞的凋亡信号通路,还有一条不依赖于胱天蛋白酶的凋亡信号通路。在昆虫的多种组织细胞中,细胞凋亡与自噬程序性死亡在信号通路上存在互串(crosstalking),可以相互促进、抑制或替代。了解昆虫细胞程序性死亡对防治害虫具有一定的意义。

荧光增白剂对苏云金芽孢杆菌毒力的增效作用及其紫外防护功效

测试了 3种荧光增白剂 Tinopal LPW,VBL和 JD- 3对苏云金杆菌杀虫剂杀棉铃虫初孵幼虫毒力的影响 ,并检测了荧光增白剂 VBL作为佐剂在 Bt受紫外线照射时的光保护功效。结果表明 ,这 3种二苯乙烯类荧光增白剂以 1 0 g/kg与 Bt复配后的 LC50 值与不加荧光增白剂的Bt的 L C50 值相比 ,其增效比值分别为 :1 .2 3、1 .49和 2 .0 0。说明这 3种荧光增白剂对 Bt杀棉铃虫的活性有不同程度的增效作用。而且复混剂 (1 0 g/kg荧光增白剂 VBL+ Bt)在紫外线处理8h后 ,其杀虫活性仍保持 70 %以上 ,说明了荧光增白剂 VBL是 Bt一种好的光保护剂 。

美洲黑杨(中嘉8号)离体叶片再生研究

用中嘉8号杨[Populus deltoids(I-63×I-69)]试管苗叶片作外植体,在添加不同生长素和细胞分裂素浓度配比的1/2(N)MS培养基上,筛选出叶片直接分化不定芽的最适培养基1/2(N)MS+0.2 mg/L BA+0.02 mg/LNAA+25 g/L蔗糖+7 g/L琼脂,不定芽分化率为85%。同时发现,一定浓度的KT对生根具有促进作用,最适生根培养基为MS+0.08 mg/L KT+0.02 mg/L NAA+25 g/L蔗糖+8 g/L琼脂,生根率为82.2%。

光增白剂对甜菜夜蛾围食膜结构的作用与影响

应用环境扫描电镜和生化技术研究了甜菜夜蛾Spodopteraexigua正常围食膜和光增白剂M2R处理围食膜的形态、结构和组成。结果表明 :正常的围食膜表面光滑致密、无孔洞和缝隙 ;光增白剂处理的围食膜产生了孔缝。正常围食膜所含蛋白质的种类很多 ,经SDS PAGE测定至少有 17条多肽 ,分子量多在 97 4kD以下 ,围食膜蛋白质的含量约为 4 1 98% ,糖的含量约为 2 0 5 %。光增白剂可以解离大部分围食膜蛋白 ,液滴法喂食幼虫蓝色葡聚糖 2 0 0 0进一步证实了光增白剂能破坏围食膜的完整性。

杆状病毒诱导昆虫细胞凋亡的初步研究

Microscopic examination of Spodoptera litura(SL-1)cell infected with AcMNPV or SfaMNPV revealed progressive cell blebbing starting at 8h～12h postinfection and culminating in total cell destruction at 24h postinfection.The fragmentation of the infected cell nuclei was observed by stained with the specific fluorescent dye DAPI.Agarose gel electrophoresis analysis of the DNA extracted from infected cells show typical DNA ladder. All these supported that both viruses infected SL-1 cells undergo apoptosis.Through lipofectin transinfection,we observed that only the DNA of AcMNPV or SfaMNPV can also induce apopotosis of SL-1 cell.Virus titer analysis revealed that neither viruses can duplicate in SL-1 cells.

线粒体在细胞凋亡中的变化与作用

在各种凋亡信号的诱导下,线粒体会发生显著的结构与功能性的变化,包括各种促凋亡蛋白(如细胞色素c,凋亡诱导因子等)的释放,线粒体膜电位的丢失,电子传递链的变化,以及细胞内氧化还原状态的变化;核转录因子以线粒体为中介也参与了细胞凋亡的调控。线粒体在哺乳动物细胞凋亡中具有核心地位和作用,昆虫细胞凋亡的研究表明,线粒体与昆虫细胞凋亡也有密切的关系。线粒体在细胞凋亡中的作用可能具有普遍意义。

蛋白质芯片技术

以前对蛋白质的研究集中在一次研究一种蛋白质 ,通常费时费力 ;而蛋白质芯片技术是研究蛋白质组的新技术 ,是高通量、微型化和自动化的蛋白质分析技术。它可以用来研究蛋白质的亚细胞定位和蛋白质与蛋白质之间的相互作用 ,以及对蛋白质的功能进行生物化学分析 ,将对蛋白质组研究及医学生物学的发展有很大的推动作用。较系统地介绍了蛋白质芯片的概念、制作及检测方法 ;同时也讨论了蛋白质芯片的两种功能形式、存在问题和应用前景。

昆虫差异蛋白质组:进展和展望

黑腹果蝇Drosophilamelanogaster、家蚕Bombyxmori、意大利蜜蜂Apismellifera和冈比亚按蚊Anophelesgambiae等昆虫的基因组测序已经基本完成,蛋白质组学技术将是阐明这些基因组功能的重要工具。本文综述了应用差异蛋白质组学技术在昆虫诱导性免疫、抗性机制和分子病理研究方面取得的一些成果:(1)细菌、真菌、脂多糖或机械损伤诱导的昆虫血淋巴或血细胞来源细胞系的蛋白质表达的改变;(2)Bt抗性昆虫中肠刷状缘膜和抗锥虫采采蝇Glossinamorsitans唾液腺多种蛋白质表达的改变;(3)化学农药处理和姬蜂Chelonusinanitus携带的多分DNA病毒引起的昆虫蛋白质组的变化。最后讨论了昆虫差异蛋白质组学研究的瓶颈与对策。

昆虫中肠Bt杀虫晶体蛋白毒素受体氨肽酶N的研究进展

鳞翅目昆虫中肠上皮细胞刷状缘膜 (BBM)上的Bt杀虫晶体蛋白毒素受体氨肽酶N(APN)的结构和位点密度的改变是昆虫对Bt毒素的主要抗性机制之一 ,该文简要综述了APN受体的研究进展。每种昆虫中肠上皮细胞中有数种APNs,彼此间同源性较高 ,其中部分APNs为Cry1A家族毒素的功能性受体。不同种类昆虫的APNs受体 ,甚至同一种昆虫的不同类型APNs,其所结合的毒素种类可能不同。APNs决定该昆虫对Cry1A类毒素的敏感程度差异。有些抗性昆虫的APNs基因编码区发生了多个点突变。

测定昆虫细胞存活或死亡的MTT方法的改进

MTT方法具有灵敏、简便、稳定可靠、不需同位素等特点。为了摸索测定昆虫细胞存活（或死亡）的MTT方法的各种最适条件，本文以中国棉铃虫细胞系为对象，确定了一些基本参数、并比较了三种MTT测定方法。结果表明：改进的方法所选用的溶剂——pH为4.5的3％SDS异丙醇效果最好，溶解甲所需时间短、OD值高。测定昆虫细胞范围为每孔500～60000细胞，测试波长为560nm，参考波长为690nm.