碱性成纤维细胞生长因子-壳聚糖载体诱导成年大鼠骨髓间充质干细胞向神经细胞的转化

目的探索碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)-壳聚糖载体对成年大鼠骨髓间充质干细胞(rMSCs)向神经细胞转化的诱导作用。方法采用免疫组织化学进行定性观察,并定量计数rMSCs诱导转化为神经干细胞、神经元和星形胶质细胞等神经细胞,噻唑蓝(MTT)比色法定量检测诱导后细胞的活性。结果 rMSCs经bFGF-壳聚糖载体诱导后,表达神经干细胞标记物nestin、神经元标记物β-tubulinⅢ和星形胶质细胞标记物胶质纤维酸性蛋白(GFAP),nestin在bFGF-壳聚糖组中高表达,9 d时达到最大值49.40%。结论 bFGF-壳聚糖载体可以诱导成年rMSCs高比例地分化为神经干细胞。

胆囊癌组织中p57^(KIP2)、cyclin D1和cyclin E的表达及临床意义

背景与目的:原发性胆囊癌(primary carcinoma of the gallbladder,PCG)是死亡率极高的恶性肿瘤,其恶变的机制目前尚未明确。前期研究发现,p57^(KIP2)在人类多种恶性肿瘤中异常表达。本研究拟进一步探讨p57^(KIP2)在PCG组织中的表达及临床意义。方法:运用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR)、免疫组织化学EliVision法分别检测60例PCG、20例胆囊腺瘤(adenoma of the gallbladder,AG)和20例慢性胆囊炎(chronic cholecystitis,CC)组织中p57^(KIP2)、cyclin D1、cyclin E mRNA表达及蛋白水平。结果:p57^(KIP2) mRNA及蛋白在PCG、AG和CC中的表达逐渐升高,两两比较差异有统计学意义(P<0.05)。Cyclin D1、cyclin E mRNA及蛋白在PCG、AG和CC中的表达逐渐降低,PCG与AG比较、PCG与CC比较,差异有统计学意义(P<0.05)。在PCG组织中,p57^(KIP2)蛋白的表达与临床分期、组织学分级及淋巴结转移有关(P<0.05)。Cyclin D1蛋白的表达与临床分期有关(P<0.05)。p57^(KIP2)与cyclin D1的表达呈负相关(P<0.05),p57^(KIP2)与cyclin E的表达呈负相关(P<0.05),cyclin D1与cyclin E的表达呈正相关(P<0.05)。结论:p57^(KIP2)表达的降低与cyclin D1、cyclin E表达的增加可能是PCG的发生机制之一;检测p57^(KIP2)、cyclin D1及cyclin E对PCG的预后判断有重要意义。

p57^(KIP2)、cyclin D1、cyclin E在男性乳腺癌组织中的表达及其临床意义

目的:探讨p57^(KIP2)、cyclin D1、cyclin E在男性乳腺癌(male breast cancer,MBC)组织中的表达及其临床意义。方法:收集2000年1月至2016年12月60例温州医科大学附属第一医院MBC患者的组织标本,分为乳腺浸润性导管癌组(infiltrating ductal carcinoma,IDC)40例、乳腺导管原位癌组(ductal carcinoma in situ,DCIS)20例,选取20例男性乳腺发育症(gynecomastia,GYM)作为对照组。应用RT-PCR、免疫组织化学法分别检测IDC、DCIS、GYM组织中的p57^(KIP2)、cyclin D1、cyclin E m RNA及蛋白的表达情况。结果:IDC的p57^(KIP2)mRNA表达水平为0.18±0.07,低于DCIS的0.42±0.05、GYM的0.75±0.04;IDC的p57^(KIP2)蛋白阳性率为25%(10/40),低于DCIS的60%(12/20)、GYM的90%(18/20);p57^(KIP2)mRNA及蛋白表达三组间两两比较,差异均具有统计学意义(P<0.05)。IDC的cyclin D1、cyclin E mRNA表达水平分别为0.92±0.12、0.96±0.08,高于DCIS的0.72±0.06、0.64±0.01及GYM的0.38±0.03、0.21±0.02;IDC的cyclin D1、cyclin E蛋白阳性率分别为90%(36/40)、88%(35/40),高于DCIS的80%(16/20)、85%(17/20)及GYM的25%(5/20)、20%(4/20),差异均具有统计学意义(P<0.05)。在IDC组织中p57^(KIP2)、cyclin D1、cyclin E表达均与临床分期、组织学分级相关(P<0.05),p57^(KIP2)蛋白的表达与淋巴结转移相关(P<0.05);p57^(KIP2)与cyclin D1、p57^(KIP2)与cyclin E呈负相关(P<0.05),cyclin D1与cyclin E呈正相关(P<0.05)。结论:p57^(KIP2)、cyclin D1、cyclin E可能参与了MBC的发生发展过程,联合检测p57^(KIP2)、cyclin D1、cyclin E可为进一步发现MBC的发病机制及治疗提供重要参考。

小鼠胚胎大脑皮质活化和静息神经干细胞的初步分离与鉴定

目的:从小鼠胚胎大脑皮质中分离并鉴定静息和活化的神经干细胞。方法:通过流式细胞术,从胚胎14.5 d的小鼠大脑皮质中分选出大小不同的细胞团;利用免疫荧光技术检测神经干细胞标志物Pax6以及增殖标志物Ki67的表达变化;借助RT-qPCR分析两组细胞中干细胞标志基因Pax6、Oct4、Sox2和Nanog的表达情况;采用流式细胞术及RT-qPCR分析两组细胞所处的周期;体外培养对大、小细胞组进行增殖能力检测。结果:免疫荧光结果表明,分离出的两类细胞均表达Pax6,且大细胞组Ki67为阳性,小细胞组为阴性。细胞周期分析显示,小细胞组G0/G1期比例高于大细胞组,而G2/M期为0,且cyclin A和cyclin B的表达显著低于大细胞组(P<0.05)。体外培养显示,相对于大细胞,小细胞形成的微球数量少,速度慢;大、小细胞形成的微球消化后,Pax6和Ki67染色均阳性,且阳性率无显著差异(P>0.05)。结论:大、小细胞团分别为活化和静息的神经干细胞。活化的干细胞具有较强的增殖能力,而静息干细胞自我复制与增殖能力较差。在体外培养条件下,静息的神经干细胞可以被转激活。

自闭症相关Foxp1突变体Y435X的功能研究

目的:对小鼠Foxp1 Y435X突变体(蛋白序列比对小鼠Y435X等同于人类Y439X)的表达和功能进行研究,探究Y435X突变体与自闭症谱系障碍发病机制之间的联系。方法:通过Western blot分析小鼠神经母细胞瘤N2a细胞中Y435X突变体的蛋白表达水平;利用免疫荧光检测N2a细胞及原代小鼠大脑皮质神经元中Y435X突变体的亚细胞定位;采用小鼠子宫内胚胎基因转染技术,分析Y435X突变体对大脑皮质神经元迁移、最终定位及顶树突发育的影响。结果:Western blot结果显示,Y435X突变体在N2a细胞中产生大约56 kD的截短蛋白,与野生型Foxp1相比,表达量明显增加;免疫荧光结果说明,Y435X突变体在胞质中形成聚集体,并导致核膜皱缩;Y435X突变体改变了小鼠出生后大脑皮质神经元的正常定位及顶树突的生长方向。结论:Foxp1 Y435X突变体在皮质神经元中产生聚集体,并干扰出生后皮质神经元的正常定位及顶树突的生长。

Otx1诱导外向钾电流并抑制小鼠神经母细胞瘤细胞增殖

目的:探讨Otx1(orthodenticle homeobox 1)蛋白在调节电压门控性钾通道中的作用,并分析其对体外培养的小鼠神经细胞增殖的影响。方法:小鼠神经母细胞瘤N2a细胞中分别转染对照和过表达Otx1的质粒DNA,应用全细胞膜片钳记录N2a细胞中K^(+)依赖的外向电流;通过电生理技术,分析Otx1对K^(+)电流激活、失活和失活后恢复时间等参数的影响;通过细胞转染Otx1突变体,研究其对细胞增殖的影响。结果:过表达Otx1可增强电压依赖性外向K^(+)电流,降低半失活电位,并延迟外向电流失活后恢复;星形胶质细胞瘤相关的Otx1突变体K321T和Y320C所诱导的K^(+)电流幅度较低,与野生型Otx1相比,转染K321T或Y320C突变体的细胞增殖率升高;在N2a细胞表达Kv4.2α也导致外向K^(+)电流增强,并抑制N2a细胞的增殖。结论:Otx1可在体外培养的小鼠神经细胞中诱导电压依赖性K^(+)电流,而K^(+)电流可能参与细胞的增殖过程。

p85a基因对小鼠大脑皮层投射神经元迁移的影响

Pi3k/Akt信号通路是近年来发现的参与细胞增殖、调控的重要通路,Pi3k激活可介导多种细胞功能,Pi3k由p85a和p110构成。该研究通过干扰p85a基因的表达,探讨其在小鼠大脑皮层投射神经元迁移中的作用。首先,构建p85a基因的对照质粒(scramble)、siRNA质粒(sip85a-1、sip85a-2)和过表达质粒(OEp85a);接着转染N2a细胞,48 h后,用定量PCR方法检测p85a基因mRNA的表达情况。随后,将sip85a-1、sip85a-2、OEp85a质粒分别转入小鼠大脑,4 d后,借助免疫荧光方法检测皮层神经元的迁移情况。定量PCR结果显示:与对照相比,转染sip85a-1、sip85a-2均能显著降低N2a细胞中p85a基因的mRNA表达,抑制效率约为40%(P<0.05);而转染OEp85a质粒后,能显著增加p85a基因mRNA的表达,约为对照组的12倍(P<0.01)。胚胎电转结果中,各区EGFP阳性神经元数目定量分析显示,sip85a-1、sip85a-2、OEp85a质粒均能显著抑制神经元的迁移(P<0.05)。大脑发育阶段中,p85a基因在适当范围内,对平衡神经元迁移过程中起着重要作用。

整体护理在小儿手术室护理中的应用及对生活质量的影响分析

观察并分析整体护理在小儿手术室护理中的应用及对生活质量的影响。方法:选取2018年6月至2020年7月间收治的80例手术患儿进行研究,将其采用掷骰子的方式分成对比组(n=40)与干预组(n=40),对比组采用常规手术室护理,干预组采用整体护理,统计两组手术患儿护理前、后的焦虑程度,再记录两组手术患儿在术后的疼痛程度与不良情况发生率。结果:干预组手术患儿护理后的焦虑评分与疼痛评分均显著低于对比组,且干预组手术患儿的不良情况发生率更少于对比组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:在小儿手术室护理中应用整体护理,可有效改善患儿的负性情绪,并降低术后疼痛与不良情况,进而提高患儿的生活质量。