白术治疗溃疡性结肠炎作用机制的网络药理学分析及实验验证研究

目的基于网络药理学探究并预测白术治疗溃疡性结肠炎(UC)的作用靶点及分子机制,并加以动物实验验证。方法从TCMSP数据库、TCM-ID数据库以及结合相关参考文献筛选出白术的活性成分,在Swiss数据库获得对应靶点,从GeneCards数据库中获取UC疾病的相关靶点,分别构建“药物-成分-靶点-疾病”网络图“、通路-活性成分-靶点”网络图以及绘制PPI核心靶点网络图,并进行GO功能富集分析和KEGG通路注释分析,然后进行活性成分与核心靶点的分子对接。以葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导小鼠UC模型,通过采用苏木精-伊红染色法(Hematoxylin-Eosin staining)、AB-PAS染色法及免疫组织化学法分别检测小鼠结肠组织中病理形态学变化、杯状细胞数目以及炎症因子的表达情况,进行网络药理学预测结果的实验验证。结果筛选出白术内酯I、II、III等30个活性成分,获取其活性成分对应靶点591个,其中关键靶点有IL-1β、TNF-α等,分子对接结果显示IL-1β、TNF-α与核心成分具有良好的结合能力。动物实验结果显示,白术醇提物组可明显增加UC小鼠的结肠长度、降低DAI评分,还可改善UC小鼠结肠组织病变情况,增加杯状细胞的个数,抑制结肠组织中IL-1β、TNF-α的高表达。结论该研究表明白术可通过多组分、多靶点、多通路调控炎症因子的释放而抑制炎症反应,发挥改善UC的药效作用。

基于代谢组学研究肝复乐胶囊抑制LX-2细胞激活机制

目的 研究肝复乐胶囊对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的肝星状细胞LX-2激活的影响。方法 LX-2细胞分为对照组、模型组和肝复乐125、250、500μg/mL组。除对照组外,其余各组LX-2细胞给予5 ng/mL TGF-β1刺激24 h建立肝纤维化模型。通过分子生物学手段(RT-qPCR及Western blot等)检测细胞中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原(COL1A1)表达。结合GC-MS法和代谢组学技术检测各组细胞代谢变化,寻找与肝星状细胞激活相关差异代谢物,进行通路富集,预测可能代谢通路。结果 与模型组比较,肝复乐各剂量组LX-2细胞α-SMA、COL1A1的mRNA及蛋白表达降低(P<0.01),并呈剂量依赖性。代谢组学分析显示,丙酸、丁酸、苯丙氨酸、L-苏氨酸、肌醇、D-半乳糖、甘油、油酸、D-甘油酯与肝星状细胞激活关系密切,且在给药后回调,并富集得到4条代谢途径。结论 肝复乐胶囊能够剂量依赖性地抑制TGF-β1对LX-2细胞的激活,并缓解其代谢异常,其机制可能是通过调节半乳糖代谢,甘油酯代谢,苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸的生物合成,苯丙氨酸代谢等途径实现的。

生、醋柴胡UPLC-DAD指纹图谱建立及抗肝纤维化作用的谱效关系研究

目的建立生、醋柴胡的指纹图谱,比较生、醋柴胡化学成分差异,考察两者抗肝纤维化作用的差异,探究其与抗肝纤维化药效之间的关联性。方法采用UPLC法建立10批生柴胡和10批醋柴胡的指纹图谱,以TGF-β诱导肝星状细胞(LX-2)建立肝纤维化体外细胞模型,以Ⅰ型胶原蛋白(collagenⅠ,col1a1)和α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)蛋白表达情况为药效指标,利用MetaboAnalyst 5.0网站,以变量重要性投影(VIP)值>1为标准筛选影响生、醋柴胡质量的差异标志物,并采用正交偏最小二乘判别分析(OPLS-DA)研究生、醋柴胡差异化学成分及与抗肝纤维化作用的谱效关系,筛选生、醋柴胡抗肝纤维化作用的主要成分。结果生、醋柴胡样品的UPLC指纹图谱共有峰有18个,生、醋柴胡的主要差异成分有9个,其中峰9、7、6可以指认为柴胡皂苷d、柴胡皂苷a、柴胡皂苷f。药效结果发现,生、醋柴胡均有抗纤维化活性,且醋柴胡抗纤维化活性更强。通过谱效关联结果发现,柴胡抗肝纤维化作用的主要相关成分为11、12、14、15、18号峰。结论建立生、醋柴胡的指纹图谱方法简单可行,通过谱效关系筛选出抗肝纤维化活性的重要成分,为明确生、醋柴胡抗肝纤维化作用物质基础提供依据。

生物传感器在新烟碱类农药残留检测中的应用研究进展

新烟碱类杀虫剂在食品和环境样品中的超标残留严重威胁人体健康,提高新烟碱类农药残留的检测水平刻不容缓。基于生物传感器的新烟碱类农药残留物检测平台,可以实现对农药残留的快速、简单和低成本检测。本文主要总结了电化学传感器、荧光传感器、比色传感器、电化学发光生物传感器和拉曼化学生物传感器在新烟碱类农药残留快速检测中的最新研究进展。同时,对其面临的挑战和解决方案进行了探讨,为日后生物传感器在农药残留检测方面的进一步开发和应用提供参考。

子芩与枯芩UPLC指纹图谱建立及抗炎作用的谱效关系研究

目的:建立子芩和枯芩的指纹图谱,探究子芩与枯芩化学成分差异及与抗炎药效之间的关联性,明确抗炎作用的物质基础。方法:采用UPLC法建立子芩和枯芩指纹图谱,以LPS刺激THP-1巨噬细胞释放的炎症因子IL-1β、TNF-α水平为药效指标,采用正交偏最小二乘判别分析(OPLS-DA)研究子芩与枯芩差异化学成分及与抗炎作用的谱效关系,筛选子芩与枯芩抗炎作用的物质基础。结果:子芩和枯芩样品UPLC指纹图谱共有峰有17个,OPLS-DA结果发现二者差异化学成分有4个,分别为黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素及汉黄芩素,谱效关系结果发现子芩和枯芩抗炎作用的主要相关成分有2个,分别为黄芩苷、黄芩素。结论:该研究建立的子芩和枯芩指纹图谱方法简单可行,通过谱效关系分析筛选出抗炎活性的重要成分,为明确子芩和枯芩抗炎作用提供物质基础。

课程思政在新时代中药炮制学实验教学中的应用与探讨

课程思政是新时代高校思想政治教育的工作重点,是培养德才兼备的新时代大学生关键环节,如何在中医药实验课程教学中润物无声地融入课程思政值得深入探讨和研究。中药炮制学实验课程是中药炮制教学的重要环节,是学生通过实践的方式学习中药炮制方法和技艺的关键途径,其思政内涵丰富,可将专业教育和思政进行有效地融合。本文从中药炮制实验教学与课程思政相结合的可行性入手,探究其与课程思政融合育人的策略,塑造当代大学生的社会主义核心价值观,建立中医药文化自信,弘扬中医药工匠精神,培养大学生的创新意识,为中药炮制学实验课程的思政教学改革与应用提供参考。

基于虚拟仿真的线上线下混合教学模式在实验教学中的应用研究——以中药炮制工程学实验为例

根据中药炮制工程学实验教学面临的现实困境,文章通过建立基于虚拟仿真的线上线下混合教学模式,以线上超星平台、虚拟仿真平台及线下中药炮制实验实训中心为依托,以规模化生产麸炒苍术饮片的实验教学为例,利用线上超星平台及微信学习群让学生进行提前学习,再将虚拟仿真技术应用于麸炒苍术饮片实验教学中,最后利用中药炮制实验实训中心进行线下实验教学,有效激发了学生参与实验的积极性,为创新实验教学模式提供了新的思路。

苍术麸炒前后氯仿部位化学成分研究

目的:探讨苍术麸炒前后氯仿部位的化学成分变化,从化学成分和药效学的变化角度探讨苍术的炮制机制。方法:运用HPLC技术研究苍术麸炒前后氯仿部位整体的化学成分,分离炮制前后变化明显的目标化合物;以健脾和燥湿为指标研究该部位炮制前后药效变化。结果:从氯仿部位分离得到2个变化明显的化学成分,化合物A为5-羟甲基糠醛,化合物B为邻苯二甲酸二异丁酯;药理实验结果表明,麸炒苍术氯仿部位组胃泌素水平高于生品,小肠推进率显著增加。各给药组尿量与尿液中AQP2含量变化较阴性对照组变化不明显。结论:变化成分邻苯二甲酸二异丁酯和5-羟甲基糠醛可能为麸炒苍术毒副作用和药效变化的物质基础之一;氯仿部位是健脾有效部位之一,该部位燥湿作用不明显。

补阴佳品——龟鳖甲

“波澜日已浅,龟鳖日复滋。”古人以诗歌抒发对龟鳖生命力的赞叹,这里的龟鳖分别是指乌龟和鳖。它们以甲壳入药。龟甲为龟科动物乌龟Chinemys reevesii(Gray)的背甲及腹甲[1],味咸、甘,性微寒;归肝、肾、心经。鳖甲为鳖科动物鳖Trionyx sinensis Wiegmann的背甲[1],味咸,性微寒;归肝、肾经。乌龟和鳖全年均可捕捉,以秋、冬二季为多,捕捉后杀死,或用沸水烫死,剥取背甲和腹甲,除去残肉,晒干。龟鳖甲被列入湖北的“十大楚药”名册。目前,龟鳖甲开发了许多疗效突出的中成药,比如鳖甲煎丸、复方鳖甲软肝片、龟甲健骨胶囊等,除了药用,保健食品也有许多应用,比如鳖甲胶糕、龟甲胶糕、龟苓膏等。

半夏——化痰第一药

林果黄梅尽,山苗半夏新。“半夏”因“夏天过半采收”而得名。半夏为天南星科植物半夏Pinellia ternate(Thunb.)Breit.的干燥块茎。具有燥湿化痰,降逆止呕等功效[1]。半夏为临床常用中药,大量经典方剂中用到半夏;但半夏为有毒中药,需炮制使其毒性降低。依据炮制方式不同,半夏炮制品有:生半夏、清半夏、姜半夏、法半夏、半夏曲、麸炒半夏曲等品规。

HPLC法测定苍术及麸炒苍术中5-羟甲基糠醛的含量

苍术为传统燥湿药,是菊科植物茅苍术Atractylodes lancea （DC）或北苍术Atractylodes chinensis （DC） Koidz.的干燥根茎.始载于《神农本草经》,列为上品.性辛、苦、温.归脾、胃、肝经.具有燥湿健脾,祛风,散寒,明目等功能[1].生苍术燥性偏大,麸炒可缓和其燥性,并可增强健脾和胃作用[2].5-HMF主要是由己糖经加热分解产生,广泛存在于含有糖类物质的植物和食品中,一般炮制或加热后5-HMF含量增加[3].

特征图谱与化学计量学相结合评价南北苍术饮片的差异性

目的:以苍术HPLC特征图谱为基础,结合化学计量学判别方法,分析南苍术和北苍术饮片质量差异。方法:采用HPLC法建立南苍术与北苍术特征图谱,通过对比两者特征峰,并结合主成分分析、偏最小二乘-判别分析,分析18批苍术样品。结果:对比二者特征图谱发现,北苍术4号峰和7号峰成分含量明显高于南苍术,尤以4号峰更为突出,在南苍术中该含量低于检测限;经统计9号峰与7号峰峰面积比值显示,南苍术A9/A7>2,北苍术A9/A7<2,差异明显。主成分分析和偏最小二乘-判别分析均能将9批南苍术和9批北苍术很好的聚为两个不同组别,并明确导致差异的几个主要成分是4、7、8、9号峰所对应的成分。结论:特征图谱与化学计量学方法相结合可以有效区分南苍术与北苍术,为评价南北苍术的差异性提供了一种新的有效参考模式。

多指标综合评分法优化麸炒苍术的炮制工艺

目的:优化艺术的最佳的炮制工艺,为大生产提供基础数据。方法:采用L9(34)正交试验法,以炮制品中苍术素、β-桉叶醇、以及5-羟甲基糠醛和外观性状为指标,考察麦麸用量,炒制时间和炒制温度等因素,通过综合评分优选麸炒苍术的制备工艺。结果:麸炒苍术的最佳炮制工艺为每1 kg饮片用麸量为100 g,炒制温度为200℃,炒制时间为80 s。优选的苍术麸炒炮制工艺稳定、合理、可靠,能保证苍术术麸制品的质量。结论:优化的炮制工艺简单、稳定、可行,可为苍术的工业化炮制生产提供参考。

生熟三七醇提物对脑缺血再灌注损伤小鼠的疗效

目的探讨生熟三七醇提物对脑缺血再灌注损伤小鼠的疗效。方法将C57BL/6小鼠随机分为6组:假手术组,模型组,生低组(200 mg/kg)、生高组(400 mg/kg)、熟低组(200 mg/kg)、熟高组(400 mg/kg),造模前连续给药3 d,采用线栓法建立小鼠脑缺血再灌注损伤模型,造模24 h后,进行神经功能评分,氯化三苯基四氮唑(TTC)染色法测定脑梗死体积,试剂盒测定脑组织中丙二醛(MDA)和髓过氧化物酶(MPO)的含量,并通过苏木素-伊红(HE)染色观察脑组织形态。结果与模型组比较,生低组、生高组、熟高组神经功能评分均显著降低,生低组、生高组、熟低组、熟高组脑梗死体积及MAD水平均显著降低,生高组MPO水平显著降低(均P<0.05)。生低组、生高组、熟低组、熟高组脑组织病理形态均有所改善。结论生熟三七醇提物均对小鼠脑缺血再灌注损伤有一定的保护作用,但生三七醇提物药效明显优于熟三七。

虎杖一体化饮片与传统饮片的指纹图谱及体外抗氧化活性比较

目的比较虎杖产地加工与炮制一体化(简称“一体化”)制备的饮片与传统饮片的指纹图谱及体外抗氧化活性差异。方法根据一体化工艺和传统工艺分别制备10批虎杖一体化饮片和10批传统饮片。采用高效液相色谱法建立虎杖两种饮片的指纹图谱,并进行比较;检测虎杖两种饮片对1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)自由基、ABTS自由基、超氧自由基、羟自由基的清除率以及对Fe3+的还原能力,比较这两种饮片的体外抗氧化活性。结果虎杖两种饮片共有11个共有峰,其中一体化饮片共有17个共有峰,传统饮片共有13个共有峰;虎杖一体化饮片中6号峰(虎杖苷)和15号峰(大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷)的峰高明显高于传统饮片,传统饮片中13号峰(白藜芦醇)、17号峰(大黄素)和19号峰(大黄素甲醚)的峰高明显高于一体化饮片。体外抗氧化活性结果显示,虎杖一体化饮片和传统饮片对DPPH自由基、ABTS自由基、超氧自由基和羟基自由基均具有清除能力,对Fe3+也均具有还原能力。结论虎杖一体化炮制工艺较传统炮制工艺可更好地保留虎杖的有效成分,且虎杖一体化饮片的体外抗氧化活性强于传统饮片。

人参皂苷Rb1调控MAPK通路改善小鼠脑缺血再灌注诱导血脑屏障损伤的作用研究

目的探讨人参皂苷Rb_(1)对小鼠脑缺血再灌注诱导的血脑屏障(BBB)损伤的作用及机制。方法将C57BL/6小鼠随机分为假手术组、模型组和人参皂苷Rb_(1)低、中、高剂量(5、10、20 mg·kg-1)组,采用线栓法栓塞颈内动脉1 h后复灌建立脑缺血再灌注损伤模型,假手术组不栓塞,其余操作同模型小鼠。缺血1 h后ip相应药物,于再灌注24 h后处死取材。采用伊文思蓝染色法检测各组小鼠BBB损伤程度;采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测各组小鼠脑组织中炎症因子白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)以及紧密连接蛋白1(ZO-1)、闭合蛋白(Occludin)的mRNA表达水平;同时采用Western blotting检测各组小鼠脑组织中ZO-1、Occludin蛋白,金属基质蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)以及MAPK通路相关蛋白磷酸化的表达水平。结果与模型组相比,人参皂苷Rb_(1)可显著减少脑缺血再灌注小鼠脑组织中伊文思蓝的渗漏量(P<0.05),显著降低脑组织中IL-1β、IL-6和TNF-α的mRNA转录水平(P<0.05、0.01);显著上调ZO-1和Occludin的mRNA转录和蛋白表达水平(P<0.05、0.01);显著降低MMP-2、MMP-9的蛋白表达水平(P<0.05、0.01);显著抑制MAPK通路p38、JNK及ERK磷酸化蛋白的表达(P<0.05、0.01)。结论人参皂苷Rb_(1)对小鼠脑缺血再灌注诱导的BBB损伤具有一定的改善作用,其作用机制可能与抑制MAPK信号通路激活,减少MMP-2、MMP-9蛋白的表达,进而减轻对ZO-1、Occludin等紧密连接蛋白的降解有关。

“酒制升提”炮制理论在“寒性”中药中的应用及研究进展

酒制可引药上行、增效减毒、缓解寒性中药过偏之性产生的副作用。“酒制升提”指导着中药药性理论的研究和“寒性”中药的炮制与临床应用。本文研究酒制对寒性中药的物质基础、药理药效、作用机制等的作用,揭示“酒制升提”炮制理论的发生发展与科学内涵,为深度挖掘“酒制升提”炮制理论的现实研究与应用提供参考与思路。

结合网络药理学及动物实验初步探究苍术抗溃疡性结肠炎的作用机制

目的:基于网络药理学方法结合体内动物试验探究苍术抗溃疡性结肠炎的作用机制。方法:(1)通过TCMSP、BATMAN-TCM数据库筛选出苍术的活性成分及其可能的作用靶点;通过GeneCards数据库检索溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)疾病的相关靶点;将上述靶点导入Venny 2.1中对苍术活性成分的作用靶点与UC的疾病靶点取交集,获得苍术抗UC的交集靶点;采用Cytoscape 3.7.1构建苍术抗UC的“苍术-活性成分-交集靶点”网络,分析其关键活性成分;将交集靶点导入STRING数据库,构建蛋白-蛋白互作网络图,筛选出核心靶点;将交集靶点导入Matescape数据库对其进行GO功能及KEGG富集分析,最后使用Maestro 11.1软件对关键活性成分与核心靶点蛋白进行分子对接。(2)体内复制葡聚糖硫酸钠(dextran sodium sulfate,DSS)诱导UC小鼠模型,将BALB/c小鼠通过随机数字表法分为空白组、模型组、苍术醇提物组(1110 mg·kg^(-1)·d^(-1))及阳性药组(柳氮磺吡啶,SASP,250 mg·kg^(–1)·d^(–1)),每组6只;灌胃给药(10 mL·kg^(-1)),每天1次,连续给药7 d,末次给药1 h后处死,并进行相关指标检测。结果:(1)苍术抗UC的活性成分有26个,苍术-UC交集靶点273个;KEGG富集分析显示主要涉及的信号通路有MAPK通路及PI3K/Akt等炎症通路;分子对接结果显示其关键活性成分与核心靶点蛋白之间具有较强的结合活性。(2)动物实验数据表明,苍术醇提物可明显增加UC小鼠的结肠长度、降低疾病活动指数评分,减缓UC小鼠结肠组织病变程度、增加杯状细胞的个数,抑制结肠组织中IL-1β、MMP-2、MMP-9等炎性介质的高表达,调控PI3K/Akt通路的激活。结论:该研究结合网络药理学及动物实验初步证实苍术可能通过作用于IL-1β等靶点、参与PI3K/Akt信号通路的调控改善UC小鼠结肠损伤,为深入研究苍术及其活性成分抗溃疡性结肠炎的作用机制提供实验依据和理论参考。

中药煨法历史沿革及现代研究概况

煨法是中药传统炮制方法之一,历代本草和医书中均有相关记载,且种类繁多,但目前涉及到的具体中药品种也不多,且相关研究较少。笔者通过查阅古今相关资料,从煨法的历史沿革,炮制目的,现代代表性中药的炮制工艺、质量评价及药理学研究等方面进行了整理和分析。梳理后发现,煨法在古代应用广泛,最早见于东汉《华氏中藏经》,历经唐、宋、金、元、明、清时期的丰富和发展,并随着明代经济的繁荣发展,在明清进入鼎盛时期,涉及的中药品种多达159种,并逐渐完善了煨法的炮制理论。然而现代沿用煨法的品种大幅减少,现代中药采用煨法的主要目的多为降低不良反应、缓和药性、增强疗效、除去非药用部位、利于进一步加工等。该文通过梳理中药古今煨法的关键信息,可为中药煨制品的临床应用及现代研究提供文献依据。

基于GC-MS的枳壳水煎液抑制THP-1源性巨噬细胞泡沫化代谢组学研究

目的:研究枳壳水煎液(AFD)抑制氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的人单核白血病细胞(THP-1)源性巨噬细胞泡沫化的代谢组学及其可能机制。方法:THP-1细胞分为对照组,模型组,枳壳低、中、高剂量组。采用油红O染色法检测泡沫细胞的形成,用ELISA法检测细胞内甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)及炎症因子水平[单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)、干扰素γ(IFN-γ)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)],采用GC-MS检测各组细胞代谢组,寻找与药效相关的差异代谢物,并预测相关代谢通路。结果:AFD可抑制泡沫细胞形成,降低TG、TC及炎症因子MCP-1、IFN-γ、TNF-α表达水平(P<0.01,P<0.05)。代谢组学分析显示,L-丝氨酸、L-苏氨酸、L-甲硫氨酸等7种生物标志物与细胞泡沫化关系密切,给药后显著回调(P<0.05,P<0.01)。结论:AFD可通过调节甘氨酸/丝氨酸代谢、鞘脂代谢、甲硫氨酸代谢抑制巨噬细胞泡沫化,为动脉粥样硬化的治疗提供依据。