COQ10B在食管鳞癌中的表达及其调控Snail表达促进食管鳞癌细胞增殖与侵袭

目的:探讨COQ10B对食管鳞癌细胞增殖、侵袭能力的影响及可能的分子机制。方法:通过TIMER2.0数据库分析COQ10B基因在各种肿瘤和相邻正常组织之间的表达水平。免疫组织化学检测COQ10B在食管鳞癌组织中的表达水平并进行临床病理特征分析及生存分析;利用慢病毒构建COQ10B敲减稳转株及Snail过表达稳转株,qRT-PCR和Western blot方法检测转染效率。MTT法、Celigo细胞计数及Transwell侵袭小室检测COQ10B对KYSE150细胞系增殖和侵袭能力的影响。通过GEPIA2数据库分析COQ10B表达水平与Snail的相关性;Western blot检测敲减COQ10B对Snail蛋白表达的影响。通过拯救实验分析COQ10B是否通过正调控Snail促进KYSE150细胞系增殖和侵袭能力。结果:COQ10B在ESCC组织及细胞系中均为高表达水平,且表达水平与临床病理特征病理分级相关。COQ10B与ESCC患者预后相关,高表达COQ10B的ESCC患者预后明显较差,且发现性别、肿瘤TNM分期是影响ESCC预后的独立危险因素。敲减COQ10B可降低ESCC细胞增殖及侵袭能力。COQ10B表达水平与Snail呈正相关,并通过正调控Snail促进KYSE150细胞系增殖和侵袭能力。结论:COQ10B通过正向调控Snail基因表达促进食管鳞癌增殖与侵袭。

三阴性乳腺癌免疫相关LncRNA筛选及预后预测模型构建

目的筛选出三阴性乳腺癌(TNBC)免疫相关LncRNA基因,构建TNBC预后预测模型。方法①从癌症基因组图谱(TCGA)项目下载TNBC组织和癌旁组织的转录组RNA表达谱原始数据,结合Immport数据库,筛选TNBC免疫相关的LncRNA。进一步应用单因素及多因素Cox分析筛选TNBC与预后关系密切的免疫相关LncRNA,然后再根据最佳AIC值确定与预后关系密切的免疫相关LncRNA。②根据预后关系密切的免疫相关LncRNA,构建TNBC预后预测模型。③根据TNBC预后风险模型测算的风险评分值的中位值将TNBC患者样本分为高风险组和低风险组,比较高低风险组生存率。④采用ROC、主成分分析(PCA)评估构建的TNBC预后预测模型的预测效能。⑤采用多因素Cox分析TNBC预后预测模型预测效能的独立性。结果共计65例份TNBC组织样本,得到369个免疫相关LncRNA,通过单因素和多因素Cox分析,共得到3个与预后关系密切的免疫相关LncRNA(AC090181.2、LINC01235、LINC01943),并构建TNBC预后预测模型,该模型表达公式如下:风险评分(RS)=(-6.24904×A C090181.2)+(0.240562×LINC01235)+(-2.18153×LINC01943)。高风险组和低风险组患者生率差异有统计学意义(P<0.001)。TNBC预后预测模型对患者预后预测效能好(AUC=0.910;高、低风险组投影点分布有区别,区分度高)。TNBC预后预测模型能独立预测TNBC预后(HR=1.028,P<0.05)。结论成功构建了由3个与预后关系密切的免疫相关LncRNA(AC090181.2、LINC01235、LINC01943)组成的TNBC预后预测模型,其能较好预测TNBC患者的预后。

辅酶Q10B调控PI3K/AKT信号通路促进食管鳞癌恶性生物学行为的分子机制研究

目的:探讨辅酶Q10B(COQ10B)影响食管鳞癌细胞恶性生物学行为的分子机制。方法:采用qRT-PCR检测3种人ESCC细胞系(KYSE150、KYSE450和TE-1)和食管上皮细胞系Het-1A细胞中COQ10B表达情况。对敲减COQ10B的KYSE150细胞进行RNA测序筛选差异表达基因,通过KEGG通路分析寻找密切相关信号通路。利用慢病毒构建COQ10B过表达KYSE150和TE-1细胞稳转株,Western blot方法检测过表达效率。采用CCK8法检测PI3K/AKT信号通路抑制剂LY294002对食管鳞癌细胞的半抑制浓度(IC_(50))值。通过EDU、平板克隆实验、流式细胞术、创面愈合实验、Transwell侵袭小室检测过表达COQ10B以及加入LY294002抑制剂后对食管鳞癌细胞增殖、凋亡、迁移及侵袭能力的影响。同时采用Western blot技术检测过表达COQ10B以及加入LY294002抑制剂后对KYSE150食管鳞鳞癌细胞中PI3K/AKT信号通路相关蛋白(PI3K、AKT、p-PI3K和p-AKT)表达的影响。结果:COQ10B在ESCC细胞系中相对高表达。RNA-seq筛选出显著性差异表达基因共319个,包括285个上调基因、34个下调基因,通过KEGG通路分析筛选出PI3K/AKT信号通路作为后续分子机制的研究对象。PI3K/AKT信号通路抑制剂LY294002随浓度和作用时间的增加,对食管鳞癌细胞的毒性作用增强,后续实验中使用LY294002作用48 h的IC_(50)值左右的药物浓度。与阴性对照组相比,在KYSE150和TE-1食管鳞癌细胞中过表达COQ10B后可显著增强细胞的增殖、迁移及侵袭并抑制其凋亡。然而,在加入LY294002抑制剂处理48h后,COQ10B过表达所增强的ESCC细胞增殖、迁移、侵袭能力均被显著抑制,而凋亡能力的抑制被逆转。同时与阴性对照组相比,KYSE150食管鳞癌细胞中过表达COQ10B后PI3K/AKT信号通路中p-PI3K、p-AKT蛋白表达水平显著升高。而在加入LY294002抑制剂处理48 h后可显著抑制COQ10B过表达所增强的PI3K/AKT信号通路相关蛋白p-PI3K、p-AKT表达水平。结论:COQ10B可通过激活PI3K/AKT信号通路促进食管鳞癌细胞的增殖、迁移、侵袭,并抑制其凋亡。