抗SARS冠状病毒S1蛋白N端249至667的单克隆抗体的制备与鉴定(英文)

目的在获得了具有免疫原性的SARS冠状病毒S1蛋白片段的基础上,制备和鉴定特异性抗该段S1蛋白单克隆抗体(mAb)。方法原核表达含S蛋白受体结合区的SARS冠状病毒S1蛋白片段S1c(N端249-667氨基酸残基),其免疫原性经SARS病人恢复期血清鉴定后免疫BALB/c小鼠,按常规方法制备单克隆抗体,并采用ELISA间接法、免疫荧光和免疫印迹进行筛选和鉴定。结果筛选出3株特异性针对SARS冠状病毒S1蛋白N端249-667的mAb杂交瘤细胞株,IgG亚类鉴定1株为IgG1,2株为IgG2a,经免疫荧光鉴定与人冠状病毒株229E和OC43无交叉反应。结论获得3株抗SARS冠状病毒S蛋白受体结合区特异性单克隆抗体,为建立新的SARS冠状病毒检测方法的和进一步研究S蛋白的功能奠定了基础。

禽流感病毒H5N1血凝素基因在昆虫细胞中的表达及鉴定

目的应用杆状病毒-昆虫细胞表达体系克隆及表达禽流感病毒H5N1血凝素H5抗原,鉴定其抗原性和生物活性。方法PCR扩增禽流感病毒H5全长基因序列,克隆、转化制备重组杆状病毒Bacmid质粒,通过转染昆虫细胞制备重组杆状病毒进行蛋白表达。采用细胞免疫荧光、Westernblotting和血凝试验分别对表达的蛋白进行抗原性和生物活性分析。结果在昆虫细胞中成功表达禽流感病毒重组his-H5蛋白,其相对分子质量约为64000,与豚鼠红细胞能够发生凝集反应,免疫荧光与Westernblotting结果提示该重组蛋白能够与禽流感病毒H5标准血清中的抗体特异性结合。结论经杆状病毒-昆虫细胞表达系统获得的重组his-H5抗原具备天然的生物活性和抗原性,该方法为进一步研究禽流感病毒血凝素抗原生物学特性以及制备亚单位疫苗、相关抗体奠定了基础。

重氮试验在盲插鼻肠管时末端位置判断中的应用效果研究

目的探讨重氮试验在盲插鼻肠管后末端位置判断的应用效果。方法采用便利抽样法,选取2021年9月至2022年1月山东省某三级甲等医院重症监护病房(intensive care unit,ICU)进行盲插鼻肠管术的216名患者为研究对象。采用重氮试验、测pH值、观察回抽液性质三种方式预测鼻肠管末端位置,以X线摄片为判定的金标准,确认鼻肠管末端位置。比较重氮试验及其他两种方式预测的准确率、敏感度、特异度、阳性结果预测值(positive predictive value,PPV)、阴性结果预测值(negative predictive value,NPV)、阳性似然比(positive likelihood ratio,PLR)、阴性似然比(negative likelihood ratio,NLR)等指标。结果pH值判断的敏感度为97.7%、NPV为84.0%、NLR为0.045;回抽液性质判断的特异度为82.9%、PPV为95.5%、PLR为4.912;重氮试验方式的准确率为92.6%、Kappa系数为0.755;受试者操作特征曲线下面积最大为0.870,95%CI(0.793,0.947)。结论重氮试验判断盲插鼻肠管末端位置的准确率、一致性较好,具有较高的临床预测价值。

经验曲线现象下的成本管理

“经验曲线”的理论及其应用,是西方管理会计中的一个重要研究课题。本文着重介绍在成本管理工作中,对经验曲线现象应该如何处理的问题。经验曲线(LearNing Curve)也称为学习曲线。就工业企业来说,当企业重复生产某种产品的时侯,随着生产的不断进行,生产该种产品所需的劳动时间将会不断减少。也就是说,重复生产某项产品的次数愈多,经验愈丰富,生产效率就愈高,则生产单位产品所耗费的时间也就愈少。如果我们按照取得经验的不同阶段(即生产第几个产品)进行生产时所平均耗费的时间来画成一个几何图形,则该图形将趋向于一个指数曲线。这也就是我们所说的经验曲线.经验曲线可直接反映出。

西方责任会计中的业绩评价问题

社会上的集体是多种多样的,小至一个家庭,大至跨国公司都包括在内。这些集体为了更好地完成其目标,就必须对个人的活动有效地加以组织。如果说,个人和集体的利益完全一致,而没有任何矛盾的话,那么就不需要这种组织活动了。然而,在个人和集体之间,确实是存在着利益上的冲突的。即或是社会主义国家,在国家、集体、个人三方面之间,也存在着在根本利益一致基础上的某些矛盾。最根本的一点就是,有些人想在完成集体目标上少花些力量,而从集体的利益中多得些好处。力了解决这一问题。

量本利分析中确定多种产品销售数量的方法

量本利分析,是西方管理会计中的一个重要分析方法,可以进行一系列的预测。其中包括对产品损益分界点销售数量以及目标利润销售数量的预测。在生产单一产品的情况下,对产品销售数量的预测比较简单。但是,在生产多种产品的情况下的预测,则较为复杂。本文着重介绍多种产品的损益分界点销售数量以及其目标利润销售数量的两种方法。在生产单一产品的情况下,成本、业务量、利润各因素之间的关系,可用下列的公式表示:

西方高等管理会计课程内容简介

西方会计课程的设置区分为财务会计和管理会计,而有关管理会计方面的课程又有管理会计、成本会计和高等管理会计三门课程。管理会计课程的内容包括有:管理会计的一般介绍、成本的分类、直接成本的分摊、车间经费的分摊、成本计算的方法一定单法和分步法、责任会计、弹性预算、标准成本、量本利分析和资本预算等等。成本会计课程的重点是成本的计算、分摊和控制。从所包括的内容来看,如产品成本计算的各种方法以及成本的分摊方法等问题与管理会计课程所讲的有些重复。

审计工作中的科学抽样法

在企业中实行内部会计控制制度是非常重要的,它可以保证会计数据的正确性和可靠性,而只有利用真实、可靠的数据,才能作出正确的决策,也才能够提高企业的经营管理.如果内部会计控制制度不健全或虽然制度是有效的,但没能很好地执行,也就会造成不良的后果.对于审计人员来说,为了要对会计报表的可靠程度进行估价,也是为了让内部会计控制制度更好地发挥作用,就需要对会计工作进行检查.但是,如何确定检查的范围,这就需要很好地进行探讨.从理论上来说。

禽流感病毒血凝素H5特异性单克隆抗体的制备及ELISA捕获法的建立

目的制备和鉴定禽流感病毒（H5N1）血凝素（H5）特异性单克隆抗体（mAb）,建立H5抗原的双抗体夹心ELISA捕获法。方法以H5血凝素和携带H5全长基因的质粒免疫Balb/c小鼠制备mAb,利用血凝抑制（HI）实验筛选和鉴定,通过竞争抑制试验分析抗体识别表位,并采用抗体配对试验筛选捕获抗体和检测抗体,建立测定H5抗原的双抗体夹心ELISA捕获法。结果获得16株特异性针对H5的单克隆抗体,与A型流感病毒H1、H3、H7、H9和B型流感病毒的血凝素无HI交叉反应,对H5血凝素的血凝抑制效价为1∶100-1∶51200;通过配对实验,建立以单克隆抗体H5M9为捕获抗体,辣根过氧化物酶标记单克隆抗体H5M11为检测抗体的双抗体夹心ELISA;检测多株H5N1病毒和H5血凝素的最低检出值为1/32血凝单位,检测A型流感病毒H1N1、H3N2、B型流感病毒以及H7、H9血凝素均为阴性。结论建立了一种灵敏度高、特异性强的测定H5抗原的ELISA捕获法,可应用于禽流感病毒H5N1感染的实验室早期诊断。

捕获ELISA法测定抗EV71-IgM抗体用于EV71感染早期诊断

目的探讨捕获ELISA法测定抗肠道病毒71型(EV71)IgM抗体在EV71感染所致手足口病(HFMD)早期诊断中的价值。方法以实时荧光RT-PCR检测89例临床初诊为HFMD患儿的粪便、疱疹液、咽拭子或肛拭子的肠道病毒RNA。用40例排除HFMD的5岁以下儿童血清为抗EV71-IgM抗体阴性对照,以捕获ELISA法检测患儿不同发病期血清中抗EV71-IgM抗体。结果经实时荧光RT-PCR检测,89例HFMD患儿粪便、疱疹液、咽拭子或肛拭子中EV71感染28例,柯萨奇病毒A16(CA16)感染43例,非EV71和CA16的肠道病毒感染14例,非肠道病毒感染4例。EV71感染者发病1～3 d、4～6 d及>6 d的血清抗EV71-IgM抗体阳性率分别为81.3%、100%和100%;CA16感染者分别为10.0%、26.4%和65.7%;非EV71和CA16的肠道病毒感染者及非肠道病毒感染者在发病1～3 d和4～6 d无1例阳性;阴性对照组无1例阳性。抗EV71-IgM抗体在EV71感染的早期(急性期)的诊断敏感性和特异性分别为81.3%和92.9%。结论 EV71感染者与CA16感染者血清抗EV71-IgM抗体在发病4 d后存在较明显的交叉反应。抗EV71-IgM抗体可用作EV71感染早期诊断的血清学标志物。

A型流感病毒核衣壳蛋白ELISA捕获法的建立和临床应用

目的制备和鉴定A型流感病毒核衣壳蛋白单克隆抗体,建立A型流感病毒核衣壳蛋白ELISA捕获法,用于A型流感病毒感染的实验室早期诊断。方法利用杆状病毒系统表达A型流感病毒核衣壳蛋白,免疫BALB/c小鼠制备单克隆抗体,采用ELISA间接法、免疫荧光和免疫印迹进行筛选和鉴定,用双抗体夹心ELISA捕获法建立检测A型流感病毒核衣壳蛋白的方法。结果获得8株、共识别4个A型流感病毒核衣壳蛋白不同抗原位点的单克隆抗体,选择以单抗2B8A11作为捕获抗体,以C16A15作为检测抗体为最佳抗体对,建立双抗体夹心ELISA捕获法。检测流感患者的当日采集和冻存的呼吸道标本,与病毒分离培养方法的符合率分别为100%和42.9%;与B型流感病毒和其他呼吸道病毒无交叉反应。检测流感患者当日采集的呼吸道标本敏感性高于德国Serion试剂盒(P<0.001),与RT-PCR方法比较差异无显著性(P=0.5)。结论成功建立了灵敏度高、特异性强的A型流感病毒核衣壳蛋白抗原的ELISA捕获法,为A型流感病毒感染的实验室早期诊断提供技术方法。

一步法实时RT-PCR快速检测手足口病肠道病毒

目的探讨实时荧光RT-PCR在手足口病(HFMD)肠道病毒快速检测中的应用价值。方法以实时荧光RT-PCR检测64例临床初诊为HFMD患儿标本中总肠道病毒(EV)、柯萨奇病毒A组16型(CA16)和肠道病毒71型(EV71),用RD细胞、Vero细胞和Hep-2细胞进行病毒分离培养,以免疫荧光法鉴别分离培养的EV71。结果64例标本中,EV(+)/EV71(+)为23.4%(15/64)、EV(+)/CA16(+)为48.4%(31/64)、EV(+)/EV71(-)/CA16(-)为10.9%(7/64)、EV(-)/EV71(-)/CA16(-)为17.2%(11/64)。实时荧光RT-PCR检测为EV71且病毒分离培养出现细胞病变效应的培养细胞经抗EV71单克隆抗体免疫荧光检测均为阳性,未发生细胞病变效应或非EV71的培养细胞均为阴性。结论实时荧光RT-PCR检测HFMD病原具有特异和快速等优点,与病毒分离培养具有较高的一致性,可用于手足口病的早期诊断和鉴别诊断。

Ⅰ型登革病毒NS1蛋白检测体系的建立及在2014年广东登革疫情诊断中的应用

目的以Ⅰ型登革病毒（DENV）非结构蛋白1（NS1）为免疫原制备NS1特异性单克隆抗体,建立Ⅰ型登革病毒NS1抗原特异性检测方法,并应用于广东以Ⅰ型登革感染为主的临床血清标本检测。方法用原核表达的重组登革病毒NS1蛋白和灭活的Ⅰ型登革病毒免疫Balb/c小鼠,通过细胞融合,间接ELISA、免疫荧光和免疫印迹鉴定,获得DENV1NS1特异性单克隆抗体并建立检测方法。结果共获得26株Ⅰ型登革病毒NS1蛋白特异性结合的单抗。通过对26株1型登革病毒NS1蛋白特异性单抗进行多株抗体组合配对,最终筛选出最佳抗体组合。该组合检测DENV1病毒培养上清的检测限为1∶16 384（12.5 pfu/ml）,且与其他3个血清型登革病毒、乙型脑炎病毒和黄热病毒均无交叉反应,对500份健康人血清标本检测中,阴性标本497例,临界3例,对发病0~13 d的836份临床确诊的登革热患者血清检测的敏感性为85.6%,明显高于q RT-PCR检测体系（66.3%）（P〈0.001）,亦明显高于病毒分离诊断率（P〈0.001）。结论成功获得了1组DENV1-NSl蛋白的特异性单克隆抗体,利用该组抗体建立了1种敏感性和特异性更好的只针对DENV1-NS1蛋白的双抗体夹心检测方法,且比其他方法能够覆盖更宽泛的时间范围,该方法可作为登革热早期诊断的工具。

临床公共实验室平台信息化管理建设探索

结合南方医科大学珠江医院检验医学部医学实验中心的实际情况,总结了临床公共实验室信息化管理中安防管理系统、仪器预约管理系统以及临床样本库管理系统的设计理念和建设情况,强调了信息化管理对临床公共实验室平台发展的重要意义和作用。

西尼罗河病毒NS1的克隆、表达及抗原性分析

目的克隆和表达西尼罗河病毒(WNV)非结构蛋白1(NS1),并分析其与登革病毒NS1的抗原交叉反应性。方法合成WNV NS1全基因序列,将NS1全基因克隆到pGEX-5X-3原核表达载体中表达GST-NS1融合蛋白,用4型登革病毒免疫血清及登革病毒NS1单克隆抗体并应用Western Blot方法分析WNV-NS1重组蛋白的抗原性。结果重组质粒pGEX-5X-3-WNV-NS1经IPTG诱导,高效表达GST-NS1融合蛋白,经变性纯化和复性获得可溶性WNV-NS1重组蛋白,经Western Blot证实WNV-NS1重组蛋白可与各型登革病毒免疫小鼠血清及部分4型登革病毒NS1交叉单抗识别。结论成功获得可溶性WNV-NS1重组蛋白,该蛋白与登革病毒NS1具有抗原交叉反应性,其结果为建立西尼罗河病毒的血清学诊断和鉴别诊断奠定了基础。

人冠状病毒SARS-CoV、229E和OC43核衣壳(N)蛋白单克隆抗体的制备及3株人冠状病毒N蛋白的抗原相关性观察

目的通过制备和鉴定人冠状病毒SARS-CoV、229E和OC43核衣壳(N)蛋白单克隆抗体(mAb),观察3株人冠状病毒的N蛋白抗原相关性。方法分别用基因重组SARS-CoV、229E和OC43N蛋白免疫BALB/c小鼠,制备mAb,并采用ELISA间接法、免疫印迹和免疫荧光进行筛选和鉴定,同时用mAb分析3株人冠状病毒N蛋白之间的免疫交叉反应。结果获得多株抗SARS-CoV、229E和OC43 N蛋白mAb杂交瘤细胞株,ELISA间接法、免疫印迹和免疫荧光结果均显示,所有的mAb仅与各自病毒的N蛋白特异性反应,而在3株人冠状病毒N蛋白抗原之间不产生免疫交叉反应。结论获得的特异性抗人冠状病毒N蛋白mAb为进一步研究3株人冠状病毒的抗原决定簇相关性奠定了基础。

锌、硒对镉中毒小鼠金属硫蛋白合成及脂质过氧化损伤的影响

目的观察锌、硒对镉中毒小鼠金属硫蛋白合成及脂质过氧化的影响,为镉中毒的研究及防治提供理论基础。方法36只昆明小鼠随机分成6组,每组6只:对照组,经口灌注生理盐水;CdCl2组,100μmol/kg的CdCl2,经口灌胃;Zn2SO4组,Zn2SO420μmol/kg经口灌胃;Na2SeO3组,Na2SeO310μmol/kg经口灌胃;CdCl2+Zn2SO4组,Zn2SO4和CdCl2交替经口灌胃;CdCl2+Na2SeO3组,Na2SeO3和CdCl2交替经口灌胃。109Cd-血红素饱和法测小鼠组织金属硫蛋白含量;试剂盒检测小鼠组织丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性。结果单独镉、锌、硒组及Zn+Cd、Se+Cd组小鼠肝、心和肾脏MT含量均明显高于对照组,CdCl2组小鼠肝、心和肾脏MDA含量增高、SOD和GSH-Px活力降低。CdCl2+Zn2SO4组和CdCl2+Na2SeO3组小鼠肝、心和肾脏MT含量较单用CdCl2组进一步增高(P<0.05),MDA含量降低,SOD和GSH-Px活力升高。结论锌、硒增加镉中毒小鼠金属硫蛋白合成,减轻镉中毒小鼠脂质过氧化损伤。

SARS抗体检测方法的建立与IgG变化规律

目的 :检测分析SARS患者血清IgG抗体产生情况 ,研究一种新的SARS冠状病毒IgG抗体检测方法的实际效果和临床意义。方法 :利用基因重组SARS冠状病毒核壳抗原 (N )建立间接ELISA法 ,检测SARS确诊、疑似患者及其他呼吸道疾病患者共 3 78份血清标本中的特异性IgG抗体。结果 :以A450 值 =2 1× 2 0 0例健康献血员均值作为抗体阳性判断的临界值 ,IgG的阳性临界值 0 2 3 9,对 160份SARS确诊病人、176份疑似病例和 42例对照病例血清IgG抗体检测结果进行分析 ,对于确诊病例发病 1周内 ,IgG抗体检测阳性率为 5 63 % ,发病第 2周 ,IgG检出阳性率为 62 86% ,第 3周为 92 5 9%。结论 :机体产生针对SARS冠状病毒核壳抗原的IgG抗体 ,在 1周后逐渐升高 ,持续时间长 ,证明在SARS冠状病毒致病转归机制中可能起重要作用 ,并且可作为SARS检测的重要手段。

返回舱入水冲击数值建模与响应分析

用仿真方法对返回舱入水冲击问题进行了研究,建立三维有限元模型。分别对返回舱以不同速度、不同质量入水的情况进行了计算,通过对计算结果的分析发现,冲击压力曲线能较好地和文献中的试验曲线相吻合,证实了仿真计算的可行性。

简并PCR在肠道病毒血清型鉴定中的应用

目的探讨共有序列简并杂合寡核苷酸引物PCR(CODEHOP-PCR)在肠道病毒血清型鉴定中的临床应用价值。方法以CODEHOP-PCR检测经实时荧光RT-PCR鉴定为EV71和CA16手足口病患者的临床样本和病毒分离培养细胞上清的肠道病毒VP1基因片段,经琼脂糖凝胶电泳并回收、测序,与Genbank提供的序列比较,确定肠道病毒的血清型。结果 CODEHOP-PCR后的序列分析表明,所有的EV71毒株和CA16毒株与近几年国内报道的部分毒株同源性在96%以上,其血清分型结果验证了实时荧光RT-PCR分型结果的准确性。结论 CODEHOP-PCR合并测序用于肠道病毒血清型的准确鉴定,与传统的病毒分离及血清中和试验相比,具有更快速、准确的优点。