慢性肾脏病贫血的规范化治疗

贫血是慢性肾脏病常见的并发症之一,主要原因为促红细胞生成素(EPO)生成不足和铁缺乏,是肾脏功能下降的一种表现,因此,EPO和铁剂是治疗慢性肾性贫血的主要药物。本文综述了近年来慢性肾脏疾病贫血的评估及血红蛋白的治疗目标,EPO和铁剂治疗的指征、用法、疗效评价和注意事项以及新型促红细胞生成药物的研究进展,以期提高对慢性肾脏病贫血规范化治疗的认识。

三氧化二砷对淋巴瘤T2细胞株SHP-1基因的去甲基化作用

背景与目的:去甲基化作用可能是三氧化二砷(arsenic trioxide,As2O3)对抗造血系统恶性肿瘤的另一种机制。本研究探讨As2O3对淋巴瘤细胞系T2细胞中抑癌基因酪氨酸磷酸酶(SH2-containinphosphatase-1,SHP-1)的去甲基化作用及对T2细胞生长增殖的生物学影响。方法:T2细胞以As2O3或5-氮杂胞苷(5-aza-2'-deoxyoytidine,5-AC)单独处理,或两药联合处理。采用甲基化特异性PCR、荧光定量PCR和Western检测As2O3处理前后SHP-1基因启动子过甲基化及其mRNA和蛋白表达状况、c-kit蛋白表达变化。MTT法检测细胞存活率。流式细胞术检测细胞凋亡率。结果:As2O3能逆转SHP-1基因启动子甲基化,使T2细胞SHP-1mRNA和蛋白重新表达,同时c-kit蛋白表达呈下降趋势;As2O3明显抑制T2细胞的增殖,随浓度增加及作用时间延长,其增殖抑制效应增加(P<0.05);2.5μmol/L浓度的As2O3作用T2细胞1,2,3d细胞增殖抑制率(9.8%,20.3%,47.5%)明显低于联合作用组(11.0%,36.7%,61.0%)。As2O3可使T2细胞凋亡率增加,且随作用时间延长和浓度增加,凋亡细胞逐渐增多(P<0.05),联合作用组细胞凋亡率(1d:17.3%;2d:37.9%;3d:67.9%)明显高于2.5μmol/LAs2O3单独作用组(6.1%,26.5%,50.9%)。结论:As2O3能去除T2细胞中SHP-1基因甲基化,使其重新表达,并可能通过抑制c-kit受体及其信号转导路径的活化而抑制肿瘤细胞增殖,并诱导细胞凋亡。

慢性粒细胞性白血病中SHIP1基因的表达变化及机制探讨

目的观察SHIP1基因在慢性粒细胞性白血病(CML)患者中的表达变化,并通过特异性小干扰RNA(siRNA)封闭K562细胞株BCR-ABL基因的表达,探讨BCR-ABL基因表达对SHIP1基因的影响。方法应用RQ-PCR方法检测CML患者骨髓、正常人外周血白细胞及白血病细胞株K562中SHIP1基因表达的差异。另取K562细胞分为3组:空白对照组(不加任何干扰成分);非特异性siRNA处理组(加非特异性siRNA);特异性siRNA处理组(加入特异性siRNA封闭BCR/ABL融合基因),应用RQ-PCR及Western blot方法分别检测3组中BCR/ABL、SHIP1基因的mRNA及其相应蛋白P210(BCR/ABL编码)、P145(SHIP1基因编码)的表达,并比较各组中表达水平的变化。结果CML患者骨髓白细胞和K562细胞中SHIP1基因的表达明显低于正常人的外周血白细胞。特异性siRNA处理组中BCR-ABL基因mRNA和P210蛋白的表达水平明显下降,SHIP1基因mRNA和P145蛋白表达水平随BCR-ABL表达下降而增加;非特异性siRNA处理组与空白组相比无明显差异。结论CML患者SHIP1基因的表达低于正常人;特异性siRNA能够抑制BCR-ABL基因的表达;BCR-ABL基因能抑制SHIP1基因及其蛋白表达。

急性髓系白血病82例患者VEGF与MMP-2、MMP-9的相关性研究

为了探讨急性髓系白血病(AML)患者中血管内皮生长因子(VEGF)与基质金属蛋白酶MMP-2、MMP-9的相互关系及二者在AML中的意义,采用半定量RT-PCR技术检测AML患者与正常人骨髓单个核细胞(MNC)MMP-2mRNA、MMP-9mRNA、VEGF mRNA的表达,用明胶酶谱的方法测定原代MNC和HL-60细胞分泌的MMP-2、MMP-9的活性,应用ELISA方法检测AML患者血清中VEGF蛋白的水平,分析VEGF和MMP-2、MMP-9mRNA之间的关系。结果显示:AML患者MMP-2mRNA、MMP-9mRNA与VEGF mRNA的表达和VEGF蛋白水平呈正相关,缓解期患者和正常对照无相关性;VEGF阳性组发生髓外浸润率明显高于阴性组;VEGF上调HL-60细胞中bcl-2的表达。结论:AML患者中MMP-2,MMP-9的表达和VEGF具有正相关性,VEGF可以上调部分AML患者中MMP-2,MMP-9的表达,VEGF可能与MMP-2,MMP-9共同参与了白血病髓外浸润的发生。

甲基化抑制剂5-aza-2′-deoxycytidine对K562细胞SHP-1基因表达及细胞增殖与凋亡的影响

本研究探讨5-氮杂胞苷(5-aza-2′-deoxycytidine,5-aza-CdR)对K562细胞中抑癌基因SHP-1的转录调控作用及对K562细胞增殖凋亡的生物学影响,为寻找肿瘤治疗新靶点提供实验依据。采用MSP方法检测SHP-1基因甲基化状态,MTT法检测不同剂量(0.5,1,2μmol/L)5-aza-CdR作用K562细胞1,3,5天时对K562细胞存活率的影响,流式细胞术(FCM)分析5-aza-CdR作用1,3,5天时细胞周期及凋亡率的变化,实时定量PCR(FQ-PCR)和Westernblot方法检测5-aza-CdR处理前后SHP-1mRNA及蛋白表达水平、p-STAT5蛋白表达变化。结果表明,K562细胞中存在SHP-1基因的甲基化,5-aza-CdR作用使K562细胞中SHP-1mRNA和蛋白重新表达,而p-JAK2蛋白表达随之呈下降趋势;5-aza-CdR明显抑制K562细胞增殖,并与药物浓度及作用时间呈正相关。JAK2特异性抑制剂AG490明显抑制K562细胞增殖;5-aza-CdR可使K562细胞凋亡率增加,且作用也呈时间依赖性,用药1,3,5天细胞凋亡率分别为9.3%,24.2%,37.7%。2μmol/L的5-aza-CdR处理24小时后,G0/G1期细胞逐渐增多,G2/M期细胞逐渐减少,细胞阻滞在G0/G1期。5-aza-CdR作用1,3,5天时G2/M期细胞比例分别为30.7%,23.4%,19.3%。结论:特异性甲基化转移酶抑制剂5-aza-CdR能使K562细胞中沉默的SHP-1基因重新表达,并可能通过JAK/STAT路径活化抑制白血病细胞增殖并诱导其凋亡。

SHP-1和JAKs基因在成人急性髓系白血病患者中的异常表达及其相关性

目的研究SHP-1基因和JAK家族基因在成人急性髓系白血病(AML)患者中的表达及相关性,以探讨两者在AML发病机制中的作用。方法急性髓系白血病患者63例及健康志愿者19名(健康对照)为研究对象,分别应用FQ-PCR和RT-PCR方法检测骨髓单个核细胞中SHP-1、JAKsmRNA表达情况;并分析两者的相关性及其与预后的关系。结果SHP-1在AML患者表达水平明显低于缓解组和健康对照组(P<0.01),JAK2、JAK3和TYK2表达水平明显高于缓解组和健康对照组(P<0.05),JAK1在初治AML中表达也增高但与CR和NC组相比差异无统计学意义(P>0.05);SHP-1和JAK1、JAK3在mRNA水平负相关(P<0.05)。结论SHP-1可能是白血病潜在的抑癌基因,AML细胞中SHP-1与JAKsmRNA表达呈负相关;SHP-1对JAKs基因的负调控作用并非只是通过去除JAKs磷酸化而阻断JAK/STAT路径,还可能在转录水平进行调节。

外源性SHIP基因对K562细胞周期及其相关蛋白表达的影响

目的:探讨SHIP基因对人白血病细胞系K562细胞周期的调控作用。方法:用携带野生型SHIP基因及绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)基因的慢病毒及空载体慢病毒转染人白血病K562细胞。FCM检测转染效率、细胞凋亡率及细胞周期变化,实时荧光定量PCR(real-time fluorescent quantitative PCR,RFQ-PCR)检测SHIPmRNA水平的变化,Western印迹法检测SHIP、cyclinD1、p21WAF1/CIPI、p27KIP1蛋白表达水平的变化。结果:与转染空载体组和未转染组相比,转染野生型SHIP基因的K562细胞增殖减慢,凋亡率明显上升(P<0.05);细胞周期显示,G0/G1期延长,G1期前出现亚二倍体的凋亡峰,S期和G2/M期比例降低;cyclin D1表达降低,p21WAF1/CIPI和p27KIP1表达增加。结论:转染野生型SHIP基因可使细胞周期阻滞在G0/G1期,抑制白血病细胞增殖,促进白血病细胞凋亡。

孟鲁司特钠对ITP模型小鼠T淋巴细胞亚群及晚期氧化蛋白产物的影响

目的:探讨孟鲁司特钠对特发性血小板减少性紫癜(ITP)模型小鼠T淋巴细胞亚群、细胞因子及晚期氧化蛋白产物(AOPP)的水平,分析孟鲁司特钠治疗ITP的机制。方法:将40只ITP模型小鼠随机分为对照组、模型组、孟鲁司特钠低剂量组(3 mg/kg)和孟鲁司特钠高剂量组(12 mg/kg)。成功造模后第8天开始,连续14 d给药后,计算血小板数量(PLT)、胸腺、脾脏指数,采用流式细胞仪检测外周血T淋巴细胞亚群,酶联免疫法检测血清中IL-6、TNF-α、AOPP水平。结果:与空白组小鼠比较,模型组小鼠的PLT、脾脏指数、CD8^+、IL-6、TNF-α、AOPP水平显著升高(P<0.05),CD3^+、CD4^+、CD4^+/CD8^+水平显著下降(P<0.05);与模型组比较,孟鲁司特钠低、高剂量组小鼠脾脏指数、CD8^+、IL-6、TNF-α、AOPP水平显著降低(P<0.05),CD3^+、CD4^+、CD4^+/CD8^+水平显著上调(P<0.05)。结论:孟鲁司特钠能够通过调节免疫功能紊乱,消除AOPP积累,降低IL-6、TNF-α水平,对ITP起治疗作用。

慢病毒载体介导SHIP基因抑制K562细胞增殖及对PI3K/Akt信号通路的调控

背景与目的:SHIP基因主要表达于造血细胞,通过降解PIP3抑制PI3K/Akt信号通路而在造血细胞增殖和存活中起重要负调控作用。本研究通过慢病毒载体介导SHIP基因转染K562细胞,探讨SHIP基因改变及功能丢失与白血病发病的关系。方法:将携带SHIP基因的慢病毒感染K562细胞,FQ-PCR法检测SHIP转录水平,Westernblot法检测转染后SHIP蛋白表达及Akt磷酸化水平的变化;比较SHIP基因表达前后细胞增殖、形态的变化。结果:K562细胞中SHIP蛋白阴性。以携带SHIP基因的慢病毒载体转染K562细胞后,细胞增殖抑制率升高,K562-wtSHIP-FIV-G细胞的增殖抑制率由转染第3天的(9.9±1.5)%升到第5天的(40.6±2.3)%;伴有Akt磷酸化水平明显减弱;转染后,K562-wtSHIP-FIV-G组细胞p-Akt的表达水平由0.533降低到0.245(P<0.01),细胞增殖明显被抑制。此外,SHIP蛋白还能使K562细胞出现凋亡特征,Hoechst33342染色结果转染wtSHIP基因组K562细胞第5天早期凋亡率[(38.3±4.3)%]明显高于K562-FIV-G组细胞[(8.2±0.9)%]和未转染组K562细胞[(7.7±0.8)%]。结论:SHIP基因具有重要的抑制细胞增殖和促进凋亡的能力,SHIP基因缺失导致K562细胞PI3K/Akt信号途径失调,促进K562细胞增殖。

MMP-2和MMP-9在急性B淋巴细胞白血病中的表达及临床意义

本研究探讨急性B淋巴细胞白血病(B-ALL)患者骨髓细胞中基质金属蛋白酶-2和-9(MMP-2,MMP-9)的表达及临床意义。采用半定量RT-PCR方法检测初治、复发B-ALL患者和正常对照骨髓中单个核细胞MMP-2,MMP-9 mRNA的表达。采用明胶酶谱检测B-ALL患者和正常对照骨髓单个核细胞孵育上清中MMP-2,MMP-9的酶活性。结果表明,初治、复发组B-ALL患者中MMP-2表达率明显高于正常对照组(P<0.05);MMP-9表达率明显低于正常对照组(P<0.05)。髓外浸润组患者MMP-2和MMP-9表达率均明显高于无髓外浸润组(P<0.05),而MMP-2/MMP-9(+)组髓外浸润发生率明显高于MMP-2/MMP-9(-)组。高危组B-ALL患者MMP-9表达率明显高于标危组,而两组间MMP-2表达率无显著性差异(P>0.05)。结论:B-ALL患者白血病细胞可以产生MMP-2,MMP-9,可能参与了B-ALL的髓外浸润,MMP-9表达可能提示预后不良。

重组变构人TNF相关促凋亡配体联合三氧化二砷诱导白血病耐药细胞株凋亡

本研究探讨重组变构人TNF相关促凋亡配体(recombinant mutant human TNF-related apoptosis-inducing ligand,rmhTRAIL)联合三氧化二砷(As2O3)对阿霉素诱导的人慢性髓系白血病红白血病变耐药细胞株K562/AO2(mdr-1+)的促凋亡作用。以亲本阿霉素敏感细胞株K562(mdr-1-)为对照,观察rmhTRAIL作用后细胞形态变化,采用MTT法测定rmhTRAIL、As2O3单药及联合作用后细胞增殖抑制率;碘化丙锭染色的流式细胞术(FACSCalibur)定量检测rmhTRAILL、As2O3单药及联合作用后sub-G1峰占检测细胞的百分比(sub-G1%)。结果表明:rmhTRAIL联合As2O3对K562/AO2和K562增殖的抑制作用优于单药,采用国内金(正均)氏公式判断rmhTRAIL和As2O3联合作用具有协同作用;流式细胞术定量检测sub-G1%显示,rmhTRAIL2 000ng/ml与As2O32μmol/L单独作用下K562/AO2组与K562组凋亡率分别为(34.93±0.10)%、(10.53±0.16)%(p<0.01);(5.95±0.07)%、(3.50±0.01)%(p<0.05),联合作用下细胞凋亡率分别为(50.95±0.91)%、(20.75±0.95)%(p<0.05),K562/AO2组凋亡效应强于K562组。结论:rmhTRAIL可诱导K562、K562/AO2细胞凋亡;rmhTRAIL联合凋亡诱导剂As2O3对白血病耐药细胞株K562/AO2和K562细胞株的凋亡具有协同作用;rmhTRAIL、As2O3对K562/AO2的促凋亡作用优于其亲本K562细胞。

急性白血病患者JAK家族基因的表达及临床意义

目的探讨不同时期急性白血病(AL)细胞中JAKs基因的表达情况及其临床意义。方法将入选患者分为初治组、复发组、完全缓解组(CR组)和正常对照组(NC组),RT-PCR方法检测AL患者和正常对照者骨髓MNC中JAK1～3和TYK2 mRNA的表达。结果(1)AL患者JAK2、JAK3、TYK2 mRNA平均表达水平较CR组和NC组差异有统计学意义(P<0.05)。初治AL患者JAK1 mRNA表达水平较NC组略增高,但差异无统计学(P>0.05),复发AL患者JAK1 mRNA表达水平较NC组差异有统计学意义(P<0.05);(2)TYK2阳性组的AL患者缓解率较TYK2阴性患者差异有统计学意义(P<0.05)。结论JAK家族基因在白血病患者的高表达可能在白血病的发生发展中起重要作用。急性髓性白血病(AML)和急性淋巴细胞白血病(ALL)在激活JAK/STAT信号传导通路的方式有所不同。

急性白血病患者STAT5、SOCS1和PTPRO基因的表达及临床意义

目的探讨STAT5、SOCS1和PTPRO基因在急性白血病(AL)中的表达情况及临床意义。方法将入选患者分为AL初治组、完全缓解组(CR组)和正常对照组(NC组),Syber Green荧光定量PCR方法检测各组骨髓单个核细胞(MNC)中STAT5、SOCS1及PTPRO mRNA的表达。结果 (1)AL初治组STAT5 mRNA表达水平明显高于缓解组(P<0.05),缓解组STAT5表达水平高于正常对照组(P<0.05);(2)AL初治组SOCS1、PTPRO的表达水平低于缓解组(P<0.05),缓解组SOCS1、PTPRO的表达水平低于正常对照组(P<0.05);(3)STAT5、SOCS1、PTPRO基因表达水平中位值分别为0.980、0.838和0.771,根据中位值分为高表达组和低表达组,两组缓解率间差异无统计学意义(P>0.05)。结论 STAT5的高表达及SOCS1和PTPRO的低表达可能在白血病的发生、发展中起重要作用。

血管性血友病因子裂解蛋白酶活性及抑制物检测在获得性血栓性血小板减少性紫癜中的应用

目的探讨血管性血友病因子裂解蛋白酶（ADAMTS 13）活性及抑制物检测在获得性血栓性血小板减少性紫癜（TTP）中的应用价值。方法应用残余胶原结合实验检测2013年1月至2014年12月17例获得性TTP患者的ADAMTS 13活性及抑制物,结合临床资料分析其临床意义。结果 17例患者中包括男3例、女14例,中位年龄49（27-73）岁。全部患者用残余胶原结合实验检测ADAMTS 13活性均降低并伴有抑制物阳性,其中16例（94.1%）ADAMTS 13活性重度降低（〈10%）。17例患者中仅5例出现＂五联征＂,全部患者均有溶血性贫血及血小板减少,查乳酸脱氢酶（LDH）、间接胆红素（IBIL）增高。15例患者送检外周血涂片,10例发现破碎红细胞,6例〉1%。结论获得性TTP诊断缺乏特异性临床表现及实验室指标,残余胶原结合实验检测ADAMTS 13活性及抑制物,方法简便、结果可靠,ADAMTS 13活性重度降低,伴有抑制物阳性可以为获得性TTP的诊断与鉴别诊断提供重要的实验室依据,并为血浆置换联合免疫抑制治疗提供理论基础。

多发性骨髓瘤伴中枢神经系统浸润1例分析

目的:分析1例以头痛、复视等神经系统表现为首发症状的多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)伴中枢神经系统(central nervous system,CNS)弥散性浸润的病例以总结此病例特点,提供临床治疗经验。方法:结合文献对其实验室检查及临床资料进行了分析和总结。结果:患者头痛、复视等神经系统表现为多发性骨髓瘤细胞浸润中枢神经系统所致,与普通浸润不同,本例患者颅内无实质性肿块存在,而为罕见的弥漫性浸润。与文献报道不同,本例患者浆细胞CD56阳性,之前无任何多发性骨髓瘤相关药物治疗病史。对鞘内给药反应良好,而不像文献报道的治疗无效。结论:多发性骨髓瘤中枢神经系统浸润可能存在多样性,免疫学标志及治疗药物作用有可能影响疾病对治疗的反应性,需要进一步观察总结经验。

rmhTRAIL诱导耐阿霉素细胞株K562/A02凋亡及作用机制的实验研究

目的:探讨recombinanat mutant human TNF-related apoptosis -inducing ligand,(rmhTRAIL)对阿霉素诱导的人慢性粒细胞白血病红白血病变耐药细胞株K562/A02(mdr-1+)的促凋亡作用及其机理。方法:以亲本阿霉素敏感细胞株K562(mdr-1-)为对照,观察rmhTRAIL作用后K562、K562/A02细胞形态变化,采用碘化丙啶染色法流式细胞术(FACSCalibur)定量检测细胞sub -G1%, MTT法测定rmhTRAIL对细胞增殖抑制,半定量逆转录-聚合酶链反应(semiquantitative reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)方法检测K562、K562/A02细胞的四种TRAIL受体DcR1、DcR2、DR4、DR5mRNA表达水平。结果:rmhTRAIL可诱导K562、K562/A02细胞凋亡,有典型的细胞形态改变;流式细胞术检测显示K562/A02的sub -G1%大于K562 (P<0.05); rmhTRAIL对K562/A02的增殖抑制作用优于K562 (P<0.05); K562/A02中DR4、DR5mRNA的表达高于K562, DcR1mRNA在K562/A02表达低于K562, DcR2 mRNA在两种细胞中均不表达。结论:rmhTRAIL可以诱导K562/A02细胞凋亡;rmhTRAIL对K562/A02促凋亡和抑制增殖作用优于其亲本细胞K562;K562/A02细胞表面TRAIL死亡受体高表达及诱骗受体低表达可能是耐药细胞更敏感的原因。

HLA全相合供者与亲缘单倍体供者异基因造血干细胞移植治疗输血依赖的非重型再生障碍性贫血效果比较

目的比较HLA全相合供者(human leucocyte antigen-matched donor realated or unrelated donor,HLA-MR/UD)与亲缘单倍相合(haploidentical donor,HID)异基因造血干细胞移植(allogeneic hematopoietic stem cell transplantation,allo-HSCT)治疗输血依赖的非重型再生障碍性贫血(transfusion dependent non-severe aplastic anemia,TD-NSAA)的效果。方法回顾性分析行allo-HSCT治疗的TD-NSAA患者14例的临床资料,根据供者来源分为亲缘单倍体移植组(HID组)和全相合亲缘或无关供者移植组(matched donor realated or unrelated donor,MR/UD组),比较2组植入率、植入时间、移植治疗相关死亡、移植相关并发症、总体生存率等,评价2种方法治疗TD-NSAA中的效果。结果HID组急性移植物抗宿主病(acute graft-versus-host-disease,aGVHD)发生率高于MR/UD组(P<0.05),主要体现在Ⅰ~Ⅱ度aGVHD。2组病史特征、回输造血干细胞计数、造血干细胞植活时间、嵌合状态、移植相关并发症(除外Ⅰ~Ⅱ度aGVHD)、3年总生存率(overal survival,OS)率及无病生存率(disease free survival,DFS)率差异均无统计学意义(P>0.05)。结论HID allo-HSCT与全相合亲缘或无关供者allo-HSCT对TD-NSAA的疗效相当,在骨髓库中或同胞全合中未成功匹配患者可以考虑HID allo-HSCT。

急性髓系白血病患者MMP-2和MMP-9的表达及与髓外浸润的关系

目的 :探讨急性髓系白血病 (AML)患者基质金属蛋白酶 2 , 9(MMP 2 ,MMP 9)的表达及与髓外浸润的关系。方法 :采用半定量RT PCR方法检测了 6 5例AML患者骨髓MMP 2、MMP 9mRNA的表达。采用明胶酶谱检测了 18例AML患者MMP 2、MMP 9的酶活性。结果 :①MMP 2在AML患者中表达率、表达水平均明显高于正常对照组 (P <0 .0 5 ) ;MMP 9表达在各组间差异无统计学意义 (P >0 .0 5 )。②髓外浸润组患者MMP 2和MMP 9表达率、表达水平均明显高于无髓外浸润组 (P <0 .0 5 )。③MMP 2 (+)、MMP 9(+)组髓外浸润发生率明显高于MMP 2 (- )、MMP 9(- )组 (P <0 .0 5 )。结论 :AML患者白血病细胞可以产生MMP 2和MMP 9,是参与AML髓外浸润的重要因素。

SHIP基因真核表达载体的构建、鉴定及对白血病细胞系K562的抑制作用

目的构建真核表达质粒pCAG-IRES-SHIP-GFP,并观察其在K562细胞中的表达。方法将SHIP基因的RT-PCR产物克隆入载体pCAG-IRES-GFP,经酶切、鉴定及测序分析,构建pCAG-IRES-SHIP-GFP重组真核表达质粒。实验设置3个组:K562组(未转染)、K562/IRES组(转染空载体pCAG-IRES-GFP),K562/SHIP组(转染重组质粒pCAG-IRES-SHIP-GFP)。荧光显微镜和流式术检测重组质粒的转染效率;Western blotting检测各组SHIP蛋白的表达及Akt磷酸化水平变化;MTT法和流式术分析SHIP基因转染对细胞增殖的影响。结果重组质粒pCAG-IRES-SHIP-GFP已成功载入SHIP的全长编码基因,序列测定的结果与预期设计完全一致。荧光显微镜在K562/SHIP组可见绿色荧光,转染效率为48.2%±6.6%。Western blotting显示K562/SHIP组有明显的SHIP蛋白表达,且p-Akt-308和p-Akt-473的水平(分别为0.182和0.381)较K562/IRES组(0.361和0.716)和K562组(0.365和0.725)明显下降(P<0.01)。流式术分析显示K562/SHIP组细胞生长减慢,G0/G1期细胞增多、G2/M期细胞减少,增殖指数降低。结论成功构建了3 585bp的SHIP基因真核表达质粒pCAG-IRES-SHIP-GFP,并在K562细胞中表达。外源性SHIP基因转染能使K562细胞增殖受抑,原因可能与Akt的磷酸化下调有关。