老年肝癌患者系统治疗策略

衰老是促进慢性肝病不同阶段发展的主要风险因素,与肝细胞癌的发生密切相关,老年和年轻肝癌患者的临床病理学特征及肿瘤微环境有显著区别。肝癌系统治疗领域发展日新月异,免疫检查点抑制剂联合靶向治疗极大改善了晚期肝癌患者的预后。老年肝癌患者治疗决策的选择需要考虑年龄相关的独特问题,在决策前需进行充分沟通和必要评估。通过大型临床研究的年龄亚组分析,可以推测老年肝癌患者能够从免疫联合治疗中获益,不应将高龄作为治疗策略选择的限制因素。然而,将临床试验中获得的疗效和安全性数据外推到真实世界中的老年人群具有一定局限性,针对老年肝癌患者的最佳诊疗方案仍有待大规模前瞻性临床研究进一步探索。

滨蒿内酯对原代和传代培养豚鼠气道平滑肌细胞内钙的影响

目的探讨滨蒿内酯(scoparone,Scop)对原代及短期传代培养的豚鼠气道平滑肌细胞(airway smooth musclecells,ASMCs)内钙的影响,同时,比较原代与传代ASMCs在形态、生长曲线及内钙释放受Scop及caffeine影响的异同。方法细胞计数法绘制原代及传代培养ASMCs的生长曲线,应用Fluo-3/AM为细胞内Ca2+示踪剂,通过倒置荧光纤维镜观察和记录原代及短期传代培养的ASMCs的细胞形态及其细胞内钙离子浓度([Ca2+]i)的改变。结果原代和传代培养ASMCs的倍增时间分别为(31.89±1.24)h和(22.91±6.82)h,传代培养ASMCs的倍增时间明显缩短(P<0.05),传代培养的ASMCs相对原代培养ASMCs体积增大。在细胞外液无钙条件下,不同浓度的Scop(10-6、10-5、10-4mol.L-1)可降低静息状态下培养的ASMCs的[Ca2+]i,并与给药浓度有关,原代与传代培养的ASMCs比较,对不同浓度的Scop的降钙反应无明显异同(P>0.05);不同浓度咖啡因(caffeine,10-4、10-3、10-2mol.L-1)在10-4mol.L-1Scop存在下,可升高ASMCs的[Ca2+]i,传代培养的ASMCs[Ca2+]i较原代对caffeine的反应下降(P<0.01)。结论Scop可降低培养的ASMCs的[Ca2+]i,并且不受细胞传代影响。短期传代培养的ASMCs相对于原代细胞,形态及内钙释放通道特性发生了改变。

滨蒿内酯对豚鼠肥大细胞释放组胺、类胰蛋白酶及细胞内钙的影响

目的滨蒿内酯(Soparone,Sco.)通过松弛气道平滑肌、清除气道氧自由基、抑制气道炎症等多种途径起到抗炎平喘作用,该实验基于前期所做的研究工作,进一步探讨了Sco对肥大细胞(mast cells,MCs)脱颗粒及其炎症介质的释放作用的影响及可能的调控途径。方法不同浓度的Sco(10-5、10-6和10-7mol/L)分别作用于正常及致敏MCs,并设立正常及致敏MCs的溶剂对照组(control,asthma),比较各组MCs脱颗粒百分数、类胰蛋白酶活力、组胺释放率及MCs细胞内钙([Ca2+])i的变化。结果 1×10-5和1×10-6mol/L Sco.组MCs脱颗粒百分数分别为(39.10±2.81)%和(11.40±2.37)%,明显低于asthma组的(78.90±4.12)%(P<0.05),且以上Sco.组MCs的组胺和类胰蛋白酶释放亦较asthma组显著减少(P<0.05);在无细胞外钙条件下,不同浓度的Sco(10-5、10-6和10-7mol/L)对正常MCs[Ca2+]i的影响分别为(-12.1±2.2)%、(-6.1±2.4)%和(-2.1±0.7)%,对致敏MCs[Ca2+]i的影响分别为(-75.6±2.2)%、(-33.9±2.5)%和(-4.0±0.02)%,相同浓度Sco.对正常组和致敏组MCs[Ca2+]i的降低作用的组间差异有显著性(P<0.05)。结论 Sco.可剂量依赖性抑制豚鼠MCs脱颗粒从而抑制MCs组胺及类胰蛋白酶的释放;Sco.能够抑制豚鼠正常MCs以及致敏MCs[Ca2+]i水平。

小鼠羊膜干细胞的分离与培养

目的探索小鼠羊膜细胞(mAMCs)分离、培养方法及其体外增殖分化的特性。方法应用不同浓度胰蛋白酶及与胶原酶按不同的先后顺序作用小鼠羊膜,并采用不同的细胞接种浓度培养细胞,分别考核最佳的分离及体外培养方案。免疫荧光及免疫组化法鉴定mAMCs的干细胞标志。结果胰蛋白酶消化及与胶原酶合用顺序不同,导致收获上皮细胞与间质细胞的数量和比例明显不同,先用胰蛋白酶消化将得到较多的上皮细胞,反之先用胶原酶消化将得到较多的间质细胞。以不同浓度接种上皮和间质细胞,原代培养2 w后生长曲线可见原代培养的mAMCs在y轴为对数坐标时呈长尾s型曲线。原代培养的上皮和间质细胞有较长的停滞期(2～4 d),指数增长期的细胞倍增时间间质细胞相对上皮细胞短,因此融合期时间间质细胞明显较短。接种浓度对间质细胞的生长曲线影响不大,但对上皮细胞有较大影响。在Chang medium C营养液中原代附壁培养mAMCs OCT3/4及SSEA-1阳性。结论应用0.25%胰蛋白酶及与0.075%胶原酶作用小鼠羊膜,可获得分离的mAMCs,原代培养mAMCs干细胞标志OCT3/4及SSEA-1阳性。

滨蒿内酯对ryanodine介导哮喘豚鼠气道平滑肌细胞内钙释放的抑制作用

目的该实验就滨蒿内酯(Scoparone,Sco)降低气道平滑肌细胞(airway smooth muscle Cells,ASMC)细胞内钙浓度(cytoplasmic Ca2+concentration,[Ca2+]i)的途径及平喘作用的机理进行初步的探讨。方法建立卵蛋白诱导的哮喘豚鼠模型,通过离体豚鼠气管环的舒缩实验和测定培养的ASMCs[Ca2+]i浓度的方法,分析Sco对哮喘豚鼠ryanodine受体介导的内钙释放的影响。结果显示在细胞外含钙或无钙时,预先给予Scoparone可抑制5μmol/L ryanodine引起的正常、哮喘组豚鼠离体气管环收缩反应;Scoparone可明显降低对照组及哮喘组豚鼠原代培养ASMCs[Ca2+]i水平且哮喘组更为明显(P<0.01);Scoparone明显降低原代培养的ASMCs[Ca2+]i对5μmol/L ryanodine的反应性(P<0.01)。结论 Sco明显降低正常和哮喘豚鼠原代培养的ASMCs[Ca2+]i,对后者的作用明显大于前者;Sco对ASMCs的[Ca2+]i降低作用主要是通过抑制细胞内钙释放途径实现的,明显抑制哮喘豚鼠ASMCs ryanodine受体介导的内钙释放。

滨蒿内酯剂量依赖性降低培养的豚鼠气道平滑肌细胞内钙

目的：探讨滨蒿内酯（scoparone，Scop）对原代及短期传代培养的豚鼠气道平滑肌细胞（airway smooth muscle cells，ASMCs）内钙的影响，同时，比较原代与传代ASMCs在形态、生长曲线及对不同工具药反应性等方面的异同性。方法；以酶消化法分离培养ASMCs，应用Fluo-3／AM为细胞内钙离子示踪剂，观察原代及短期传代培养的ASMCs在Scop及其他工具药的作用下细胞内钙离子浓度（[Ca^2＋]i）的改变。

滨蒿内酯对离体大鼠主动脉平滑肌作用的研究

目的 :研究滨蒿内酯 (scoparone ,Scop)对离体大鼠主动脉平滑肌张力的影响。方法 :通过测定离体血管环张力变化 ,观察Scop对主动脉平滑肌的舒张作用及与苯肾上腺素 (PE)、普萘洛尔 (Prop)和氯化钾 (KCl)之间的相互作用。结果 :Scop舒张离体主动脉平滑肌 ,并且对内皮完整 (EC +)标本的舒张作用明显大于去内皮 (EC - )标本 ,半抑制浓度 (IC50 )分别为 (10 0± 0 4 ) μmol/L(CE +)与 (83 2± 0 8) μmol/L(EC - ) (P <0 0 1) ;Scop使PE量效曲线下移 ,呈非竞争性抑制 ,亲和力指数 (PD2 )分别为 4 93± 0 0 5 (EC +)与 2 94± 0 14 (EC - ) ;Prop(1μmol/L)对Scop舒张血管平滑肌作用无影响 ;Scop不能抑制Prop所致血管平滑肌收缩 ;Scop对血管平滑肌的依内钙及依外钙性收缩均有明显抑制作用。结论 :Scop可舒张离体大鼠主动脉平滑肌 ,此作用与内皮细胞的功能有一定关系。

滨蒿内酯对豚鼠气管平滑肌细胞细胞内钙离子浓度的影响

目的 :探讨滨蒿内酯 (Scop)松弛豚鼠气管平滑肌的机制。方法 :进行豚鼠气管平滑肌细胞分离 ,通过负荷钙离子荧光指示剂fluor 3 AM进行 [Ca2 + ]i 测定。结果 :Scop可直接降低豚鼠气管平滑肌 [Ca2 + ]ii,并且能抑制磷酸组织胺 (His)和咖啡因 (caffeine)对气管平滑肌 [Ca2 + ]i 的升高作用。结论

滨蒿内酯对豚鼠哮喘模型平喘作用的研究

目的 :研究滨蒿内酯对豚鼠哮喘模型的平喘作用。方法 :应用组胺与乙酰胆碱引喘法制作豚鼠哮喘模型 ,治疗药物滨蒿内酯采用雾化吸入给药。结果 :滨蒿内酯对药源性哮喘有明显的抑制作用 ,其半数有效剂量 (ED5 0为 85 .11mg/L(n =4) ,且抑制作用与给药的剂量之间呈良好的线性关系 (有剂量依赖性 )。结论 :滨蒿内酯对豚鼠哮喘模型有一定的平喘作用。

藻酸双酯钠改善模型大鼠的胰岛素抵抗和血脂异常(英文)

藻酸双酯钠具有抗凝、抗血栓以及调节血脂等作用,是一种新型的抗动脉粥样硬化药物。但它对糖尿病伴脂代谢异常血症的治疗作用还没有明确。本研究建立糖尿病伴脂代谢异常血症大鼠模型,初步探讨藻酸双酯钠对其血糖和血脂的调节作用。Wistar大鼠高脂饲料喂养1.5个月后尾静脉注射链脲佐菌素。建模成功后,灌胃给予藻酸双酯钠1个月,检测血中血糖、胰岛素和脂质浓度。结果显示,藻酸双酯钠治疗组与糖尿病对照组相比,血中甘油三酯、总胆固醇和低密度脂蛋白明显降低,高密度脂蛋白显著升高,藻酸双酯钠治疗后血糖和胰岛素浓度有所下降,而胰岛素敏感指数比糖尿病对照组明显提高。本研究提示,藻酸双酯钠可以改善糖尿病伴脂代谢异常血症大鼠血脂异常,并提高胰岛素敏感性。

哮喘豚鼠气道平滑肌细胞内钙释放通道的变化

目的检测哮喘豚鼠气道平滑肌细胞(ASMCs)内钙释放通道功能的改变,探讨与支气管哮喘的关系,同时,寻找传代培养ASMCs的方法。方法以Flou-3/AM为细胞内钙离子示踪剂,观察ASMCs在工具药作用下细胞内钙离子浓度([Ca2+]i)的改变。结果①在ASMCs外无钙情况下,不同浓度ryanodine(5×10-5,10-4,2×10-4mol·L-1)作用于原代培养正常与哮喘ASMCs,[Ca2+]i迅速升高,哮喘组明显高于正常组(P<0·01)。10-4mol·L-1的组织胺(hista-mine)作用于原代培养的正常组与哮喘组ASMCs,[Ca2+]i升高无差异(P>0·05)。②传代培养哮喘ASMCs在10-4、2×10-4mol·L-1ryanodine作用下,[Ca2+]i迅速升高,与原代细胞比较无差异(P>0·05)。在浓度为5×10-5mol·L-1时,原代明显高于传代(P<0.01)。哮喘组传代ASMCs对10-4mol·L-1的histamine反应不明显。结论哮喘豚鼠ASMCs内钙释放通道(RyRs)功能升高,特定条件下,哮喘传代细胞仍然保持原代细胞内钙释放通道的特性。

铅对小鼠学习记忆及脑海马细胞内钙库释放的影响

目的探讨铅对小鼠学习记忆和海马细胞内钙库Ca2+释放的影响。方法用水迷宫实验测定小鼠的空间学习记忆能力;采用低浓度胰蛋白酶消化法分离小鼠海马细胞,用IP3敏感钙库和IP3非敏感钙库的特异性拮抗剂肝素和普鲁卡因刺激海马细胞,以弗拉吐(Fura2)作Ca2+荧光探针测定铅对海马细胞[Ca2+]i的影响。结果在水迷宫实验中,结果表明慢性铅暴露可明显损伤仔鼠的空间定位航行能力,损伤程度与饮用铅的浓度成正相关。与对照组比较,25μmol·L-1铅可致分离的小鼠海马细胞在胞外无钙静息状态下[Ca2+]i显著性增高(P<0.05);而30μg·ml-1的三磷酸肌醇(IP3)敏感钙库特异性拮抗剂Heparin和0.1mg·ml-1的非IP3敏感钙库的特异性拮抗剂procaine可拮抗铅引起的海马细胞[Ca2+]i增高。结论慢性铅暴露可致小鼠空间学习记忆能力下降;高水平的铅可促进小鼠海马细胞内IP3敏感和非IP3敏感的两种内质网钙库释放,致海马细胞在胞外无钙静息状态下[Ca2+]i升高。

滨蒿内酯对哮喘豚鼠血清和肺组织匀浆中白细胞介素4与干扰素γ失衡的调节作用(英文)

背景:滨蒿内酯是传统中药茵陈的主要有效成分之一,具有免疫抑制、消炎和舒张支气管平滑肌的作用。滨蒿内酯是否能改善哮喘豚鼠血清及肺组织匀浆中白细胞介素4与干扰素γ(IL-4/IFN-γ)失衡、进而抑制IgE的产生而发挥平喘作用目前尚不清楚。目的:研究滨蒿内酯的平喘作用及其对哮喘豚鼠免疫功能的调节作用。设计:以实验动物为研究对象,随机对照的验证性研究。单位:一所大学的天然药物研究室。材料:实验于2000-07/2002-03在中国医科大学药理教研室完成。选择健康雄性豚鼠84只,体质量200±50)g,清洁级。(干预:分别采用10g/L组胺与1g/L乙酰胆碱混合液引喘及10mL/L卵蛋白致敏复制法制备急性和迟发性哮喘豚鼠模型,采用雾化吸入途径给予滨蒿内酯药治疗,观察引喘潜伏期,并分别采用化学发光法、放免法和双抗夹心法检测迟发性哮喘豚鼠血清及肺组织匀浆中IgE,IL-4和IFN-γ的含量。主要观察指标:引喘潜伏期以及实验动物血清及肺组织匀浆中IgE,IL-4和IFN-γ含量。结果:滨蒿内酯明显延长急性和迟发性哮喘引喘潜伏期,哮喘组豚鼠血清及肺组织匀浆中IgE,IL-4含量较对照组明显增加(P<0.05),IFN-γ含量明显降低(P<0.05);而滨蒿内酯组IgE水平及IL-4含量较哮喘组豚鼠显著降低(P<0.05),IFN-γ的含量则明显升高(P<0.05)。结论:滨?

C-反应蛋白与老年糖尿病周围神经病变的关系

目的探讨2型糖尿病(T2DM)患者血清C反应蛋白(CRP)与周围神经病变的发生是否相关。方法选择在本院住院治疗的135例T2DM患者,均予肌电图检测左右胫神经的H反射潜伏期数值,将H反射>35 m s者归入有周围神经病变组(A组),H反射<35 m s者归入无神经病变组(B组)。检测并比较两组的血清CRP水平、血糖水平及其他临床生化参数。结果 A组CRP和HbA1 c水平均明显高于B组(P<0.05);两组FPG和PPG水平比较无显著性差异(P>0.05);CRP与H反射呈正相关(r=0.42,P<0.05);HbA1 c与H反射亦呈正相关(r=0.68,P<0.05)。结论长期高血糖状态是T2DM周围神经病变的最主要原因,而CRP在T2DM周围神经病变的发生发展中同样具有重要作用。

兰尼碱受体mRNA在哮喘豚鼠气道平滑肌细胞中表达的改变

目的明确兰尼碱受体(RyR)与哮喘发病的关系,为哮喘的防治提供一条新的途径。方法以酶消化法分离培养正常与哮喘豚鼠气道平滑肌细胞(ASMCs),应用RT-PCR方法测定每组细胞RyR各亚型RyR1,RyR2和RyR3的mRNA表达。结果正常与哮喘豚鼠ASMCs中,RyR1和RyR2的mRNA均见表达,未见RyR3mRNA的表达,并以表达RyR2mRNA为主。哮喘时,RyR1和RyR2的mRNA相对吸光度值分别为0.43±0.05和1.5±0.6,明显高于正常组RyR1mRNA的吸光度值0.34±0.03(n=6,P<0.01)。结论RyR1mRNA表达上调可能与哮喘发病相关。

老年2型糖尿病患者颈动脉内膜中层厚度与血清超敏C-反应蛋白的相关性

目的探讨老年2型糖尿病患(T2DM)者者颈动脉内膜中层厚度(IMT)与血清超敏C-反应蛋白(HS-CRP)的相关性。方法选择64例老年T2DM患者,其中IMT增厚组34例和IMT正常组30例,另选取30名健康老年人作为对照组。采用免疫浊度法检测入选者HS-CRP水平,彩色超声多普勒测量颈动脉IMT,并对结果进行相关性分析。结果 T2DM组HS-CRP和IMT分别为(4.02±0.42)mg/L、(0.87±0.15)mm,明显高于对照组(3.07±0.38)mg/L和(0.66±0.13)mm,差异有显著性(P<0.05)。IMT增厚组HS-CRP为(4.16±0.33)mg/L明显高于IMT正常组(3.86±0.31)mg/L,差异有显著性(P<0.05)。相关性分析显示与IMT呈正相关(r=0.358,P<0.05)。结论血清HS-CRP增高可能是老年T2DM患者早期动脉粥样硬化的危险因素之一。检测HS-CRP与IMT对及早发现糖尿病(DM)大血管病变有重要的临床意义。

用Fura-2双波长荧光法测定小鼠海马细胞内游离钙

目的:探讨小鼠海马细胞分离及细胞内钙离子浓度([Ca2+]i)的测定。方法:低浓度胰蛋白酶消化、分离海马细胞,采用Ca2+荧光指示剂Fura2双波长荧光法测定[Ca2+]i。结果:海马细胞存活率超过95%。细胞外Ca2+1.0mmol/L时,静息状态下海马细胞[Ca2+]i为(210±10.7)nmol/L。30mmol/LKCl可显著增加[Ca2+]i,并且KCl的这种效应呈一定的剂量依赖关系。结论:低浓度胰蛋白酶消化分离小鼠海马细胞简单、可靠;Fura2建立的双波长荧光法灵敏、可靠。

二甲双胍对2型糖尿病大鼠降脂作用的研究

目的观察二甲双胍(Met)对2型糖尿病大鼠糖代谢、脂代谢的影响,探讨其可能的作用机理。方法制备食饵性高脂2型糖尿病大鼠模型,洛伐他汀(Lov)为阳性对照药物,观察二甲双胍对2型糖尿病大鼠血糖、血脂的影响。结果与Lov组相比Met组有明显降低空腹胰岛素,改善胰岛素抵抗的作用;与DM组相比,Met及Lov均可明显降低2型糖尿病伴高血脂大鼠TC、TC、LDL-C水平,升高HDL-C水平。结论 Met可明显降低2型糖尿病伴高血脂大鼠血糖,也可明显降低空腹胰岛素水平,改善胰岛素抵抗;Met能明显改善2型糖尿病伴高血脂大鼠脂质代谢紊乱。