基于光镜表型的促神经元亚型分化药物初筛法

目的:建立基于光镜表型的促胚胎干(embryonic stem,ES)细胞神经元亚型分化药物筛选法,供早期发现促神经再生药初筛用。方法:采用悬滴培养4-/4+法,形成拟胚体,继而贴壁培养向神经细胞分化,光镜确认表型呈神经元样的基础上进一步评价各类亚型。以10-7mol/L异补骨脂甲素(Isobavachin,IBA)和10-6mol/L淫羊藿苷(Icariin,ICA)为例,分化终点以光镜下轴突为胞体三倍长以上者为神经元样细胞,继续以免疫荧光成像法确认神经元(β-tubulinⅢ阳染),并进一步以特异性抗体(ChAT、GABA)阳染共定位鉴别相应神经元亚型。结果:基于光镜表型评价,在分化终点即可剔除轴突分化不全的细胞,取代了以往免疫荧光成像所需的人力、物力与时间;并避免进一步ELISA或流式细胞术评价的假阳性。光镜显示IBA处理者大部分显示神经元样表型,而ICA处理的细胞却不然,免疫荧光成像结果与此相一致。因此,仅对IBA处理的神经元做亚型鉴定,显示胆碱能神经元以及γ-氨基丁酸能神经元亚型。结论:基于光镜表型的促神经元分化初筛法在化合物促神经元亚型分化上具有简便易行、节约物力与时间,避免假阳性的独到之处;经该法初筛后供后续研究,可见IBA具有促胆碱能和γ-氨基丁酸能神经元分化活性。

贝伐珠单抗在我院抗肿瘤治疗中的应用分析

目的:了解贝伐珠单抗在抗肿瘤治疗中的应用情况,以促进该药的临床合理使用。方法:回顾性收集2011年1月-2015年12月我院接受贝伐珠单抗治疗的265例肿瘤患者的病历资料,对患者的肿瘤类型、贝伐珠单抗的临床地位、治疗方案、用药次数、治疗周期进行统计和分析,计算主成分参数并进行主成分分析和聚类分析。结果:265例患者共涉及18类恶性肿瘤,以结直肠癌(48.68%)、卵巢癌(20.75%)、肺癌(9.43%)为主;贝伐珠单抗抗肿瘤治疗用于一线、二线、三线的比例分别为10.28%、26.39%、23.61%;其肿瘤治疗涉及肿瘤类型主要为结直肠癌、卵巢癌、肺癌;其抗肿瘤治疗的肿瘤类型可聚为4类,结直肠癌为一类,卵巢癌为一类,肺癌为一类,其他为一类。贝伐珠单抗与化疗药物联用方案有347例次(90.84%),贝伐珠单抗单用方案有35例次(9.16%);在贝伐珠单抗与化疗药物联用方案中,以与含氟尿嘧啶等抗代谢类药物联用(50.54%)、与含紫杉类药物联用(18.05%)、与铂类药物联用(16.50%)为主。有1例患者最多使用了69次贝伐珠单抗,有44例患者各使用了1次;有1例次治疗了51个周期,有85例次治疗了1个周期,以治疗1~4个周期最为常见。结论:贝伐珠单抗作为首个上市的抗血管生成药物,在临床恶性肿瘤(实体瘤)的治疗中具有一定的地位,已成为结直肠癌、卵巢癌和肺癌的一线治疗药物,但由于其药理作用的局限性,该药与化疗药物的联用仍是主要方向。

基于GEO数据库的近端与远端结肠癌特征基因生物信息学研究

目的:通过分析近端与远端结直肠癌的差异基因集和其集中的关键通路,区分不同部位结肠癌的分子表达特征基因谱。方法:利用GEO数据库中高通量基因芯片数据筛选出具有结肠癌患者肿瘤部位近远端信息的芯片。采用GO基因功能注释和KEGG通路富集分析,筛选出可表征远端与近端结肠癌生物特性的特征基因簇和通路,并进行蛋白质相互作用网络可视化分析。结果:经差异基因分析后,发现不同部位结肠癌基因表达具有显著差异,且主要存在于一些重要的肿瘤相关信号通路,如Wnt信号通路,细胞外基质相关通路和免疫调控通路等。结论:本文利用生物信息学方法,从多种角度定义了近端和远端结肠癌的差异分子表达特征,为结肠癌的精准治疗提供理论依据。

基于生物信息学的未分化甲状腺癌关键发病机制及其潜在干预靶点研究

目的:阐明未分化型甲状腺癌(ATC)的分子病理状态,并挖掘其潜在的干预策略。方法:利用GEO数据库联合R语言分析ATC组织与正常甲状腺组织差异表达的基因;利用京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路数据库和基因本体(GO)数据库对差异表达的基因进行富集和功能注释;基于STRING数据库及Cytoscape软件构建蛋白质相互作用网络,分析其关键网络节点和基因簇;最后采用L1000CDS2数据库预测ATC的潜在治疗药物。结果:共获得2087个差异表达基因。与正常甲状腺组织相比,ATC组织细胞内信号通路及肿瘤微环境均发生显著改变,包括PI3K-Akt信号的持续激活、p53通路的激活、炎症反应、细胞外基质重塑等。蛋白质相互作用网络提示存在3个重要的基因簇和9个关键节点。将差异表达基因与L1000CDS2数据库进行比对后发现22个能够逆转ATC病理状态的潜在化合物。结论:本研究揭示了ATC发病机制中的关键节点,为ATC的治疗提供了潜在的靶点。

甲状腺未分化癌治疗研究进展:免疫疗法与分子靶向治疗

甲状腺未分化癌(ATC)是恶性程度最高的内分泌系统肿瘤之一,目前尚无有效的治疗手段。针对肿瘤免疫微环境和肿瘤细胞的分子靶向药物是治疗ATC的潜在有效策略。ATC的分子靶向治疗研究主要以抑制肿瘤血管新生及肿瘤细胞增殖为主,其中酪氨酸激酶抑制药作为极具潜力的靶向药物,已经在Ⅱ期临床试验中进行过测试或正在进行评估。另一方面,靶向ATC肿瘤免疫微环境的药物主要集中于靶向切断肿瘤细胞与肿瘤相关巨噬细胞的联系、针对肿瘤新抗原或特异性抗原设计的疫苗以及免疫检查点抑制剂。这些策略为ATC的治疗提供了新思路,本文对以上领域的研究进展进行综述,以期为ATC的治疗提供线索。

缺血性脑损伤大鼠外周血动态共表达网络分析

目的:研究大脑中动脉栓塞(MCAO)大鼠不同造模时程外周血的特异表达基因及特征共表达网络模块。方法:利用GEO数据库的基因表达谱芯片GSE119121联合R语言分析MCAO造模后不同时间点(0、1、2、3、6及24 h)外周血的差异表达基因。通过STEM工具筛选不同造模时程基因表达模式。利用基因本体(GO)数据库和京都基因与基因组百科全书(KEGG)数据库对差异表达的基因进行功能注释和通路富集。在R语言环境下利用CEMiTool包对基因表达谱矩阵进行共表达网络构建及模块分析,并将模块与不同造模时间点进行富集分析。结果:与造模0 h相比,造模后1、2、3、6及24 h差异表达基因数分别为163、502、527、550、75。共有38种基因表达模式被富集,其中模式65和模式34分别在2~6 h特异上调或下调,Hp、Nos2、P2ry10及Klf12为两种模式的代表性基因。共表达网络模块分析显示,造模急性期早期(1~6 h)基因状态与模块2正相关,造模1~3 h基因状态与模块3正相关,造模2~6 h基因变化与模块4正相关。基因模块6随着造模时间的迁移,与各时间点从正相关(0~2 h)逐渐转为负相关(3~24 h),模块6主要与病毒应答及固有免疫应答相关,其网络核心节点包括Mx1、Mx2、Rtp4等基因。结论:本研究初步筛选了缺血性脑卒中急性发病期大鼠外周血的特征基因及动态共表达网络模块,为探究缺血性脑卒中的病理生理变化规律提供了依据。

白藜芦醇通过上调miR-186-5p表达抑制肝癌细胞迁移、侵袭和上皮-间质转化

目的:探讨白藜芦醇抑制肝癌细胞转移的分子机制。方法:利用CCK-8法检测白藜芦醇对肝癌细胞HepG2和Huh7存活率的影响,筛选后续实验适合的浓度;实时定量RT-PCR检测肝癌组织和肝癌细胞中miR-186-5p的表达;细胞划痕实验、Transwell小室实验和蛋白质印迹法分别检测白藜芦醇或miR-186-5p表达变化对肝癌细胞HepG2和Huh7迁移、侵袭和上皮-间质转化相关蛋白表达的影响。结果:6.25μmol/L白藜芦醇对肝癌细胞HepG2和Huh7的存活率无显著影响,遂后续实验中白藜芦醇的浓度选择6.25μmol/L。实验结果显示,白藜芦醇可以抑制肝癌细胞的迁移和侵袭,并增加上皮钙黏素表达,降低波形蛋白和Twist1表达(均P<0.05).与癌旁组织和正常肝细胞相比,肝癌组织和肝癌细胞中miR-186-5p表达均下调(均P<0.05).白藜芦醇能诱导肝癌细胞中miR-186-5p的表达(均P<0.01)。上调miR-186-5p表达可显著抑制肝癌细胞的迁移、侵袭和上皮-间质转化(均P<0.05),而敲低miR-186-5p表达能阻断白藜芦醇对肝癌细胞迁移、侵袭和上皮-间质转化的抑制作用。结论:白藜芦醇能体外抑制肝癌转移,其机制可能与上调miR-186-5p表达有关。

抗肿瘤生物类似药的监管现状与前景展望

近年来,生物医药快速发展,在肿瘤等临床疾病治疗中发挥着越来越重要的作用。随着众多生物原研药的专利到期,生物类似药的研发备受关注。欧洲、美国和世界卫生组织等地区和国际组织相继出台系列政策法规和技术原则,以期为生物类似药的研发和上市提供标准和规范。为指导生物类似药的进一步发展,2015年,我国颁布了《生物类似药研发与评价技术指导原则(试行)》。本文对各个国家和地区生物类似药的政策法规进行梳理,并在此基础上进一步探讨抗肿瘤生物类似药的发展前景。

桥本甲状腺炎与甲状腺癌关系的研究进展

近年来,桥本甲状腺炎(HT)和甲状腺癌尤其是甲状腺乳头状癌(PTC)的发病率均呈上升趋势。HT与甲状腺癌发病的关系尚不明确。有免疫机制研究发现,HT可影响PTC的肿瘤免疫微环境,改善预后。内分泌研究发现,长期HT引起促甲状腺激素升高是PTC发生发展的危险因素。一些共同的分子标志物在HT和PTC患者血清和组织标本中均呈高表达,与在其他甲状腺疾病中的表达差异明显。合并HT的PTC患者具有特定的临床特征。本文对HT与甲状腺癌关系的研究进展进行综述。

甲状腺未分化癌免疫治疗的现状及未来

甲状腺未分化癌(ATC)是恶性程度最高的内分泌系统肿瘤,是当前亟待攻克的医学难题。目前,针对ATC的免疫治疗研究主要包括阻断肿瘤相关巨噬细胞(TAM)的招募、诱导TAM重编程以及恢复其吞噬功能;靶向T淋巴细胞及自然杀伤细胞的相关免疫逃逸检查点;基于溶瘤病毒和树突状细胞的肿瘤疫苗以及过继免疫治疗。其中,以靶向阻断免疫检查点程序性死亡蛋白1/程序性死亡蛋白配体1为代表的免疫治疗策略已初步证实对ATC患者有获益,尤其是分子靶向抑制剂联合免疫治疗具有极佳的治疗效果。由于ATC存在极大的异质性,针对ATC开展包括生物、免疫或细胞治疗等多种免疫治疗研究,并探索下一代免疫检查点抑制剂对ATC的治疗潜力,有望为ATC患者提供更丰富的治疗策略。本文综述了ATC的免疫治疗潜在靶点以及相关的免疫疗法进展。

MAD2L1/CAMK2A/PTTG1基因簇失调维持子宫内膜癌干性特征

目的研究子宫内膜癌(UCEC)的干性特征及潜在调控机制。方法从癌症基因组图谱数据库中获取UCEC转录组测序数据。在R3.5.1环境下,采用edgeR包对基因表达谱进行标准化。基于一类逻辑回归机器学习算法计算各UCEC样本的mRNA干性指数(mRNAsi)。采用survival包和survminer包计算mRNAsi和候选基因的预后意义。基于高频子通路挖掘算法(HiFreSP)对差异基因进行子通路预后识别。通过WGCNA包构建基因共表达网络,分析关键基因模块。利用clusterProfiler包进行功能注释及通路富集分析。利用人类蛋白图谱数据库进行免疫组织化学验证。结果UCEC样本mRNAsi显著高于正常组织(t=25.095,P<0.001),分化程度越低,mRNAsi越高,mRNAsi随肿瘤分期逐渐上调。预后分析表明,mRNAsi评分越高,UCEC患者总生存期越短(χ^(2)=6.864,P=0.0088),mRNAsi高低组别之间存在570个特异变化差异基因。通过HiFreSP算法富集并识别出卵母细胞减数分裂的子通路及细胞周期子通路具有显著预后意义。这些通路共包含MAD2L1、CAMK2A、PTTG1、PLK1、CCNE1、CCNE2、ESPL1、CDC20、CCNB1、CCNB2、SMC1B等11个差异基因,均与患者预后显著相关。基因共表达网络分析结果显示,mRNAsi与3个基因模块密切相关,MAD2L1、CAMK2A、PTTG1也分别与上述模块高度相关。免疫组织化学结果表明,MAD2L1及PTTG1在UCEC组织中高表达,而CAMK2A在UCEC中下调,该趋势与转录组测序结果一致。结论本研究基于机器学习刻画了UCEC的干性特征,识别预后相关子通路,并发现MAD2L1、CAMK2A、PTTG1等基因簇与UCEC的干性特征密切相关,为揭示UCEC干性特征调控机制及发现潜在治疗靶点提供线索。

60kg级钢板控轧控冷工艺分析

介绍了Nb，V复合微合金化生产60公斤级低合金高强度钢板的控制轧制（CR），控制轧制与控制冷却（CCR）工艺，通过几种轧制工艺的对比分析。找出最佳的控制轧制与控制冷却生产工艺，来保证钢板的综合性能。

头颈部鳞癌转录因子调控网络及潜在靶点研究

目的:研究头颈部鳞癌(HNSCC)的转录因子调控网络及潜在关键靶点。方法:利用基因表达综合数据库(GEO)联合GEO2R在线工具分析HNSCC与正常黏膜组织的基因表达差异;利用Clue GO进行差异基因功能注释及通路相互作用网络构建;基于相互作用基因/蛋白检索工具(STRING)数据库及Cytoscape软件构建蛋白-蛋白相互作用(PPI)网络,分析其关键网络节点和基因簇,并利用iRegulon插件进行转录因子调控网络构建并筛选关键转录因子;利用Kaplan-Meier Plotter分析关键转录因子与HNSCC患者预后相关性。结果:和正常黏膜组织相比,HNSCC组织共有168个基因(66个上调,102个下调)发生显著变化。这些差异基因与细胞外基质分解、胞外基质重塑、IL-17信号通路、胶原代谢过程、胞外基质-受体相互作用、细胞基质黏附的调控以及平滑肌细胞迁移调控等重要信号相关。蛋白-蛋白相互作用网络分析共筛选出两个关键基因簇。其中degree值排名前五网络节点MMP9,COL1A1,COL3A1,COL1A2,SPP1均聚集于基因簇2,且与胞外基质重塑或胞外基质-受体相互作用有关,但在HNSCC中的作用研究甚少。进一步针对上调及下调差异基因的转录因子调控网络分析共筛选出14个转录因子,其中仅有4个转录因子在HNSCC研究中有报道。Kaplan-Meier Plotter分析显示6个转录因子与HNSCC患者预后显著相关,另外4个转录因子与预后的相关性与患者性别相关。结论:本研究综合多种生物信息学手段揭示HNSCC发生发展的潜在转录因子调控网络,挖掘该网络中的关键基因簇及节点,并预测其与患者预后相关性,为HNSCC的发病机制及潜在治疗靶点发现提供理论依据。

清肺口服液在特发性肺纤维化中的治疗作用及网络药理学研究

目的:考察清肺口服液在特发性肺纤维化中的治疗作用及机制。方法:72只SD大鼠分为正常对照组、模型对照组、吡非尼酮组(给予吡非尼酮50 mg·kg–1·次–1,每天2次)、清肺口服液组(给予清肺口服液3.6 mL/kg,每天1次)处理21 d,获取肺组织进行HE染色、马森染色和转化生长因子-β(TGF-β)免疫组织化学染色,其余组织进行匀浆后检测超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)和谷胱苷肽(GSH)。采用网络药理学方法,利用BATMAN-TCM数据库检索清肺口服液组成药物的化学成分及其对应靶点,随后构建成分-靶点-疾病网络图,进行通路富集分析。结果:组织病理学结果提示,清肺口服液给药后可改善肺纤维化状态,且效果与吡非尼酮类似;清肺口服液可减少肺组织TGF-β表达,对SOD、MDA和GSH也有调控作用。成分-靶点-疾病网络构建及基因功能注释结果显示,清肺口服液与调控炎症、细胞外基质和细胞因子等通路相关。结论:清肺口服液可能通过调控炎症等信号通路发挥抗特发性肺纤维化作用。

基于生物信息学分析转录因子HLF及KLF7在头颈部鳞癌进展过程的表达及预后意义

目的:通过生物信息学手段筛选驱动头颈部鳞癌(HNSCC)进展的潜在关键转录因子,分析其表达特征及预后意义。方法:从癌症基因组图谱数据库获取HNSCC转录组测序数据,筛选不同分期肿瘤组织与正常黏膜组织的差异转录因子。通过STEM工具分析差异转录因子在HNSCC进展过程的表达模式。在R3.5.1环境下,利用survival包和survminer包计算差异转录因子的预后意义。最后利用人类蛋白图谱数据库对候选转录因子进行免疫组化验证,并通过基因集富集分析挖掘与转录因子密切相关的通路。结果:和正常组织相比,HNSCC各分期的差异转录因子分别为172(Ⅰ期),272(Ⅱ期),272(Ⅲ期),307(Ⅳ期),各分期共有差异转录因子为7个。其中HLF及KLF7等5个差异转录因子与HNSCC患者预后显著相关。免疫组化结果显示,上述转录因子表达趋势均与转录组测序结果一致,其中HLF在HNSCC 4个分期表达均显著下调,而KLF7则呈现相反趋势。基因集富集分析显示,HLF表达下调可显著激活细胞外基质分解及对Ⅰ型干扰素的反应等生物进程;KLF7高表达时,角质形成细胞增殖、细胞-基质连接组件等生物进程显著激活。结论:HLF及KLF7等转录因子表达失调与HNSCC分期及患者预后密切相关,并潜在参与驱动HNSCC的恶性进展。

天然药物成分干预铁死亡抑制肿瘤的作用研究进展

铁死亡是一种铁依赖的程序性死亡,不同于传统的细胞死亡方式(如凋亡、焦亡、坏死、自噬),其特征是活性氧诱导脂质过氧化物堆积。铁死亡在肿瘤发生发展中发挥着重要的调控作用。最新研究表明,天然药物成分可通过谷胱甘肽/谷胱甘肽过氧化物酶4途径、铁代谢、脂质代谢等调控机制诱导肿瘤细胞铁死亡。研究发现了30多种天然药物成分具有诱导肿瘤细胞铁死亡的作用,且有多通路、多靶点的特点。本文综述了天然药物成分通过干预铁死亡抑制肿瘤的作用研究进展。

基于GEO数据库的HPV阳性口咽癌特征基因生物信息学研究

目的通过分析HPV阳性与阴性口咽癌患者基因芯片数据,寻找差异基因及其关键通路,区分不同HPV感染状态下口咽癌的分子表达特征基因谱。方法利用GEO数据库中高通量基因芯片数据库筛选出口咽癌患者具有HPV感染状态信息的芯片。采用GO基因功能注释和KEGG通路富集分析,筛选出可表征不同HPV感染状态口咽癌生物特性的特征基因簇和通路,并进行蛋白质相互作用网络可视化分析。结果经差异基因分析后,发现HPV感染状态可影响口咽癌的生物学特征,并显著改变一些重要的肿瘤信号通路,如Wnt信号通路和PI3K-Akt信号通路等。结论本研究利用生物信息学方法,从多种角度定义了口咽癌不同HPV感染状态下的分子表达特征,为口咽癌的精准治疗提供理论依据。

川芎嗪诱导小鼠肝药酶Cyp3a11的作用及其机制研究

目的考察川芎嗪对小鼠肝药物代谢酶Cyp3a11(CYP3A4同源基因)的作用及相关机制。方法 24只8周龄C57BL/6小鼠随机分为对照组和川芎嗪低、中、高剂量(25,50,100 mg·kg-1)组,连续灌胃给药15 d。以RT-PCR法检测肝脏Cyp3a11m RNA表达。采用差速离心法提取肝微粒体,以Cyp3a11经典底物咪达唑仑进行孵育,HPLC-MS/MS检测肝脏Cyp3a11活性。以双荧光报告基因法分析川芎嗪对CYP3A4转录活性的影响。结果川芎嗪可诱导小鼠肝脏中Cyp3a11的m RNA表达,且诱导作用呈剂量依赖性增加。高剂量组可诱导Cyp3a11的代谢活性升高。川芎嗪可通过核受体PXR途径激活CYP3A4启动子转录活性。结论川芎嗪对CYP3A4同源基因Cyp3a11的表达和活性具有一定的诱导作用,提示在临床使用过程中可能存在潜在的药物相互作用风险。

基于生物信息学的未分化甲状腺癌恶性机制研究

目的阐明未分化甲状腺癌(anaplastic thyroid carcinoma,ATC)与分化型甲状腺癌的分子通路差异,揭示ATC的恶性机制。方法利用GEO数据库联合R语言分析ATC与乳头状甲状腺癌(papillary thyroid cancer,PTC)肿瘤组织的基因表达差异,以及ATC、PTC与正常甲状腺组织的共有差异基因;基于STRING数据库及Cytoscape软件构建蛋白-蛋白相互作用(PPI)网络,分析其关键网络节点和基因簇,并利用KEGG、DAVID数据库及ClueGO插件进行基因功能富集及注释。最后,利用RT-PCR检测关键节点在不同甲状腺癌细胞株中的表达差异。结果和正常甲状腺组织相比,ATC和PTC存在775个共同差异基因,通路富集于PI3K-Akt信号通路、p53通路、肿瘤通路、细胞周期等与调控肿瘤发生发展相关的经典通路,以及炎症反应、胞外基质重塑、免疫反应、血管新生等肿瘤微环境相关通路改变。进一步筛选ATC和PTC差异基因发现,与PTC相比,ATC组织中p53通路、PI3K-Akt信号通路、胞外基质-受体相互作用、细胞周期、蛋白消化及吸收、吞噬体、补体途径等肿瘤关键通路显著激活。研究通过构建PPI网络并分析出3个关键基因簇,其功能主要与细胞周期、双链修复、细胞趋化、蛋白泛素化等重要生物进程相关。其中,TOP2A、IL8、UBE2S是各基因簇的关键节点,并与甲状腺恶性演进潜在相关。结论研究利用生物信息学发现ATC发生发展的潜在分子机制网络,并揭示该网络中的关键基因簇及节点,为ATC的恶性机制及潜在治疗靶点提供理论依据。

外泌体在头颈部鳞癌中的研究进展

外泌体是一种携带多种生物活性物质的膜性囊泡,在介导肿瘤细胞-肿瘤细胞及肿瘤细胞-肿瘤微环境之间信息传递过程扮演重要角色。外泌体通过多种途径参与肿瘤发生发展,其在临床诊断和治疗方面也具有重要研究价值。全文对外泌体与头颈部鳞癌恶性进展、肿瘤微环境、耐药的关系及其在头颈部鳞癌诊断与治疗中的研究进展进行综述,以期为寻找头颈部鳞癌诊治新靶点提供线索。