核黄素启动植物生长信号通路的初步研究

报道了核黄素促进植物生长的效应及分子反应。在实验室内对 7种粮食、蔬菜和经济作物使用核黄素后 ,植物生长量增加 2 3 8%～ 85 4 %。在田间试验中 ,烟草使用核黄素后 ,生长量提高 35 9%～ 10 8% ,烤烟叶产量提高 4 4 7%～110 3%。在拟南芥上 ,核黄素处理可以诱导PR 3b、PDF1 2、ETR1和EIN2基因的表达 ;PR 3b和PDF1 2是乙烯信号通路的分子标志 ,乙烯 /茉莉酸信号传导可以调控植物生长发育 ;ETR1和EIN2是乙烯信号通路上、下游的关键调控基因 ,其产物分别作为乙烯的受体和转录调控因子起作用。根据以上这些结果 ,核黄素启动了植物生长信号传导通路的分子反应 。

Harpin_(xoo)多克隆抗体制备、鉴定与应用

以纯化harpinxoo蛋白为抗原免疫新西兰白兔,制备兔抗harpinxoo蛋白的多克隆抗体,经ELISA法测定抗体效价为1∶2000,经亲和层析纯化,Westernblot分析制备抗体与原核细胞体外表达的harpinxoo蛋白可以特异性结合,表明该抗体的特异性良好。应用该抗体验证harpinxoo编码基因在转基因水稻中在翻译水平的正常表达。因此,兔抗harpinxoo抗体的成功制备,为进一步深入研究harpinxoo的生物学功能、细胞定位以及在其它植物中的表达等奠定基础。

水稻白叶枯病菌(Xanthomonas oryzae pv.oryzae)化学诱变hrp基因突变体及相关性状的研究

硫酸二乙酯 (diethyl sulfate,DES)化学诱变水稻白叶枯病菌 (Xanthomonas oryzae pv. oryzae,Xoo)日本系统 号小种 (JXO ) ,获得 16株 hrp-突变体 ,其在感病寄主水稻 IR2 6、汕优 6 3上失去致病性和在非寄主烟草上失去过敏反应。所得的 hrp-突变体并无黄色素缺失现象。16株 hrp-突变体的淀粉酶、果胶酶、蛋白酶、纤维素酶和脂酶等胞外酶活性基本与野生型一致。 JCM2 0 92、JCM2 2 11、JCM2 2 5 2和 JCM2 4 5 7这 4株 hrp-突变体为 型泌出通道突变体 ,JCM0 0 6 6等另 12株 hrp-突变体的超声波破碎液、离心上清液中无激发 HR的信号物质存在。细胞组分分析表明 ,激发烟草 HR的信号物质不是 L PS而是蛋白类物质。来自 JXO 基因文库 hrp基因克隆 p UHRX2 4 5中的 1.1kb Sac I-Kpn I片段 ,能够互补 hrp-突变体 JCM0 0 6 6和 JCM2 4 82 ,使其恢复在烟草上激发 HR的能力 ,但不能恢复其致病性。

水稻白叶枯病菌及其毒素引起烟草叶片组织坏死机制的研究

水稻白叶枯病菌ＪＸＯＩＩ细胞悬浮液及其分泌的毒素溶液接种到烟草叶片中，都能在烟草叶片上产生快速的坏死反应。引起坏死反应所需的最短时间分别为接种后８ｈ和０．５ｈ。低浓度的ＪＸＯＩＩ（＜１０７ｃｆｕ／ｍｌ）接种后３６～４８ｈ内形成褪绿斑，而低浓度的毒素（＜２．５ｍｇ／ｍｌ）接种后随时间延长在接点无任何可见变化。依文斯蓝（Ｅｖａｎｓｂｌｕｅ）染色发现，毒素和ＪＸＯＩＩ分别在接种后０．５ｈ和６ｈ内细胞大量死亡。叶圆片法测定表明，接种毒素后２ｈ内烟草细胞膜透性迅速上升，接种ＪＸＯＩＩ后９ｈ细胞膜透性开始明显上升。毒素处理的烟草叶片中ＬＯＸ、ＰＯＸ、ＳＯＤ、ＣＡＴ活性水平较对照降低，而ＪＸ－ＯＩＩ处理中上述酶活性较对照有不同程度的增加。蛋白质合成抑制剂环己酰亚胺，ＲＮＡ合成抑制剂放线菌素Ｄ和钙离子通道阻断剂氯化镧分别以７．１×１０－５Ｍ、１×１０－４Ｍ和１×１０－３Ｍ浓度有效地抑制ＪＸＯＩＩ在烟草上形成坏死反应，这些抑制剂对毒素在烟草上的坏死反应则没有影响。

产抗菌蛋白芽孢杆菌的筛选及抗菌蛋白性质

对小麦赤霉病菌（ＪＦ－１２）有拮抗作用的７６个芽孢杆菌菌株中有３０个能产生抗菌物质。根据无细胞培养滤液对氯仿和热处理的稳定性将３０个菌株分成三类。属于类型Ⅰ的１４个菌株中，Ｂ３、Ａｎｔ－２７和Ａｎｔ－６４的抗菌物质可以被８０％饱和度硫酸铵沉淀，不能通过透析膜。Ｂ３的粗提抗菌蛋白对胰蛋白酶、蛋白酶Ｋ和ＲＮＡ酶均不敏感；在ｐＨ５．０～１０．０范围内，抑菌活性与对照无显著差别；热处理（６０℃／３０ｍｉｎ、１２０℃／１０ｍｉｎ和１２０℃／３０ｍｉｎ）后对小麦赤霉病菌和小麦纹枯病菌的抑菌活性无显著改变，但对水稻白叶枯病菌的抑菌活性，１２０℃加热１０分钟后显著下降，加热３０分钟后检测不到抑菌活性。Ｂ３粗蛋白液可以被ＤＥ５２柱（２．６ｃｍ×４０ｃｍ）吸附和洗脱，对植物病原真菌和对水稻白叶枯病菌有作用的成分在不同的ＮａＣｌ梯度洗脱。

转小麦冷胁迫蛋白截短基因烟草及其抗病性分析

TA3-13是克隆于小麦冷胁迫蛋白基因的截短片段。原核表达的TA3-13蛋白能够诱导烟草产生显著的抗烟草花叶病毒(TMV)的作用。文章将TA3-13基因片段克隆到植物表达载体pBI121上,构建成转基因重组体pB-3-13,通过冻融法转化农杆菌EHA105,构建成转基因侵染菌株。采用叶盘法将pB-3-13转化三生烟草,经卡那霉素抗性筛选,获得48株T0代再生植株。通过PCR检测,鉴定出33株转基因单株,收获了20株种子作为T1代株系。PCR-Southern杂交结果显示,PCR阳性条带与TA3-13探针有特异性杂交,说明外源基因被转化到烟草的基因组中。选取两个T1代株系的烟草植株用于各项测定。GUS组织化学活性鉴定和RT-PCR检测结果显示,外源基因可以成功地表达。接种TMV病毒后,转基因烟草抗TMV的能力较转空载体烟草提高3～5倍。转基因烟草具有抗TMV侵入和抗病毒病害发展的作用,同时转基因烟草可以抗细菌软腐病菌的扩展。

编码harpin_(Xoo)蛋白的基因hpa1_(Xoo)转化菊花增强对蚜虫的抗性

将水稻白叶枯病原菌Xanthomonas oryzae pv.oryzae编码harpinXoo蛋白的hpa1Xoo基因构建植物重组表达质粒pCAMBIA3300-hpa1Xoo-bar,由根癌农杆菌Agrobacterium tumefa-ciensLBA4404介导,叶盘法转化寒菊QX-077,获得了草丁膦转基因寒菊株系。经PCR、Southernblot和RT-PCR检测证明hpa1Xoo已整合到寒菊基因组中。在转基因株系的叶片和植株上抗虫性鉴定表明,转基因寒菊显著抑制桃蚜Myzus persicae的繁殖(t<0.01)。RT-PCR表明转基因植株中hpa1Xoo能够在转录水平正常表达。hpa1Xoo转化寒菊可以正常表达并提高寒菊对蚜虫的抗性。

植物病害的系统获得抗性

植物病害的系统获得抗性南京农业大学植保系宋从凤黄迎春潘小玫王金生系统获得抗性（ＳｙｓｔｅｍｉｃＡｃｑｕｉｒｅｄＲｅｓｉｓｔａｎｃｅ，ＳＡＲ）最初是由Ｒｏｓｓ（１９６１）描述烟草用ＴＭＶ预接种后，可使植株获得对ＴＭＶ再接种具有抗性时采用的，是植物病害...

大白菜软腐病菌游动性突变体在大白菜体内增殖扩展研究

用培养皿滤纸吸附测定法和不伤根土壤拌菌处理及针刺接种法 ,测定了大白菜软腐病菌游动性突变体进入大白菜体内、并在其中侵染定殖和扩展的特性。结果表明 ,游动性丧失和增强的突变体都可以通过种子萌发和主动接触进入大白菜体内、并可以在体内有短期的繁殖 ,但菌量远低于野生菌。大白菜叶片接种实验说明 ,这两种突变体也都可以进行短距离扩展 ,但扩展距离和菌的繁殖量低于野生菌。

截短的小麦冷胁迫反应蛋白基因片段TA3-13的融合表达、纯化与诱导抗TMV功能研究

TA3-13是小麦中一个冷胁迫蛋白WCSP1编码基因的5′端截短的DNA序列。它与水稻白叶枯病菌Harpin蛋白的编码基因hpa1_(X∞)(又称hrf1,hrfA)具有59%的一致性。为了研究TA3-13蛋白的生物学性状和功能及其与Harpin蛋白的关系,本研究以pET30a(+)为载体,构建了His融合表达重组体,转化大肠杆菌后在异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)和阿拉伯糖的诱导下获得了融合蛋白的表达。利用镍柱对融合蛋白进行了纯化研究,结果表明:融合蛋白在200 mmol·L^(-1)咪唑浓度下能够被有效地洗脱下来,电泳显示具有单一条带。烟草花叶病毒(TMV)接种试验显示:纯化的TA3-13蛋白喷雾烟草后仍具有较高的诱导烟草抗TMV的作用。

新混合萃取剂体系的萃取动力学和胶团化作用

本文研究了协同萃取体系(D_2EHPA-H_2RPA-Al^(3+))的胶团化作用和界面特性[H_2RPA为长碳链单烷基磷酸脂,D_2EHPA为二(2—乙基己基)磷酸],以及液—液界面动力学。结果发现,混合体系中H_2RPA具有较强烈的胶团化作用和较高的界面活性,随着[D_2EHPA]的增加,其胶团化倾向和界面活性随之下降,H_2RPA和D_2EHPA具有完全相反的界面吸附行为,证实了非胶束混合萃取体系的动力学控制机制为界面化学反应控制型,得到了反应速率方程式,非胶束体系为有应用前景的混合萃取剂体系。

小麦类蛋白激酶基因片段TA50-10的克隆及其TMV抗性诱导功能

TA50-10是小麦中的一个截短的cDNA序列,与水稻白叶枯病菌harpin蛋白基因hpa1Xoo(又称hrf1,hr-fA)具有59%的一致性,它编码的多肽有类蛋白激酶催化域(Protein kinase like domain)。为了研究TA50-10蛋白质的生物学性状和功能以及与harpin蛋白的关系,用PCR法从小麦cDNA中扩增到TA50-10基因,并以pET30a(+)为载体构建了原核表达重组体pET30-TA50-10。将其转化大肠杆菌后在异丙基硫代-!-D-半乳糖苷(IPTG)的诱导下获得了表达蛋白质,并研究了该表达蛋白质诱导烟草抗烟草花叶病毒(TMV)的作用。结果表明:原核表达的TA50-10蛋白质具有热稳定性;用热处理后部分纯化的TA50-10蛋白质溶液喷施烟草叶片能够诱导三生烟草局部抗TMV,并且诱抗效果在处理后10 d内没有明显改变。

小麦纹枯病生防菌株B_3产生抗菌物质条件的研究

枯草芽孢杆菌Ｂ３（Ｂａｃｉｌｌｕｓｓｕｂｔｉｌｉｓ）在ＮＢ，Ｋ＇Ｂ，ＬＢ，ＹＴ，Ｍ９和ＳＧ等６种培养液中产生抗菌物质的量有显著差别，以在ＮＢ中产量最大。以ＮＢ作培养基时，Ｂ３在ｐＨ５～９、温度为２０～４０℃范围内均可产生抗菌物质，而又以ｐＨ７．０和３０℃最适。定期取样测定表明，Ｂ３在培养１２～４８ｈ内产生抗菌物质逐渐增多。不同碳氮源测试结果表明，以终浓度为０．１％的葡萄糖、０．２％的甘露醇或０．２％的可溶性淀粉作碳源，０．１％的硫酸铵、氯化铵、硝酸铵或半胱氨酸作氮源有利于Ｂ３抗菌物质产生。

燕山牌YD系列导热油在沥青生产中的应用

1 前言随着我国交通筑路、建筑等事业的迅速发展,沥青的需要量逐年增加。因此,改进沥青生产过程中的加热工艺,迅速提高沥青产量,已成为一个急需解决的大问题。把导热油加热技术应用于沥青生产工艺中,不仅可以提高沥青产量,而且还可以节约能源、改善劳动环境、降低劳动强度。