基于二代测序技术的胰腺癌胚系变异携带情况及临床因素相关性分析

目的探讨胚系变异在胰腺癌患者中的携带率及其相关的临床因素。方法纳入271例胰腺癌患者,通过二代测序检测21个肿瘤易感基因的胚系变异,并分析胚系变异与发病年龄、家族史及个人史等临床因素的关系。结果在未经筛选的胰腺癌患者中P/LP胚系变异的携带率为6.3%,遗传高危组(具备肿瘤家族史或个人史或早发性)胰腺癌患者中的携带率高达17.1%。胰腺癌患者中胚系变异频率较高的基因为PALB2、BRCA2和ATM。结论胰腺癌患者中整体胚系变异的携带率不高,但在遗传高危组中显著升高,证明了临床因素在遗传性胰腺癌筛选中的重要性。

血清PCT、CRP联合NLR在细菌性血流感染中的应用价值

目的探讨血清降钙素原(PCT)、C反应蛋白(CRP)联合中性粒细胞与淋巴细胞比值(NLR)在细菌性血流感染(BSI)早期诊断及鉴别诊断中的应用价值。方法选取2022年1-12月就诊于复旦大学附属中山医院并诊断为细菌性BSI的339例患者作为血培养阳性组,选取同期收治的临床诊断为发热且血培养结果为阴性的185例患者作为血培养阴性组。根据病原菌类型分为革兰阴性菌感染(GN-BSI)组194例和革兰阳性菌感染(GP-BSI)组145例。将GN-BSI组分为肠杆菌目组(133例)、非发酵菌组(49例)及其他细菌组(12例)3个亚组。比较血清PCT、CRP和NLR在不同组别间的差异。采用受试者工作特征(ROC)曲线并计算曲线下面积(AUC)、灵敏度和特异度,评估血清PCT、CRP、NLR单项及联合诊断细菌性BSI的效能。结果血培养阳性组血清PCT、CRP和NLR水平高于血培养阴性组,差异均有统计学意义(P<0.05);GN-BSI组的PCT水平中位数为1.77 ng/mL,高于GP-BSI组的0.79 ng/mL,差异有统计学意义(P<0.05);肠杆菌目组血清PCT、CRP水平高于非发酵菌组,差异有统计学意义(P<0.05)。3项指标联合诊断细菌性BSI的AUC为0.866,灵敏度为0.752,特异度为0.816;3项指标联合鉴别诊断GN-BSI和GP-BSI的AUC为0.977,灵敏度为0.959,特异度为0.917;3项指标联合鉴别诊断肠杆菌目细菌BSI和非发酵菌BSI的AUC为0.842,灵敏度为0.699,特异度为0.857,均高于单项指标检测的诊断价值。结论血清PCT、CRP联合NLR对细菌性BSI早期诊断及鉴别诊断具有一定的临床价值。

磁微粒化学发光法测定VEGF的性能验证和临床应用效果评估

目的分析磁微粒化学发光法测定血管内皮生长因子(VEGF)的性能并评估临床应用效果。方法选取2023年8月于复旦大学附属中山医院确诊为实体恶性肿瘤患者80例作为癌症组,良性病变患者80例作为良性疾病组,另选取于该院体检的表观健康者20例作为健康对照组。采用磁微粒化学发光法测定VEGF的水平,并验证其正确度、重复性、中间精密度、线性范围、可报告范围、参考范围及抗干扰能力。比较3组患者VEGF水平并绘制VEGF诊断恶性肿瘤的受试者工作特征(ROC)曲线。结果低值样本重复检测20次的变异系数(CV)为4.38%,高值样本重复检测20次的CV为1.32%,符合国家卫生健康委员会临床检验中心室间质量评价标准中公布的肿瘤标志物不超过总允许误差(TEa)的1/4的要求(≤6.25%)。低值样本测量10次的CV为2.38%,高值样本测量10次的CV为1.92%,中间精密度符合不超过TEa的1/3的要求(≤8.33%)。重复检测3次国际标准品Z1、Z2的偏差分别为1.43%和-1.45%,其绝对值均未超出目标偏差(≤15%)。线性范围为40~3200 pg/mL。可报告范围为40~16000 pg/mL。20例表观健康人群检测结果均在厂家声明参考范围内,参考范围验证通过。加入干扰物质后,检测结果偏差均符合产品说明书声明的偏差(≤15%),抗干扰验证通过。癌症组VEGF水平高于健康对照和良性疾病组(P<0.05),以160 pg/mL为最佳截断值时,VEGF诊断恶性肿瘤的曲线下面积为0.90,灵敏度为0.69,特异度为0.95。结论磁微粒化学发光法测定VEGF的重复性、中间精密度、正确度、线性范围、可报告范围、参考范围、抗干扰能力均符合实验室质量管理要求,能保证检测质量,满足临床使用需求,可用于恶性肿瘤的辅助诊断。

高通量测序数据再分析在识别结直肠癌患者ERBB2扩增中的价值

目的评估未涵盖即ERBB2拷贝数变异(copynumbervariation,CNV)分析的高通量测序(highthroughput sequencing,HTS)数据再分析在识别结直肠癌患者ERBB2扩增中的价值。方法回顾性分析经病理活检确诊为结直肠癌并接受外周血cfDNA高通量测序样本的检测数据252例。根据经免疫组织化学(immunohistochemistry,IHC)和/或荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH)判断为ERBB2未扩增样本的HTS数据,计算17号染色体(Chr17)reads数占总reads数的比例范围,初步确定其为识别ERBB2扩增的阈值。根据初步阈值筛选可疑阳性样本,通过数字PCR、IHC和FISH进行验证。结果89例经IHC和/或FISH判定为ERBB2未扩增样本的Chr17 reads数与总reads数的比值为0.239±0.192(0.188~0.299)。以均数的1.25倍0.298作为识别ERBB2扩增的阈值分析其余163例样本数据,发现7例疑似阳性,比值为0.302~0.853。其中5例经IHC和/或FISH判定为阳性,6例经数字PCR验证为阳性,Chr17 reads与总reads数的比值与ERBB2/EIF2C1比值成正相关,相关性好(r2=0.909)。结论再分析未涵盖ERBB2 CNV分析的HTS数据可以初步识别结直肠癌患者的ERBB2扩增。

TNFRSF12A与肝癌的临床相关性及其与肿瘤免疫调控的相关研究

目的探讨肝癌发病机制中TNFRSF12A分子的作用。方法通过综合分析癌症基因图谱(Cancer Genome Atlas Program,TCGA)和单细胞测序数据,研究TNFRSF12A在肝癌中的表达情况及其与预后的相关性。HPA数据库分析TNFRSF12A在亚细胞内的定位,使用DAVID数据库进行GO和KEGG富集分析。TIME 2.0数据库分析TNFRSF12A与肝癌组织内免疫细胞浸润的相关性。结果TNFRSF12A在肝癌组织中高表达并与患者生存预后呈显著正相关(OS:HR=1.61,P=0.0070;RFS:HR=1.45,P=0.0370;PFS:HR=1.30,P=0.0990;DSS:HR=1.67,P=0.0270),同时与患者的年龄(P=0.0467)和BCLC分期(P=0.0456)也存在显著相关性。TNFRSF12A与肿瘤干细胞标志物(CD24、SOX4、ANPEP)共表达,提示其与肿瘤恶性程度高度相关。分子功能分析揭示其主要存在于细胞质中,并在细胞凋亡、侵袭、蛋白结合等过程中发挥作用。此外,TNFRSF12A与Treg细胞和免疫细胞浸润相关,揭示其在肿瘤免疫调节中可能发挥的作用。结论TNFRSF12A在肝肿瘤中表达显著升高,并与患者预后显著相关。肿瘤细胞可通过其与Treg产生的细胞因子发生互作,重塑肿瘤微环境。

间接法建立上海地区人群血清铁蛋白参考区间

目的采用间接法建立上海地区人群血清铁蛋白参考区间。方法选取2021年1月—2022年10月复旦大学附属中山医院行铁蛋白检测的27775名受试者,采用Turkey法剔除离群值,最终纳入18264名受试者用于建立参考区间。采用Hoffmann法建立铁蛋白的参考区间。选取2023年3—4月同院2486名表观健康者,用于验证铁蛋白自建参考区间。依据性别和年龄将参考区间建立人群和验证人群分别分为男性组、≤50岁女性组和>50岁女性组。另选取2022年3月—2023年4月复旦大学附属中山医院>50岁女性贫血患者207例,用于血清铁蛋白自建参考区间的临床应用评估。采用线性回归分析评估铁蛋白水平与性别和年龄的相关性。结果男性组、≤50岁女性组和>50岁女性组之间铁蛋白水平差异均有统计学意义(P<0.001)。男性铁蛋白水平与年龄无相关性(r^(2)=0.003,P>0.05),女性铁蛋白水平与年龄呈正相关(r^(2)=0.125,P<0.05)。采用Hoffmann法依据年龄和性别分别建立参考区间。建立的男性、≤50岁女性和>50岁女性铁蛋白参考区间分别为33.4~1000.0、4.8~341.0、27.4~765.0μg·L^(-1)。自建参考区间的上、下限与现用参考区间有一定差异。自建参考区间的验证通过率(男性组98.59%、≤50岁女性组95.82%、>50岁女性组97.38%)显著高于现用参考区间(85.89%、78.76%、60.26%)(P<0.001)。依据自建参考区间能更好地区分女性贫血人群铁代谢指标异常者。结论血清铁蛋白具有性别和年龄差异。采用间接法建立的铁蛋白参考区间较现用参考区间更适用于上海地区人群。

24 h卫星血培养可改进急诊病原微生物培养流程

目的 分析24 h卫星血培养对急诊微生物实验室血培养工作流程的影响。方法 收集2020年6月1日—2021年5月31日(第1阶段)和2021年6月1日-2022年5月31日(第2阶段)复旦大学附属中山医院设置卫星血培养前(18 208套)、后(2 810套)相关实验室数据,比较设置卫星血培养前后转运时间(TTI)、报阳时间(TTP)、革兰染色时间(TTG)、最终报告时间[样本周转时间(TAT)]的差异。结果 设置卫星血培养前、后阳性率分别为6.29%(1 146/18 208套)和9.57%(269/2 810套),差异有统计学意义(P<0.001)。在全时段、工作时段和非工作时段,设置卫星血培养后TTI、TTP和TAT均短于设置前(P<0.05),尤其是非工作时段,分别缩短3.78、7.76和16.18 h。设置卫星血培养后,肠杆菌目细菌和葡萄球菌的TTP分别较设置前缩短1.93(P=0.014)和6.59 h(P<0.001),肠杆菌目细菌和肠球菌的TAT分别缩短8.13和6.53 h(P<0.05)。结论 设置卫星血培养可显著提高血培养阳性率,缩短TTI、TTP,进而缩短TAT,实现血培养的流程优化。

基于术前RDW-SD、RDW-CV评估乳腺癌淋巴转移患者预后

目的 分析乳腺癌淋巴转移患者术前红细胞体积分布宽度标准差(RDW-SD)和红细胞体积分布宽度变异系数(RDW-CV)与其预后的关系。方法 选取2018年1月—2022年2月复旦大学附属中山医院厦门医院经术后病理确诊乳腺癌并发生淋巴转移的女性患者156例。收集患者术前RDW-CV和RDW-SD、临床病理指标,以及预后相关信息。采用Cox回归分析评估患者预后不良的影响因素。采用受试者工作特征(ROC)曲线分析RDW-SD和RDW-CV预测患者预后不良的效能。根据RDW-CV、RDW-SD的最佳临界值,将156例乳腺癌淋巴转移患者分为高表达组和低表达组,采用Kaplan-Meier生存曲线比较高表达组和低表达组无病生存率的差异。结果 不同TNM分期的乳腺癌淋巴转移患者之间RDW-SD、RDW-CV差异有统计学意义(P<0.001)。ROC曲线分析结果显示,RDW-CV诊断病理Ⅳ期[曲线下面积(AUC)=0.838,P<0.001)和患者预后不良(AUC=0.773,P<0.001)的效能均优于RDW-SD(AUC分别为0.780、0.729,P<0.05)。Cox回归分析结果显示,术前RDW-CV是预后不良的独立危险因素[风险比(HR)=1.46,95%可信区间(CI)为1.13~1.89,P=0.004]。Kaplan-Meier生存曲线分析结果显示,RDW-CV高表达组和RDW-SD高表达组无病生存率分别低于RDW-CV低表达组和RDW-SD低表达组(P<0.001)。结论 术前RDW-CV对乳腺癌淋巴结转移患者的预后评估价值优于RDW-SD。高RDW-CV是患者预后不良的独立危险因素。

浆母细胞在成人原发免疫性血小板减少症中的表达特征及临床价值

目的探讨成人原发免疫性血小板减少症(ITP)患者外周血中浆母细胞的表达特征及在疾病诊断中的价值。方法选取2022年7—12月来复旦大学附属中山医院就诊的20例ITP患者和20例继发其他各种疾病导致血小板减少患者(非ITP血小板减少患者)分别作为ITP组和非ITP血小板减少组,并选取同期24例体检健康者作为健康对照组。应用流式细胞术检测各组外周血B淋巴细胞亚群并比较其差异,采用Logistic回归分析ITP发生的风险因素。结果与健康对照组比较,ITP组浆母细胞(CD19^(+)CD27^(++)CD38^(++))占CD19^(+)细胞比例显著上升,差异有统计学意义(P<0.05),其余淋巴细胞亚群指标比较差异无统计学意义(P>0.05)。与健康对照组比较,非ITP血小板减少组初始B细胞(CD19^(+)CD27^(-)CD38^(-))占CD19^(+)细胞比例显著上升,记忆B细胞(CD19^(+)CD27+CD38^(-))占CD19^(+)细胞比例均显著下降,差异有统计学意义(P<0.01),浆母细胞比例差异无统计学意义(P>0.05)。与非ITP血小板减少组比较,ITP组浆母细胞(CD19^(+)CD27^(++)CD38^(++))、记忆B细胞(CD19^(+)CD27+CD38^(-))占CD19^(+)细胞比例均显著上升,初始B细胞(CD19^(+)CD27^(-)CD38^(-))占CD19^(+)细胞比例下降,差异有统计学意义(P<0.05)。Logistic回归分析显示,当模型未校准时,OR=3.31,P<0.01;校准性别、年龄后,ITP发生的风险增加2.65倍(OR=3.65,P<0.01);进一步校准性别、年龄和血小板计数后,ITP发生的风险增加3.78倍(OR=4.78,P<0.01)。结论外周血浆母细胞升高是成人ITP发生的独立风险因素。

全自动凝血检测流水线在高通量标本检测中的临床应用评估

目的评估全自动凝血检测流水线在高通量标本检测中的临床应用。方法收集2021年6-8月复旦大学附属中山医院的枸橼酸钠抗凝标本相关信息,包括标本采集时间、接收时间、仪器吸样时间、检测完成时间和是否通过自动审核等内容,比较全自动凝血检测流水线安装前后标本预处理时间、检测时间、标本周转时间(TAT),对全自动凝血检测流水线检测速度进行评估。结果全自动凝血检测流水线每小时预计可检测650~900个标本,比浊法项目数量增多会减慢仪器检测速度。全自动凝血检测流水线检测门诊和病房的标本预处理时间及检测时间明显短于单机检测,差异均有统计学意义(P<0.05)。全自动凝血检测流水线能够缩短TAT(P<0.05)。应用全自动凝血检测流水线后,自动审核率为25.6%。结论全自动凝血检测流水线适用于实验室高通量标本检测。与单机检测相比,全自动凝血检测流水线能够缩短TAT和检测时间,有助于减轻实验室人员的工作压力。

上海地区血清丙氨酸转氨酶测定结果一致性和参考范围调查

目的探索上海地区血清丙氨酸转氨酶(ALT)临床检测结果的一致性,并进行表面健康人群的参考范围调查.方法每次实验前将c.f.a.s.中含有的根据国际临床化学家联合会(IFCC)推荐方法要求测得的ALT值传递到1份新鲜人混合血清,以此校准各参加医院检验科的ALT检测系统.32家医院检验科先后进行了9次实验,并在检测结果基本一致后分别进行了7 598例和21 970例年龄为17～78岁的表面健康人员ALT测定值调查.结果校准前各参加医院检验科之间的ALT检测值变异系数(CV)为17.1%～20.5%,校准后各医院之间检测值具有良好的一致性,CV降至1.42%～5.97%.2次ALT参考范围调查中男性和女性的第95百分位值分别为58和45 U/L,约相当于30或23赖氏法单位;第97.5百分位值分别为67和55 U/L,约相当于35或29赖氏法单位;第99百分位值分别为75和67 U/L,约相当于39或35赖氏法单位.结论采用统一的校准血清,可以使不同医院(不同检测系统)之间ALT检测值差异明显减小,一致性显著增加.

上海地区血清ALT测定标准化和参考范围调查

目的 探索上海地区血清丙氨酸氨基转移酶 (ALT)的检测标准化 ,并进行测定条件下人群ALT参考范围调查。方法 将cfas中含IFCC推荐要求的ALT值传递给一份新鲜混合人血清样品 ,以此作为临时校准品 ,校准后测定不同浓度的血清样品。 19所医院检验科共进行 7次实验 ,并在测定条件下检测 2 0岁以下到 71岁以上 75 98人的ALT。结果 ALT在 3 0 0U /L以下时 ,各参加医院检验科之间的平均测定值具有良好的可比性 ,CV <5 .0 % (1.80 %～ 4.60 % )。两次实验之间测定值的CV <3 .4% (3 .3 4%～ 3 .3 9% )。 75 98例ALT测定值男性或女性的第 97.5百分位点分别为 66U /L和 5 5U/L ,约相当于 3 5或 2 9赖氏法测定单位 ;第 99百分位点分别为 74U/L和 64U/L ,约相当于 3 9或 3 4赖氏单位。结论 采用统一校准血清 ,可使不同单位 (不同方法 )间ALT测定值差异明显减小 。

积极推进医学检验结果一致性的工作

临床医生和患者都希望医学检验可以做到同一份样本在不同的检验部门、不同的时间得到相同的检测结果（在临床允许的差异范围内）。这是一代又一代医学检验人员长期以来孜孜追求的目标——检测标准化,也是检测结果一致性追求的目标。但医学检验的实际情况距离这一目标相距甚远。由于种种原因,医学检验部门使用的检测系统（检测仪器、检测试剂盒参数、标准品等）常常各不相同,使得同一份样本的检测结果在不同的检测部门出现程度不等的差异。

血清载脂蛋白免疫透射比浊测定试剂盒性能评价

评价五种市售免疫透射比浊法测定血清载脂蛋白Ａ－Ｉ和Ｂ的试剂。测定数据显示，除个别国产试剂外，其他试剂的不准确性均小于５％ ；线性范围可达２ ｇ～２．５ ｇ／Ｌ或更高；与ＢＭ 测定结果有较好的可比性。实验选用试剂的重现性变异均小于３％ 。抗溶血或抗黄疸干扰的性能均令人满意，符合临床检测要求。

神经甾体

神经甾体是指那些不经过外周内分泌腺而在神经组织中合成代谢的甾体激素。神经甾体的合成代谢途径已得到证实。对神经甾体调节神经兴奋性的作用机制进行了许多研究。神经甾体的多种神经调质功效尤其是其对γ－氨基丁酸Ａ受体（ＧＡＢＡＡ受体）的调节作用，已引起重视。