特异质型药物性肝损伤发生机制及其评价方法的研究进展

特异质型药物性肝损伤(IDILI)是一种仅发生在少数易感人群中的严重药物不良反应,其发生与患者的性别、年龄、基因和基础疾病有关,具有较难预测、无明显剂量依赖性和潜伏期长等特点。近年来,随着对IDILI研究的深入,初步阐明了肝代谢功能障碍、炎症应激、半抗原、危险因子、免疫稳态失衡和基因多态性等IDILI发生机制假说,发现高迁移率族蛋白B1、角蛋白18和微RNA等可作为预测IDILI的生物标志物。另外,也尝试建立了炎症应激、免疫耐受抑制和类器官培养等用于评价和筛选IDILI风险药物的体内和体外模型。本综述为IDILI风险药物的筛选和临床相关疾病的治疗提供参考。

丹酚酸B通过抑制NLRP3炎症小体priming阶段减轻缺氧诱导大鼠心肌细胞损伤

目的探究丹酚酸B(Sal B)能否通过调控NLRP3炎症小体priming阶段减轻缺氧诱导大鼠心肌细胞损伤。方法CCK8法检测不同浓度丹酚酸B对大鼠H9C2细胞生长的影响,并挑选出合适的丹酚酸B实验浓度;微孔板、ELISA法检测缺氧造模后实验组,不同浓度给药组,以及抑制剂组LDH/cTn/IL-1β的分泌水平;qPCR以及蛋白质免疫印迹法检测造模后实验组,不同浓度给药组以及抑制剂组TLR4/Myd88/IRAK1/NF-κB/NLRP3基因以及蛋白表达水平。结果经过缺氧处理后,H9C2细胞活性下降,LDH/cTn/IL-1β分泌量升高,TLR4/Myd88/IRAK1/NF-κB/NLRP3在mRNA水平以及蛋白表达上调;与模型组相比,丹酚酸B预处理24h后,H9C2细胞活性增加,LDH/cTn/IL-1β分泌量下降,TLR4/Myd88/IRAK1/NF-κB/NLRP3 mRNA水平以及蛋白表达水平降低。结论丹酚酸B可以通过调控NLRP3炎症小体priming阶段,减轻缺氧诱导的大鼠心肌细胞损伤。

丹酚酸B调节SIRT1信号途径抑制H_(2)O_(2)诱导的NLRP3炎症小体激活

目的基于沉默信息调节因子1(SIRT1)/NOD样受体蛋白3(NLRP3)炎症小体途径探讨丹酚酸B(Sal B)抗氧化应激致细胞损伤的作用机制,以期阐明丹酚酸B抗心肌缺血的作用机制。方法采用体外构建H_(2)O_(2)诱导的氧化应激细胞模型,将H9c2细胞分为6组,分别为正常组、模型组(600μmol·L^(-1)H_(2)O_(2)刺激)、H_(2)O_(2)+丹酚酸B(5、10、20μmol·L^(-1))组和H_(2)O_(2)+丹酚酸B(20μmol·L^(-1))+EX527(10μmol·L^(-1))组。采用MTT法测定细胞活性;Hoechst染色法测定细胞凋亡;比色法及ELISA法分别测定乳酸脱氢酶(LDH)、白细胞介素(IL)-1β水平;采用DCFH-DA荧光探针检测细胞内活性氧(ROS)水平;采用JC-1荧光探针测定线粒体膜电位;Western Blot法测定H9c2细胞中NLRP3、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶1(Caspase-1)、凋亡相关斑点样蛋白(ASC),以及SIRT1信号通路相关的SIRT1、磷酸化AMP蛋白活化激酶α(p-AMPKα)、AMP蛋白活化激酶α(AMPKα)、过氧化物酶体增殖物激活受体γ共激活因子1α(PGC-1α)蛋白表达。结果与正常组比较,模型组细胞活力及线粒体膜电位明显降低(P<0.01),细胞凋亡程度及细胞内ROS、LDH和炎症因子IL-1β水平明显升高(P<0.01);与NLRP3炎症小体相关的NLRP3、Caspase-1和ASC蛋白表达显著上调(P<0.01),SIRT1、p-AMPKα/AMPKα和PGC-1α蛋白表达明显下调(P<0.01)。与模型组比较,丹酚酸B组的细胞活力以及线粒体膜电位显著升高(P<0.05,P<0.01),细胞凋亡程度及细胞内ROS、LDH及炎症因子IL-1β释放水平明显降低(P<0.01)。丹酚酸B能够明显上调SIRT1信号通路中SIRT1、p-AMPKα/AMPKα、PGC-1α蛋白表达(P<0.05,P<0.01),下调NLRP3炎症小体相关的NLRP3、Caspase-1和ASC蛋白表达(P<0.05,P<0.01),且呈一定量效关系。在应用SIRT1特异性抑制剂EX527干预后,丹酚酸B抑制H_(2)O_(2)诱导的NLRP3炎症小体激活作用被明显逆转。结论丹酚酸B可能通过激活SIRT1/AMPK/PGC-1α信号通路,抑制氧化应激诱导的NLRP3炎症小体的激活,继而发挥抗心肌缺血作用。

基于复合细胞模型的顺式和反式二苯乙烯苷特异质肝损伤评价

本研究从免疫炎症角度建立一种体外评价特异质型药物性肝损伤(idiosyncratic drug-induced liver injury,IDILI)的复合细胞模型,并应用此模型对顺式二苯乙烯苷(2,3,5,4’-tetrahydroxy-cis-stilbene-2-O-β-glucoside,Cis-SG)和反式二苯乙烯苷(2,3,5,4’-tetrahydroxy-trans-stilbene-2-O-β-glucoside,Trans-SG)的IDILI风险进行评价。CellTiter-Glo■3D Cell Viability Assay法测定Cis-SG和Trans-SG对三维(three-dimension,3D)培养下HepG2细胞活力的影响;MTT法测定Cis-SG和Trans-SG对THP-1巨噬细胞活力的影响,确定低、中、高给药剂量。分别给予THP-1巨噬细胞1、5和25μmol·L^(-1)的Cis-SG和Trans-SG或其经3D HepG2细胞孵育的上清液,酶联免疫吸附分析(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)法检测THP-1巨噬细胞上清液中白细胞介素(interleukin,IL)-1β的水平;免疫印迹(Western blot)法和逆转录聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)分别检测THP-1巨噬细胞中凋亡相关斑点样蛋白(apoptosis-associated speck-like protein,ASC)、Nod样受体蛋白3(Nod-like receptor protein 3,NLRP3)炎症小体、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-1(cysteinyl aspartate specific proteinase-1,caspase-1)和IL-1β的表达。结果显示,1、5和25μmol·L^(-1)的Cis-SG和Trans-SG对THP-1巨噬细胞分泌IL-1β的水平无明显影响,而1、5和25μmol·L^(-1)的Cis-SG和25μmol·L^(-1)的Trans-SG经肝细胞孵育后的上清液能显著提高THP-1巨噬细胞分泌IL-1β的水平,并能明显提高ASC、NLRP3、caspase-1和IL-1β蛋白和mRNA的表达。综上,本研究建立的体外IDILI复合细胞评价模型在测试Cis-SG和Trans-SG上成功应用,此模型有助于在体外初步评价和筛选具有IDILI风险的药物,为药物的特异质肝毒性预测与解决提供方法。