湖南省部分地区禽致病性大肠杆菌分离鉴定及生物特性分析

为探究湖南省禽致病性大肠杆菌的生物特性,从部分地区规模肉鸡场采集122份病死鸡临床肝脏样品,采用传统细菌培养方法进行分离培养和初步鉴定,利用大肠杆菌持家基因phoA进行PCR扩增,对纯化鉴定后的分离株进行血清型鉴定、种系发育群检测、多位点序列分型(MLST)、毒力基因检测、动物致病性试验及耐药性分析。结果显示:共分离出83株禽致病性大肠杆菌,鉴定出15种血清型,其中O2、O1、O78、O14为优势血清型,种系发育群分为B2、B1、A和D群,高致病性株主要来自B2、B1群;MLST分析共得到12种ST型,其中ST95、ST481、ST350为主要ST型;分离株irp2、fyuA、iutA、fimC毒力基因携带率为100%,其中38.55%菌株同时携带irp2、afa、fyuA、iutA、hlyF、iss、papC、fimC毒力基因;雏鸡致病性试验检出高致病性菌株46株(55.42%)、中等致病性菌株31株(37.35%)、低等致病性菌株6株(7.23%);分离株对10种常用抗生素有不同程度耐药,其中对四环素和新生霉素耐药最严重,耐药率分别为96.38%和92.77%。结果表明,湖南省禽致病性大肠杆菌遗传关系整体复杂多态,且致病性较高,耐药广泛,提示该地区应加强对禽大肠杆菌病的防控。

鸡精液甘油简易冷冻保存技术改进与优化效果评价

[目的]改进与优化鸡精液甘油细管简易冷冻保存技术。[方法]采用单因素设计试验,使用6%的冻存(3、6、9个月)与现配甘油保护液制作细管冷冻精液,比较冷冻精液冻后精子活力、活率及畸形率。采用液氮面上熏蒸法优化一步冷冻法冷冻速率,并用优化后一步冷冻法与前期研发的两步冷冻法制作细管冷冻精液,检测两种冷冻方案冻后与离心去甘油后的精子活力、活率、畸形率及种蛋受精率、孵化率。采用一步冷冻法冷冻不同品种公鸡精液,并采用不同输精轮次应用于不同年龄母鸡,通过输精试验评价输精效果。[结果]①添加冻存3、6、9个月的甘油保护液与现配甘油保护液冻后精子活力、活率、畸形率均无显著差异(P>0.05)。②经优化和重复率比较后一步冷冻法最佳冷冻速率为细管精液距离液氮面3 cm冷冻3 min,样品精子活力≥60%的重复率为100%,精子活力≥65%的重复率为65%。③一步冷冻法精子活力、精子活率分别为62.84%和76.00%,均极显著高于两步冷冻法(58.17%和68.62%)(P<0.01),两种冷冻方案的精子畸形率无显著差异(P>0.05)。一步法、两步法冷冻精液离心去甘油前、后平均精子活力、种蛋平均受精率和平均孵化率均无显著差异(P>0.05),单日最高受精率分别为68.34%和80.00%。④采用一步冷冻法制备的黑凤鸡与湘东鸡冻精输精后的种蛋受精率和孵化率均无显著差异(P>0.05)。给30周龄母鸡输精后种蛋受精率极显著高于68周龄母鸡(P<0.01)。3轮4次输精模式种蛋受精率极显著高于1轮2次输精模式(P<0.01)。[结论]将甘油保护液制备成储备液在―20℃冻存,采用一步冷冻法并预先进行冷冻速率优化,输精时注意精液冷藏时长、母鸡年龄、输精轮次,能得到稳定较好的输精效果。

龙脑樟叶粉对攸县麻鸭繁殖性能、血清免疫、抗氧化和肠道健康指标的影响

为了探究龙脑樟叶粉对攸县麻鸭繁殖性能、血清免疫、抗氧化和肠道健康指标的影响,试验按体重相近原则将100日龄健康的攸县麻鸭公鸭、母鸭各分为2个组,分别为对照组和试验组,每组各6个重复,每个重复6只。对照组饲喂基础日粮,试验组根据前期龙脑樟粉在肉鸡、蛋鸡日粮中的适宜添加浓度,选择在基础日粮中添加3%龙脑樟叶粉,预试期7 d,正试期42 d。试验结束后统计繁殖性能指标,每个重复随机选择2只鸭进行屠宰,测定免疫性能、抗氧化指标和肠道健康指标。结果表明:与对照组相比,母鸭试验组的卵巢重和卵巢指数均显著提高(P<0.05),公鸭试验组的肝脏重极显著降低(P<0.01),肝脏指数显著降低(P<0.05);母鸭试验组的血清免疫球蛋白A(IgA)质量浓度显著提高(P<0.05);公鸭试验组的空肠和十二指肠杯状细胞数显著提高(P<0.05);公母鸭试验组盲肠食糜中的大肠杆菌、公鸭试验组的乳酸杆菌、母鸭试验组的双歧杆菌的菌落数均极显著降低(P<0.01)。说明日粮中添加3%龙脑樟叶粉可提升攸县麻鸭公鸭肠道健康水平、母鸭免疫性能,促进母鸭卵巢发育,同时降低公母鸭肠道有益与有害菌菌落数量。

以DMA、甘油与DMF为保护剂的鸡精液冷冻技术体系比较研究

为筛选出高效、更具推广价值的鸡精液冷冻技术体系,以湘黄鸡和湘东鸡冻后精子活力、受精率与孵化率为检测指标,比较二甲基乙酰胺(Dimethylacetamide,DMA)细管、甘油细管与N,N-二甲基甲酰胺(N,N-Dimethylformamide,DMF)细管精液冷冻技术体系效果。结果显示:①DMA方案最适液氮面冷冻距离为1 cm,冻后平均精子活力湘东鸡为0.23,湘黄鸡为0.33;甘油方案最适液氮面冷冻距离为5 cm,冻后平均精子活力湘东鸡为0.41,湘黄鸡为0.36。②湘东鸡DMF方案平均冻后精子活力为0.15,极显著低于甘油与DMA(P<0.01)。③通过5轮输精,甘油方案平均受精率为45.35%,孵化率为60.31%,均极显著高于其他两类方案(P<0.01)。④甘油方案,公鸡26周龄组冻前精子活力与冻后活力极显著高于50周龄组(P<0.01)。结果表明,甘油细管是目前鸡精液冷冻保存建设的首选方案,应用时可先进行冷冻速率的优化,且应尽可能选择青壮年公鸡。

攸县麻鸭DMA细管精液简易冷冻技术优化研究

为改进攸县麻鸭N,N-二甲基乙酰胺(N,N-Dimethylacetamide,DMA)细管精液简易冷冻技术,本实验采用不同日龄(140~160日龄、360日龄)公鸭,以精子活力、受精率与孵化率为检测指标,优化采精方法、稀释液[FEB、B(Beltsville Poultry Semen Extender)、L(Lake)、LR(Lake and Ravie)]、冷冻速率[熏蒸高度(0.5~3 cm),熏蒸时间(1~7 min)]、DMA浓度(3%、6%、9%),以及模拟远距离运输精液制作冻精。结果显示:①在优化采精方法上,不捆绑母鸭双脚时采精时间(1.52 min)短于捆绑母鸭双脚(2.98 min)(P<0.05),二者单次采精量和精子活力无显著差异;140~160日龄组精液量(0.46 mL)与精子密度(7.29×10^(9)个/mL)均高于360日龄组(P<0.05),但精子活力差异不显著。②在稀释液筛选方面,B稀释液组的精子体外存活时间优于其他3种(P<0.05),LR稀释液组的冻精活力优于其他3种(P<0.05)。③在冷冻速率优化方面,熏蒸高度0.5 cm组优于1.5 cm组(P<0.05),与1.0 cm组无显著差异;优化后的熏蒸高度为0.5 cm,在此高度下熏蒸在1~7 min的冻精活力无显著差异,且2 min组最高。④在DMA浓度优化方面,各组冻精活力差异显著,6%浓度组最佳(P<0.05)。⑤精液稀释冷藏后模拟远距离运输制作冻精,采用优化参数制作的冻精组与原精组的受精率(81.36%vs.91.15%)、孵化率(83.83%vs.85.45%)无显著差异,冷藏时间0 h组与2、4 h组也无显著差异,但均优于8 h组(受精率45.52%、孵化率74.42%);每4 d输精1轮,4轮受精率总体呈现依次升高的趋势。因此,攸县麻鸭采用不捆绑母鸭双脚的诱情采精方式、LR稀释液、终浓度6%DMA冷冻保护剂,距离液氮面0.5 cm熏蒸2 min,且4 h内冷藏运输制作冻精可行。

基于全基因组重测序分析酃县白鹅保种效果

【目的】酃县白鹅是湖南地区优秀的地方鹅种,为了解酃县白鹅的保种效果,对保种场各家系进行保种工作的评估。【方法】从酃县白鹅保种场的42个家系中各选取1只公鹅,翅静脉采血,提取DNA,进行全基因组重测序。基于保种场42只酃县白鹅公鹅的重测序数据,对其群体遗传结构和遗传多样性进行分析与评价。【结果】检测到采样群体的SNPs位点14270647个,经数据质控和过滤筛选出13696453个SNPs位点。主成分分析(PCA)结果发现,42只公鹅个体可以明显聚为3个亚群;通过群体渗透分析发现,3个亚群之间未发生明显的杂化现象(K=3)。亚群1和亚群3的群体分化指数(Fst值)为0.0842。42只酃县白鹅共检测到832条连续性纯合片段(ROH),ROH片段长度都集中在0~2 Mb区间;基于ROH得到的近交系数F ROH值为0.0130。群体的期望杂合度为0.2918,观测杂合度为0.2968,群体近亲系数(Fis)为0.036,多态信息含量(PIC)为0.266,基因多样性指数(Nei)为0.336。【结论】酃县白鹅保种场的鹅遗传多样性比较丰富,群体近交程度比较低,观测杂合度略高于期望杂合度,并无显著性差异,说明群体处于平衡状态,但部分亚群出现了中度遗传分化,后续保种过程中要使这些亚群进行杂交,以减少酃县白鹅遗传分化的程度。

鸡精液稀释液的筛选

为筛选出效果较好的B系列鸡精液稀释液,以稀释后冷藏保存不同时长精子活力、受精率与孵化率为检测指标进行研究,结果表明:1)稀释冷藏30 min后,EL、EH组的精子活力显著优于B1组(P<0.05);冷藏24 h后,EH、EL组的精子活力显著高于P组(P<0.05);B1组和P组在各时间点均无显著性差异;2)稀释后立即输精,EL组的受精率比B1组高4.9%,但受精蛋孵化率降低5.5%,最终B1组入孵蛋孵化率比EL组高0.7%;稀释冷藏10 h后输精,EL组受精率比B1组高7%,但受精蛋孵化率比B1组低11%。B1组入孵蛋孵化率比EL组高5%,但比原精组低3%;3)稀释湘黄鸡精液冷藏运输70 km后输精,6个家系平均受精率为83.7%,受精蛋孵化率为89.8%,入孵蛋孵化率为75.2%;4)稀释液实际应用方面:B1、B2液输精效果较好,但B2液成本较低,孵化结果优于B1液与鸡场自配稀释液。综上所述,单纯降低B系列稀释液中TES含量(B1液)不利于精子生存,而等比例降低各组分,将渗透压调整为280 mOsm/kg(B2液)时,孵化效果较好。

湘东鸡生产性能分析

为了解湘东鸡选育的效果,试验对湘东鸡外观、体重、体尺与蛋品质等进行测定,并与湘黄鸡、桃源鸡进行比较。结果表明:1)湘东鸡有髯、红色单冠、冠齿6~8个;公鸡鸡冠大、厚、多数直立,少部分向一侧倒下;母鸡鸡冠多数向一侧倒下;湘东鸡98%以上的颈羽、背羽、鞍羽、腹羽为黄麻色;84%的尾羽为黑色;58%的主翼羽为黄麻色;93%为白皮;76%为青胫;2)300日龄湘东鸡:体斜长、龙骨长、体重、胸深、胸宽、胫长极显著小于230日龄的桃源鸡(P<0.01);体重、胫围极显著大于同日龄的湘黄鸡(P<0.01);体斜长极显著小于同日龄的湘黄鸡(P<0.01);不同年龄阶段,湘东鸡平均体重均大于同龄湘黄鸡;3)150日龄湘东鸡的蛋重、蛋纵径、蛋横径显著大于湘黄鸡(P<0.05),显著小于桃源鸡(P<0.05);300日龄湘东鸡,蛋重、蛋黄颜色显著大于湘黄鸡(P<0.05),水分含量小于湘黄鸡蛋,粗蛋白、粗脂肪大于湘黄鸡蛋,但差异都不显著(P>0.05);湘东鸡蛋壳颜色较为混杂,还未达到蛋壳颜色为白色或粉色的目标。说明,湘东鸡在生长速度、体重、蛋品质等方面优于湘黄鸡,也优于丝羽乌骨鸡、清远麻鸡等一些地方鸡品种,且湘东鸡鸡蛋营养价值与口感不差于湘黄鸡,后续还需提高品种的均匀度、蛋壳颜色的一致性。

湘东鸡的肉用性能、肉质性状及其与湘黄鸡的比较分析

为指导湘东鸡后续品种选育,并为湘东鸡新品种评价积累素材,试验对150日龄笼养湘东鸡母鸡的肉用性能和肉质性状进行测定,并与同日龄的湘东鸡公鸡、湘黄鸡母鸡比较。结果表明:(1)湘东鸡母鸡的活重、屠体重、半净膛重、全净膛重、腿肌重、肝脏重、心脏重、屠宰率极显著大于湘黄鸡母鸡(P<0.01),胸肌重、腺胃重、单只翅重显著大于湘黄鸡母鸡(P<0.05),肌胃指数极显著小于湘黄鸡母鸡(P<0.01);湘东鸡母鸡的活重、屠体重、半净膛重、全净膛重、腿肌重、心脏重、单只翅重、全净膛率、腿肌率极显著小于湘东鸡公鸡(P<0.01),心脏指数显著小于湘东鸡公鸡(P<0.05),腹脂重、屠宰率、腹脂率、肌胃指数极显著大于湘东鸡公鸡(P<0.01),胸肌率显著大于湘东鸡公鸡(P<0.05)。(2)湘东鸡母鸡腿肌p H值显著大于湘黄鸡母鸡(P<0.05);胸肌L^(*)、b^(*)值、腿肌L^(*)值极显著大于湘东鸡公鸡(P<0.01),a^(*)值显著小于湘东鸡公鸡(P<0.05);纤维间距小于湘东鸡公鸡,大于湘黄鸡母鸡,且差异显著(P<0.05)。结论:湘东鸡母鸡在体重、肉用性能等方面优于湘黄鸡母鸡,差于湘东鸡公鸡;湘东鸡的屠宰性能与汶上芦花鸡、黄山黑鸡、济宁百日鸡等优秀地方鸡种及亲本桃源鸡相近,优于亲本湘黄鸡;所有试验鸡的胸肌肉色均好于腿肌。

家禽的性别鉴定方法

现代家禽生产 ,祖代鸡通过翻肛鉴定性别 ,父母代鸡以羽速 (快慢羽 )判定公母 ,而商品代鸡则以羽色自别雌雄。常规性别鉴定方法耗资费力 ,且慢羽基因 (K)与内源病毒基因 (ev 2 1 )紧密连锁 ,导致慢羽鸡群免疫反应降低 ,成活率和产蛋性能下降。以鉴定W染色体上性连锁DNA序列或基因为基础 ,从分子水平上鉴定家禽性别的研究有望填补家禽性别鉴定空白。

种蛋开窗技术及其对鸡胚发育影响的研究

种蛋开窗对禽胚实施操作的技术在转基因禽类、利用多能细胞保存禽类种质资源以及禽胚实验模型等领域的研究具有重要价值。以家鸡新产蛋(含有禽胚胎干细胞)为材料,研究出了种蛋开窗切块自动复位技术,并在此基础上以接近禽胚实施操作为目的,进行了不同封口方法、不同开窗位置和添加液体排除因开窗形成的空气泡等对种蛋孵化率影响的实验。结果表明:种蛋赤道面开窗不同封口方式对孵化率影响的差异不显著,最高孵化率可达到65%;赤道面开窗,通过添加液体排除空气泡的影响不会提高孵化率,空气泡的大小与孵化率没有明显相关性;种蛋气室端开窗(针刺透内壳膜操作胚胎)方式,比赤道面开窗方式的孵化率明显提高,两种方法能见胚率均在90%以上;采用以上技术对种蛋开窗、找胚和封口,制作效率在每人每小时30个以上。本文系统地研究和报道了种蛋开窗操作禽胚简单而实用的技术,有助于解决目前种蛋开窗技术复杂且孵化率低的困境。

^(60)Co-γ射线对食用蛋保鲜和种蛋胚胎发育致弱作用的研究

采用60Co辐射源,研究不同剂量对食用蛋的灭菌和保鲜效果,以及对种蛋囊胚的致弱作用。结果表明:7 kGy的辐照剂量可以杀灭鸡蛋内容物和蛋壳上的全部细菌,但即使是4 kGy,对鸡蛋的保鲜和延长货架期方面起到的也是副作用;从3 Gy^11 Gy剂量范围内对种蛋进行辐照,其对应的孵化率为71.8%~13.3%。由于没有一个衡量辐照致弱种蛋胚胎发育程度的参数,提出了相对于空白组的孵化率下降幅度作为家鸡囊胚细胞嵌合体选取辐照剂量的依据。

水禽翻翅影响因素与研究进展

翻翅是禽类的一种生理畸形现象,尤其对水禽影响较大。对于水禽翻翅发生的原因一直存在争议。文章从饲料营养、饲养管理、遗传选择等多个方面总结了影响水禽翻翅的各类原因以及目前的研究进展,为水禽饲养过程中减少翻翅现象与后续水禽翻翅病因的研究提供参考。

以黑丝羽乌骨鸡为供体制作家鸡嵌合体的研究

以黑丝羽乌骨鸡(BS)为供体,白来航鸡(WL)为受体,进行了BCs嵌合体制作技术研究。结果表明:(1)"黑羽"对"白羽"、"丝羽"对"片羽"为完全隐性,可以在供体与嵌合体测交中,后代是否出现这些特征作为种系嵌合体判断依据。(2)供体的其它表型,对受体属于完全或不完全显性,可以作为体细胞嵌合体判断依据。(3)通过改进嵌合体制作技术,嵌合体雏鸡的出壳率为40%(29/73),其中据羽色判断的嵌合体率为18%(13/73);以黑羽为依据选择体细胞嵌合体雏鸡,10只饲养至720 d,其中60%(6/10)的嵌合体外观基本不变(其余的换羽后褪去黑羽);嵌合体鸡与供体测交,以黑羽、灰羽和丝羽判断,8只嵌合体鸡的种系传递率分别为2.5%～71.4%、5.5%～14.3%以及1.7%～10.5%。首次利用BS鸡资源,建立了多表现型嵌合体模型,为家鸡嵌合体技术深入研究提供了方便的检测方法。

诱导发情技术在农村肉牛品改中的应用研究

湖南涟源市天隆农村科技合作社从北方批量购入的一批10 d左右的西门塔尔杂交犊牛,到了发情年龄却久未发情,以此西杂牛为试验对象,采用4种治疗方案进行治疗并对其结果进行比较,结果显示两类药品最佳方案一次处理的同期发情率均在80%以上,产仔率在70%以上,进口试剂疗效虽高于国产试剂,但国产试剂性价比更高,更具有规模推广价值。同时,通过该试验,在有品改扶持政策的地区,进行了以"科研单位(专业农村科技合作社)+基层品改站(冷配员)+养殖户(农户)"模式规模推广新型繁殖技术的初步尝试,为提高良种覆盖率和利用率,推动农村肉牛产业的发展提供了有效手段。

同期发情在肉牛人工授精领域的研究与应用

阐述了国外肉牛同期发情技术的研究与应用进展,结合我国南方肉牛产业的养殖现状,分析了制约该技术推广应用的几个关键问题,并从技术上提出了解决相关问题的几点思考。

转基因禽类载体构建与导入方法研究现状

表达载体的构建与导入是转基因禽类研究的两大关键技术。以逆转录病毒为载体,在转基因家禽的血清和蛋清中,表达外源蛋白的含量已达到了5.6 mg/mL。以慢病毒为载体的基因转移技术,在家禽中实现了输卵管组织特异性表达(蛋清中含量为200μg/mL),而且克服了转基因在传代过程中表达的沉默现象。国外,种蛋赤道面开窗未注射组的孵化率达到了70.1%(为对照组的84.4%),而在国内,通过专利技术(2007100342530)实现了种蛋赤道面开窗,切块铰链式的开启与自动复原的开口与封口技术,开窗未注射组孵化率也达到了65%,制作效率达到了每人每小时30多个。本文综述了转基因禽类慢病毒表达载体及其导入家禽的研究现状,并结合作者的研究经验,探讨了存在的问题和今后的研究思路。

特异性PCR反应鉴别携带W染色体的嵌合体公鸡子代性别的研究

利用聚合酶链式反应 (PCR)特异扩增家鸡W染色体高度重复序列EcoRI家族的 44 7bp片段 ,作为鉴定家鸡W染色体存在的依据。 4个表现型为雄性的嵌合体公鸡的精液中检测到了W染色体 ,通过人工授精获得嵌合体子一代。检测了其中 188个雏鸡的血液 ,5 1.6 % (97/ 188)含有W染色体 ,χ2 检验结果显示 ,雌雄后代符合 1:1的比例 ,这表明在这 188个成活的嵌合体子代中 ,基本上没有W染色体精子所产生的雏鸡 ,携带W染色体的精子没有将其W染色体传递到其子代雏鸡中。本研究利用PCR性别鉴定技术 ,从分子水平上对精液中携带W染色体的嵌合体公鸡 (ZW→ZZ型 )子代的性别分化作了初步的探讨。

湘中肉牛杂交改良与杂交组合筛选研究

以湘中地区的涟源市和新宁县为主,调查和研究了分别以安格斯牛、西门塔尔牛和利木赞牛为父本,本地牛为母本的不同杂交组合F1杂交牛的生产性能指标。结果表明:①无论采用何种杂交模式,湘中肉牛F1杂交牛各阶段的体重和体尺均显著高于对照组。几种杂交模式中,就增重效果而言,西本杂最好,利本杂次之,安本杂最差。但安本杂个体小,善于爬坡,所需饲料也较少,因此适合山地和牧草资源相对贫乏地区饲养,如涟源市。而西本杂,增重效果最好,适合养牛自然条件较好的地区,如新宁县。②以冷配为主的杂交改良本地牛的观念基本已被农民接受,但良种覆盖率和品改率还不高,还受本地公牛和交通不便等因素制约,同时还有待根据当地自然资源特点,研究出更好的既能解决养牛饲草来源,又能降低成本的农村肉牛养殖新模式,更好地调动农民养牛积极性,提高农民养牛经济效益。