不同低氧胁迫方式下SD大鼠急进高原模型的比较研究

目的对SD大鼠在高原实地和模拟高原环境这2种低氧胁迫方式下建立的急进高原模型进行比较研究,进而鉴定模拟高原实验舱的可靠性。方法将SD大鼠分别急进模拟高原动物实验舱(4000 m)或高原实地实验室(4010 m)来建立大鼠急进高原模型,在暴露24 h或72 h后采集并测定高原生理病理变化相关指标,主要包括血常规、血生化、血气、氧化损伤指标(超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px))、炎症指标(白细胞介素-1β(interleukin 1β,IL-1β)、γ干扰素(interferon-γ,IFN-γ)、单核细胞趋化蛋白1(monocyte chemotactic protein 1,MCP-1)和白细胞介素-6(interleukin 6,IL-6))、病理组织分析和低氧敏感基因(低氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1α,Hif-1α)和血管内皮生长因子A(vascular endothelial growth factor A,Vegfa))等,最终对结果进行差异性分析,得出差异性评估报告。结果相同海拔高度下,高原实地或模拟高原暴露72 h后均可以产生明显的肺部和脑部损伤。相同暴露时间下,动物机体的血常规、血生化和血气结果相近,炎症指标(IL-6,IL-1β,MCP-1和IFN-γ)、氧化损伤指标(MDA,SOD和GSH)和脑部低氧敏感基因(Hif-1α和Vegfa)等检测结果无显著性差异。但是,模拟72 h组的二氧化碳分压(partial pressure of carbon dioxide,PaCO_(2))和碱剩余(base excess,BE)显著高于其他低氧处理组、模拟72 h组的肺部低氧敏感基因(Hif-1α和Vegfa)与空白对照组无显著性差异,以及高原实地处理组脑系数显著高于模拟高原处理组等结果提示高原实地和模拟高原环境可能存在细微区别。结论模拟高原实验舱在4000 m海拔可成功建立急进高原动物模型,最优暴露时间应大于24 h但略短于72 h。模拟高原实验舱具有良好的可靠性,但条件允许情况下应尽量前往高原实地来建立急进高原动物模型。

慢病毒介导CIB1表达下调对乳腺癌细胞生物学行为的影响

目的探讨CIB1对三阴性乳腺癌细胞增殖、迁移、凋亡和侵袭的影响及作用机制。方法将MDA-MB-231和MDA-MB-468细胞分为CIB1敲低组(感染CRISPR/Cas9慢病毒)和阴性对照组。采用CCK-8和EdU实验检测各组细胞增殖,流式细胞术测定细胞凋亡,划痕实验和Transwell实验检测细胞迁移及侵袭。采用qRT-PCR和Western blot检测细胞内β-连环蛋白(β-Catenin)、活化蛋白C(APC)、糖原合酶激酶3β(GSK-3β)、c-myc的mRNA和蛋白表达水平。结果与阴性对照组比较,CIB1敲低组增殖、侵袭和迁移细胞数减少(P<0.05),凋亡细胞数增加(P<0.05),β-Catenin、APC、c-myc的mRNA和蛋白表达量降低(P<0.05),GSK-3β的mRNA和蛋白表达量增高(P<0.05)。结论敲低CIB1可抑制乳腺癌细胞增殖、迁移及侵袭,促进细胞凋亡,其机制可能与抑制Wnt/β-Catenin信号通路有关。

低氧敏感和低氧耐受型Wistar大鼠筛选及其G1代的低氧敏感性初探

目的将G0代普通型Wistar大鼠筛选并传代,分别得到低氧敏感型和低氧耐受型G1代大鼠,初步探讨G1代大鼠和普通型大鼠的低氧敏感性差异。方法取200只Wistar大鼠(雌雄各半)作为G0代,置于氧浓度控制系统中,记录G0代大鼠在3%氧气体积分数下从放入至濒死的时间(即耐低氧时间)。挑选耐低氧时间最短的30只大鼠(雌雄各半)进行交配传代,得到G1代低氧敏感型大鼠;挑选耐低氧时间最长的30只大鼠(雌雄各半)进行交配传代,得到G1代低氧耐受型大鼠。另取24只普通型Wistar大鼠随机分为空白对照组和模型对照组,每组12只(雌雄各半)。空白对照组大鼠置于常氧环境,模型对照组大鼠、G1代低氧敏感型大鼠(即G1敏感组)和G1代低氧耐受型大鼠(即G1耐受组)一同置入低压低氧实验舱(模拟海拔5000 m环境),12 h后检测或观察血气、血常规、血生化、病理切片和低氧相关基因等指标,比较4组动物的低氧敏感性差异。结果与G0代普通型大鼠相比,G1代耐受型大鼠的耐低氧时间显著延长(P<0.01)。相比于模型对照组,G1耐受组大鼠的氧饱和度(oxygen saturation,SatO2)显著升高(P<0.05);G1敏感组大鼠的白细胞计数(white blood cell,WBC)、中性粒细胞计数(neutrophil,NEUT)、血红蛋白浓度(hemoglobin,HGB)、红细胞比容(hematocrit,HCT)、红细胞分布宽度(red blood cell distribution width,RDW)、血小板计数(platelet count,PLT)和肌酐(creatinine,Cr)水平显著升高(P<0.05或P<0.01),实际碳酸氢盐(actual bicarbonate,AB)含量显著降低(P<0.05),脑系数和肺系数显著升高(P<0.05)。此外,病理切片结果显示模型对照组、G1敏感组和G1耐受组大鼠的脑组织和肺组织均受到明显损伤,且3组大鼠脑组织中低氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α)和血管内皮生长因子A(vascular endothelial growth factor A,VEGFA)基因的表达水平无显著差异(P>0.05)。结论相比普通型大鼠,G1代低氧敏感型/耐受型大鼠表现出良好的低氧敏感/耐受性状趋势,但仍需通过不断近交筛选传代来纯化并稳固性状。

癫大鼠血清、海马组织中神经元特异性烯醇化酶和S-100β蛋白的变化及其临床意义

目的探讨红藻氨酸(KA)诱导癫疒间大鼠血清及海马组织中神经元特异性烯醇化酶(NSE)和S100β蛋白(S100β)的变化及其临床意义。方法180只Wistar大鼠随机分为对照组、KA组和卡马西平(CBZ)组,后两组再按癫疒间发作后1h、4h、12h、24h、48h和72h不同时点分为6个亚组。以放射免疫法(RIA)和酶联免疫吸附试验(ELISA)分别测定大鼠血清和海马匀浆液中NSE和S100β的变化。结果癫疒间发作72h内,血清和海马匀浆液中NSE和S100β的含量是一个动态变化过程,且呈同步变化的趋势,在12h时均达到峰值。在4～48h时,KA组和CBZ组的二者含量均明显高于对照组(P<0.05～0.01)。结论癫疒间发作后NSE和S100β的含量升高,二者可作为癫疒间发作后脑组织损伤的一个参考指标。

旋毛虫新生幼虫T668重组抗原对小鼠的保护性免疫

目的 研究旋毛虫新生幼虫T6 6 8重组抗原的免疫原性 ,制备基因工程疫苗。方法 以旋毛虫新生幼虫期特异性基因T6 6 8在大肠杆菌中的表达蛋白为抗原免疫小鼠 ,每间隔 10d免疫 1次 ,共免疫 3次。末次免疫后 10d ,每只小鼠攻击感染 2 0 0条旋毛虫感染性肌幼虫 ,感染后 5周用消化法检查肌幼虫 (ML)负荷。结果 T6 6 8重组抗原免疫组肌幼虫减虫率明显高于佐剂组和对照组。结论 T6 6 8重组抗原能诱导小鼠产生一定程度的保护性免疫 ,且可激发特异性体液免疫。

大鼠应激性胃溃疡发生机制及防治的研究

将Wistar大鼠束缚浸水应激 3h ,用光镜、电镜观察胃黏膜的病理变化 ,并检测胃黏膜溃疡指数。结果 ,应激组大鼠胃黏膜的完整性被破坏 ,上皮细胞坏死 ,毛细血管破裂、出血及渗出 ;胃黏膜表面微绒毛呈现明显水肿 ,胞膜消失 ,胞核肿大 ,核变形 ,核仁溶解 ,毛细血管内有微血栓形成。应激宁组大鼠胃黏膜病变比应激组大鼠轻 ,对照组大鼠的胃组织未发现病变。统计结果表明 ,胃溃疡指数具有统计学意义 (P <0 .0 5 )。试验证明 ,在应激状态下 ,胃局部血液循环障碍是引起胃溃疡的重要因素之一 ;

癫痫大鼠血清和脑组织IL-1β、IL-6和TNF-α水平变化

目的:探讨白介素-1β(IL-1β)、白介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)对癫痫的神经免疫调节作用及卡马西平(CBZ)对它的影响。方法:180只Wistar大鼠随机分为对照组、红藻氨酸(KA)组和CBZ组,后两组再按癫痫发作后的不同时点分为6个亚组(1h、4h、12h、24h、48h和72h);以KA建立癫痫模型,采用放射免疫分析(RIA)测定IL-1β、IL-6和TNF-α的水平变化。结果:癫痫发作后72h内,血清和脑匀浆液中IL-1β、IL-6和TNF-α的水平变化不同;在不同时点,KA和CBZ组的三者水平均明显高于对照组(P<0.01或P<0.05),同时,CBZ组的三者水平明显低于KA组(P<0.01)。结论:癫痫大鼠免疫系统处于活化状态,细胞因子水平的失衡可能参与了癫痫的免疫病理过程;CBZ对癫痫具有一定的免疫抑制作用。

凋亡相关基因bcl-2和Bax在大鼠应激性溃疡中的表达及作用

目的探讨凋亡相关基因bcl-2和Bax在应激性溃疡中表达的变化及中药组方应激宁对其变化的影响。方法Wistar大鼠水浸-束缚应激(WRS)4h,用免疫组织化学方法检测胃黏膜组织bcl-2和Bax蛋白的表达。结果bcl-2和Bax在正常大鼠胃黏膜组织中有散在的表达;应激宁组bcl-2阳性细胞数目较应激组增多,两者具有明显的差异(P<0.05);应激组Bax阳性细胞数目较应激宁组增多,两者也具有明显的差异(P<0.05);在应激组和应激宁组中,Bax阳性细胞数目均比bcl-2增加(P<0.05)。结论WRS后胃黏膜组织bcl-2和Bax的表达差异很可能参与了胃黏膜损伤和修复过程,应激宁对胃黏膜的损伤具有一定的保护作用。

旋毛虫G10-7基因在大肠杆菌中的高效表达

旋毛虫新生幼虫期特异性 G10 - 7基因从 PBK- CMV- G10 - 7重组质粒中亚克隆到 p ET- 2 8b(+)原核表达载体上 ,成功地构建了重组表达质粒 p ET- 2 8b- G10 - 7。将其转化到大肠杆菌 DE3感受态细胞中 ,经 IPTG诱导表达 ,其细菌裂解物经 SDS- PAGE电泳可检测到相对分子质量约为 34 0 0 0的目的蛋白带 ,且随诱导时间的延长蛋白表达量逐渐增加 ,诱导 4h达到峰值 ,薄层扫描结果显示 ,目的蛋白占菌体总蛋白的 6 1.7%。Western- blotting检测显示 ,此蛋白可被感染旋毛虫家猪阳性血清所识别 ,表明该蛋白具有良好的抗原性。

蕨麻猪与巴马小型猪脏器指数及低氧相关基因的比较

目的研究蕨麻猪与巴马小型猪脏器指数及低氧相关基因表达量的差异。方法采用Taq Man探针实时定量PCR(real-time quantitative PCR)技术,检测蕨麻猪与巴马小型猪心、肝、脾、肺、肾低氧反应基因表达量的变化。结果蕨麻猪的肾脏、脾脏指数低于巴马小型猪,蕨麻猪的心脏、肺脏指数高于巴马小型猪。蕨麻猪血管内皮细胞生长因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)与低氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor 1,HIF-1α)在肺、肾中的表达量明显比普通猪高(P<0.05或P<0.01);促红细胞生成素(erythropoietin,EPO)只在肺中比巴马小型猪高(P<0.05)。结论不同物种脏器指数可能是物种对物质环境、能量环境、外界病原体、能量代谢需求等综合因素进化适应的结果。蕨麻猪低氧相关基因明显比巴马小型猪高,揭示在基因方面蕨麻猪具有较强的高原适应性。

红藻氨酸致痫大鼠海马区神经元凋亡的动态变化

目的探讨红藻氨酸(kainicacid,KA)诱导的大鼠癫痫状态海马神经元的形态学变化、凋亡情况及抗痫药物的神经保护作用。方法90只Wistar大鼠随机分为对照组、KA组和卡马西平(CBZ)组,后两组再按癫痫发作后1h、4h、12h、24h、48h和72h不同时点分为6个亚组。KA注射后,观察大鼠癫痫发作后的行为学变化;采用HE染色法观察大鼠癫痫状态海马CA1、CA3区神经元形态学改变;采用原位细胞凋亡检测法观察癫痫状态海马CA1、CA3区神经元凋亡情况。结果KA注射后,大鼠出现严重的惊厥;在癫痫发作后12h,海马CA1区、CA3区开始出现凋亡细胞[CA1区:KA组(6.53±1.36)个,CBZ组(5.85±1.68)个;CA3区:KA组(9.58±1.63)个,CBZ组(7.36±1.27)个],48h凋亡细胞达到峰值(P<0.01)[CA1区:KA组(42.263±3.28)个,CBZ组(35.39±2.36)个;CA3区:KA组(57.64±12.76)个,CBZ组(38.37±13.65)个]。经CBZ干预后凋亡细胞明显减少(P<0.05)。结论癫痫发作后的迟发性神经元死亡很可能是由凋亡引起的,CBZ可抑制癫痫状态海马神经元凋亡。

中药增强机体免疫功能研究进展

中药增强机体免疫功能研究进展牛廷献史智勇（兰州军区总医院动物实验科兰州７３００５０近年来，应用免疫学的理论和方法研究中药的免疫增强作用，受到了广泛重视。特别是“扶正固本、补中益气”类中药在免疫系统有广泛的作用。因此，深入探讨中药与免疫学的关系，是一个...

缺血缺氧脑损伤大鼠NSE和S-100β蛋白的变化及其临床意义

目的探讨缺血缺氧脑损伤大鼠神经元特异性烯醇化酶(NSE)和S-100β蛋白(S-100β)的变化及其临床意义。方法75只Wistar大鼠随机分为对照组和实验组,再将实验组按造模后4 h、8 h、12 h和24 h不同时点分为4个亚组。利用夹闭双侧颈总动脉,并进行缺氧的方法制备模型。以放射免疫法(RIA)和酶联免疫吸附试验(ELISA)分别测定血清和脑组织中NSE和S-100β蛋白的变化。结果造模后24 h内,血清和脑组织中NSE和S-100β的含量是一个动态变化过程,呈同步变化的趋势,在12 h时均达到峰值。而且,实验组中各亚组的二者含量明显高于对照组(P<0.01或P<0.05)。结论缺血缺氧后不同时点NSE和S-100β的含量呈动态变化;二者可作为缺血缺氧后脑组织损伤程度及修复的一个临床参考指标。

以重组蛋白为抗原的ELISA法检测旋毛虫抗体

目的寻求特异性强、敏感性高的旋毛虫病诊断抗原。方法以旋毛虫新生幼虫期特异性T668基因在E.coli高效表达的重组蛋白为抗原,分别以兔、猪和健康者血清及旋毛虫病阳性血清为一抗,以辣根过氧化物酶(HRP)标记的山羊抗兔IgG、山羊抗猪IgG和山羊抗人IgG为二抗,建立检测旋毛虫抗体的间接ELISA方法,并以旋毛虫肌幼虫排泄-分泌(ES)抗原作为检测对照。结果以T668重组蛋白为抗原,对兔、猪和人旋毛虫病血清进行检测,阳性检出率为100%,且敏感性高(0.016μg/孔),与ES抗原检测结果完全一致。结论T668重组抗原有望替代ES抗原检测旋毛虫抗体。

乌司他丁联合血必净对内毒素致绵羊多脏器功能障碍综合征的防治研究

目的探讨乌司他丁(UTI)联合血必净(XBJ)对内毒素(LPS)致多脏器功能障碍综合征(MODS)的防治作用。方法将50只绵羊随机分为对照组(A组)、模型组(B组)、乌司他丁组(C组)、血必净组(D组)和乌司他丁+血必净组(E组),每组10只。利用LPS建立MODS模型,并以UTI、XBJ和UTI+XBJ进行防治。观察各组的体征表现,测定不同时点各组的血气、血常规、血清生化指标的改变。结果 UTI+XBJ组绵羊的体征表现明显减轻、死亡率明显降低,PaO2、生化指标和白细胞数目得到了有效的控制。结论乌司他丁联合血必净较单独应用能明显改善LPS诱导的MODS动物体征表现、降低死亡率,对肺脏、肝脏和肾脏等多脏器损伤具有良好的防治作用。

大鼠应激性损伤的生化指标变化及防治研究

采用束缚浸水法建立大鼠应激性损伤模型 ,以探讨在应激状态下血浆中 AST、ALT、LDH、CK、BUN、CREA的水平变化及应激宁的防治效应。结果表明 ,应激组的 AST、ALT、LDH、CK、BUN、CREA水平均明显高于对照组和应激宁组 ( P<0 0 1或 P<0 0 5 )。而且应激宁对其升高具有抑制作用 ,提示应激宁对应激性损伤具有防治效应。

缺血缺氧脑损伤大鼠IL-6和TNF-α的变化及其临床意义

目的:探讨缺血缺氧脑损伤大鼠白介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的动态变化及其临床意义。方法:90只Wistar大鼠随机分为对照组和实验组,再将实验组按造模后4h、8h、12h、24h和48h不同时点分为5个亚组。利用夹闭双侧颈总动脉,并进行缺氧的方法制备模型。以放射免疫分析(RIA)测定血清和脑组织中IL-6和TNF-α的变化。结果:造模后48h内,血清和脑组织中IL-6和TNF-α的水平呈动态变化。实验组中各亚组的两者含量均明显高于对照组(P<0.01或P<0.05)。血清和脑组织中两者分别在24h和12h时达到峰值。结论:缺血缺氧后不同时点IL-6和TNF-α的含量呈动态变化;两者可作为缺血缺氧后脑组织损伤程度及修复的临床指标。

蕨麻小型猪与巴马小型猪高原多脏器功能障碍综合征模型的比较研究

目的比较不同海拔地区两种小型猪高原多脏器功能障碍综合征(H-MODS)模型存在的差异,探讨建立H-MODS模型的理想动物。方法利用高原土生蕨麻小型猪与平原巴马小型猪,以内毒素(LPS)建立HMODS模型。检测不同时点血液生理生化指标的变化,并观察肺脏组织病理学变化。结果巴马小型猪模型的死亡率明显高于蕨麻小型猪;生理生化各指标的变化基本相同,但蕨麻小型猪的变化较平缓。在24 h与48 h肺脏均出现严重病理改变,但巴马小型猪较蕨麻小型猪更严重。结论不同海拔地区的两种小型猪均可成功建立HMODS模型,同时蕨麻小型猪由于自身高原生物特性对H-MODS模型的复制更加准确安全,避免高原环境的外在因素的影响。

不同程度铅中毒大鼠模型的制备

目的:建立不同程度大鼠铅中毒模型。方法:Wistar大鼠分别自由饮用不同浓度的醋酸铅1、3、6个月,以原子吸收法测定全血和脑匀浆液的铅水平。结果:实验组全血和脑匀浆中的铅水平均明显高于对照组(P<0.01),且二者的铅水平随染铅时间的延长、浓度的增加均明显升高(P<0.05)。结论:以不同时间、不同浓度染铅均成功地建立了大鼠铅中毒模型。

高原地区多脏器功能障碍综合症绵羊模型的建立

目的建立简单有效的高原实地多脏器功能障碍综合征（MODS）绵羊模型。方法绵羊随机分为对照组、实验I组和实验II组，全麻后，3mg／kg和6mg／kg内毒素（LPS）分别于30min和60min内静脉泵入实验I组和实验II组绵羊，对照组以相同方法泵入生理盐水。以不同时点测定血气、白细胞数目和血清生化的变化。结果实验I组和II组绵羊的死亡率分别为50％和70％；3h内氧合指数明显降低（P〈O．05或P〈0．01）；不同时点肌酸激酶（CK）、肌酸激酶同工酶（CK—MB）、天门冬氨酸转氨酶（AST）、丙氨酸氨基转移酶（ALT）、总胆红素（TBIL）和肌酐（CRE）明显升高（P〈0．05或P〈0．01），而CK和CK．MB在48h～72h时则明显低于对照组（P〈O．05或P〈0．01）：白细胞（WBC）数目在3h明显降低，之后又明显升高（P〈O．05或P〈0．01）。结论两种剂量的LPS均能成功地建立高原实地绵羊MODS模型。