视网膜缺血再灌注损伤的机制及bFGF对其干预作用

目的探讨碱性成纤维细胞生长因子(basic fibric growth factor;bFGF)在大鼠视网膜缺血再灌注损伤(retina ischemi—a/reperfusion injury;RIRI)中治疗作用及机制。方法采用升高眼内压的方法建立大鼠视网膜缺血-再灌注模型,并将48只大鼠随机分为正常组、缺血组、治疗组。在再灌注后1、6、12、24、72h时段分别应用末端脱氧核酸转移酶介导的脱氧三磷酸尿苷缺口末端标记法(TUNEL)检测视网膜组织中凋亡细胞的表达,采用过氧化物酶标记的链酶卵白素(streptavidin perox—idase,SP)免疫组化方法检测caspase-3的表达,使用原子吸收光度计测定细胞内钙离子的变化。结果在大鼠RIRI中,缺血组凋亡细胞在再灌注6h组开始出现,以后时段依次递增,至24h达到高峰,于72h已无明显表达。Caspase-3表达改变与凋亡细胞表达相似。钙离子于再灌注后1h开始升高,至24h达到高峰,72h出现下降。而在bFGF治疗组各观察指标变化规律基本同上,但各指标与缺血组相比较均下降,于再灌注6、12、24h时段两者差别具有统计学意义。结论细胞凋亡可能在视网膜缺血再灌注损伤中起到重要作用,bFGF可通过对细胞内钙离子、自由基以及凋亡蛋白表达的调控而达到对细胞凋亡的抑制,并进而达到对视网膜缺血再灌注损伤的治疗作用。

视网膜缺血再灌注损伤后HSP70、NF-κB的表达和细胞凋亡的关系

目的探讨大鼠视网膜缺血再灌注损伤后热休克蛋白70(HSP70)、核蛋白因子-κB(NF-κB)表达和损伤神经细胞凋亡的关系。方法前房加压法制作大鼠视网膜缺血再灌注损伤模型,28只大鼠随机分为正常组和缺血再灌注组,后者又按照再灌注后不同时间段分为1、6、12、24、48、72h组。应用末端脱氧核酸转移酶介导的脱氧三磷酸尿苷缺口末端标记(TUNEL)法检测视网膜神经细胞凋亡指数(AI),过氧化物酶标记的链酶卵白素(SP)免疫组织化学法检测视网膜组织中HSP70、NF-κB的表达。结果视网膜神经细胞的凋亡出现于再灌注后6h,并逐渐递增,24h达到高峰,48h开始下降,72h不明显。HSP70在再灌注后1h即有表达,随时间段延长表达逐渐增加,至再灌注后24h达到高峰,之后渐下降。NF-κB的表达变化与凋亡细胞变化的规律基本一致。结论视网膜缺血再灌注损伤导致神经节细胞的凋亡;HSP70和NF-κB在视网膜缺血再灌注损伤中表达升高,对神经细胞的凋亡起着重要的调节作用。

葡萄膜黑色素瘤漏诊六例报告

葡萄膜黑色素瘤漏诊六例报告青岛医学院附属医院眼科牛膺筠，徐洪春，王大博，赵桂秋，赵洁葡萄膜黑色素瘤易经血转移，是一种恶性程度较高的肿瘤．如能早期诊断及恰当处理，不仅能挽救许多病人的生命，而且还可保留许多人的眼球，甚至有用的视力．本院１９５８－１９９３...

眼睑肿瘤p53和ras p21的表达及与临床预后的关系

探讨ｐ５３和ｒａｓ ｐ２１蛋白的表达与眼睑肿瘤临床预后的关系。方法 采用免疫组化ＳＡＢＣ法检测了９８例眼睑恶性肿瘤组织中ｐ５３和ｒａｓ ｐ２１蛋白的表达。结果 在鳞状细胞癌旁正常及轻度不典型增生上皮中未见ｐ５３和ｒａｓ ｐ２１蛋白表达；而中、重度不典型增生，原位癌，浸润癌ｐ５３和ｒａｓ ｐ２１蛋白阳性表达率逐渐增高。其中基底细胞癌ｐ５３和ｒａｓ ｐ２１阳性表达率分别为５０．０％，５２．５％；鳞状细胞癌分别为５４．３％，６２．９％；睑板腺癌分别为５６．５％，６５．２％。随着肿瘤分化程度的降低，ｐ５３和ｒａｓ ｐ２１蛋白阳性表达率及阳性表达强度逐渐增高；ＳＣＣ中ｐ５３及ｒａｓ ｐ２１蛋白阳性表达与组织分化程度之间呈显著负相关，且与肿瘤淋巴转移有关。结论 ｐ５３和ｒａｓ ｐ２１的表达可作为判断眼睑肿瘤恶性程度、淋巴结转移的重要指标。

视网膜脱离误诊为脉络膜黑色素瘤病例分析

对临床诊断为脉络膜黑色素瘤经组织病理学检查为视网膜脱离的7例病例进行分析,其中伴视网膜下出血并机化组织形成者3例,伴脉络膜脱离、脉络膜上腔出血2例,伴玻璃体积血4例,色素上皮下血肿形成1例,对7例误诊的原因做了分析,对如何诊断和鉴别诊断提出看法.

眼睑恶性肿瘤P53基因的表达

1目的 探讨 P5 3基因突变与眼睑恶性肿瘤发生的关系及临床病理学意义。 2方法 采用微波处理免疫组化 L SAB法 ,检测了 10 2例眼睑恶性肿瘤组织中 P5 3基因的表达。 3结果 原位癌及浸润癌 P5 3基因的表达强于正常上皮、轻度不典型增生及中度不典型增生组织 (H c=2 4.45 ,P<0 .0 5 )。鳞状细胞癌 (SCC)中低分化型癌的 P5 3基因表达强于高、中分化型 (H c=7.12 ,P<0 .0 5 )。眼睑 SCC,基底细胞癌及睑板腺癌的表达率分别为5 0 .0 % ,5 6 .6 % ,5 8.8% ,明显高于正常上皮组织及不典型增生组织 (χ2 =16 .73～ 2 5 .5 9,P均 <0 .0 1)。4结论 P5

20 年眼球摘除病理及流行病学分析

①目的探讨眼球摘除的病因及其不同时期的变化。②方法对２０年摘除的９２１只眼球的病因进行临床、病理和流行病学分析。将摘除眼球按病理诊断分类，以前１０年（１９７３～１９８２）和后１０年（１９８３～１９９２）为两个阶段，计算其构成比。③结果因肿瘤摘除眼球者中，视网膜母细胞瘤占第１位，误诊率与漏诊率最高的是葡萄膜黑色素瘤；前后１０年对比，因视网膜母细胞瘤、葡萄膜黑色素瘤、青光眼、眼内炎摘除眼球的例数下降；因眼外伤摘除例数增加；因角膜病摘除眼球占首位。④结论在今后保护眼球的防治工作中，应把角膜病放在主要地位。

眼前段穿孔后上皮内生的临床病理观察

眼前段穿孔后上皮内生是一种严重的并发症。本文报告经组织病理学证实的47例,其中因眼外伤所致者24例,角膜穿孔者16例,手术伤7例。上皮内生后在前房生长者30例,形成虹膜囊肿者17例。本文对上皮内生的分类、原因、临床症状和后果做了分析。 眼前段穿孔伤或内眼手术时,由于伤口处理不当,都可能造成上皮向眼内生长,临床上这类情况虽不多见,但一旦发生,则处理比较困难,且易引起严重后果,甚至失明或丧失眼球。今将本院眼球病理标本中遇到的47例分析讨论如下。

玻璃体内注射先锋霉素Ⅵ对视网膜酶组织化学影响

①目的探讨先锋霉素Ⅵ玻璃体腔内注射的安全剂量。②方法以不同浓度的先锋霉素Ⅵ（１００，２００，２５０，３００，４００μｇ）行兔眼玻璃体腔内注射，用酶组织化学染色法测定注射后不同时间（１，３，７ｄ）视网膜琥珀酸脱氢酶（ＳＤＨ）和乳酸脱氢酶（ＬＤＨ）活性的变化，并观察对视网膜组织结构及超微结构的影响。③结果随用药剂量增大，视网膜内ＳＤＨ与ＬＤＨ活性均逐渐降低；各剂量组视网膜内ＳＤＨ与ＬＤＨ活性分别于术后３ｄ和１ｄ降至最低，然后开始恢复，至手术７ｄ后１００和２００μｇ组恢复至正常，其余剂量组仍低于正常。组织学检查显示１００和２００μｇ剂量组视网膜出现水肿，其余剂量组均出现细胞变性坏死、杆锥体脱失等改变。④结论先锋霉素Ⅵ玻璃体腔内注射的安全剂量为２００μｇ．

角膜上皮创伤后修复的动物实验研究

动物实验说明,角膜上皮创伤后的修复,可有3种不同的来源——角膜、角巩膜缘和球结膜上皮。来自角膜和角巩膜缘的修复上皮,其修复时间较短,修复上皮的形态与正常角膜上皮无差异,来自球结膜的修复上皮,不仅修复时间长,而且修复上皮中出现杯状细胞,杯状细胞的数目和形态随修复时间的不同而有变化,直至修复后100天,修复上皮与正常角膜上皮才无明显差异。

眼部恶性淋巴瘤(附3例报告)

眼部恶性淋巴瘤（附３例报告）牛膺筠康菊眼部恶性淋巴瘤比较少见，１９８５～１９９６年我们共收治３例。现报告如下。１临床资料例１，男，７０岁。因左上眼睑肿块２４０ｄ就诊。眼部检查：左上眼睑皮肤色泽正常，上睑全被硬性肿块占据，无触痛，上睑下垂，不能上举，用...

促红细胞生成素预处理对视网膜神经元缺氧性损伤的保护作用

目的研究缺氧对培养大鼠视网膜神经元的影响及促红细胞生成素(erythropoietin,EPO)预处理的保护作用。方法取体外原代培养3d的大鼠视网膜神经元,利用1mmol.L-1的连二亚硫酸钠消除培养基中的氧合并培养基质缺糖持续6h,导致神经元缺氧性损伤。采用免疫组化染色技术检测了EPO受体在原代培养视网膜神经元的表达,乳酸脱氢酶(LDH)释放率作为评价损伤的指标,TUNEL染色检测视网膜神经元的凋亡,并进行形态学观察。结果原代培养的大鼠视网膜神经元正常下可见EPOR的弱阳性表达,表达部位定位于神经元的胞体和突起,缺氧后EPOR的表达明显增加;神经元LDH释放率和凋亡百分率增加;在损伤前加入浓度2.5～40kU.L-1的rhEPO均可有效抑制LDH释放(P<0.05)。TUNEL结果显示rhEPO预处理能抑制神经元的凋亡,明显改善细胞缺氧性损伤的形态学变化。结论EPO预处理对神经元的缺氧损伤具有保护作用,且具有浓度和时间依赖性。

大鼠视网膜缺血再灌注损伤后脑源性神经生长因子对细胞凋亡及caspase-2和caspase-3表达的影响(英文)

目的:探讨caspase-2和caspase-3在大鼠视网膜缺血再灌注损伤中的表达与细胞凋亡的关系及脑源性神经生长因子对其的影响及对视网膜的保护作用。方法:实验于2007-02/2007-07在青岛大学医学院附属医院中心实验室完成。前房加压法制作大鼠视网膜缺血再灌注损伤模型,28只大鼠随机分为正常组和手术组,其中手术组大鼠左眼为缺血再灌注组,右眼为治疗组(BDNF玻璃体腔注射),手术组又按照再灌注后不同时间段分为1,6,12,24,48,72h组。光学显微镜观察并计数视网膜神经节细胞的数量。应用末端脱氧核苷酸转移酶介导的脱氧尿苷三磷酸缺口末端标记法(TUNEL)检测视网膜神经节细胞凋亡、免疫组织化学法(SABC)和酶联免疫吸附实验(ELISA)检测视网膜组织中caspase-2和caspase-3的表达情况。结果:正常视网膜未见凋亡细胞表达,缺血后6～24h可见大量凋亡细胞表达,48h开始下降。凋亡细胞在缺血后24h达到高峰,caspase-2缺血6h后逐渐增加,24h达高峰,然后在48至72h下降。caspase-3表达改变与caspase-2改变基本一致。BDNF治疗组各观察指标表达变化规律与缺血组基本一致,但能明显抑制凋亡细胞的表达,同时使caspase-2和caspase-3的表达降低。结论:视网膜缺血再灌注损伤诱导了神经节细胞的凋亡;BDNF可抑制caspase-2和caspase-3的表达,减少神经节细胞凋亡,对视网膜缺血再灌注损伤有治疗作用。

促红细胞生成素对人视网膜色素上皮细胞氧化损伤的保护作用

目的探讨促红细胞生成素对过氧化氢氧化损伤人视网膜色素上皮细胞的保护作用及其机制。方法采用600μmol.L-1的过氧化氢造成体外培养的人视网膜色素上皮细胞氧化损伤模型。实验设计分为5组:对照组,过氧化氢模型组,过氧化氢+10 kIU.L-1EPO组,过氧化氢+20 kIU.L-1EPO组和过氧化氢+40 kIU.L-1EPO组。MTT法检测细胞活性,测定细胞内超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)含量,Annexin V-FITC/PI双染色流式细胞法测定细胞的凋亡率。结果过氧化氢模型组RPE细胞的活性明显降低,不同浓度的EPO药物干预组的细胞活性较模型组明显升高,并随着EPO浓度的升高而升高。过氧化氢模型组RPE细胞SOD活性降低,MDA的含量增加;而EPO药物干预组SOD活性较模型组明显升高,MDA含量减少,差异有显著性。过氧化氢模型组RPE细胞的凋亡率升高,而不同浓度的EPO药物干预组降低RPE的凋亡率,凋亡率随着EPO浓度的升高而降低。结论促红细胞生成素对过氧化氢诱导的人RPE细胞的氧化损伤有保护作用,其机制可能与抑制氧化反应、提高抗氧化酶活性、减少细胞凋亡有关。

促红细胞生成素对大鼠视网膜神经元谷氨酸损伤的保护作用

目的探讨促红细胞生成素对大鼠视网膜神经元谷氨酸损伤的保护作用。方法原代培养大鼠视网膜神经元,透射电镜和LDH释放率检测评价不同浓度谷氨酸对神经元的影响,并选择损伤明显的浓度作为损伤剂量。然后细胞分组为N组(正常对照)、G组(谷氨酸损伤)、EG组(EPO+谷氨酸)、AG组(AG490+谷氨酸)、AEG组(AG490+EPO+谷氨酸)、MTT比色法比较5组神经元活力的改变。Western blot检测各组细胞Bax蛋白表达的情况。结果透射电镜显示在50μmol·L-1组出现了染色质和线粒体的改变。100μmol·L-1组改变更加明显。LDH释放率结果显示在20μmol出现了明显的细胞损害。MTT结果示EG组细胞活力高于G、AG和AEG组,G组高于AG和AEG组(P<0.01)。Western blot检测结果示,AG、AEG组Bax表达高于G组,G组高于EG组。结论 EPO对视网膜神经元谷氨酸损伤有保护作用,保护机制可能通过Jak2通路下调神经元谷氨酸损伤后Bax蛋白的表达,减少细胞凋亡从而达到视网膜神经元保护作用。

rhEPO对光损伤诱导的RPE细胞凋亡的抑制

目的研究重组人促红细胞生成素（rhEPO）在人视网膜色素上皮（RPE）细胞光化学损伤中的保护作用及其作用机制，为年龄相关性黄斑变性等的药物治疗和预防提供理论依据。方法取成人ARPE-19细胞株传代培养的2～5代细胞建立光损伤模型，光照12h后再培养24h终止培养，采用AnnexinV—FITC／PI流式双染法检测不同浓度的rhEPO干预治疗前后RPE细胞凋亡的变化；采用酶联免疫吸附实验（enzyme linked immunosorbant assay，ELISA）及免疫组织化学法检测不同浓度的rhEPO干预治疗前后RPE细胞easpase-3及Bcl-2表达的变化；并添加AG490（Jak2激酶抑制剂），探讨人rhEPO对人RPE细胞光化学损伤的保护性作用机制。结果各rhEPO组均可明显减少光化学损伤诱导的人RPE细胞的凋亡，呈浓度依赖性，以40IY·ml^-1EPO组结果最明显，为（4．93±1．45）·ml^-1；在40IU·ml^-1EPO组caspase-3浓度最低，为（0．125±0．029）μg·L^-1；在40IU·ml^-1EPO组Bcl-2表达最高（168．21±3．87）；在加入AG490组，人RPE细胞凋亡增高为（11．29±2．11）·ml^-1；caspase-3浓度增高为（0．362±0．042）μg·L^-1；Bcl-2表达降低。rhEPO抑制凋亡作用均被阻止。结论rhEPO可抑制光化学损伤诱导的人RPE细胞的凋亡，抑制caspase-3的浓度，上调Bcl-2的表达，对人RPE细胞的光化学损伤有保护治疗作用；其保护作用机制主要通过EPO与受体结合后激活Jak2激酶途径完成的。

新生大鼠视网膜神经元的原代培养与观察

目的：建立新生大鼠视网膜神经元体外培养的有效方法。方法：取出生后1～3d的Wistar大鼠视网膜，胰蛋白酶＋依地酸（EDTA）消化制成单细胞悬液，接种于置有包被多聚赖氨酸（poly-L-lysine）玻片的24孔培养板中培养，利用相差显微镜对培养的细胞进行动态观察；并以免疫细胞化学技术对视网膜神经元进行染色。结果：在多聚赖氨酸上培养的视网膜神经元生长良好，部分细胞伸出突起，且有些突起相互连接。免疫细胞化学染色显示，培养的细胞大多数抗神经丝蛋白（NF）抗体反应阳性。胰蛋白酶＋EDTA联合消化能使视网膜细胞很好得分离，获得视网膜单细胞悬液。结论：酶消化法原代培养视网膜神经元有较好的视网膜神经元生长率；胰蛋白酶＋EDTA联合消化较单独用胰蛋白酶消化效果好。

低氧诱导促红细胞生成素及其受体在人胚胎RPE细胞中的表达

目的研究促红细胞生成素(EPO)及其受体(EPOR)在人视网膜色素上皮(RPE)细胞化学低氧损伤中的表达及意义。方法原代培养人胚胎RPE细胞,应用不同浓度氯化钴造成RPE细胞化学缺氧,应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测RPE细胞增生活力变化,采用免疫组织化学法检测EPO和EPOR在RPE细胞中的表达,应用W esternb lot法检测EPO和EPOR蛋白的表达变化。结果不同浓度的CoC l2均促进细胞生长。正常人胚胎RPE细胞检测到EPO和EPOR的弱表达,CoC l2处理组检测到EPO和EPOR的强表达。结论化学缺氧促进人胚胎RPE细胞的增生,EPO及其受体EPOR可能在这个过程中起重要作用。

过氧化氢诱导人视网膜色素上皮细胞衰老及其机制探讨

目的研究过氧化氢诱导人视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium,RPE)细胞氧化损伤中的细胞衰老现象并探讨其机制。方法培养的人RPE细胞随机分为正常对照组和过氧化氢处理组,过氧化氢处理组根据用600μmol·L-1过氧化氢处理的不同时段分为1h、6h、12h、24h及72h组。流式细胞术分析各组细胞周期,计算G0/G1期细胞所占比率;流式细胞术检测各组细胞线粒体膜电位的变化;免疫组织化学法检测各组细胞Caspase-9的变化。结果与正常对照组相比,过氧化氢作用6h组G0/G1期细胞所占比率增高(P<0.05),且随作用时间的延长而增加,72h组最高(P<0.01),达到(89.12±0.21)%;过氧化氢损伤导致RPE细胞膜电位降低,且随时间延长逐渐降低,72h组最低(62.48±0.59);Caspase-9蛋白在过氧化氢作用1h时表达开始增高,且随时间延长逐渐增加,在24h时达到高峰(36·2±0.4),72h时略有回落(26.4±0.8),但仍较正常组(3.2±0.2)高。结论过氧化氢作用下,人RPE细胞生长停滞于G/G期,呈现衰老现象。线粒体膜电位的降低和线粒体凋亡途径上游因子Caspase-9的活化可能是细胞衰老的机制之一。