新医科背景下虚拟仿真实验在胚胎学中的应用

胚胎学是研究从受精卵发育为新生个体的过程及其机制的科学,是组织学与胚胎学课程中重要部分。学生只有学好胚胎学,才能了解生命个体的发生和发育,理解组织学、病理学、解剖学等其他学科中的相关内容。传统教学模式主要以讲授文字和图片为主,缺乏了教与学的互动性、自主性以及临床结合性。在新医科背景下,基于胚胎学课程的特点,建设了早期胚胎发育与畸形筛查虚拟仿真实验教学项目。该项目的设计以不孕不育问题为导向,融合生殖医学、妇产科学等临床学科,将理论知识与专业技能相结合,不仅丰富了胚胎学实验内容,也为培养新时代新医科人才夯实基础。

PeroxiredoxinⅡ在小鼠早胚发育中的作用及机理

目的观察PeroxiredoxinⅡ对小鼠植入前胚发育的影响,并探讨其可能的机制。方法收集昆明种小鼠的1细胞胚,采用微滴培养法连续培养48h,观察不同浓度PeroxiredoxinⅡ抗体对植入前胚发育的影响,以胚胎发育到各期的比例为判断发育效果的标准。同时,应用共聚焦扫描显微镜术结合特异性荧光探针2′,7′二氯氢化荧光素双乙酸酯,检测小鼠胚中氧自由基水平。结果抗体添加组和未添加组的1细胞胚经24h培养后96%以上发育成2细胞胚,但经48h培养,抗体添加组的胚发育明显受抑,多数停滞于2细胞期。激光共聚焦成像的结果表明,PeroxiredoxinⅡ抗体添加组的2细胞胚内荧光强度明显增强。结论PeroxiredoxinⅡ抗体可引起2细胞胚发育阻滞,这可能与胚内的氧自由基水平升高有关,提示植入前胚内PeroxiredoxinⅡ可减少或消除细胞内氧自由基,促进植入前胚的发育。

一氧化氮合酶同功异构酶在大鼠睾丸中的表达和定位

目的 :了解一氧化氮 ( NO)在睾丸中的作用。方法 :运用免疫组织化学方法观察 3种一氧化氮合酶 ( NOS)同功异构酶在大鼠生后 4、7、1 4、3 0、60 d睾丸中的分布。结果 :( 1 )生后 4、7、1 4d大鼠睾丸未见 3种 NOS免疫阳性反应 ;( 2 )生后 3 0 d少数精母细胞及生后 60 d生精小管腔面精子和间质细胞呈 NOS1阳性 ;( 3 )生后 3 0 d少数精母细胞、支持细胞和管周类肌细胞呈 NOS2阳性 ,而生后 60 d NOS2阳性反应见于睾丸间质细胞、管周类肌细胞、支持细胞、极少数精母细胞和不成熟精子头部 ;( 4)生后 3 0 d睾丸内少数精母细胞和血管壁呈 NOS3阳性 ,生后 60 d NOS3阳性反应仅见于血管壁。结论 :NO可能参与精子发生、睾酮的分泌过程 ,并调节睾丸内的血流。

PeroxiredoxinII在小鼠卵巢中卵泡、GV卵、MII卵和植入前胚的表达和定位

目的 观察PeroxiredoxinII在小鼠卵巢中卵泡和植入前胚的表达与定位 ,为探讨PeroxiredoxinII在小鼠卵母细胞发育成熟和早期胚发育的作用提供依据。 方法 根据小鼠PeroxiredoxinIImRNA序列 (AccessionNo :BC0 0 2 0 34)设计引物 ,对小鼠生发泡完整卵细胞 (GV卵 )中的PeroxiredoxinII可能编码区进行扩增。同时 ,取生后 3d和 2月小鼠的卵巢 ,免疫细胞化学染色显示PeroxiredoxinII蛋白在卵泡中的分布。此外 ,运用RT PCR和免疫细胞化学染色方法观察PeroxiredoxinII在植入前胚的表达。 结果 从GV卵中扩增所得 6 84bp的cDNA序列 ,与小鼠PeroxiredoxinII具有 99%同源性 ;其推导的编码氨基酸序列与小鼠PeroxiredoxinII氨基酸序列完全相同。免疫细胞化学染色显示 :生后 3d小鼠卵巢内未见PeroxiredoxinII阳性反应 ;2月小鼠卵巢内阳性反应见于初级卵泡、次级卵泡和近成熟卵泡中卵母细胞的胞质。卵泡细胞未见PeroxiredoxinII阳性反应。RT PCR结果表明 :PeroxiredoxinIImRNA在GV卵中处高水平 ,从MII卵开始略有下降 ,在 4 细胞胚和早期囊胚期间未检到。免疫细胞化学染色显示 :GV卵、MII卵、1 细胞胚、2 细胞胚、4 细胞胚、8 细胞胚、桑椹胚和早期囊胚均呈PeroxiredoxinII阳性反应。

白细胞介素2对大鼠垂体-甲状腺轴的影响

白细胞介素２对大鼠垂体┐甲状腺轴的影响王世鄂周瑞祥陈奕权何为民（福建医科大学组织胚胎学教研室，福州３５０００４）中国图书分类号Ｒ３９２．１临床上，一些肿瘤患者用大剂量长时间的白细胞介素２（ＩＬ－２）治疗后出现甲状腺功能减低，本研究采用较低剂量的ＩＬ－...

白介素-2对大鼠血中胃泌素和生长抑素水平的影响

目的研究白介素－２对大鼠血中胃泌素和生长抑素水平的影响。方法运用放射免疫分析方法测定分别注射生理盐水（对照组）和两种不同剂量白介素－２（１０００Ｕ／只、２０００Ｕ／只）的大鼠血中胃泌素和生长抑素水平。结果低、高剂量白介素－２注射大鼠血中胃泌素水平分别为１４８．９６９±２０．１６８ｎｇ／Ｌ和１７６．０２０±２７．６１８ｎｇ／Ｌ，均明显低于对照组（２１５．９７５±３０．５５５ｎｇ／Ｌ）；而低、高剂量白介素－２注射大鼠血中生长抑素水平分别为１７６．８７８±５０．８６９ｎｇ／Ｌ和１４２．９１３±４６．４６５ｎｇ／Ｌ，高于对照组（１２６．５７３±４２．７９２ｎｇ／Ｌ）。结论白介素－２可以降低血中胃泌素水平，升高生长抑素水平。

小鼠GV卵中母源基因的克隆和其中一个基因在植入前胚表达的研究

目的 克隆和筛选小鼠生发泡完整卵母细胞 (GV卵 )中母源基因 ,并检测其中一个基因在植入前不同发育阶段胚中的表达 ,初步了解该基因在卵母细胞发育成熟及早期胚发育中的作用。 方法 应用抑制性消减杂交技术 (SSH) ,以生发泡完整的卵母细胞为检测子 (tester) ,8 细胞胚为驱赶子 (driver) ,建立GV卵中母源基因的cDNA文库。通过斑点杂交法进一步筛选GV卵中母源基因的cDNA文库 ,对阳性克隆进行序列测定和同源性分析 ;并采用RT PCR方法观察其中 1个阳性克隆的基因在着床前胚的表达。 结果 克隆得到 18个基因的cDNA序列和 8个同源EST序列在GV卵中特异表达 ,包括PeroxiredoxinⅡ基因。RT PCR显示PeroxiredoxinⅡ基因呈阶段性差异表达 ,在GV卵、MⅡ卵、1 细胞胚和 2 细胞胚有表达 ,但从MⅡ卵开始表达下降。而在 4 细胞胚、8 细胞胚、桑椹胚和囊胚中不表达。 结论 PeroxiredoxinⅡ基因是GV卵中母源基因cDNA文库中的一个基因 ,提示该基因在卵母细胞发育成熟和合子基因激活中起一定作用。

妊娠期和哺乳期大鼠血中生长抑素变化的放射免疫分析

研究妊娠期和哺乳期大鼠血浆中生长抑素的变化。方法应用放射免疫方法测定妊娠和哺乳期间大鼠血中生长抑素的水平。结果妊娠期和哺乳期大鼠血中生长抑素水平均升高，与动情间期相比，差别有显著性（Ｐ＜０．０５，妊娠第５天除外）。结论妊娠期和哺乳期间释放入血的生长抑素增多。

Peroxiredoxin II mRNA在小鼠卵泡发育中定位的研究

目的 观察PeroxiredoxinIImRNA在小鼠卵巢各级卵泡和MII卵中的分布 ,为了解PeroxiredoxinII在卵母细胞发育及成熟过程中的功能意义提供形态学依据。 方法 原位杂交方法。 结果 在小鼠卵巢内 ,原始卵泡的初级卵母细胞未检到PeroxiredoxinIImRNA的杂交信号 ,初级卵泡的初级卵母细胞可检到杂交信号 ,次级卵泡和近成熟卵泡中卵母细胞的信号明显增强。离开卵巢的GV卵也能检到较强的杂交信号 ,排到输卵管的次级卵母细胞 (MII卵 )杂交信号与GV卵相比明显减弱。从原始卵泡到近成熟卵泡周围的卵泡细胞均可检到杂交信号 ,其信号强度在卵泡发育成熟过程中未见有明显变化。卵母细胞和卵泡细胞的PeroxiredoxinIImRNA杂交信号均分布在胞质。 结论 提示PeroxiredoxinII可能参与了卵母细胞生长发育和卵母细胞成熟过程的调节。

妊娠期和哺乳期大鼠胰岛生长抑素免疫反应阳性细胞的变化

本文用免疫细胞化学和体视学方法，观察妊娠和哺乳期间大鼠胰岛生长抑素（ＳＳ）免疫反应阳性细胞（细胞）的变化。结果显示妊娠期和哺乳期胰岛Ｄ细胞面数密度（ＮＡ）、数密度（Ｎｖ）和体密度（Ｖｖ）值升高，且染色深度加强，提示妊娠期和哺乳期胰岛Ｄ细胞合成ＳＳ增加。

大鼠睾丸中S-100蛋白生后发育变化的免疫细胞化学研究

本文应用免疫细胞方法，研究大鼠生后４天、７天、１４天、３０天、２个月和３个月睾丸中Ｓ－１００蛋白的分布和变化规律。结果表明：Ｓ－１００蛋白染色反应位于睾丸间质细胞，直到生后３０天才出现阳性细胞，数量少，着色浅，而２月龄和３月龄大鼠睾丸Ｓ－１００蛋白阳性细胞数量多，着色深。提示Ｓ－１００蛋白可能参与间质细胞的合成和分泌睾酮过程。

小鼠生发泡完整卵母细胞一个特异基因的克隆及其在胚胎的表达

目的 :克隆和筛选小鼠生发泡完整卵母细胞 (GV卵 )特异基因 ,并检测其一在胚胎中的表达。方法 :应用抑制性消减杂交技术 (SSH) ,建立GV卵特异的cDNA文库。通过斑点杂交法进一步筛选并对阳性克隆进行序列测定和同源性分析 ;采用RT PCR方法观察其一在着床前胚胎的表达。结果 :克隆发现 1 8个基因和 8个EST序列在GV卵中特异表达。RT PCR显示该阳性克隆的基因在GV卵、MII卵、1 细胞胚胎和 2 细胞胚胎有表达 ,其短片段是预期要扩增者 ,从MII卵开始表达下降 ;长片段在GV卵、MII卵、1 细胞胚胎和 2 细胞胚胎表达未见明显变化。长、短片段两端序列一致。结论 :该基因是GV卵特异cDNA文库中的一个基因 ,且是母源性基因 。

妊娠期和哺乳期大鼠胃幽门部生长抑素免疫反应阳性细胞的变化

目的 观察妊娠期和哺乳期胃幽门部生长抑素 (SS)免疫反应阳性细胞 (D细胞 )的变化。 方法 应用免疫细胞化学和放射免疫方法测定胃幽门粘膜生长抑素阳性细胞染色强度、数密度 (NV)、体密度 (VV)和面数密度 (NA)以及胃液内生长抑素含量。 结果 妊娠第 19天 ,D细胞染色强度、数密度、体密度和面数密度明显升高(P<0 .0 5 ) ;哺乳第 2 0天 ,D细胞染色明显减弱、数密度、体密度和面数密度显著下降 (P<0 .0 5 ) ,胃液内生长抑素含量明显增加 (P<0 .0 5 )。 结论 生长抑素参与妊娠、哺乳期胃肠功能的调节。

卵泡刺激素及其受体在大鼠胰腺的共定位观察

目的观察卵泡刺激素(FSH)及其受体(FSHR)在大鼠胰腺中的共存关系,以了解FSH对胰腺的功能意义。方法应用免疫荧光组织化学双标记染色技术,在激光共聚焦扫描显微镜下观察染色结果。结果部分外分泌腺细胞、导管上皮细胞及部分胰岛细胞呈FSH反应阳性,呈强绿色荧光。小血管内皮细胞也呈FSH反应弱阳性,呈弱的绿色荧光。部分胰岛细胞呈FSHR反应阳性,呈强红色荧光。一些外分泌腺上皮细胞呈FSHR反应弱阳性,呈淡红色荧光。有一些胰岛细胞呈FSH和FSHR双阳性反应,呈黄色荧光或红、绿相间荧光。结论FSH及其受体均存在于大鼠胰腺中,胰岛中的部分细胞共同存在FSH及其受体,FSH可能通过旁分泌或自分泌的途径对胰腺的功能起调节作用。

大鼠下颌下腺卵泡刺激素、黄体生成素的分布及与促性腺激素释放激素受体的共定位研究

目的 研究卵泡刺激素 (FSH)和黄体生成素 (LH)在大鼠下颌下腺中的定位、分布及与促性腺激素释放激素受体 (GnRHR)共定位的关系。 方法 采用邻片免疫组织化学共定位方法。 结果 大鼠颌下腺浆液性腺泡上皮细胞、分泌管、排泄管及颗粒曲管上皮细胞均呈FSH和LH免疫反应阳性 ,阳性颗粒分布在细胞质内 ,细胞核阴性。邻片共定位结果显示颌下腺GnRHR免疫反应阳性细胞同样呈FSH免疫反应阳性 ,大部分的GnRHR免疫反应阳性细胞呈LH免疫反应阳性 ,小部分呈免疫反应阴性。两种免疫反应阳性物质均分布在细胞质内 ,细胞核阴性。 结论 大鼠下颌下腺浆液性腺泡上皮细胞、分泌管、排泄管和颗粒曲管上皮细胞可能以自分泌或旁分泌的GnRH调节自身合成与分泌FSH和LH。

卵泡刺激素对大鼠胰岛素和胰高血糖素分泌影响的体外研究

目的研究卵泡刺激素(FSH)在体外对胰腺组织分泌胰岛素和胰高血糖素的影响。方法体外孵育大鼠胰腺组织并施加不同浓度FSH,应用酶联免疫分析(ELISA)方法检测上清液中胰岛素和胰高血糖素的含量。结果当FSH浓度小于10-2IU/L时,胰岛素和胰高血糖素分泌量随FSH浓度的增加而减少;当FSH浓度大于10-2IU/L时,胰岛素和胰高血糖素分泌量随FSH浓度的增加而增加。结论FSH在体外对胰岛素和胰高血糖素分泌具有相同的双向调节作用,FSH可能对胰腺内分泌具有调节功能。

Peroxiredoxin Ⅰ和Ⅱ在小鼠输卵管和子宫的分布与表达

目的:观察PeroxiredoxinⅠ和Ⅱ(PrxⅠ和Ⅱ)在小鼠输卵管和子宫的分布及其周期性变化。方法:免疫组织化学和蛋白免疫印迹技术。结果:在输卵管中,PrxⅠ和Ⅱ免疫阳性反应见于输卵管上皮;而子宫内,PrxⅠ免疫阳性反应分布于内膜上皮、腺体上皮和内膜基质,而PrxⅡ主要见于内膜基质。蛋白免疫印迹技术也显示这两型蛋白在输卵管和子宫均表达,动情期和动情间期这两型蛋白在输卵管和子宫中的表达水平无显著性差异。结论:提示PrxⅠ与Ⅱ在输卵管和子宫中表达稳定,可能为受精和早期胚胎发育提供抗氧化的良好微环境。

卵泡刺激素在大鼠胰腺中的定位及其与促性腺激素释放激素受体共存关系

目的 :研究卵泡刺激素在大鼠胰腺中的分布及其与促性腺激素释放激素受体的共存关系。方法 :采用免疫组织化学法和邻片双标记方法。结果 :大鼠胰腺外分泌部腺泡内的部分腺细胞和胰岛中的部分内分泌细胞呈现FSH免疫阳性反应 ,阳性产物分布于胞质 ,胞核阴性。卵泡刺激素与促性腺激素释放激素受体在大鼠胰岛细胞中有重叠分布。结论 :大鼠胰腺外分泌部的腺泡细胞和胰岛的细胞能表达卵泡刺激素。卵泡刺激素和促性腺激素释放激素受体共存于大鼠胰岛细胞中。表达卵泡刺激素的胰岛细胞可能受促性腺激素释放激素调节。

M16添加硫氧还蛋白过氧化物酶Ⅱ无法克服昆明小鼠早胚体外发育2-细胞阻滞

目的观察硫氧还蛋白过氧化物酶Ⅱ(Peroxiredoxin Ⅱ,PrxII)是否可以克服昆明(Kunming)小鼠早胚体外发育2-细胞阻滞。方法取昆明小鼠1-细胞胚置于含PrxII蛋白的M16培养液中培养,观察PrxII对昆明小鼠早胚发育潜能和2-细胞胚内活性氧自由基(reactive oxygen species,ROS)水平的影响;同时比较昆明和B6C3F1小鼠1-细胞胚在M16中各自的发育情况;激光扫描共聚焦显微镜分别检测比较昆明与B6C3F1小鼠体外培养2-细胞胚内ROS水平以及昆明小鼠体外培养与体内发育2-细胞胚内ROS水平。结果M16培养液中添加PrxII蛋白(1nmol/L和100nMol/L)可以明显降低昆明小鼠体外培养2-细胞胚内ROS水平(P<0.05),但不能克服昆明小鼠体外发育2-细胞阻滞;昆明小鼠1-细胞胚在M16中培养存在2-细胞阻滞现象,而B6C3F1小鼠无2-细胞阻滞现象;昆明小鼠体外培养2-细胞胚内ROS水平显著低于体内发育2-细胞胚(P<0.05),亦略低于B6C3F1小鼠体外培养2-细胞胚内ROS水平(P>0.05)。结论M16培养液中添加PrxII可以明显降低2-细胞胚内ROS水平,但并不能克服2-细胞阻滞。与昆明小鼠体内发育2-细胞和B6C3F1体外发育2-细胞胚相比,体外培养昆明小鼠2-细胞胚内ROS水平并不升高,这些结果提示昆明小鼠体外培养出现2-细胞阻滞的原因并非是胚内ROS水平升高引起。

溶藻弧菌抗独特型抗体scFv的原核表达及免疫原性鉴定

目的构建溶藻弧菌抗独特型单链抗体(scFv)的原核表达载体,并对其表达的蛋白进行免疫原性鉴定。方法从分泌溶藻弧菌抗独特型单克隆抗体的杂交瘤细胞株(2F4)中已获得的该抗体重链可变区基因(VH)和轻链可变区基因(VL),通过基因重组构建scFv及原核表达载体pET32a-AL,转化大肠杆菌BL21后用IPTG诱导表达。表达后的重组蛋白利用动物免疫试验进行免疫原性鉴定。结果scFv基因序列全长747碱基对,编码249个氨基酸,符合小鼠免疫球蛋白可变区基因特征,含有框架区(FRs)、抗原互补决定区(CDRs)及抗体特征性的半胱氨酸残基。ELISA测定和动物免疫试验显示抗独特性抗体的scFv具有与溶藻弧菌一样的免疫原性。结论成功构建了抗溶藻弧菌独特型抗体scFv原核表达载体并表达于包涵体中,表达的融合蛋白具有与溶藻弧菌一样的免疫原性,为溶藻弧菌抗独特型单链抗体scFv成为鱼用基因工程疫苗奠定了初步基础。