涎腺肌上皮瘤的临床病理分型和免疫组化研究

对从１８７３例涎腺肿瘤复查后确诊的４３例涎腺肌上皮瘤进行了临床病理学和免疫组化研究。结果显示：该瘤的患病率约占涎腺肿瘤的２．３％，好发于腮腺（４８．８４％）和腭腺（４１．８６％）；该瘤在病理上可分为５型：即上皮细胞型、梭形细胞型、浆细胞样细胞型、透明细胞型和混合细胞型，其实质细胞——肿瘤性肌上皮细胞为一个连续变化的瘤细胞谱，各种形态的瘤细胞可以互相转化；免疫组化ＣＫ－１８、ａｃｔｉｎ染色显示上述各型瘤细胞均为程度不等的阳性。作者认为提高该瘤确诊率的关键是对各型瘤细胞的认识；联合应用ＣＫ－１８、ａｃｔｉｎ有助于该瘤的诊断和与多形性腺瘤的鉴别。

P53蛋白和增殖细胞核抗原在涎腺良恶性肌上皮瘤中的表达

目的：检测 Ｐ５３ 蛋白和 Ｐ Ｃ Ｎ Ａ 在涎腺良恶性肌上皮瘤中的表达。方法：采用免疫组化方法检测１２ 例肌上皮瘤、８ 例肌上皮瘤细胞生长活跃型、２０ 例恶性肌上皮瘤中 Ｐ５３ 蛋白和 Ｐ Ｃ Ｎ Ａ的表达，用图像分析系统检测 Ｐ Ｃ Ｎ Ａ 的相对含量。结果： Ｐ５３ 蛋白在６ 例恶性肌上皮瘤中呈阳性表达，在良性肌上皮瘤中均呈阴性表达； Ｐ Ｃ Ｎ Ａ阳性表达的增殖指数和相对含量在恶性肌上皮瘤中表达高于在良性肌上皮中的表达（ Ｐ＜０．０１）； Ｐ Ｃ Ｎ Ａ 高表达与 Ｐ５３ 蛋白高表达有一定相关性。结论：ｐ５３ 基因突变对恶性肌上皮瘤的发生有一定作用； Ｐ Ｃ Ｎ Ａ 阳性表达和相对含量的检测是诊断恶性肌上皮瘤的重要生物学指标。

癌基因c－erbB－2、抗癌基因p53在涎腺良恶性肌上皮瘤中的表达及分析

应用免疫组化方法对４０例涎腺肌上皮瘤（ＭＥ）、肌上皮瘤细胞生长活跃（ＭＡＰ）、恶性肌上皮瘤（ＭＭＥ）进行了ｃ－ｅｒｂＢ－２、ｐ５３基因蛋白表达的研究。结果：ｃ－ｅｒｂＢ－２表达总的阳性率为４２．５％（１７／４０），其中ＭＥ为１６．７％（２／１２）．ＭＡＰ为３７．５％（３／８），ＭＭＥ为６０％（１２／２０），三者间有显著差异（Ｐ＜０．０５），ｐ５３表达总的阳性率为２５％（１０／４０），ＭＥ，ＭＡＰ，ＭＭＥ三者间无显著差异（Ｐ＞０．０５）．ｃ－ｅｒｂＢ－２与ｐ５３在该瘤中的表达无相关性，结果表明ｃ－ｅｒｂＢ－２和ｐ５３的过量表达可能参与了涎腺肌上皮瘤的发生和分化过程；特别是癌基因ｃ－ｅｒｂＢ－２的检测对鉴别该瘤的良、恶性及早期诊断有一定的意义。

六亚甲基二乙酰胺对MEC-1细胞凋亡及bcl-2基因表达的影响

目的：研究分化诱导剂六亚甲基二乙酰胺（ｈｅｘａｍｅｔｈｙｌｅｎｅ ｂｉｓａｃｅｔａｍｉｄｅ， ＨＭＢＡ）诱导人粘液表皮样癌细胞系ＭＥＣ－１细胞凋亡及对凋亡相关基因ｂｃｌ－２表达的影响。方法：用２ｍｍｏｌ／Ｌ ＨＭＢＡ和１ ｍｇ／Ｌ ５－ＦＵ对培养的 ＭＥＣ－１细胞进行体外诱导７２ ｈ后，分别采用光镜、ＴＵＮＥＬ染色、免疫组化、原位杂交、图像分析等方法进行凋亡指数、ｂｃｌ－２蛋白及ｍＲＮＡ表达水平的检测。结果：ＨＭＢＡ诱导的ＭＥＣ－１细胞凋亡指数为６８．５％，明显高于对照组和５－ＦＵ组（Ｐ＜０．０１）；ｂｃｌ－２蛋白及ｍＲＮＡ的表达强度均显著高于其它组（Ｐ＜０．０１）。结论：ＨＭＢＡ对人粘液表皮样癌ＭＥＣ－１细胞具有明显的诱导凋亡作用，其作用机制可能与减弱了凋亡相关基因ｂｃｌ－２的负调控作用有关。

涎腺恶性肌上皮瘤的免疫组织化学研究

目的 探讨涎腺恶性肌上皮瘤的临床病理特征及生物学行为。方法 采用组织病理学和免疫组化方法对 2 2例恶性肌上皮瘤进行分析。结果 好发于腮腺和腭腺 ;男性多见 (男女之比 2 3∶1) ;中位年龄4 9岁。病理特征为透明细胞型和上皮样细胞型多见 ,呈巢索状分布 ;细胞异型性明显 ,有病理性核分裂像 ;广泛浸润周围组织。免疫组化染色Actin、Ck 18、EGFR、TGFβ均呈明显的强阳性表达 ;PCNA阳性表达的平均增殖指数是 2 2 8%± 6 93,以透明细胞型的PI值为最高 ;癌基因C erbB 2、抑癌基因P53分别呈 63 6%和31 8%的阳性表达 ,各型的表达也以透明细胞型为最高。结论 恶性肌上皮瘤是一种上皮性肿瘤 ,其亚型透明细胞型恶性程度较高。C erbB 2、P53和PCNA的异常表达及协同作用在恶性肌上皮瘤的发生发展中起重要作用。

六亚甲基二乙酰胺对粘液表皮样癌细胞P^(21)和P^(53)基因的转录激活作用

为了研究分化诱导剂六亚甲基二乙酰胺 (hexamethylene bisacetamide,HMBA)在体外诱导人粘液表皮样癌细胞 (MEC- 1)时 P2 1(cip1/ waf1) ,P53 基因调控的机理 ,从而为临床治疗提供理论依据 .选用 0 .0 0 2 mol/ L HMBA和 0 .0 0 1g/ L 5 - FU对培养的 MEC- 1细胞体外诱导 72 h后 ,分别采用光镜、TUNEL染色、免疫组化、图像分析等方法进行凋亡细胞的检测及 P2 1(cip1/ waf1) ,P53表达的定量分析 .结果表明 HMBA诱导的 MEC- 1细胞 P2 1(cip1/ waf1)的表达强度显著高于对照组 (P <0 .0 1) ,P53 的表达强度显著低于对照组 (P <0 .0 1) .提示 HMBA通过激活转录因子 P2 1(cip1/ waf1) ,P53的表达而发挥对粘液表皮样癌细胞诱导分化。

涎腺肌上皮瘤的临床病理分型和免疫组化研究

对从1873例涎腺肿瘤复查后确诊的43例涎腺肌上皮瘤进行了临床病理学和免疫组化研究。结果显示:该瘤的发病率约占涎腺肿瘤的2.3％,好发于腮腺(48.84％)和腭腺(41.86％);该瘤在病理上可分为五型:即上皮细胞型、梭形细胞型、浆细胞样细胞型、透明细胞型和混合细胞型,其实质细胞—肿瘤性肌上皮细胞为一个连续变化的瘤细胞谱,各种形态的瘤细胞可以互相转化;免疫组化CK—18、actin染色显示上述各型瘤细胞均为程度不等的阳性。作者认为提高该瘤确诊率的关键是对各型瘤细胞的认识;联合应用CK-18、actin有助于该瘤的诊断和与多形性腺瘤的鉴别。

大鼠脊髓慢性压迫及减压后神经细胞凋亡及其相关基因的表达

目的:观察慢性压迫性脊髓损伤后及减压后神经细胞凋亡和Bcl-2mRNA,P53mRNA,CASPASE-3对神经功能恢复的影响。方法:将55只同龄Wistar大鼠,置入后路渐进式压迫装置,制作成慢性压迫性脊髓损伤模型。随机分为假手术对照组(A组5只),慢性脊髓压迫组(B组25只),减压组(C组25只)。应用原位末端脱氧核糖核苷酸转移酶介导dUTP标记(TUNEL)技术及原位杂交检测方法,观察各组细胞凋亡率及细胞凋亡相关基因Bcl-2mRNA、P53mRNA、CASPASE-3在慢性压迫性脊髓损伤后及减压后的表达,分别于损伤后及减压后1、3、7、14、28d对慢性脊髓损伤区进行细胞凋亡及原位杂交检测。结果:A、B、C三组均发现神经细胞凋亡及细胞凋亡相关基因Bcl-2mRNA,P53mRNA,CASPASE-3的表达,A、B、C三组细胞凋亡率及阳性细胞灰度值比较,差异有显著性意义(P<0.05)。阳性细胞表达程度与细胞凋亡的减少及神经功能的恢复相一致。结论:慢性压迫性脊髓损伤可导致大量的神经细胞凋亡,同时激活内源性保护机制,使脊髓发生适应性改变。减压可能通过激活此机制而减轻神经细胞凋亡,起到保护作用。

穿心莲内酯抗肿瘤作用机制的研究进展

近年来,穿心莲内酯的研究日益受到重视,穿心莲内酯具有抗肿瘤、消炎抗菌、抗病毒感染等广泛药理作用。在抗肿瘤方面的研究发现穿心莲内酯具有抗胃癌、肝癌、肺癌、乳癌等多种肿瘤的作用。其抗肿瘤的机制可能与诱导肿瘤细胞的凋亡、抑制细胞周期、提高淋巴细胞抗肿瘤活性等方面有关。

SphK1-S1P信号通路的激活参与糖尿病大鼠肾损伤的研究

目的观察鞘氨醇激酶1-1-磷酸鞘氨醇(SphK1-S1P)信号通路在链脲佐菌素(STZ)诱导的糖尿病大鼠肾脏中的激活情况。方法观察STZ诱导的糖尿病大鼠肾脏中SphK1-S1P信号通路的激活情况。分别检测大鼠肾脏功能及病理指标。采用液质联用分析SphK1活性及S1P含量。并采用免疫组织化学、Real-time PCR和Western blot法检测了SphK1的表达。结果 STZ诱导的糖尿病大鼠血糖、肾重体质量比、24h尿蛋白显著升高,糖尿病大鼠肾脏系膜区肥大,细胞外基质扩展。同时,糖尿病大鼠肾脏中SphK1-S1P信号通路被激活,表现为SphK1表达和活性增加,以及S1P生成增加。结论糖尿病大鼠肾脏中存在SphK1-S1P信号通路的激活,可能参与了糖尿病大鼠肾损伤过程。

APC^(Min/+)结直肠癌癌前病变小鼠模型的生物学特性

目的研究C57BL/6J-APCMin/+小鼠肠道腺瘤的生物学特性。方法记录APCMin/+小鼠的繁育情况,通过统计不同周龄小鼠小肠及大肠腺瘤的数目和总体积,观察其肠道腺瘤的发生、发展规律;通过病理组织学切片,观察腺瘤的病理学变化;通过免疫组织化学染色,观察WNT信号通路相关基因的表达情况。结果 APCMin/+小鼠9周龄时肠道开始有腺瘤发生,24周龄时多数小鼠出现死亡。从9~24周龄,腺瘤体积持续增大,但小肠腺瘤数目不再增加。免疫组化染色显示腺瘤中β-catenin入核,启动WNT信号通路下游原癌基因cyclinD1活化。结论 APCMin/+小鼠是良好的结直肠癌前病变动物模型。

改革实验室体制,完善实验室管理

实验室体制和实验室管理是制约高校教学和科研的重要因素。本文分析了高校现有实验室管理体制的弊病,提出改革实验室体制的思路与途径,以及加强科学化、规范化管理实验室的若干措施。

可摘局部义齿患者口腔内环境变化的动态观察

目的 :观察和探讨可摘局部义齿对口腔唾液流率、pH值及变链菌数的影响机制和特点。方法 :收集 2 8例患者戴用可摘局部义齿前及戴用后 2周、3月、6月、1年、2年、4年的 5min非刺激性全唾液 ,计算单位时间内唾液分泌总量 (流率 ,ml/min) ;用精密pH试纸测定唾液pH值 ;采用塑料条法测定唾液中变链菌数。结果 :①患者戴用可摘局部义齿后 ,唾液流率有所降低 ,唾液pH值有所升高。但随着戴用时间延长 ,它们又逐渐恢复正常。②患者戴用可摘局部义齿后唾液中变形链球菌数量增加。结论 :戴用可摘局部义齿可导致患者唾液分泌减少 ;酸碱平衡改变及变形链球菌数量增加。

阿尔茨海默病和帕金森病患者血清代谢组学研究

目的研究阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)和帕金森病(Parkinson’s disease,PD)患者血清代谢物的变化。方法收集正常人和临床确诊的AD和PD患者的血清,采集各组血清样品的NMR1H谱,运用主成分分析法(principalcomponentanalysis,PCA)和正交最小偏二乘判别法(orthogonal partial leastsquares-discriminant analysis,OPLS-DA)分析。结果 PCA和OPLS-DA分析显示正常人、AD患者和PD患者的血清代谢特征存在明显差异。与正常人相比,AD患者血清中异亮氨酸和乳酸含量明显升高(P<0.05),脂质、谷氨酰胺、肌酸和葡萄糖含量明显降低(P<0.05);PD患者血清中乳酸和谷氨酰胺含量升高(P<0.05,P<0.01),葡萄糖的含量降低(P<0.01);与AD患者相比,PD患者血清中脂质、乳酸和谷氨酰胺含量明显升高(P<0.05,P<0.01),而异亮氨酸、丙氨酸和葡萄糖的含量明显降低(P<0.05,P<0.01)。结论 AD患者与PD患者在血清代谢水平上具有明显差异,具有明显变化的代谢物(谷氨酰胺、丙氨酸、异亮氨酸、脂质、乳酸和葡萄糖)有可能作为潜在血清代谢标记物,为临床区分AD和PD提供参考。

穿心莲内酯对口腔癌生长的影响

目的:探讨穿心莲内酯对口腔癌的作用及其机制。方法:用穿心莲内酯及其对照药物治疗金黄地鼠颊囊癌,通过测量肿瘤体积观察治疗效果。用免疫组化检测穿心莲内酯对肿瘤血管和肿瘤细胞增殖的作用,用TUNEL法检测穿心莲内酯对肿瘤细胞凋亡的作用,用免疫组化检测凋亡信号分子caspase-3的表达情况。结果:穿心莲内酯治疗组颊囊癌的肿瘤体积明显比对照组小,肿瘤微血管密度和增殖的肿瘤细胞也明显低于对照组,肿瘤细胞的凋亡率明显高于对照组,而且治疗组中caspase-3明显被活化。结论:穿心莲内酯通过抑制肿瘤血管生成和肿瘤细胞增殖以及促进肿瘤细胞凋亡,抑制了金黄地鼠颊囊癌的生长。穿心莲内酯通过caspase-3途径诱导了肿瘤细胞的凋亡。

SGT基因在小鼠深静脉血栓形成中的作用

目的探讨SGT(small glutamine-rich tetratricopeptide repeat-containing protein)在深静脉血栓(deep vein thrombosis,DVT)形成中的作用。方法分别对SGT基因敲除小鼠及野生型对照鼠进行下腔静脉结扎建立DVT模型,观察建模后两种小鼠体内血栓形成情况,测定出血时间、凝血时间、血栓重量及长度。HE染色观察血栓形成的病理形态特点,ELISA法检测血清中可溶性细胞间黏附分子-1(soluble intercellular adhesion molecule-1,sICAM-1)和白细胞介素-6(interleukin 6,IL-6)的表达。结果与野生型对照鼠相比,SGT基因敲除小鼠在建模48 h后,裸血栓重量长度比明显减小,凝血时间和出血时间均显著延长,形成的血栓中纤维蛋白所占比例较小;SGT基因敲除小鼠血清中sICAM-1表达水平显著低于对照鼠,IL-6的表达水平差异无统计学意义。结论 SGT基因敲除能有效抑制DVT的形成,其作用机制可能与血小板功能受影响及细胞间黏附分子表达改变有关。

PTEN抑制胚胎原肠胚形成期EMT的过程

PTEN(Phosphatase and tensin homolog)是一种重要的抑癌基因,具有非常广泛的生物学活性,例如在细胞的生长发育、迁移、凋亡和信号传导等均发挥重要作用。PTEN基因表达始于在胚胎早期的上胚层,而后主要出现在神经外胚层和胚胎中胚层结构,表明PTEN可能参与胚胎早期发育过程的细胞迁移、增殖和分化。文章主要应用在体改变早期胚胎PTEN的表达水平来观察其对上胚层至中胚层细胞转换—EMT(Epithe-lial-mesenchymal transition)的作用。首先,原位杂交结果提示,内源性PTEN表达在原条以及之后的中胚层细胞结构如体节等。在体PTEN转染实验,体外培养至HH3期的鸡胚胎,转染Wt PTEN-GFP或移植Wt PTEN-GFP原条组织至未转染的同时期的宿主胚胎相同部位后,观察到PTEN转染细胞大都由上胚层迁移至原条并滞留于原条,不再参与中胚层细胞形成。移植实验也得到相似结果,发现在Wt PTEN-GFP阳性原条组织移植后很少细胞迁移出原条。另外在原肠胚期PTEN siRNA降调胚胎一侧PTEN基因后,降调侧中胚层细胞数明显少于正常侧。上述研究结果均提示PTEN基因在胚胎原肠胚期三胚层形成过程中可能具有抑制EMT的作用。

冰冻切片制作方法的改良

目的探讨使用7.5%明胶-15%蔗糖(w/v)代替OCT包埋剂对冰冻切片技术的改良。方法4.0%的多聚甲醛固定组织后,7.5%明胶-15%蔗糖代替OCT包埋剂包埋,经-80℃冰箱冷冻后,冰冻切片机进行切片。结果使用7.5%明胶-15%蔗糖代替OCT包埋组织后可以顺利的进行冰冻连续切片。结论实验结果证实,7.5%明胶-15%蔗糖替代OCT包埋剂后切片可以打破冰冻切片不能连续切片的常规,大大缩短了制片时间及节省了实验材料,并且切片效果良好、组织切片完整、厚薄均匀、不易形成皱折。

Slit-Robo信号对粘液表皮样癌细胞增殖作用的影响

目的探讨Slit-Robo信号对粘液表皮样癌细胞系Mc3细胞生长与增殖作用的影响及其作用机制。方法免疫组织化学方法及流式细胞术细胞内因子检测法检测Mc3细胞Slit2及Robo1蛋白的表达;在Robo1受体胞外区的单克隆抗体R5作用下,以细胞计数法与软琼脂克隆形成实验观察Mc3细胞生长变化及用流式细胞术细胞内因子检测法检测增殖相关蛋白PCNA的表达。结果 Mc3细胞表达Slit2及Robo1蛋白,并且在R5单克隆抗体作用下,Mc3细胞体外生长能力受到抑制,增殖能力明显减弱,PCNA蛋白表达水平下降。结论 Slit-Robo信号可能影响Mc3细胞的生长增殖能力,对肿瘤细胞内的PCNA有正调控作用,提示该信号可能参与粘液表皮样癌的发生及发展过程。

鼻咽癌放射敏感性异质性的形态学差异观察

目的探讨鼻咽癌放射敏感性异质性与形态学变化的相关性。方法应用电镜观察并用体视学技术测算,比较鼻咽癌细胞系CNE-2Z亚克隆株H5和S1,于体内体外照射后形态学改变的差异;用流式细胞仪、荧光显微镜检测H5和S1放射后凋亡率的不同,用Western-blot检测H5和S1放射后凋亡蛋白Bcl-2表达的差异,以期探讨其形态学异质性机制。结果H5和S1照射后形态学改变差异有显著性;照射后的H5比S1凋亡率高,对射线敏感;S1细胞的各个照射剂量组Bcl-2蛋白表达无明显差异;而H5细胞的各个照射剂量组Bcl-2蛋白表达随照射剂量的增加而递减。结论H5、S1照射后形态学的差异变化可用于预测其放射敏感性的异质性。