猪圆环病毒2型病毒样颗粒三倍轴区域嵌合猪细小病毒抗原表位的展示策略及免疫原性

为了探索猪圆环病毒2型(porcine circovirus type 2, PCV2)病毒样颗粒三倍轴区域展示外源抗原表位的潜力,本研究借助结构模拟和蛋白质的三维结构展示,分析了PCV2核衣壳表面氨基酸残基突变后的结构差异。通过分析不同cap基因突变质粒在大肠杆菌表达系统中所表达的突变体蛋白的可溶性和纯化难易程度,确定合适的外源表位嵌合区。将嵌合PPV抗原表位的Cap蛋白经体外组装获得重组的病毒样颗粒,将此病毒样颗粒免疫小鼠,通过抗体检测来评价其免疫原性。结果显示,PCV2核衣壳表面三倍轴区域存在两个适合用于展示外源表位的氨基酸区域(分别命名为Motif A和Motif B),相同表达条件下,Motif A区域的突变蛋白均以可溶性表达为主,且能一步纯化获得目的蛋白,而Motif B区域的突变蛋白多以包涵体形式存在;Motif A区域嵌合PPV表位后,纯化的重组蛋白能在体外组装成cVLPs,并通过间接免疫荧光试验证明其保留有野生型VLPs内化PK15细胞的能力;形成的cVLPs能刺激小鼠机体产生分别针对PCV2 VLPs、B5-E1表位和PPV VP2蛋白的抗体。综上表明,PCV2 Cap蛋白Loop GH区域Motif A能够将外源表位展示在病毒样颗粒外表面,并且能够被机体免疫细胞识别产生特异性抗体。

猪Lck蛋白在猪圆环病毒2型体外复制过程中的作用

为了鉴定猪圆环病毒2型(PCV2)侵染细胞建立感染的重要宿主因子,本文分析在PK-15细胞中猪淋巴细胞特异性酪氨酸激酶Lck表达及活性对PCV2感染复制的影响,确定Lck是调控PCV2感染复制的新靶点。首先,本研究基于猪Lck结构特性和序列保守性分析,选取Lck SH3结构域为免疫原基因序列,利用原核表达目的蛋白制备小鼠抗猪Lck的多克隆抗体。然后,通过Western blot检测PCV2感染PK-15和3D4/21细胞后对Lck表达及活性的影响。最后,在PK-15细胞中利用瞬时转染过表达或Lck特异性抑制剂(A770041),通过Western blot和荧光定量PCR(RT-qPCR)检测猪Lck表达和磷酸化对PCV2复制的影响。结果显示,成功制备了鼠源性抗猪Lck的多克隆抗体。在PCV2感染PK-15和3D4/21细胞早期阶段,Lck表达水平未见明显变化,但Lck磷酸化水平显著上调。过表达Lck可显著上调PCV2 Cap蛋白表达及病毒拷贝数,而采用A770041抑制Lck磷酸化水平后,可显著下调PCV2 Cap蛋白表达、病毒拷贝数和病毒滴度,这些结果表明Lck正调控PCV2的感染复制,为发现PCV2感染的新分子机制奠定重要基础。

经桡动脉入路颅内动脉狭窄支架成形术四例

目的 报道4例经桡动脉入路行颅内动脉狭窄支架成形术的缺血性卒中病例并总结其治疗经验。方法与结果 回顾分析2022年青岛大学附属医院采用经桡动脉入路行颅内动脉狭窄支架成形术的4例缺血性卒中患者的诊断与治疗过程,狭窄分别位于左颈内动脉起始部、右椎动脉起始部、左椎动脉V4段、左椎动脉V4段与基底动脉起始部交界处,经桡动脉入路颅内动脉狭窄支架成形术顺利,术后狭窄均再通,术中及术后无一例出现并发症。结论 经桡动脉入路颅内动脉狭窄支架成形术治疗缺血性卒中安全、有效。

颈内动脉颅外段迂曲与前循环脑梗死的相关性研究

目的:探讨颈内动脉颅外段血管迂曲与前循环脑梗死的相关性;方法:回顾性分析2022年5~10月于我院住院的1340例患者,记录入选者的临床资料(年龄、性别、高血压、高脂血症、糖尿病、吸烟史、冠心病及前循环脑梗死情况)。使用单因素及多因素Logistic回归分析前循环脑梗死与颈内动脉颅外段迂曲及其程度及一般危险因素的关系。结果:前循环脑梗死组与对照组之间,年龄、性别、高血压、糖尿病、冠心病、高脂血症、吸烟史以及血管迂曲程度等因素的差异均具有统计学意义。单因素Logistic回归分析揭示,与前循环脑梗死无显著相关性的只有简单迂曲,而折曲、卷曲和颈内动脉颅外段的迂曲程度及其他一般性危险因素均与之具有相关性。进一步的多因素Logistic回归分析表明,年龄、男性、高血压病史、糖尿病史、冠心病史、高脂血症病史以及吸烟史是前循环脑梗死的独立危险因素。然而,颈内动脉颅外段的迂曲指数无论是左侧(OR 0.92, 95%CI 0.24~3.53, P = 0.91)还是右侧(OR 2.60, 95%CI 0.66~10.23, P = 0.17),均不构成前循环脑梗死的独立危险因素。结论:颈内动脉颅外段的折曲和卷曲形态与前循环脑梗死存在显著关联,但其迂曲程度并不是前循环脑梗死的独立危险因素。

基于变换应力方法的各向异性模型三维化

各向异性模型的三维化较各向同性模型更加复杂,如果采用g(θ)方法进行各向异性模型的三维化,会出现诸如屈服面不连续、内凹的现象。但如果采用变换应力方法,既能保证各向异性屈服面的连续光滑,又能使各向异性模型的临界状态面与强度准则相一致。采用基于SMP准则的变换应力方法,实现了初始应力各向异性化的修正剑桥模型的三维化,确定了三维化模型的塑性因子和塑性流动方向,并给出了应用于有限元计算的切线刚度矩阵。通过试验数据和预测结果的对比,表明变换应力方法三维化的各向异性模型能够较合理地反映K0固结土的强度和变形特性。

鼠源性抗雄性特异性抗原噬菌体Fab抗体库的构建

利用雄鼠脾细胞免疫6-7周龄C57BL/6雌鼠,加强免疫后取脾细胞,TRIZOL法提取细胞总RNA,并逆转录合成cDNA第一条链。以其为模板,利用特异性Ig基因的引物PCR扩增出重链Fd片段和κ链基因,并将扩增出基因重组到噬质粒载体pComb3中,重组噬质粒转化大肠杆菌XL1-Blue中,分别构建κ链基因库和抗体Fab段基因库。分别经蓝白斑筛选,计算转化效率,通过PCR反应和双酶切反应鉴定抗体库的重组率,轻链、重链Fd段基因的重组率均为80%。抗体Fab段基因库经过辅助噬菌体VCSM13超感染,成功构建了鼠源性噬菌体Fab抗体库,并测定噬菌体抗体库的库容和滴度,结果分别为1.5×10^7,3.2×10^11pfu/mL。对噬菌体抗体库的18个克隆进行ELISA分析,结果显示以雄鼠脾细胞作为抗原时,有9个克隆含有雄性特异性的噬菌体抗体,而以雄鼠睾丸细胞作为抗原时,有8个克隆与睾丸细胞呈现结合活性。噬菌体抗体库的构建为雄性特异性抗原的鼠源性噬菌体抗体Fab片段的筛选及其应用、雄性特异性抗原和抗体功能性分子基础的研究奠定了坚实基础。

土的干密度对水气迁移影响规律的试验研究

针对冷凝条件下的"锅盖效应"现象,设计了简易的水气迁移试验模拟装置,进行不同干密度的北京地区粉土的水气迁移试验.试验结果表明:不同土体干密度的试验中,均发生了明显的水气迁移导致的土体低温端含水量增大的现象;随着土体干密度的增大,土体中水气迁移的速率随之下降,土体含水量增大的现象被弱化.因此,提高粉质土的干密度,虽不能避免水气迁移的发生,但可作为一项防治"锅盖效应"的有效辅助措施.

鼠源性抗雄性特异性抗原噬菌体Fab抗体的制备及分析

利用噬菌体抗体库筛选技术获得抗雄性特异性抗原的噬菌体Fab抗体,首次采用雄鼠脾细胞对鼠源性抗雄性特异性抗原噬菌体Fab抗体库进行3轮亲和富集和2轮雌鼠脾细胞吸附,对筛选后特异性噬菌体Fab抗体进行ELISA分析,重组率鉴定及基因测序分析。结果显示,5次筛选后的15个菌落中有9个能产生抗雄性特异性抗原特异性噬菌体抗体,噬菌体Fab抗体的基因重组率为60%,E5克隆的重链、轻链可变区序列分别属于VH1和VκⅣ基因家族,这为挑选出高亲和力的抗雄性特异性抗原噬菌体Fab抗体奠定了实验基础,将推进雄性特异性抗原及其抗体的研究进程,并为性别控制研究开创新途径。

粒状材料颗粒破碎的力学特性描述

基于粒状材料的颗粒破碎对材料剪胀特性的影响以及描述特征状态应力比的幂函数表达式,提出相应的屈服面和屈服面的表达式,并对屈服面随参数的变化规律进行分析。分析结果表明:通过选取适当的参数,屈服面能够完全回归到修正剑桥模型屈服面的形式。最后,结合适当的等向压缩条件和统一硬化参数,将屈服面应用到砂土的本构模型,能够很好地预测试验结果,合理描述砂土颗粒破碎的力学特性。

不同剂量尼莫地平对SAH患者ET-1、NO及大脑中动脉平均血流速度的影响

目的探讨应用尼莫地平预防蛛网膜下腔出血(SAH)后脑血管痉挛(CVS)的最佳剂量。方法将60例原发性SAH患者随机分为SAH1、SAH2、SAH3、SAH4组各20例,分别予2、1、0.5、0.2 mg/h尼莫地平静滴,在第1、3、7、10、14 d观察血浆和脑脊液(CFS)中内皮素-1(ET-1)和NO动态变化,并用经颅多普勒(TCD)监测各组大脑中动脉(MCA)的平均血流速度(Vm)。结果与SAH3组及SAH4组比较,SAH1组及SAH2组血浆和CSF中ET-1水平明显升高、NO明显降低(P<0.05),MCA的Vm明显降低;SAH1组及SAH2组分别有7例(35%)和1例(5%)因血压下降退出试验(P<0.05)。结论1 mg/h尼莫地平(静滴)为防治SAH后CVS的适宜剂量。

血清学检测H-Y噬菌体Fab抗体阳性克隆的分析

目的为分析H-Y噬菌体Fab抗体特异性,筛选用于抗体亲和力提高的H-Y噬菌体Fab抗体阳性克隆。方法以从噬菌体Fab抗体库中筛选到具有雄性特异性结合活性的阳性克隆A6、A8、E6为基础,通过C57BL/6鼠脾细胞为抗原的ELISA分析3株阳性克隆的特异性,镜下观察亲和力较好的A8阳性克隆ELISA结果,利用生物信息学方法预测分析该克隆的抗体基因可变区序列和结构。结果 ELISA分析显示3株阳性克隆具有雄性特异性,其中A8阳性克隆具备较好的雄性特异性。A8克隆具有免疫球蛋白轻链和重链可变区结构,其重链、轻链可变区分别属于VH I和VκIV基因家族。结论 A8阳性克隆可用于后续的导向筛选和抗体基因改造等研究工作。

Touchdown PCR扩增多样性小鼠Fab抗体基因

为了扩增多样性Fab抗体基因产物,保证噬菌体抗体库的足够库容。分离C57BL/6鼠的脾脏,并制备脾细胞悬液,提取其总RNA,逆转录为cDNA,利用普通PCR和Touch down(TD)PCR扩增鼠Fab基因产物,通过琼脂糖凝胶电泳验证PCR产物,比较分析2种方法的扩增效果。结果显示:轻链和重链Fd基因的PCR产物大小约为680bp,与理论值相符。电泳结果显示,TD-PCR获得8个重链Fd基因和6个轻链基因条带,普通PCR获得7个重链Fd基因和5个轻链基因条带。在普通PCR产物中,轻链基因引物VkB未能扩增出相应基因,而TD-PCR扩增出该基因。TD-PCR扩增出引物ⅢA和ⅢC的对应基因,而普通PCR却未见对应结果,普通PCR扩增出ⅢB引物的对应基因,TD-PCR未见对应结果。比较分析认为,TD-PCR可以增加抗体基因多样性,有潜力成为保证噬菌体Fab抗体库库容的途径,为Fab抗体基因的扩增及相关研究提供实验参考。

早孕因子的研究进展及应用前景

早孕因子(EPF)是一种免疫抑制性的调节因子,目前普遍认为它是热激蛋白家族成员伴侣蛋白10 的同系物,是最早确认妊娠的生化标志之一,可用花环抑制试验做生物学鉴定。EPF的可用于预测早期胚胎发育情况,帮助了解妊娠母体对胚胎的识别,免疫耐受等机制。早孕因子的发现及研究在生殖生物学领域中具有非常重要的意义。

有关1∶25万航磁系列图的几个问题

航磁系列图编制的主要内容是将历年航磁测量成果重新整理、拼接,形成航磁基础图件,经过化极处理后,制作上延、剩余、导数等图件供用户使用。笔者就编图工作的几个技术关键问题进行了探讨。

电刺激丘脑底核对大鼠杏仁核电点燃的抑制作用

目的在大鼠杏仁核电点燃癫痫模型中研究丘脑底核高频深部电刺激对点燃的抑制作用及其对Glu、GABA浓度的影响。方法建立大鼠杏仁核电刺激点燃模型,观察丘脑底核高频深部电刺激对点燃发作的抑制作用,应用高效液相色谱(HPLC)测定大鼠脑组织中Glu、GABA的浓度。结果对丘脑底核高频深部电刺激(130Hz,0.2ms,5V)能够有效抑制大鼠杏仁核电点燃(P<0.05);并可以降低纹状体内Glu浓度,升高纹状体内GABA浓度(P<0.05)。结论丘脑底核高频深部脑电刺激能有效抑制大鼠杏仁核电点燃,其作用机制可能与改变Glu、GABA浓度平衡有关。

糖尿病与脑梗死的关系研究进展

糖尿病已被公认是引起脑梗死的独立危险因素之一．脑梗死则是糖尿病常见而主要的并发症之一。糖尿病合并脑梗死有其不同于单纯脑梗死的临床特点及预后。糖尿病患者的脑梗死发病率为非糖尿病患者的2～4倍，

百多邦联合芦荟胶治疗截瘫患者压疮的探讨

目的探讨莫匹罗星软膏(百多邦)联合芦荟胶治疗截瘫患者压疮的临床效果。方法 72例院外截瘫并发压疮患者,随机分成试验组和对照组,每组36例。两组应用相同的清理方法进行清理,试验组应用百多邦联合芦荟胶进行换药,对照组采用百多邦进行换药。对比两组治疗效果。结果治疗后,试验组总有效率为91.67%,高于对照组的72.22%(P<0.05)。结论应用百多邦联合芦荟胶进行治疗可以取得较好的效果,值得推广。

广义非线性强度与广义滑动面

广义Mises准则满足八面体面上的剪应力和正应力之比为常数,SMP(Spatially Mobilized Plane)准则满足空间滑动面上的剪应力和正应力之比为常数,那么对于包含或逼近现有非线性强度准则的广义非线性强度,在物理空间中应存在一平面,且满足该平面上的剪应力和正应力之比为常数.为此,提出了介于八面体面和空间滑动面之间的广义滑动面,与广义非线性强度相对应,广义滑动面上的剪应力与正应力之比为常数,并给出了广义滑动面上应力比的表达式,及主应力空间中的强度面形状.通过深入分析和对比,表明了广义非线性强度和广义滑动面在材料强度描述上的一致性。

优质饲草在养猪产业中的应用

优质饲草的营养价值早已在养猪产业中得到认可,适时适量使用饲草可替代部分日粮,有利节约粮食、促其生长、提高免疫力。猪粪、尿回施于饲料生产田土则可实现循环利用,从而提高生猪养殖业的经济和生态效益。为此,对目前生产上主要的饲草种类在养猪上的生产应用及效果进行了综述和分析,并对饲喂时的注意事项进行了探讨。