光的非视觉生物效应评价方法及其质量评估模型的构建

为提高光的非视觉生物效应研究方法选取提供科学依据,本研究采用文献分析法搜集筛选有效文献240篇对光的非视觉生物效应相关的认知/注意力水平、警觉度、情绪、睡眠质量、节律相位等5个人体指标的25种评价方法进行比较评估。研究结果:(1)提出由“方法设计”、“心理学评价特征量”和“方法在光环境研究中适用性”三个维度的14个方法质量评估指标组成的方法质量评估模型;(2)构建适用于综合光环境研究的非视觉生物效应评价方法质量评估模型;(3)提出不同光环境特征量化分析方法。光的非视觉生物效应评价方法质量评估模型的建立可以为不同类型的光环境研究提供方法选取的依据和推荐,从而为光环境人因工程学研究的方法论提供理论基础。

高原青稞籽粒提取物的成分分析及其抗氧化活性研究

目的:对比青稞籽粒的提取方法,以最大化获得其抗氧化活性物质。方法:采用生物发酵法、水提法、醇提法3种方法,对比分析青稞籽粒提取物中β-葡聚糖、总酚的提取效率。通过铁离子还原抗氧化能力测定(FRAP),2,2'-联氮-双-(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)二铵盐(ABTS)、1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)自由基清除法检测青稞籽粒提取物的抗氧化能力。同时,利用高效液相色谱-串联质谱法(LC-MS/MS)对提取物进行代谢物鉴定。结果:醇提法表现出最优的提取效果,得到2.03µg/mLβ-葡聚糖和8.88µg/mL没食子酸当量的总酚,并在FRAP、ABTS、DPPH3种抗氧化能力检测法中都显示出最强的抗氧化能力。代谢物分析筛选出25种化合物,其中23种具有抗氧化活性。结论:本研究揭示了青稞籽粒提取物的代谢组成及其抗氧化活性,为深入理解青稞的营养特性及其潜在健康效益提供了科学依据,也为青稞在医药和保健品开发中的应用提供了理论支持。

利用无创测量表征人体面部皮肤老化表型

目的:利用无创测量技术提取的中国人群面部皮肤理化参数建立表征皮肤老化表型的新指标。方法:招募100例不同年龄段的健康受试者,通过皮肤无创测试仪器检测皮肤含水量等皮肤参数,进行主成分分析(PCA)和广义线性模型分析(GLM)。结果:相关性分析发现胶原蛋白密度与年龄呈显著负相关(r=-0.31,P<0.01),眼角弹性指标R5(r=-0.612,P<0.0001)等参数明显随年龄增加而降低。广义线性模型建立的SAI与年龄关系更为显著(r=0.699,P<0.0001)。结论:面部皮肤老化主要表现为胶原蛋白流失,弹性降低,皮肤变黑变红,利用无创测量参数和广义线性模型建立的皮肤老化指数可以用来表征面部皮肤复杂的老化特征。

紫外线B(UVB)损伤人皮肤基底膜屏障的分子特征

目的:观察UVB照射引起的基底膜屏障损伤的特征。方法:使用40 mJ/cm^(2)UVB照射HaCaT细胞,通过RNA-seq数据分析研究基底膜屏障相关基因的表达特征。通过透射电镜和免疫荧光染色,在3组离体皮肤组织中观察50 mJ/cm^(2)UVB连续照射3 d后基底膜结构及关键屏障蛋白含量的变化。结果:发现了18个与基底膜相关的基因,其中17个基因表达下调,COL4A4、COL4A5、COL4A6、ITGB1、ITGA3、ITGA4、ITGA6、LAMA5的表达水平下调倍数超过1.5倍(P<0.05),而HPSE的表达上调了2.4倍(P<0.0001)。在离体皮肤组织实验中,UVB照射后观察到基底膜透明层和致密层断裂,半桥粒破坏,完整性和连续性受损,并且整合素蛋白含量下降(P<0.05)。结论:UVB照射会下调基底膜屏障结构相关基因的表达,上调乙酰肝素酶基因表达,造成基底膜结构紊乱以及基底膜关键屏障蛋白降解,使基底膜屏障受损。

LEPREL1是特发性肺纤维化的潜在治疗靶点

为了寻找特发性肺纤维化(IPF)的潜在治疗靶点,从GEO获取IPF基因芯片数据,用R分析差异表达基因和通路;用STRING和Cytoscape筛选枢纽(HUB)基因;RNA-Seq和单细胞数据验证,肺纤维化小鼠实验验证,筛选具有相关性的基因,分析潜在通路。结果显示:基因芯片数据集GSE10667、GSE53845、GSE48149共116例样本,差异基因132个,主要富集在细胞外基质、胶原等通路。STRING和Cytoscape筛选HUB基因,主要为COL1A1、CXCL12、LEPREL1等基因,其中LEPREL1表达显著下调(GSE10667,P_(adj)=0.00096;GSE53845,P_(adj)=0.0001048;GSE48149,P_(adj)=0.01517)。LEPREL1在RNA-Seq数据集GSE92592(P_(adj)=0.0288)、GSE83717(P_(adj)=0.006268)、GSE150910(P_(adj)=1.9528e-30)中均显著下调;在单细胞数据(GSE135893)中主要在AT2细胞中表达并有下调趋势;在肺纤维化小鼠的RT-qPCR和IHC中也表达显著下调。差异表达基因中有81个与LEPREL1具相关性的基因,主要与细胞黏附、钙离子、胶原形成、Wnt等通路相关。IPF的差异基因主要富集在胶原和细胞外基质通路,且AT2细胞中下调的LEPREL1可能是其潜在治疗靶点。

益气活血复方治疗硬皮病肺部炎症与纤维化的作用机制:基于生物信息学与网络药理学方法

目的通过生物信息学与网络药理学方法鉴定益气活血复方(YQHX)治疗硬皮病肺部炎症与纤维化的有效成分和关键分子,为硬皮病药物靶点开发提供依据。方法利用一次性气管灌注方法,使用博莱霉素诱导建立肺纤维化小鼠模型。将24只小鼠随机分成PBS对照组、博来霉素组、YQHX对照组、YQHX治疗组,每组6只,分别予以PBS或益气活血复方灌胃处理。利用HE染色、Masson染色方法验证YQHX对小鼠肺组织炎症及纤维化的治疗效果。从TCMSP数据库获取YQHX抗纤维成分丹参的活性成分及靶基因。整合PPI网络、GO/KEGG富集分析、分子对接等多种生物信息学分析,确定丹参治疗硬皮病的主要活性成分及关键靶点,分析相关信号通路。利用免疫组化分析小鼠肺组织标本中CD3抗体、p-PI3K抗体及p-AKT抗体表达情况,验证YQHX对炎症治疗及关键通路的影响。结果HE染色及Masson染色结果显示小鼠肺组织纤维化程度及炎症浸润下降,提示YQHX能够显著改善肺部纤维化、炎症及组织破坏程度。生物信息分析提示丹参中关键成分主要为木犀草素。PPI网络分析发现AKT1、EGFR、ESR1、TNF、IL6为丹参治疗硬皮病的核心靶点。KEGG富集发现基因主要富集在PI3K-AKT通路。分子对接分析发现木犀草素与4个关键靶点间存在潜在结合位点。免疫组化结果表明,YQHX显著降低博来霉素诱导的小鼠肺组织CD3+T细胞浸润、p-PI3K和p-AKT水平。结论YQHX对肺部炎症与纤维化具有显著的疗效。木犀草素可能是YQHX中关键有效分子,其可能通过靶向PI3K-AKT通路治疗硬皮病肺部炎症与纤维化。

系统性硬化症发生肺动脉高压的独立危险因素分析

目的:探讨血清肿瘤相关抗原(TAAs)[包括癌胚抗原(CEA)、甲胎蛋白(AFP)、糖链抗原125(CA125)、糖链抗原15-3(CA15-3)、糖链抗原19-9(CA19-9)、糖链抗原72-4(CA72-4)和糖链抗原50(CA50)]与系统性硬化症(SSc)合并肺动脉高压(PAH)的关系。方法:采用病例对照方法探索7种血清肿瘤相关抗原与SSc-PAH及系统性硬化症不合并肺动脉高压(SSc-nonPAH)患者之间的关联。共纳入290例SSc患者,其中男41例,女249例,年龄中位数51岁,病程中位数7年。采用二元Logistic回归进行多因素分析。结果:SSc-PAH患者血清中的肿瘤相关抗原CEA、CA125、CA19-9、CA50均显著高于SSc-nonPAH患者(P<0.05)。多因素Logistic回归分析结果显示,SSc-PAH患者的血清CA125水平显著高于SSc-nonPAH患者(P=0.007)。结论:血清CA125是SSc发生PAH的独立危险因素,血清CA125含量可能是SSc合并PAH患者的有效生物标志物,可为SSc-PAH的诊断及预后提供一定的参考价值。

中国汉族人群线粒体DNA单倍群与尿酸水平的关联研究

尿酸(UA)是人体内嘌呤核苷酸代谢的最终产物,与多种慢性疾病相关。因线粒体处于人体代谢的核心位置,线粒体DNA变异可能影响血液中尿酸水平。本研究对来自广西南宁、江苏泰州和河南郑州的3个中国汉族人群共计2837例样本(其中男性样本1112例、女性样本1725例)进行分析,对样本初始的UA值矫正了性别和年龄因素。本研究根据线粒体DNA的变异将受试者分为16种基础单倍群,通过比较每个单倍群样本和其他样本的UA水平差异,探索线粒体单倍群和UA的相关性。在总体3个汉族人群中,M8单倍群的UA矫正值((310.5±87.2)μmol/L)显著低于其他单倍群((326.1±80.6)μmol/L,P=0.02),B5单倍群的UA矫正值((338.8±72.5)μmol/L)显著高于其他单倍群((324.9±81.2)μmol/L,P=0.01)。本研究结合后续分析发现,在总人群、南宁人群和泰州人群女性数据中,M8单倍群均与低UA水平显著相关;在总人群和女性数据中,B5单倍群与高UA水平显著相关。综上所述,本研究在中国汉族人群中发现了与UA水平显著相关的线粒体单倍群,为后续线粒体DNA变异在尿酸代谢中的作用机制研究提供线索。

ColorMeter和VISIA-CR图像提取肤色的方法对比

目的:建立基于VISIA-CR图像提取中国人群面部肤色表型的方法,比较VISIA-CR图像提取的肤色参数与ColorMeter肤色仪测量值的一致性,为利用面部图像数据提取肤色表型建立参考方法。方法:基于机器学习模型自建算法自动批量提取VISIA-CR图像的肤色参数,并比较提取面积、位置和光源模式对结果的影响;随后利用256例健康人群面部VISIA-CR图像提取的肤色参数与ColorMeter肤色仪测量值进行了Pearson相关性分析。结果:VISIA-CR标准光和交叉偏振光两种模式下提取的肤色参数强相关(L^(*),R=0.86;a^(*),R=0.90;b^(*),R=0.85;P<0.05),相邻或对称位置下不同面积的肤色参数也强相关(R>0.82,P<0.05),提示光源模式、相邻或对称位置和测量面积对VISIA-CR图像提取结果的影响不大。VISIA-CR图像提取的肤色参数与ColorMeter测量值有相关性(P<0.05),其中交叉偏振光模式下,较大提取面积的肤色参数L^(*)值与仪器测量值强相关(R>0.73)。结论:该方法可从VISIA-CR图像中准确提取肤色参数且能较好解决肤色不均的测量偏差问题,交叉偏振光模式和较大提取面积下的肤色参数L^(*)值更接近ColorMeter仪器测量结果,推荐用于肤色表型的提取。

基于数据库挖掘皮肤黑色素瘤微环境预后生物标志物

目的 通过探索肿瘤微环境(TME)来确定与皮肤黑色素瘤(SKCM)预后生存相关基因,并进一步构建评估SKCM患者预后的风险预测模型。方法 根据癌症基因组图谱(TCGA)数据库和ESTIMATE算法计算SKCM患者的免疫评分和基质评分,筛选高分组与低分组之间的差异表达基因(DEG),并进一步通过功能富集分析、蛋白质相互作用网络(PPI)、生存分析和Lasso回归分析筛选预后显著相关基因,最终利用预后显著相关基因构建风险预测模型。结果 471例SKCM病例纳入本研究,根据免疫评分和基质评分的中位数,将236例评分≥中位数的患者纳入高分组,235例评分<中位数的患者纳入低分组。高免疫评分组和高基质评分组的中位生存时间分别显著长于低免疫评分组和低基质评分组(P值均<0.05)。Kaplan-Meier生存曲线显示,免疫评分、基质评分均与SKCM患者的生存时间呈正相关(P=0.000 11、0.046)。SKCM患者中高分组和低分组的基因表达数据分析结果显示,高分组和低分组具有不同的基因表达谱。基于免疫评分的结果显示,高分组有1 257个基因上调,20个基因下调[log2差异倍数(|log2(FC)|>1.5),P<0.05];基于基质评分的结果显示,高分组有876个基因上调,42个基因下调[|log2(FC)|>1.5,P<0.05]。免疫评分和基质评分进行基因集富集分析(GSEA),结果显示上调基因主要富集的基因组百科全书(KEGG)通路为细胞因子-细胞因子受体的相互作用、趋化因子信号传导途径、NF-κB信号传导途径等,基因本体(GO)通路为免疫学突触、细胞因子产生的负向调节和正向调节、细胞杀伤等。韦恩图显示,有728个DEG在免疫评分和基质评分的高分组中表达上调,3个DEG在免疫评分和基质评分的高分组中表达下调,即一共731个基于不同评分筛选出的共有DEG。对731个共有DEG进行功能富集分析,结果显示共有DEG与免疫应答具有相关性;生存分析显示,共有599个(81.9%)基因的表达情况与SKCM患者的预后相关,其中596个(81.5%)基因的高表达与SKCM患者更好的预后相关(P<0.05),3个(0.4%)基因的低表达与SKCM患者更好的预后相关(P<0.05)。通过Lasso回归进一步筛选出29个候选基因,利用29个候选基因计算风险评分,并且根据风险评分将SKCM患者分为高风险组(评分≥中位数)和低风险组(评分<中位数);结果显示,低风险组的中位生存时间显著长于高风险组(P<0.000 1),且AUC达到0.66。结论 探索SKCM患者的TME确定了29个SKCM预后相关基因,构建的风险预测模型可用于评估患者生存情况。

硬皮病及其在不同人群中遗传因素的差异

硬皮病是一种复杂的自身免疫性疾病,其主要特征有微血管受损和组织器官纤维化,根据其发病累及范围不同,主要分为系统性硬皮病和局限性硬皮病两种类型。硬皮病发病症状复杂,发病机制不明,导致治疗效果不甚理想。硬皮病发病有家族聚集现象及种族差异,表明硬皮病具有遗传易感性。近年来许多研究集中于寻找硬皮病发病的遗传因素,并已发现有多种候选基因及通路参与硬皮病的发生与发展过程。然而,不同人群中的研究结果并未得出完全一致的结论,群体遗传结构的差异可能与硬皮病的发生密切相关。

博莱霉素诱导肺纤维化小鼠模型的建立及特征

目的探讨博莱霉素气管灌注诱导肺纤维化小鼠模型在不同时期分子生物学及组织病理学的改变。方法 6～8周龄C57BL/6小鼠60只,30只为正常对照组,30只以博莱霉素2.5 mg/kg单次气管灌注建立小鼠肺纤维化模型(模型组),以肺组织病理学形态及基因表达水平为指标,判断模型小鼠肺纤维化发展阶段。结果正常对照组小鼠的肺组织无明显病理改变,模型组小鼠肺部有不同程度的肺泡结构破坏、炎性细胞浸润以及大量以胶原为主的细胞外基质沉积。基因表达检测结果显示:模型组灌注博莱霉素1～2周,小鼠肺组织白介素(IL)-4、IL-13较正常对照组升高,而3～5周模型组与正常对照组无差异(P>0.05)。模型组肺组织中胶原基因Colla2、Cola13、结缔组织生长因子(CTGF)、转化生长因子-β_1(TGF-β_1)均较正常对照组有不同程度的升高,与组织病理学改变一致。结论博莱霉素2.5 mg/kg单次气管灌注可成功建立肺纤维化小鼠模型;博莱霉素灌注早期以肺部炎性浸润为主,第3周时肺纤维化达到高峰,第5周开始纤维化有所缓解。

抗U_1RNP抗体在系统性硬化症中的临床意义

目的分析抗U_1RNP抗体与中国系统性硬化症（systemic sclerosis,SSc）患者临床特征及实验室指标的相关性。方法选取上海中西医结合医院、河北以岭医院、成都中医药大学附属医院和中南大学湘雅二医院等4家医院诊断明确的中国SSc患者354例,记录其临床表现和实验室检查结果,同时检测抗U_1RNP、ATA、ACA、SSA、SSB、Sm抗体。统计分析抗U_1RNP抗体阳性患者与阴性患者之间各种临床特征及实验室指标。结果 354例SSc患者中抗U_1RNP抗体的阳性率为25.5%,抗U_1RNP抗体阳性组患者发病年龄为（35.38±12.45）岁,明显低于抗U_1RNP抗体阴性组患者的（39.80±12.81）岁（P〈0.01）。在多因素分析中,抗U_1RNP抗体阳性者较阴性者关节肌肉累及发生率增加,手指点状凹陷症状发生率降低,C3水平降低,白细胞和血小板计数减少,但IgG水平和C3降低发生率明显增高（P〈0.05）。分层分析中,与抗U_1RNP抗体阴性患者相比,阳性组中女性患者不易发生活动后气促症状,而在40-50岁发病的抗U_1RNP抗体阳性患者不易患有消化道累及的症状,病程在12年以上的SSc患者具有较低的皮肤硬度积分（P〈0.05）。抗U_1RNP抗体阳性的SSc患者具有更高的抗Sm、SSA、SSB抗体检出率,而阴性SSc患者有更高的ATA抗体检出率（P〈0.05）。与ATA抗体阳性者比较发现,抗U_1RNP抗体阳性患者仍具有很低的手指点状凹陷症状的发生率（P〈0.05）。结论抗U_1RNP抗体是中国SSc患者的常见自身抗体,与ATA、Sm、SSA、SSB抗体联合检测有助于提高SSc的诊断,U_1RNP抗体阳性的SSc患者应密切关注关节肌肉累及和血液系统的变化,男性患者应注意高密度胆固醇水平的变化。抗U_1RNP抗体阳性患者的SSc严重程度不如ATA阳性的患者,此类患者不易患有手指点状凹陷症状,女性患者不易发生活动后气促,40-50岁发病患者不易累及消化道。

自噬通路基因多态性与晚期非小细胞肺癌含铂化疗疗效的相关性分析

对晚期非小细胞肺癌患者采用含铂化疗是肺癌临床治疗中非常重要的方法,然而不同患者对含铂化疗的敏感性却存在着明显的个体差异,这提示发现潜在的分子标志物对预测临床中含铂化疗疗效具有关键作用。本研究旨在探索自噬通路基因多态性与晚期非小细胞肺癌含铂化疗疗效之间的相关性,以期寻找可能影响含铂化疗药物敏感性的分子标记。本研究纳入了1004例接受含铂化疗的晚期非小细胞肺癌患者,分析了自噬通路中13个基因上的99个SNP位点与含铂化疗临床获益、无疾病进展时间及总生存时间之间的相关性。研究发现,位于ULK1基因的位点rs7953348(G>A)(P=0.017,OR:0.67,95%CI:0.49~0.93)和rs12303764(A>C)(P=0.009,OR:0.63,95%CI:0.45-0.89)及位于ATG14基因上的位点rs17742719(C>A)(P=0.002,OR:1.83,95%CI:1.26~2.66)、rs8003279(A>G)(P=0.006,OR:1.65,95%CI:1.16~2.35)和rs1009647(G>A)(P=0.002,OR:1.70,95%CI:1.22~2.37)与临床获益存在显著关联,位于DRAM基因上的位点rs7955890(G>A)(P=0.004,HR:0.63;95%CI:0.46~0.86)和rs17032060(G>A)(P=0.006,HR:0.65,95%CI:0.48~0.88)及位于ATG3基因上的位点rs13082005(G>A)(P=0.012,HR:1.27,95%CI:1.05~1.53)与含铂化疗的无疾病进展时间显著相关,位于ULK1基因的位点rs7953348(G>A)(P=0.011,HR:0.74,95%CI:0.58~0.93)和位于ATG10基因上的位点rs1864183(G>A)(P=0.016,HR:0.42,95%CI:0.21~0.85)对含铂化疗的总生存时间有着显著影响。研究结果提示自噬通路在含铂化疗敏感性中发挥着重要作用,自噬通路基因多态性可能是预测含铂化疗疗效的潜在分子标志物,这可能为临床上肺癌的个体化医疗提供一定的理论基础。

抗双链DNA抗体与系统性红斑狼疮临床表型的相关性及4种试剂盒效能比较

目的对4种常用的抗双链DNA(dsDNA)抗体检测试剂盒进行效能比较,同时对抗dsDNA抗体与系统性红斑狼疮(SLE)15项典型临床表型进行相关性分析,以辅助SLE的临床诊断和病情监测。方法收集SLE患者229例,其他结缔组织病患者112例。整理各病例10项临床表型和5项实验室指标,计算SLE患者的疾病活动指数(SLEDAI)。用4种试剂盒[试剂盒A为间接免疫荧光法(IFA),试剂盒B、C均为酶联免疫吸附试验(ELISA),试剂盒D为放射免疫法]检测患者血清抗dsDNA抗体水平,对4种试剂盒的检测效能进行比较,同时对抗dsDNA抗体与各临床表型和实验室指标之间的相关性进行分析。结果 4种试剂盒的检测结果间差异均有统计学意义(P<0.01)。Youden指数最高的是试剂盒C,试剂盒B、D次之,试剂盒A最低;B、C、D 3种定量试剂盒的检测结果与SLE患者的SLEDAI具有相关性(r值分别为0.482、0.512、0.685,P<0.01)。在10项临床表型和5项实验室指标中,抗核小体抗体升高和补体下降与抗dsDNA抗体呈正相关(P<0.01);抗核抗体阳性(P<0.05)、狼疮肾炎(P<0.05)、白细胞减少(P<0.05)和颊部红斑(P<0.05)在2种试剂盒的检测结果中显示与抗dsDNA抗体呈正相关;而血小板减少、外周关节炎等8项与抗dsDNA抗体未显示相关性。结论 4种抗dsDNA抗体检测试剂盒检测性能差异较大。试剂盒C适用于疾病的初筛检测,试剂盒D可用于监测病情的活动度。狼疮肾炎、颊部红斑、抗核小体抗体、抗核抗体、补体降低、白细胞减少与抗dsDNA抗体关系密切。

2013年美国风湿病学会／欧洲抗风湿联盟系统性硬化分类标准评析

系统性硬化（硬皮病，SSc）是一种具有多重临床表现的自身免疫性疾病，主要病理学特征包括小血管病变、自身抗体产生和成纤维细胞功能失调导致的细胞外基质大量沉积。目前SSc一般分为局限性皮肤型SSc、弥漫性皮肤型SSc和无皮肤累及的SSc。因其临床表现的多样性，SSc尚无法通过诊断性实验来予以明确诊断；

参麦开肺散对NIH/3T3成纤维细胞增殖及胶原合成的影响

目的探讨参麦开肺散对NIH/3T3成纤维细胞(FB)增殖及体外纤维化细胞模型胶原合成的影响。方法NIH/3T3 FB常规培养后分为正常对照组、模型组和处理组,正常对照组加入含1%胎牛血清(FBS)的细胞培养液500μl,模型组加入使用含1%FBS细胞培养液配制的5 ng/mlβ型转化生长因子(TGF-β)溶液500μl,处理组加入含5 ng/ml的TGF-β+1 mg/ml的参麦开肺散混合溶液500μl,培养24 h。分别采用实时定量聚合酶链反应(PCR)、蛋白免疫印迹(Western blot)和Sircol assay检测细胞内胶原及细胞外基质(ECM)相关基因表达水平、Ⅰ型胶原表达情况以及分泌到细胞上清中胶原蛋白的含量。结果参麦开肺散显著降低胶原及其相关基因、Ⅰ型胶原蛋白的表达以及分泌到细胞上清中胶原蛋白的含量(P<0.05,P<0.01)。结论参麦开肺散可明显抑制TGF-β诱导的NIH/3T3 FB胶原的合成,其发挥抗纤维化作用可能与其抑制FB增殖及胶原合成相关。

参麦开肺散对降低肺纤维化小鼠胶原生成的影响

目的：利用博莱霉素诱导的肺纤维化小鼠模型研究参麦开肺散对胶原生成的影响。方法：将6～8周龄C57BL/6小鼠单次气管灌注浓度为2.5 mg·kg-1的博莱霉素，建立肺纤维化模型；24只小鼠随机平均分为预防组和治疗组，两组分别包括对照组、模型组和药物组。从小鼠肺组织病理切片、肺组织胶原含量、胶原基因表达量、细胞外基质基因表达量等4个方面研究参麦开肺散在缓解肺纤维化过程中对胶原生成的影响。结果：无论是预防组还是治疗组，对照组中小鼠肺组织均无明显病理变化，模型组小鼠肺泡结构破坏，炎症细胞浸润，并有大量以胶原为主的细胞外基质沉积，表现出了严重的纤维化病变。经过药物治疗，小鼠肺泡结构接近正常，且细胞外基质沉积现象明显缓解；实时定量PCR结果显示，模型组小鼠肺组织中胶原基因Col1a1、Col1a2、Col3a1表达量显著升高，喂食药物后，胶原基因表达量大幅度下调。此外，模型组中细胞外基质基因如Ctgf、Fn1、Sparc、Tgf-β1的表达量相对于对照组均有所升高，而喂食药物之后其表达量均有所下调。结论：参麦开肺散通过降低相关纤维化基因如Ctgf、Fn1、Sparc、Tgf-β1的表达而有效减少胶原的生成，缓解纤维化进程。

雄性激素不敏感综合征家系中可育与不育患者间的差异表达基因

目的利用抑制消减杂交方法筛选和鉴定某雄性激素不敏感综合征家系中1名可育患者与1名不育患者间的差异表达基因。方法分别以可育患者(MJ)和不育患者(ZGJ)的生殖器皮肤成纤维细胞(GSF)为实验方,构建正向和反向消减文库。通过菌落原位杂交、点杂交、Southern印迹法逐步筛选得到候选阳性克隆,利用Northern印迹法验证,并将获得的阳性克隆进行测序和同源性分析。结果构建了这两名患者GSF的正向和反向消减文库,筛选得到反向消减文库中2个Northern阳性克隆,以及两文库中11个无Northern杂交信号、可能代表低丰度转录本的候选克隆。测序和同源性分析显示2个Northern阳性克隆分别与自家趋化素(autotaxin-t)基因和钙结合蛋白S100A6基因高度同源。结论以上2个Northern阳性克隆以及11个无Northern杂交信号的克隆可能代表两患者GSF的差异表达基因,有助于阐明雄性激素不敏感综合征家系中患者表型多样性及育性保留的分子机制。

人胎盘羊膜上皮细胞的分离鉴定及多向诱导分化

背景:人羊膜上皮细胞来源稳定,正逐渐成为广受关注的再生医学种子细胞来源。目的:建立人羊膜上皮细胞体外分离培养、成脂、成软骨、成骨诱导分化的方法。方法:通过胰蛋白酶消化法从人胎盘羊膜中分离羊膜上皮细胞,进行体外培养与鉴定,观察培养12 d内的细胞生长曲线。取P1代羊膜上皮细胞,分别进行成脂、成软骨、成骨诱导,以常规培养细胞为对照,诱导16 d后,分别进行油红O染色、Masson染色及碱性磷酸酶染色,同时采用荧光定量PCR检测诱导过程中成脂转录因子、Ⅱ型胶原蛋白、骨桥蛋白、碱性磷酸酶m RNA表达变化。结果与结论:(1)从人羊膜中分离出的羊膜上皮细胞,免疫荧光检测表达上皮细胞标记物CK19;(2)P1代细胞具有较强的分裂增殖能力,P2细胞与P1相比增殖能力略有下降,P3细胞增殖能力最差;(3)羊膜上皮细胞经成脂、成软骨、成骨诱导后,油红O染色有红色脂滴,Masson染色有亮蓝色软骨基质,碱性磷酸酶染色有红褐色钙结节;随着诱导时间的延长,成脂转录因子、Ⅱ型胶原蛋白、骨桥蛋白、碱性磷酸酶表达量升高;(4)结果表明,采用酶消化法可从人羊膜中分离得到羊膜上皮细胞,羊膜上皮细胞可向脂肪细胞、成软骨细胞、成骨细胞分化。