抗生素类药品无菌检查方法研究进展

无菌检查法是无菌药品检查的法定检验方法,其中薄膜过滤法因易操作、风险低和准确度高等优点比直接接种法应用更广泛。无菌药品剂型种类繁多,其中抗生素类药品因品种结构多变、抑菌性强和抗菌谱广等因素,一直以来是建立无菌检查方法的难点。本文就薄膜过滤法中的溶解、过滤、冲洗和培养等4个关键步骤展开讨论,通过对已建立的13类47个品种共61个抗生素药品无菌检查方法的综述,探讨建立无菌检查方法的基本策略,并对无菌检查方法和结果的局限性进行讨论,以期为建立抗生素类无菌药品无菌检查方法及正确认识无菌检查结果提供思路和参考。

14株伯克霍尔德菌的鉴定分析

目的对从菌种保藏中心获得以及样品分离的14株伯克霍尔德菌进行鉴定分析,为该菌的鉴定和溯源分析提供参考。方法分别用生理生化(API20NE和Biolog碳源分析系统)、基因型(自动化核糖体分型、16SrDNA和recA序列分析)的方法对11株标准菌株和3株未知菌进行了鉴定,并对结果进行了分析比较。结果生理生化的方法能够鉴定到属的水平,Biolog能够区分BCC与非BCC类群微生物;16SrDNA序列分析能够鉴定到属水平,对于非BCC的部分菌可以鉴定到种水平,并且能够将BCC正确分类;recA序列分析能够将包含BCC的部分菌正确鉴定到种水平;Riboprinter技术能够鉴定到属水平,但是该技术能够对菌进行溯源分析。结论在进行该菌的鉴定时,可以参考中国药典2015年版四部9204微生物鉴定技术指导原则的要求,根据自身的需求、技术能力以及能够承担的成本,选择适宜的鉴定方法和技术,依据多相鉴定原则进行鉴定分析,第一步判断是否属于伯克霍尔德菌属,第二判断是否属于BCC,第三尽可能准确鉴定到种水平,有必要的情况下进行溯源分析以确认污染来源。

5种中药配方颗粒微生物学质量分析

目的建立5种中药配方颗粒的微生物限度检查法,对微生物限度检查结果进行分析,并对其污染菌进行分离、鉴定和分析。方法按照《中国药典》2010年版对中药配方颗粒进行微生物限度方法学验证,细菌计数采用培养基稀释法,霉菌和酵母菌计数、大肠埃希菌检查采用常规法。细菌鉴定采用VITEK2-Compact。结果有3批的配方颗粒细菌数超过1 000 cfu/g,菌种鉴定结果表明中药配方颗粒中污染的主要是人和哺乳动物的寄生菌以及环境中广泛存在的菌。结论中药配方颗粒的微生物学质量分析,为配方颗粒的微生物限度项目和限制的确定提供实验基础和数据支持,以完善配方颗粒的质量标准,也能够指导生产企业加强生产管理提高产品质量。

化妆品中霉菌和酵母菌数测定的方法验证研究

参考《中国药典》微生物检验的验证方法,以黑曲霉和白色念珠菌为验证菌株,对7个化妆品样品进行了霉菌和酵母菌数检验方法的验证。结果表明,只有2个样品适用于《化妆品卫生规范》2007年版中的霉菌和酵母菌数检验方法。在虎红培养基中加入卵磷脂和吐温80,能够部分消除化妆品中防腐剂的抑菌作用;使用该种培养基,对于另外5个样品,分别建立了适合于它们的霉菌和酵母菌数检验方法。

VIDAS在保健食品沙门氏菌快速检测中的应用

目的将全自动免疫分析仪(VIDAS)应用于保健食品的沙门氏菌快速检验。方法将21批次保健食品分为BPW组和BPW阳性对照组,分别采用VIDAS和国标方法进行沙门氏菌检验,并比较结果。结果 21批保健食品的沙门氏菌检验中,BPW组两种检验方法结果均为阴性;BPW阳性对照组有20批的VIDAS方法与GB方法的检验结果一致,占总批数的95.2%。结论可以用VIDAS方法对保健食品进行沙门氏菌的快速检验。用国标方法检验沙门氏菌需要96 h或者更长,用VIDAS方法则可以把检验时间缩短到48 h。如果VIDAS方法检验结果为阴性则可以作为最终结果,如果结果为阳性,则需要按照国标方法进一步进行确认试验。

非无菌药品中不可接受微生物的控制与风险评估

目的:就非无菌药品中可能污染的不可接受微生物的相关内容进行综述,为监管部门、药品检验检测机构和药品生产企业提供参考。方法:梳理非无菌药品中不可接受微生物的概念来源、定义及常见种属,比较各国相关的法规、指导原则以及查阅近年的国内外研究文献,简述不可接受微生物的检验策略和风险评估方法。结果与结论:不可接受微生物可通过污染药品影响药品质量威胁患者健康,通过药典的控制菌检查方法可能无法检出,因此应引起重视。各国药典、美国现行药品生产质量管理规范等都要求应使用风险评估的方法控制药品中的不可接受微生物。我国已经有不可接受微生物污染药品的事件发生,应引起监管机构和制药企业的注意,并应尽快建立相关的控制策略、检验方法和风险评估体系。

大肠埃希菌和金黄色葡萄球菌的最低生长水分活度测定

目的探索大肠埃希菌和金黄色葡萄球菌的最低生长水分活度(water activity,A_w)。方法分别采用定性和定量试验,研究在NaCl、蔗糖、甘油3种水分活度调节剂作用下,水分活度对大肠埃希菌和金黄色葡萄球菌生长规律的影响。结果大肠埃希菌的最低生长水分活度为0.922~0.950,金黄色葡萄球菌的最低生长水分活度为0.864~0.900。根据对生长曲线的分析,随着水分活度下降,大肠埃希菌和金黄色葡萄球菌的总生长量降低,停滞时间延长,比生长速率下降。结论水分活度调节剂会影响细菌的最低生长水分活度,大肠埃希菌对甘油更为耐受,而金黄色葡萄球菌对氯化钠更为耐受。2种菌的比生长速率呈线性下降规律,且在氯化钠和蔗糖的比生长速率下降规律基本一致。

硫乙醇酸盐流体培养基成分、历史起源及应用研究进展

对硫乙醇酸盐流体培养基成分、历史起源、应用现状、应用进展进行综述,以确保该培养基在实验室中的正确、安全使用。该培养基依然是目前不可替代的可同时培养需氧、厌氧菌的培养基。

关于《化妆品卫生规范》(2007年版)中菌落总数测定方法的探讨

参考《中国药典》微生物检验的验证方法,以金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌和大肠埃希菌三株菌为验证菌株,分别采用营养琼脂培养基和卵磷脂、吐温80-营养琼脂培养基,对7个化妆品进行了菌落总数检验方法的验证。结果表明,卵磷脂和吐温-80可以作为中和剂部分消除化妆品中防腐剂的抑菌作用。只有2个样品适用于目前《化妆品卫生规范》2007年版的菌落总数检验方法。对于另外5个样品,分别建立了适合于它们的菌落总数检验方法。

2种即用型工作菌株在琼脂培养基上的生长情况研究

目的:研究2种即用型工作菌株在胰酪大豆胨琼脂培养基上的生长情况,并与新鲜菌液进行比较,对即用型工作菌株的使用提出建议。方法:将2种即用型工作菌株和新鲜菌液涂布接种至3种胰酪大豆胨琼脂培养基上,比较生长的菌落数。结果:有1种即用型工作菌株的菌落数低于新鲜菌液,统计学分析表明呈显著性差异,提示其活性低于新鲜菌液。结论:即用型工作菌株在制备时经过低温和干燥过程,不利条件有可能会影响到即用型工作菌株的活性。在使用之前应经过充分的实验证明,避免由于活性差异影响试验结果。

《中国药典》2020年版中生物指示剂相关指导原则的标准建立与研究

生物指示剂是药品灭菌工艺监控、确认和验证的关键物质。《中国药典》2020年版增订了通则9207灭菌用生物指示剂指导原则和通则9208生物指示剂耐受性检查法指导原则,进一步规范了生物指示剂的定义、特点、质量和应用等,并且增加了总芽孢计数、D值测定、存活时间和杀灭时间的确认等质量控制方法。新增订的指导原则弥补了《中国药典》在生物指示剂方面的不足,规范了灭菌生物指示剂的质量控制,以及药品灭菌工艺的研究与开发,有助于进一步提高我国的药品质量与安全。

环境分离菌在药品微生物检验中的应用

目的:讨论环境分离菌在药品微生物检验中的应用。方法:通过对各国药典、法规、指导原则、行业标准和行业指南等文件的梳理和分析,列出了环境分离菌在药品微生物检验中的应用建议和要求,并结合实例,进一步介绍了环境分离菌的应用范围。结果:各国药典和行业指南均要求或建议在消毒剂效能验证、抑菌效力检查、培养基方法适用性(培养基促生长试验)、检验方法的适用性、快速微生物检验方法和微生物检验替代方法验证等检验项目中增加使用环境分离菌(包括生产检验过程中人员、环境以及样品中分离菌)。结论:与标准菌株相比,环境分离菌更能够反映样品或环境实际存在微生物的情况,因此,在药品微生物检验中应用环境分离菌能够使检验结果对产品质量或环境做出更客观和科学的评价。可根据检验项目、药品的生产工艺和产品本身的特点,在风险评估的基础上选择适当的环境分离菌应用于检验过程中。

屎肠球菌对复方胰酶散微生物计数中试验菌生长的影响

目的:研究屎肠球菌对复方胰酶散微生物计数方法适用性试验中试验菌生长的影响。方法:按照中国药典规定的方法适用性试验方法,分别对含有和不含屎肠球菌的复方胰酶散样品,用倾注法和涂布法进行试验,观察5种试验菌的生长情况,并计算回收率。结果:使用倾注法和涂布法,白色念珠菌和黑曲霉的回收率能够达到要求,使用涂布法(0.2 mL·皿^-1)金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌和铜绿假单胞菌的回收率能够达到要求。结论:初步研究表明,使用倾注法时试验细菌的回收率偏低的原因是屎肠球菌的生长导致琼脂培养基pH值下降,从而抑制了加入的试验细菌的生长。

美国药典41版汽相灭菌法简述

以汽化过氧化氢表面灭菌为例,介绍了美国药典(USP)41版中汽相灭菌法相关章节(1229.11汽相灭菌法)的内容,主要包括过氧化氢灭菌原理、汽化过氧化氢表面灭菌的特点、灭菌效果的影响因素、灭菌验证用生物指示剂的特点以及使用的注意事项,并将USP第41版1229.11汽相灭菌法的全文翻译。

参苓白术散微生物限度检查法的建立及检验结果分析

目的建立参苓白术散的微生物限度检查法,对14个生产厂家37个批次产品的微生物限度检查结果进行分析。方法细菌计数采用培养基稀释法,霉菌和酵母菌计数、大肠埃希菌和大肠菌群检查采用常规法。结果选取的3个生产厂家6个批次的产品进行方法验证,五种验证菌的回收率均大于70%。结论 14个生产厂家,37个批次的参苓白术散微生物限度检查结果均符合规定,结果较为满意。

洋葱伯克霍尔德菌群(Bcc)及干扰菌在不同增菌培养基中的生长研究

目的:考察Bcc以及Bcc与干扰菌的混合物在不同的增菌培养基中能否生长和增殖;探讨不同的Bcc菌种对增菌培养基的营养需求和抗生素的耐受是否存在差异。方法:将Bcc的代表菌株、干扰菌以及Bcc与干扰菌的混合物分别接种至TSB、10倍稀释的TSB、添加10 mg·L^(-1)庆大霉素的TSB和添加250000 U·L^(-1)多粘菌素B的TSB中培养,划线分离至选择性培养基上观察结果,并对可疑菌落进行分离和鉴定。结果:只接种Bcc的4种增菌培养基均能使之良好地增殖。低量的Bcc(约102 cfu)与高量的干扰菌(104 cfu)的混合接种,除了神秘伯克霍尔德菌CMCC(B)23010外,4种增菌培养基能使Bcc增殖并被检出。结论:添加抗生素的TSB与未添加抗生素的相比没有表现出明显的优势。TSB可以作为Bcc检验时的增菌培养基使用。生长缓慢且活力弱的Bcc菌株在特定条件下有可能会被漏检。

右旋糖酐在注射用醋酸卡泊芬净无菌检查中的应用

目的:通过无菌方法学验证试验,建立注射用醋酸卡泊芬净的无菌检查法。方法:样品分别用0.9%无菌氯化钠溶液溶解,采用薄膜过滤法处理,每膜分别用0.9%无菌氯化钠溶液和右旋糖酐40葡萄糖注射液冲洗若干次,并在培养基中加入右旋糖酐1 g,以白色念珠菌为阳性对照菌。结果:各验证菌株均能够正常生长,方法可行。结论:通过添加外源的右旋糖酐,使真菌通过利用外源的肽聚糖用于自身细胞壁的合成,从而消除了醋酸卡泊芬净的抑菌作用,建立了抗真菌药物注射用醋酸卡泊芬净的无菌检查法。

北京地区销售的10种中药饮片微生物污染程度考察

目的:考察北京地区10种中药饮片微生物污染程度。方法:采用微生物限度检查法检查10种共100批中药饮片样品的需氧菌总数(TAMC)、霉菌和酵母菌总数(TYMC)、耐热菌数(NAIRE)、耐胆盐革兰氏阴性菌及其他6种致病控制菌负载量。结果:100批饮片样品的lg TAMC值为2.0~6.8,lg TYMC值为1.0~6.0,lg NAIRE值为1.0~5.9,耐热菌检出率为100%,耐胆盐革兰氏阴性菌检出率为27%,2批当归饮片样品中检出了大肠埃希菌,但所有饮片样品均未检出沙门菌、志贺氏菌、溶血性链球菌、金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌。结论:北京地区销售的不同品种的中药饮片的微生物负载差别很大,建议新版药典根据中药饮片的入药部位、药性、炮制工艺等制订适宜的微生物限度标准。

良好药品微生物实验室系统的设计、建设与质量管理

药品微生物实验室系统是支撑完成药品微生物检验工作的技术平台,它的良好设计、管理与运转是药品微生物实验室质量管理体系的基础。在实验室系统的设计和建设中,实验室使用者应从初期就深入参与其中,根据试验任务决定系统设计,避免过高或过低的不合理要求;根据工作任务、工作流程确定实验室布局;实验室通入足够的新风,既能有效防止交叉污染又能够最大限度满足人员的舒适性和安全要求。微生物实验室日常运行时,应由专人与运维团队对接,共同合作完成实验室的运维管理。随着我国药品微生物标准体系和实验室建设标准体系的稳定和完善,通过良好的设计、建设和管理,一定能够建设出结构简单、运行稳定、经济高效、安全舒适的良好微生物实验室系统。

微波干燥预处理对苹果渣提取果胶的影响

利用微波干燥技术对湿苹果渣进行预处理,研究了微波干燥预处理对苹果渣提取果胶的影响。以探索一种新的干燥方法和提高果胶品质。结果表明:微波能量越大,苹果渣组织结构破碎越严重,其复水能力越弱;但对苹果渣颜色无显著影响;微波干燥预处理能显著提高果胶得率,微波预处理条件为300W、15min、7.5×10-2kW·h或500W、10min、8.3×10-2kW·h时微波预处理苹果皮渣的果胶提取得率比对照提高了50%左右,是较为适宜的微波处理条件,但微波能量大于8.3×10-2kW·h时,对果胶得率有不利影响;微波干燥预处理对果胶半乳糖醛酸含量无显著性影响,但显著提高了果胶的酯化度、固有黏度和黏均分子质量。