重组免疫毒素hIL-2-LuffinP1的构建及表达

目的 构建人分泌型IL 2与免疫毒素LuffinP1的重组基因原核表达载体,并对其产物进行鉴定及纯化。方法 采用基因工程原理,将IL 2 LuffinP1的重组基因片段克隆入表达载体pET2 0b(+ )中,经酶切及DNA序列测定鉴定正确,转化表达宿主菌Origami(DE3 ) pLysS中,经IPTG诱导表达含His标签的融合蛋白 重组免疫毒素hIL 2 LuffinP1。结果 成功构建了免疫毒素表达载体pET2 0b(+ ) hIL 2 LuffinP1,获得纯化的重组免疫毒素,并经Westernblot鉴定正确。结论 hIL 2 LuffinP1的成功构建,为进一步研究它在抗移植排斥中的作用奠定了基础。

重组免疫毒素对同种小鼠皮肤移植排斥反应的抑制作用

目的观察重组免疫毒素hIL-2-Luffin P1对小鼠皮肤移植排斥反应的抑制作用。方法采用同种异体小鼠皮肤移植模型,观察hIL-2-Luffin P1对移植物存活的影响、移植后外周血T细胞亚群变化以及移植物的组织病理学观察。结果hIL-2-Luffin P1组小鼠皮肤存活时间延长(13.86±2.11)d,与空白对照组比较相差显著(P<0.01),且与hIL-2-Luffin P1的剂量呈正相关;而Luffin P1处理组与对照组相比无明显差异。同时,移植后外周血T细胞亚群活化程度减轻,病理显示hIL-2-Luffin P1处理组移植皮肤淋巴细胞浸润较轻。结论hIL-2-Luffin P1能够抑制T细胞的异常活化,从而抑制免疫排斥反应,达到延长移植物存活时间的目的。

芳维A酸乙酯对细胞间隙连接通讯的影响

目的 研究芳维A酸乙酯对细胞间隙连接通讯的影响。方法 用划痕标记染料示踪技术检测黄色荧光素在培养细胞中的传递情况。结果 芳维A酸乙酯能够拮抗促癌剂TPA对GJIC的抑制作用 ,在一定范围内 ,芳维A酸乙酯浓度越大 ,其对NIH3T3细胞GJIC功能的恢复作用越强 ,因而具有抗促癌作用。结论 芳维A酸乙酯不仅具有抗增殖、诱导分化作用 ,同时还具有癌症的化学预防作用。

芳维A酸乙酯对小鼠皮肤乳头状瘤形成过程中ODC、PCNA的影响

目的 通过测定小鼠二阶段皮肤乳头状瘤模型中鸟氨酸脱羧酶 (ODC)、增殖细胞核抗原 (PCNA)的变化 ,探讨芳维A酸乙酯的癌化学预防作用机制。方法 ODC作用于14 C标记的鸟氨酸底物后释放14 CO2 ,通过测定14 CO2 生成量反映标本中ODC活性 ;用免疫组化方法检测样本中PCNA表达情况。结果 芳维A酸乙酯对肿瘤标志物ODC、PCNA有明显的抑制作用。结论 芳维A酸乙酯对ODC、PCNA的抑制作用是其预防小鼠乳头状瘤发生的重要机制 ,它具有肯定的癌化学预防作用。

重组免疫毒素hIL-2-Luffin P1对大鼠肾移植存活时间的影响

目的以人IL-2片段与植物毒素Luffin P1重组获得的免疫毒素hIL-2-Luffin P1,观察它对大鼠肾移植排斥反应的抑制作用。方法采用同种异体大鼠肾移植模型,观察hIL-2-Luffin P1对移植物存活的影响,以及移植物的组织病理学观察。结果hIL-2-Luffin P1组大鼠存活时间延长(13.86±2.11)d,与对照组比较相差显著(P<0.01);而Luffin P1处理组与对照组相比无明显差异。同时,病理结果显示对照组移植肾单位结构破坏,淋巴细胞浸润明显,而在同一时间hIL-2-Luffin P1处理组大鼠的移植肾脏病理变化较轻;T淋巴细胞亚群检测显示经hIL-2-Luffin P1处理后,受体外周血T细胞的活化程度降低。结论hIL-2-Luffin P1能够抑制免疫排斥反应,延长移植物存活时间。

核糖体失活蛋白LuffinP1的构建*

目的: 构建免疫毒素LuffinP1的基因原核表达载体,获得免疫毒素LuffinP1,并对其进行鉴定及纯化。方法:设计寡聚核苷酸片段连接延长合成全长LuffinP1, PCR扩增后将其克隆入表达载体pET20b( +)中,经酶切及DNA序列测定鉴定正确,转化表达宿主菌Origami(DE3 )pLysS中,经IPTG诱导表达蛋白LuffinP1,Westernblot鉴定。结果:成功构建了免疫毒素表达载体pET20b( +) -LuffinP1,获得纯化的免疫毒素,并经Westernblot鉴定正确。结论:通过基因工程成功表达免疫毒素LuffinP1,简化了其制备过程,有利于对其进一步研究应用。

多媒体教学在皮肤科临床见习中的运用

随着计算机和网络技术的发展，多媒体教学已被广泛地引入课堂，为广大课堂教育手段带来了巨大的变革，这是对传统教学模式的改革，在广泛的实践中确实起到了提高教学效率和教学水平的作用。相对于传统的教学模式，多媒体教学充分利用其集视、触、听等效果于一体的优势，结合多变的图像、文字说明，并辅以教师生动的讲解，可以对学生产生全方位的动态信息刺激，使学生通过多种感觉器官同时获得丰富的信息，加之多媒体教学素材变化快，也进一步促进了学生在课堂学习中记忆、思维的过程，从而极大地提高了教学效果。特别是在皮肤科的教学中，皮肤性病学是一门以形态学为主的学科。能够通过多媒体手段使授课内容图文并茂、形象直观、印象深刻。但是在见习教学过程中，大多数人认为，见习带教基本上是一种学员直接与患者接触，带教老师对疾病进行讲解的形式．实际上在见习带教过程中，适当的运用一些多媒体教学，

维A酸与癌症的化学预防

癌症的化学预防是指用化学药物预防肿瘤的发生，或使肿瘤细胞分化逆转，从而达到预防恶性肿瘤的目的。维A酸具有明显的癌化学预防作用，具有抗增殖、诱导分化和诱导细胞凋亡的作用，维A酸类化合物通过与受体RAR和RXR结合发挥生物学作用，不同受体亚型介导的生物学反应各有差异。维A酸目前已广泛应用于皮肤癌前病变及肿瘤的防治。

重组免疫毒素hIL-2-LuffinP1对淋巴细胞体外增殖的影响

目的检测基因工程免疫毒素hIL-2-LuffinP1的体外生物学活性。方法采用分离的C57和BALB/c小鼠脾细胞进行混合淋巴细胞反应,刀豆球蛋白A(ConA)刺激BALB/c小鼠脾细胞进行淋巴细胞增殖实验,以LuffinP1毒素分子作为对照。3H-TdR核素掺入法检测hIL-2-LuffinP1对淋巴细胞增殖的抑制作用。以CTLL-2细胞检测hIL-2-LuffinP1对IL-2依赖细胞株的杀伤作用,实验共设6组:PBS、IL-2、LuffinP1、LuffinP1+IL-2、hIL-2-LuffinP1、hIL-2-LuffinP1+IL-2,CTLL-2细胞加入各组试剂培养12h,台盼蓝染色,计数每100个细胞中的死亡细胞数。结果随剂量增加,hIL-2-LuffinP1对淋巴细胞增殖的抑制作用逐渐增强,在10-6mol/L浓度时,抑制率可达到97%,而LuffinP1对淋巴细胞增殖无明显抑制作用。hIL-2-LuffinP1对Con A刺激的脾细胞活化也有抑制作用,与在混合淋巴细胞体系中一致,而LuffinP1对上述两个反应体系中的淋巴细胞增殖均无明显抑制作用。加入hIL-2-LuffinP1+IL-2和hIL-2-LuffinP1后CTLL-2细胞的死亡率分别为29.6%和47.4%,明显高于IL-2组(5.6%,P<0.01)。结论重组免疫毒素hIL-2-LuffinP1在体外能够抑制淋巴细胞增殖,对表达IL-2R的活化淋巴细胞产生定向杀伤作用。

表现为角状增生的化脓性肉芽肿

报告1例呈角状增生表现的化脓性肉芽肿。患者女,32岁。下唇正中有一黑褐色柱状增生物,凸出皮面约1.5cm。皮损组织病理检查示毛细血管扩张性肉芽肿。

口服阿维A结合光化学疗法治疗寻常型银屑病临床疗效观察

目的:评价口服阿维A结合光化学疗法治疗寻常型银屑病的疗效及不良反应。方法:60例寻常型银屑病患者随机分为两组,分别给予单一光化学治疗、口服阿维A及光化学治疗。结果:口服阿维A结合光化学治疗的疗效显著优于单一光化学治疗,长波紫外线的总暴露量可明显减少,可缩短近一半疗程。结论:口服阿维A结合光化学疗法是一种值得推广的治疗中至重度寻常型银屑病的方法。

关于提高皮肤性病学教学质量的思考

皮肤性病学是医学领域中病种最多的学科（2 000多种）,它专业性较强,以形态学为主。由于皮肤病的表现多呈现在皮肤表面,对皮肤病的描述和定义依赖于对皮肤损害的描述,这些描述比较抽象、学员难以理解和掌握,给皮肤性病学的教学带来困难。如何将教学理念和教学实践有机结合,如何有效运用教学方法和手段,如何在教学中创新以提高皮肤性病学的教学质量,是医学教学工作者思考的问题。

激光烧灼联合包皮环切治疗顽固性尖锐湿疣160例

尖锐湿疣(CA)是人乳头瘤病毒(HPV)感染所致的性传播疾病,男性尖锐显疣患者,多合并包皮过长,既往我们只行激光烧灼配合全身治疗,但复发率较高,往往需数次治疗才能痊愈.所以,寻找经济有效且复发率低的治疗方法越来越受人们的重视.我科自1998年至今将160例包皮过长合并尖锐湿疣患者分成两组,一组激光烧灼联合包皮环切除101例,一组仅行激光烧灼59例,进行疗效对比观察分析,报告如下.

Luffin P1-KDEL的构建、表达、纯化及鉴定

目的构建植物毒素Luffin P1的原核表达质粒PET32a(+)-Luffin P1,并对其进行诱导表达,以及表达蛋白的纯化及鉴定。方法采用基因工程技术将重组基因片段Luffin P1克隆到表达载体pET32a(+)中,经酶切及DNA序列分析正确后,转化至表达宿主菌BL21(DE3)中,经IPTG诱导表达Luffin P1融合蛋白,并用His标签抗体对该融合蛋白进行Western blot鉴定,对鉴定正确的融合蛋白进行纯化,肠激酶酶切及再纯化。结果成功的构建了原核表达载体pET32a(+)-Luffin P1,获得了纯度较高的Luffin P1蛋白。结论通过基因工程合成Luffin P1蛋白是成功的,并为进一步对Luffin P1功能研究及制备免疫毒素的弹头鉴定了实验基础。

寻常性银屑病皮损表皮中TGF-β受体活化Smad蛋白表达的检测

目的:探讨转化生长因子(transforming growth factor,TGF)-β受体活化Smad——[Smad1、Smad2、Smad3(Smad1/2/3)]和磷酸化Smad2/3(p-Smad2/3)蛋白在寻常性银屑病皮损中的表达及其意义。方法:采用EliVision法免疫组化技术分别检测寻常性银屑病皮损与正常对照皮肤中Smad1/2/3和p-Smad2/3蛋白的表达情况。结果:与正常对照皮肤相比,Smad1/2/3和p-Smad2/3蛋白在寻常性银屑病皮损表皮中的表达显著降低。结论:寻常性银屑病皮损表皮中Smad1/2/3和p-Smad2/3蛋白表达降低,可通过阻断TGF-β信号转导,有助于寻常性银屑病皮损角质形成细胞过度增殖状态的发生和发展。

细菌超抗原SEB对皮炎局部糖皮质激素受体β表达的影响

目的探讨金黄色葡萄球菌肠毒素B(SEB)对于皮炎局部糖皮质激素受体β(GRβ)的影响。方法 1%DNCB重复刺激Balb/c小鼠背部皮肤构建特应性皮炎动物模型,以未经处理的模型小鼠为对照组,并分别用SEB、SEB+地塞米松、地塞米松处理该动物模型。通过H&E染色观察组织病理变化,计数真皮内炎性细胞数量来反映不同处理组皮炎的变化情况,采用q RT-PCR、Western blot和免疫组织化学方法检测糖皮质激素受体β(GRβ)的m RNA和蛋白表达。结果在利用DNCB构建的Balb/c小鼠特应性皮炎动物模型中,真皮内炎性细胞数量明显增加;与未经处理的皮炎组相比,SEB处理后炎性细胞显著增加,地塞米松处理后炎性细胞显著减少,但SEB可部分拮抗地塞米松的抗炎作用;此外,在SEB处理的皮炎组以及SEB+地塞米松处理的皮炎组,GRβm RNA和蛋白的表达均显著上调,但SEB单独处理的皮炎组GRβm RNA和蛋白的表达上调情况更为显著。结论细菌超抗原(SEB)在皮炎局部诱导了GRβ的表达升高,在外用糖皮质激素快速减敏过程中起到了重要的作用。