核酸斑点杂交技术快速鉴定转基因大豆品系

为了建立转基因大豆品系高通量检测方法,本研究以转基因大豆DAS-68416-4、DAS-44406-6、DAS-81419、DP305423作为试验对象,根据品系特异的宿主与插入片断间连接区域的基因序列作为检测靶标,设计特异性引物。以转基因标准品为材料,提取DNA作为模板进行定性PCR扩增,尼龙膜点样,生物素探针制备,杂交与显色,并对探针浓度、杂交温度与时间与显色时长进行优化,利用优化后的反应条件对转基因大豆DAS-68416-4、DAS-44406-6、DAS-81419、DP305423及空白对照样品进行检测,验证体系的特异性。将4种转基因大豆的DNA进行10倍系列稀释,利用优化后的反应条件测定灵敏度。对实验室收集的7个品系的转基因大豆标准品和8个能力验证样品进行适用性检测分析,并采用双盲验证法对17份盲样进行核酸斑点杂交测试分析,进一步验证体系的可靠性。结果表明,以转基因大豆DAS-68416-4、DAS-44406-6、DAS-81419、DP305423为模版的扩增产物均有且只有一条清晰明亮的条带,大小均与理论相符,空白对照与内参照基因结果正常。4种转基因大豆特异性探针除对应样品有显色反应,对其他3种样品均未显色,具有方法特异性。样品DAS-68416-4、DAS-81419、DP305423最低检出限为20 pg·μL^(-1),样品DAS-44406-6最低检出限为2 pg·μL^(-1),具有较高的灵敏度。对7个标准品、8个能力验证样品和17份盲样的测试结果与SN/T 1204-2016《植物及其加工产品中转基因成分实时荧光PCR定性检测方法》中的结果一致,可用于日常样品检测。本研究建立的定性PCR结合的核酸斑点杂交方法能对4种转基因大豆进行快速准确鉴定,对有序推进生物育种产业化应用,严查非法转基因种子市场流通和田间种植,保障粮食安全具有重要意义。

办一所充满幸福感的学校:教育高质量发展的校本实践

为推动学校教育高质量发展,山东省临沂第二十三中学教育集团基于“为人生幸福奠基”的办学理念,探索以新的质量观和发展观推动学校变革。一是以全面发展的教育质量观为指导,倡导多元幸福观,通过党建引领和目标统领,构建“新幸福教育”立德树人体系。二是通过岗位实践、鼓励冒尖,为每个人自我完善搭建展示才华的舞台,让人人都有人生出彩的机会。三是通过组织重构构建“美美与共”的学校双线治理体系,通过项目引领构建基于人的潜能发展的幸福教育共同体,实现彼此成就、共享幸福。

TaqMan实时荧光PCR快速检测与鉴定单核细胞增生李斯特氏菌能力验证样品

利用TaqMan实时荧光PCR技术对单核细胞增生李斯特氏菌能力验证样品进行快速鉴定和验证。依据GB 4789系列标准的第一法对ACAS-PT526能力验证中的样品D15和样品D16进行检测,通过增菌、分离、初筛和鉴定等传统培养法检测。鉴定过程中还使用了鉴定试剂条API Listeria和全自动微生物鉴定系统。同时采用TaqMan实时荧光PCR技术对经过增菌的样品D15与样品D16的培养物和单核细胞增生李斯特氏菌标准菌株的培养物进行快速鉴定。结果表明,经API Listeria试剂条鉴定,样品D15为单核细胞增生李斯特氏菌,鉴定百分率为98.6%,T值为1;经全自动微生物鉴定系统检测,样品D15为单核细胞增生李斯特氏菌,99%可能性;样品D16为金黄色葡萄球菌,99%可能性;经实时荧光PCR鉴定,样品D15 LB1增菌液培养物及李斯特显色培养基平板上的单菌落都具有显著的S型扩增曲线。综上得出,实时荧光PCR与GB 4789.30—2016的第一法试验结果一致,样品D15为单核细胞增生李斯特氏菌检出,样品D16为单核细胞增生李斯特氏菌未检出,TaqMan实时荧光PCR方法可用于微生物的快速检验,尤其是对盲样检测的辅助验证。

大红浙醋酒精发酵阶段非酿酒酵母产香机制研究

为了探讨非酿酒酵母在大红浙醋酒精发酵阶段的产香机制,以商业酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)(Sc)、酒曲(JQ)、酿酒酵母SHQ630单独发酵为对照组,非酿酒酵母(弗比恩毕赤酵母(Pf)、耐热克鲁维酵母(Kt)、库德里阿兹威毕赤酵母(Pk)、扣囊复膜酵母(Sf))单独发酵为实验组,采用3,5-二硝基水杨酸(DNS)法测定其还原糖代谢能力,失重法测定CO_(2)生成能力,顶空固相微萃取(HS-SPME)结合气相色谱质谱联用(GC-MS)技术测定其挥发性风味成分,并对菌株的耐受性进行分析。结果表明,在酒精发酵过程中,菌株SHQ630产乙醇能力最强,菌株Pf、Kt及Pk的产乙醇能力与菌株Sc和酒曲(JQ)相当,菌株Sf产乙醇能力最弱。耐受性试验结果表明,菌株Sf和Pk耐酸性较好,菌株Pf和Kt乙醇耐受性较好。GC-MS结果表明,菌株Sf、Pk、Pf及Kt发酵液分别共检出挥发性风味成分24种、18种、13种、10种,菌株Pk产酯种类最多(10种)、产醇最高(12.43 mg/L),菌株Pf产酯最高(10.64 mg/L)。结果显示,非酿酒酵母能够提升大红浙醋酒精发酵阶段风味的丰富性和芳香性。

核心素养下中职语文大单元教学的有效策略分析

如何落实核心素养下中职语文大单元教学,是中职语文教师必须面对的重要问题。语文学科作为中职教学的一个重要部分,对于学生学科核心素养的培养有着重要地位和作用。在课程教学中,中职语文的大单元教学摒弃了传统机械式的教学模式,有助于学生在大单元教学中建立结构化知识体系。本文通过分析语文核心素养在中职教育中的重要性,阐述其在中职语文大单元教学中的体现,提出进行大单元教学的有效策略,期望通过这种教学方式不断提高中职学生语文学科素养。

一种适用于电动汽车的新型双向交错式无桥变换器

电动汽车与电网端的能量传递过程得到广泛研究。鉴于此,提出了一种适用于电动汽车电池充电器的双向交错无桥变换器。该变换器通过单元整合,取消了桥式结构。详言之,该变换器前级可等效为双向交错无桥Boost电路,以满足电网和直流母线的交互;后级可等效为双向Buck-Boost电路,以满足直流母线和汽车电池的交互。对新型双向变换器的正向和反向工作过程进行分析,同时阐述新型变换器的功率控制和电流控制策略,推出相关的控制算法。最后,通过PISM软件对该变换器进行了仿真验证。结果表明,该变换器不但具有G2V和V2G两种工作模式,并拥有较高的功率因数。

促甲状腺激素受体膜外区基因突变与毒性多结节性甲状腺肿的相关性研究

目的:探讨毒性多结节性甲状腺肿(TMG)促甲状腺激素受体(TSHR)膜外区基因突变情况。方法:将12例TMG患者手术切除的病变组织及其周围正常甲状腺组织行光镜检查,提取基因DNA,对TSHR膜外区行PCR、DNA测序。结果:12例TMG标本中发现3例存在膜外区基因突变(3/12,25%),其中1例为点突变,另2例为移码突变;对照组未见基因改变。结论:TSHR的膜外区基因突变可能在TMG发生中发挥一定作用。

TSHR基因突变与亚临床型毒性多结节性甲状腺肿的相关研究

目的 探讨 TSH受体 (THSR)基因突变在亚临床型毒性多结节性甲状腺肿 (s TMG)发病中的作用。方法 9例 s TMG患者和 9例非毒性结节性甲状腺肿 (n TMG)患者 ,手术切除肿大的甲状腺组织 ,用酚 -氯仿-异戊醇法提取基因组 DNA,对目的基因片段进行聚合酶链反应 (PCR)及 DNA测序。结果 在 9例 s TMG患者中 ,发现 3例单碱基插入性突变 ,在 195 0位和 195 1位核酸之间插入了一个胞嘧啶 (C) ,使 6 16位以后氨基酸发生了移码突变 ,9例 n TMG未发生基因突变。结论 TSHR基因突变可能在 s TMG形成中发挥重要作用。

基于可靠性原理的悬架下摆臂轻量化设计研究

基于可靠性理论,结合有限元结构优化方法进行某悬架下摆臂的轻量化设计。轻量化设计后的结构质量略有减少,结构可靠性大大增加,达到了结构优化设计的目的。优化后的结构在原理样车上的应用验证了有限元分析结果的正确性和该优化设计方法的可行性。

胃癌患者外周血CK20 mRNA表达及其临床意义

目的:探讨胃癌患者外周血CK20 mRNA表达及临床意义。方法:应用Taq Man定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测58例胃癌患者(其中50例化疗2周期后复查CK20 mRNA)、20例健康对照者外周血CK20 mRNA表达;患者平均随访2年。结果:胃癌患者外周血CK20 mRNA阳性率为46.55%(27/58),显著高于健康对照组,二者差异有统计学意义(P<0.001);单因素分析胃癌患者外周血CK20 mRNA表达与远处转移(P<0.05)和临床分期相关(、期之间比较P<0.05);多因素Logistic回归分析表明:远处转移是影响胃癌患者外周血CK20 mRNA表达的独立因素;化疗2周期后CK20mRNA阳性率无显著下降,但近期疗效无效的患者外周血CK20 mRNA阳性率显著高于近期疗效有效的患者(P<0.05)。平均随访2年后,CK20 mRNA阳性患者与阴性患者的1年生存率分别为34.78%和64.29%,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:外周血CK20 mRNA可作为检测胃癌患者肿瘤细胞微转移的分子标志;定期监测胃癌患者外周血CK20 mRNA表达有助于评估化疗疗效和预测预后。

脑源性神经生长因子对mir124表达及兴奋性电流的影响

目的探讨BDNF对海马miRNA-124表达及齿状回颗粒细胞兴奋性突触后电流(s EPSCs)的影响,以明确BDNF对颞叶内侧癫痫(MTLE)发病机制的影响。方法选取哈尔滨医科大学附属第一临床医院神经外科2008年4月-2010年10月手术治疗的MTLE患者12例。RT-pcr技术检测BDNF孵育后MTLE患者海马组织mir-124表达、膜片钳技术检测BDNF对海马颗粒细胞s EPSCs的影响。结果 (1)BDNF降低了颞叶癫痫海马miRNA-124的表达(P<0.01);(2)BDNF增加了颗粒细胞sEPSCs的频率和幅度(P<0.01)。结论 BDNF降低了颞叶癫痫海马mir-124的表达,提高颗粒细胞sEPSCs的频率和幅度,从而可能对人类MTLE的发病起到促进作用。

直肠癌静脉侵袭的临床病理学研究

作者利用54例直肠癌手术切除标本,采用FVⅡ因子免疫组织化学染色,提高了癌肿内静脉侵袭阳性检出率,使细静脉和淋巴管在光镜下得以鉴别,明确了诸临床病理学因素同静脉侵袭的关系,结果表明: 1)癌组织学类型及癌浸润肠壁深度同静脉侵袭无相关性。 2)淋巴管侵袭、淋巴结转移、肝转移及三年期死亡率同静脉侵袭密切相关。 3)FVⅡ因子免疫组织化学染色在脉管侵袭的鉴别和判定方面是目前不可缺少的。 4)结果提示静脉侵袭为估计预后,预测肝转移的一个重要指标。

TSHR第三胞内袢基因突变与毒性多结节性甲状腺肿发病的相关研究

目的探讨促甲状腺激素受体(TSHR)第三胞内袢基因突变在毒性多结节性甲状腺肿(TMG)自主高功能性形成中的作用。方法将16例TMG患者手术切除标本及其作为对照的甲状腺正常组织,用酚-氯仿-异戊醇法提取基因组DNA,对目的基因片断进行聚合酶链反应(PCR)及行DNA测序。结果在16例TMG 标本中,发现3例为622位密码子的点突变。异亮氨酸被苯丙氨酸置换(I622F,ATT→TTT),2例为单碱基插入性突变,在1928位和1929位核酸之间播入了一个鸟嘌呤核苷酸(G),使该密码子609位以后氨基酸发生了移码突变。在对照组中,未发现TSHR基因突变。结论 TSHR第三胞内袢基因突变,可能在TMG发病中起重要作用。

泡沫保温输油管道投产暖管时间计算

影响暖管的实际因素有很多,如理论计算的假设性,埋地管道周围环境的不均匀性等。但根据热量平衡关系式计算出的大致时间,并对实际参数进行监测,与理论对比,可以有根据地估算预热时间的合理范围,对实际运行操作有较大帮助,满足了生产要求,还能创造一定的经济效益。

米曲霉盐胁迫对酱油发酵理化指标及微生物群落的影响

米曲霉(Aspergillus oryzae)是影响酱油品质的重要因素。该研究旨在探究盐对米曲霉代谢的影响机制以及米曲霉盐胁迫对酱油品质和微生物群落的影响。采用转录组、蛋白组、物理化学分析和微生物多样性手段分析曲霉盐胁迫代谢机制、酱油品质和微生物组成。结果表明,10%盐胁迫对于米曲霉的糖代谢是有利的;通过酱油发酵试验发现,10%NaCl预发酵还可以提高蛋白酶活性,加快了酱油中氨基酸的形成;微生物群落定植也得到了加速。因此,米曲霉在低盐胁迫下对酱油品质和微生物群落产生积极影响。

汽车运用技术专业教学模式的改革与研究

文章研究了汽车运用技术专业教学模式的改革,认为教学中要突出以能力为本位,借鉴CBE教育理论,实施能力教育体系教学改革,着重基础知识和基础能力,以培养技术应用能力为主线,设计学生知识、技能、能力、素质的培训方案,从而构建新型高等职业教育教学新模式。

发动机可变配气相位的研究

目前,人们不断挖掘发动机自身的潜力,使其朝着电控和变参数方向发展。而可变配气相位技术由于对提高发动机的动力性和经济性效果显著,并且在一定程度上能够改善有害排放,一直受到人们的关注。为此,对采用优化进气门迟闭角的发动机重新进行了模拟计算。结果表明,在发动机上实施进气门迟闭角滞后10°CA时,最大功率由84.4kW提高到了87.3kW,增加了3.6%,高速区功率和转矩平均提高了3%～7%,转矩曲线趋于平坦,燃油经济性也有较大的改善。

数字温度传感器、控制器 DS1620 及其应用

本文介绍ＤＡＬＬＡＳ公司产品ＤＳ１６２０芯片技术指标及性能，可以方便地与单片机组成测温、控温仪器仪表。