人血浆蛋白C的分离纯化与鉴定

冰冻人血浆37℃融化后,经钡盐吸附沉淀、硫酸铵分步盐析、DEAE-Sephadex A-50柱层析、制备性PAGE和肝素亲和层析分离,得到蛋白C。经鉴定,所得蛋白C分子量约为62kD,pI为4.69,PAGE分析高度均一,KPTT法证实其延长凝血时间,与有关文献报道相符。

人血浆蛋白C放射免疫分析

目的：建立人血浆蛋白Ｃ（ＰＣ）放射免疫分析法（ＲＩＡ），并初步应用于临床。方法：从人血浆中分离和纯化ＰＣ，免疫新西兰家兔，获得特异性抗血清，氯胺Ｔ法制备１２５Ｉ－ＰＣ，用平衡法建立ＰＣＲＩＡ。结果：方法灵敏度为３９４μｇ／Ｌ，工作范围为６．２５—１０２４μｇ／Ｌ，批内和批间ＣＶ分别为４．４０％和９．６８％，回收率为１０４．２８％，与因子Ⅱ未见交叉反应。测定３６例正常人血浆ＰＣ含量为３．８４±０．３４ｍｇ／Ｌ，１６例重症肝病伴发凝血障碍患者为１．０３±０．４１ｍｇ／Ｌ。结论：可为遗传性或后天性ＰＣ缺乏疾病的诊断及血栓病的研究提供一种有效的手段。

蛋白S放射免疫分析

蛋白Ｓ放射免疫分析王博诚金坚陶永辉张荣军血浆中的蛋白Ｓ（ＰＳ）有两种形式，游离ＰＳ（ＦＰＳ）及与补体第一途径的调节蛋白Ｃ４ｂ结合蛋白（Ｃ４ｂＰ）结合的ＰＳ（ＢＰＳ）。ＦＰＳ参与抗凝〔１〕，ＢＰＳ则参与补体系统激活的调控〔２〕。ＰＳ家族性缺乏已查明为常...

人心肌酸性铁蛋白的分离纯化及临床应用

人心肌匀浆经热变性、酸化、硫酸铵盐析、超离心、ＳｅｐｈａｒｏｓｅＣＬ－４Ｂ柱层析和制备等电聚焦分离，得到酸性铁蛋白。经鉴定，所得酸性铁蛋白ｐＩ为５．０，Ｈ亚基分子量为２１ｋＤ，Ｌ亚基为１９ｋＤ，ＰＡＧＥ分析呈单一区带。制备了兔抗人酸性铁蛋白抗血清，用该抗血清建立的人酸性铁蛋白放射免疫分析可检测出８０％甲胎蛋白阴性肝癌病人。

稀土离子与乳铁蛋白结合的光谱研究

用紫外示差光谱、荧光光谱及圆二色谱等方法研究了 Tb3+ 和 Eu3+ 在 p H 7.4的条件下与乳铁蛋白及脱铁乳铁蛋白的结合作用 .结果表明 ,Tb3+及 Eu3+可特异性地结合在脱铁乳铁蛋白的两个 Fe3+结合部位 ,但不能从已经结合铁的乳铁蛋白中把铁置换出来 .测得 Tb3+与这两个部位结合的条件平衡常数为 lg K1 =8.4 8± 0 .2 4和 lg K2 =6.72± 0 .1 8( 2 5℃ ,0 .1 0 mol/L Na Cl,0 .1 0 mol/L Hepes,p H=7.4 ) . Tb3+ 在这两个位点结合时 ,蛋白质的构象发生变化 .在 Tb3+ 与蛋白质的浓度比低时 ,构象趋于紧缩 ,色氨酸残基进入疏水的环境 ;当 Tb3+ 结合得较多时 ,构象转而开放 ,色氨酸残基转向亲水性环境 .但无论哪种情况 ,Tb3+ 与脱铁乳铁蛋白的结合都不影响蛋白的二级结构 .

^(125)IUdR对人脑胶质瘤细胞SHG44的杀伤作用

为评价12 5IUdR对人脑胶质瘤细胞SHG4 4的杀伤作用 ,把12 5IUdR加入到SHG4 4细胞的培养基中 ,孵育后测量细胞摄取12 5IUdR的放射性活度 ;采用克隆形成法测定12 5IUdR对SHG4 4细胞生长抑制的效果。结果表明 ,培养基中12 5IUdR浓度增加时 ,SHG4 4细胞对12 5IUdR的摄取量也相应增加 (相关系数r =0 .9917)。SHG4 4细胞摄取12 5IUdR后生长受到明显抑制 ,细胞存活分数与培养基中12 5IUdR浓度呈直线负相关 (r =- 0 .9736 ) ,其半数致死剂量LD50 为 (8.7± 0 .12 )kBq/mL ,12 5IUdR组的SHG4 4细胞存活分数明显低于Na12 5I组 (P <0 .0 0 1)。结果提示 ,12 5IUdR能够掺入到SHG4 4细胞中 ,12 5IUdR对SHG4 4细胞有明显的杀伤作用 ,说明12 5IUdR可望成为治疗脑胶质瘤的潜在的一种放射性药物。

胃癌患者全胃切除后血清PGⅠ、PGⅡ含量变化与胃癌复发的关系

目的：研究胃癌患者全胃切除手术后血清胃蛋白酶原 Ⅰ（Ｐｅｐｓｉｎｏｇｅｎ ＰＧＩ）、胃蛋白酶原 Ｒ（ＰＧ Ⅱ）含量的变化与胃癌复发的关系，探讨血清 ＰＧＩ、ＰＧ Ⅱ作为胃癌复发标志物的可能性。方法：运用放射免疫分析方法测定了１９０例正常人，１０３例胃癌手术前病人，３３例胃部分切除病人，１８例全胃切除病人，２３例全胃切除后随访病人的血清 ＰＧⅠ、ＰＧ Ⅱ的含量，并进行统计学分析。结果：与正常对照组相比，胃癌患者手术前血清 ＰＧＩ水平较低，胃癌手术后血清 ＰＧＩ、ＰＧ Ⅱ含量均明显下降，下降程度与手术方式有关，胃部分切除病人血清 ＰＧⅠ、ＰＧ Ⅱ仍保持一定水平，而全胃切除病人血清 ＰＧⅠ、ＰＧ Ⅱ含量则降至很低水平。全胃切除手术后胃癌复发患者血清 ＰＧⅠ、ＰＧ Ⅱ水平明显高于未复发患者。以ＰＧⅠ＞２２ μｇ／Ｌ，ＰＧ Ⅱ＞９ μｇ／以（ｘ+2ｓ）为临界值，１７名复发病人中有１３例结果为阳性（阳性率 ７６． ５％）。结论：胃癌患者全胃切除后血清 ＰＧⅠ、ＰＧ Ⅱ含量作为随访指标，可为胃癌复发提供重要线索。

^(131)I-epidepride的制备与SD大鼠体内分布特性研究

采用双氧水标记法和氯胺 -T法进行13 1I -epidepride标记 ,考察标记物的纯度及稳定性 ,并进行SD大鼠体内分布特性研究。实验结果表明 ,双氧水法和氯胺 -T法标记率分别为 97.4 %和 5 2 .9%。标记物的生理盐水溶液室温放置 4h ,放化纯大于 90 %。大鼠静脉注射13 1I -epide pride的生理盐水溶液后 ,纹状体与小脑比值在注射后 32 0min时高达 2 37:1。13 1I -epidepride进入血液后很快被组织摄取 ,其中以肺的早期摄取最高 (2 .11± 1.0 5 ) %ID·g- 1,各脏器的清除均较快 (T1/2 <4h) ,甲状腺的摄取率随时间的延长而增加。

BM_(210955)对破骨细胞骨吸收的抑制作用

细胞水平研究国产双磷酸盐药物－ＢＭ２１０９５５的骨吸收抑制作用。由１日龄ＳＤ大鼠四肢长骨分离破骨细胞（ＯＣ）并接种于牛皮质骨薄切片上，在不同浓度ＢＭ２１０９５５作用下培养，定时取骨片作ＴＲＡＰ免疫组化染色，计数阳性多核细胞后，经超声去除细胞后作甲苯胺蓝染色，光镜下作吸收陷窝计数，数据以ｘ±ｓ表示，并与对照比较作ｔ检验。结果显示：①ＢＭ２１０９５５能降低体外培养ＯＣ的数目，１０－８ｍｏｌ／Ｌ组的ＴＲＡＰ阳性多核细胞较对照组减少７３％，差异具有非常显著性，Ｐ＜０．０１。②ＢＭ２１０９５５抑制ＯＣ的陷窝形成能力，１０－１０、１０－８ｍｏｌ／Ｌ组的抑制率分别为７６．３２％和８７．９９％，均与对照有明显差异，Ｐ＜０．０１。③上述结果与剂量有关，剂量越高。

去势骨质疏松症大鼠模型防治效果的参数比较

目的 评价防治骨质疏松症大鼠模型药物疗效的各项指标。方法 采用卵巢切除术建立骨质疏松症预防和治疗大鼠模型 ,分别灌喂阿仑膦酸钠和埃本膦酸钠 ,持续处理 6个月。以骨密度、骨生化标志物、骨矿含量、骨生物力学和骨组织形态学方面的参数为指标 ,评价它们的价值。结果 两组大鼠模型用药后 ,各部位的骨密度明显升高。评价药物疗效时 ,敏感度、特异度、准确度最高的是全身骨密度和骨小梁面积。用药大鼠的股骨最大弯曲载荷、骨挠度、股骨干重、灰重、骨钙含量虽有不同程度的增高 ,血清骨钙素有一定程度的下降 ,但与对照组相比基本均无统计学意义。结论 全身骨密度是评价防治骨质疏松症药物疗效的最佳指标 ,骨切片计算骨小梁面积也是评价防治骨质疏松症药物疗效的敏感指标。

多巴胺D_2受体显像剂Epidepride的合成及其^(131)I标记

以 3-甲氧基水杨酸为原料合成了 Epidepride[S- ( - ) - N- [( 1-乙基 - 2 -吡咯烷基 )甲基 ]- 5-碘 - 2 ,3-二甲氧基苯甲酰胺 ]及其标记前体 ( S- ( - ) - 5- (三正丁基锡 ) - N- [( 1-乙基 - 2 -吡咯烷基 )甲基 ]2 ,3-二甲氧基苯甲酰胺 ) ,并采用双氧水法对标记前体进行 131I标记 ,获得 131I- epidepride,标记率和放化纯度均大于 95%。13 1I- epidepride溶液体外稳定性好 ,4℃放置 15d放化纯度仍大于 90 %。131I- epide-pride与 D2 受体亲和力高 ,大鼠脑内纹状体与小脑的摄取比在 32 0 min时高达 2 37;在脑内纹状体的吸收可被 Spiperone完全阻断。因此 ,131I- epidepride有望成为多巴胺 D2 受体 SPECT显像剂。

老龄鼠与记忆障碍模型大鼠脑内多巴胺系统的研究

目的 从多巴胺 (DA)系统角度探讨实验性记忆障碍及衰老的机制。方法 应用东莨菪碱 (Sco)阻断毒蕈碱 (M)乙酰胆碱受体建立记忆障碍大鼠模型 ,对该模型及老龄鼠进行记忆行为测试 ,并应用12 5I β 甲苯 3 β (4 碘苯基 )托烷 2 β 羧酸酯 (CIT)及12 5I 左旋 3 碘 2 羟基 6 甲氧基 N[(1 乙基 2 吡咯烷 )甲基 ]苯酰胺 (IBZM )脑内分布研究分别探讨在实验性记忆障碍和衰老时脑内DA转运蛋白 (DAT)及D2 受体的变化及其与记忆行为之间的关系。结果 在 10d的记忆测试中 ,第 1天 3组大鼠出错次数无明显差别 ,至第 10天老龄 [(1 3 3± 0 82 )次 /10min]及Sco组大鼠 [(3 0 0± 0 63 )次 /10min]出错次数均明显高于对照组 (t值分别为 5 682、6 3 72 ,P <0 0 5 )。12 5I β CIT脑内分布示Sco组及老龄组在纹状体 (ST)、海马 (HIP)及额叶 (FC)的每克组织百分注射剂量 (%ID/g)均低于对照组 (t值分别为 4 15 1、5 416、4 871、6 92 2、7 3 3 1、3 990 ,P均 <0 0 5 ) ;其中Sco组在FC的 %ID/g低于老龄鼠组 (t=4 13 6,P <0 0 5 )。12 5I IBZM脑内分布示Sco组及老龄鼠在ST的 %ID/g均明显低于对照组 (t值分别为 6 0 2 1和 3 2 2 7,P均 <0 0 5 ) ,且Sco组的HIP、FC的 %ID/g均低于老龄鼠组 (t值分别为

吗啡依赖大鼠脑多巴胺转运蛋白及D_2受体的研究

目的 观察吗啡依赖 (MD)大鼠脑多巴胺 (DA)系统的变化。方法 采用两隔室 (C1及C2 )模型训练大鼠对吗啡产生条件性位置偏爱 ,造成MD大鼠模型 ,用DA转运蛋白 (DAT)及DAD2 受体显像剂12 5I 甲苯 3β (4 碘苯基 )托烷 2 β 羟酸酯 (β CIT)、12 5I 左旋 3 碘 2 羟基 6 甲氧基 N[(1 乙基 2 吡咯烷 )甲基 ]苯酰胺 (IBZM)脑放射自显影、脑内放射性分布观察MD及对照组大鼠脑内D2 受体及DAT的变化。结果 条件性位置偏爱实验自第 6d后MD组大鼠由C1进入C2时间平均 (0 84±0 5 0 )min ,与对照组 (2 .40± 1.10 )min比较差异有显著性 (P <0 .0 5 ) ;放射自显影图像分析示 :12 5I β CITMD组纹状体 (ST) /小脑 (CB)及伏隔核 (NAC) /CB摄取比值分别为 4.76± 0 .92、2 .72± 0 96 ,与对照组 (5 .92± 0 .6 7、4.16± 0 .5 6 )比较差异有显著性 (P <0 .0 5 ) ;12 5I IBZM在MD组的ST/CB和NAC/CB摄取比值分别为 4.11± 0 .5 6、2 .6 4± 0 .2 5 ,明显低于对照组 (5 .43± 0 .74、3.49± 0 .6 5 ,P <0 0 5 ) ,脑内分布研究 (%ID/g脑组织湿重 )也证实MD组12 5I β CIT、12 5I IBZMST/CB摄取比值分别比对照组降低(2 1 6 8± 11.11) %和 (18.6 9± 9.97) %。结论 应用12 5I β CIT、12 5I IBZM能够敏感地反映MD?

应用^(99m)Tc-NGA进行肝ASGP受体显像的实验研究

新半乳糖人血清白蛋白（ＮＧＡ）是肝细胞表面去唾液酸糖蛋白受体（ＡＳＧＰＲ）的特异性配基。根据受体与配基结合的原理，报道了以９９ｍＴｃ标记的ＮＧＡ与人血清白蛋白（ＨＳＡ）在正常兔中显像行为的对比。结果表明９９ｍＴｃ－ＨＳＡ呈现血池显像剂的行为，而９９ｍＴｃ－ＮＧＡ则呈现肝脏受体显像剂的行为，并且若兔事先用１００倍量未标记的ＮＧＡ将肝脏受体饱和后，再用９９ｍＴｃ－ＮＧＡ显像则呈现与９９ｍＴｃ－ＨＳＡ相似的显像结果。以异硫氰酸荧光素标记的ＮＧＡ（ＦＩＴＣ－ＮＧＡ）进行流式细胞分析（ＦＣＭ）也表明，ＡＳＧＰＲ具有明显可饱和性。由此进一步表明９９ｍＴｃ－ＮＧＡ是ＡＳＧＰ受体显像，而非胶体显像；且具有饱和性．

双膦酸盐对肺癌细胞增殖的影响

背景与目的双膦酸盐在临床上被广泛用于多种骨病的治疗,在动物实验中可减少乳腺癌及前列腺癌细胞骨转移的发生,抑制和减少肿瘤在骨上的发展及负累,但对同样易于发生骨转移的肺癌的作用尚缺少研究。本实验的目的是研究几种双膦酸盐(阿仑膦酸钠、埃本膦酸钠、亚甲基二膦酸钠及因卡膦酸二钠)对不同肺癌细胞体外增殖的抑制作用,并验证这种抑制作用的广泛性或者选择性。方法采用磺酰罗丹明B染色法检测不同浓度的双膦酸盐药物对肺癌细胞及人正常肝细胞体外增殖的影响。结果不同浓度的双膦酸盐药物作用72h后,能不同程度地抑制肺癌细胞的增殖,亚甲基二膦酸钠的抑制效果很小,埃本膦酸钠及因卡膦酸二钠的作用介于亚甲基二膦酸钠和阿仑膦酸钠之间。不同的双膦酸盐对人正常肝细胞的影响具有差异性,亚甲基二膦酸钠、埃本膦酸钠及因卡膦酸二钠均表现出低毒性,而阿仑膦酸钠的毒性显著。不同的肺癌细胞对双膦酸盐的敏感性也有明显差异,H446及SPCA1相对较为耐受,而H460及A549则较为敏感。结论双膦酸盐药物对肺癌细胞及人正常肝细胞均有不同程度的抑制增殖作用,且这种作用与药物种类、浓度和肺癌细胞的种类有关。

高效离子交换色谱法测定埃本膦酸钠

采用高效离子交换色谱法 ,在流动相中加入二价铜离子 ,利用埃本膦酸钠通过流动相时与铜离子能形成紫外吸收的络合物的性质 ,在 2 4 0 nm波长下检测 ,所用柱为 DEAE离子交换柱。方法的最低检测质量浓度为 6mg/L线性回归系数为 0 .9989。方法简便 ,重现性好。同时考察了 p H及有机溶剂对平衡分配的影响。

酸性铁蛋白与肝癌临床关系的研究

测定了肝癌、肝硬化、迁延性乙型肝炎和急性肝炎患者血清酸性铁蛋白含量，其肝癌诊断的阳性率为７５．９０％，基本不受非癌性肝损伤的影响．与ＡＦＰ联合检测，肝癌诊断的阳性率可达９０．０７％，部分弥补了ＡＦＰ阴性肝癌的诊断．

酪蛋白磷酸肽的分离纯化及分子结构鉴定

将离子交换色谱、凝胶过滤色谱、高压液相色谱及毛细管色谱等分离纯化技术结合使用，从酪蛋白磷酸肽（ＣＰＰ）制品中分离出３ 个纯组分，并对各组分的氨基酸组成和Ｎ 末端２～３ 个氨基酸序列进行了分析测定，从而确定了３ 个组分的结构，它们分别是αｓ１（６１～７９）、αｓ１（４３～７９）和β（７～２４）．与用胰蛋白酶水解酪蛋白得到的ＣＰＰ比较，用胰酶水解得到的ＣＰＰ肽链较短．