基于神经网络优化模型的中药复方安慰剂配色模拟研究

目的构建粒子群反向传播(Particle swarm optimization-back propagation,PSO-BP)神经网络对中药复方颗粒剂安慰剂制备着色剂的用量进行预测,为中药复方颗粒剂安慰剂颜色的模拟提供一种新思路。方法运用BP神经网络建立样品颜色参数L、a^(*)、b^(*)与色素质量分数的模型,利用粒子群算法的全局搜索能力优化BP神经网络权重和偏置,防止模型出现局部最小值,再采用线性降低权系数法和引入变异算子提高粒子群算法的全局寻优能力;以颜色综合评价指标(ΔE)为客观评价标准,验证试验结果。结果训练结果表明,改进的PSO-BP神经网络拟合精度最高达到98.31%;预测结果表明,改进的PSO-BP神经网络的预测误差最小,平均绝对百分比误差(MAPE)、均方根误差(RMSE)和平均色差(ΔE)分别为0.4115、2.1646、2.56;制备3种颗粒的验证样品进行验证,验证样品与模型药物的ΔE分别为1.73、2.63、4.11,肉眼直观评价其中两组与模型药物色差较小。结论基于改进粒子群优化算法的BP神经网络可模拟中药复方颗粒剂安慰剂制备着色剂用量预测,可作为安慰剂配色研究的推荐优化模型。

动物生物安全实验室废弃物分类高压灭菌程序探索

为探索动物生物安全实验室不同种类废弃物合理的高压灭菌程序,探讨脉动真空灭菌器灭菌时间和脉动参数对灭菌效果的影响,以化学指示卡和生物指示剂为判断标准,研究了不同种类废弃物(动物尸体、粪便以及防护服、利器盒等一般废弃物)的灭菌程序。在程序设置方面,以灭菌温度121℃,脉动4次,排空上限80 kPa为灭菌固定参数,通过设置不同的灭菌时间和脉动下限,探索有效灭菌程序。结果显示:当灭菌时间为90 min,排空下限为-10 kPa时,猪、牛、羊等大动物尸体及其粪便灭菌合格;当排空下限为-80 kPa,灭菌时间分别为30、60、120 min时,一般废弃物、小动物尸体、禽类粪便灭菌合格。结果表明,通过调整灭菌时间和脉动参数,对不同种类废弃物进行分类高压,灭菌效果更加理想。本研究为动物生物安全实验室的废弃物处理提供了参考。

猪圆环病毒2型疫苗及其效力评价方法比较研究

为探索对不同猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type2,PCV2)疫苗产品进行统一质量评价的可行性,对国内该类疫苗产品及其现有效力评价方法进行了归纳和比较研究。结果发现,目前猪圆环病毒2型疫苗类产品种类有25个,且疫苗毒株数量多达10余个,效力检验方法包括传统的免疫攻毒法、血清学方法和多种不同的替代方法,但尚没有统一的效力评价体系。本研究可为进一步完善PCV2疫苗效力评价方法、统一评价疫苗效力、提高产品质量提供参考。

气肿疽梭菌C54-1株的制备与检定

为研究气肿疽梭菌C54-1株(CVCC60001)的菌种特性,制备了1批气肿疽梭菌C54-1株,并对菌种的形态及生化特性、培养特性、血清学特性、真空度、纯粹、剩余水分、毒力及免疫原性、16S rDNA等进行检定,以及对于该菌的适宜培养基促生长能力等方面进行了比较。实验结果表明,该冻干菌种的形态及生化特性、培养特性、血清学特性、真空度、纯粹、剩余水分、毒力及免疫原性均符合《中华人民共和国兽用生物制品规程》二〇〇〇版质量标准的规定。16S rDNA鉴定为气肿疽梭菌,相似度为99.93%。在免疫原性检定中,使用致死剂量攻毒时,免疫组能够4/4被保护,证明该菌明矾苗免疫效果良好。使用商品化梭菌培养基对于该菌培养进行了比对,证实商品化培养基替代厌气肉肝汤的可能性。本研究为气肿疽梭菌的制备和检定提供参考依据,并使用不同培养基进行比对研究,为该菌的稳定培养和疫苗工艺改进提供了研究基础。

国际标准在川芎农药残留检测中的应用

按照FDA和欧盟法规的农药种类、限度以及方法验证要求,采用改良的QuEChERS法结合液相色谱-串联质谱技术,建立川芎中54种农药残留检测方法。样品使用1%乙酸水溶液充分浸泡,经乙腈提取,Cleanert MSA-Q盐包盐析分层,QuEChERS净化,液相色谱-串联质谱检测,并采用过程校正标准曲线法进行定量。结果表明,54种农药线性关系良好,决定系数(R^(2))均大于0.99;在0.01、0.05和0.1 mg/kg加标水平下,加标回收率为92.5%~105.5%,日内精密度为0.4%~6.6%,日间精密度为1.0%~11.7%。方法操作简单、快速、准确,适用于川芎中多农药残留的高通量检测。

重组犬IFN-γ的原核表达及生物学活性研究

为了探究犬γ干扰素(canine interferon gamma,CaIFN-γ)的原核可溶性表达方法及其生物学活性,试验首先采用PCR方法扩增优化后的CaIFN-γ基因成熟肽序列,以此构建重组表达质粒pCold-SUMO-10His-CaIFN-γ;然后将重组表达质粒转化至表达菌株Lyophilized BL21(DE3)Chaprone中,并用IPTG进行诱导表达;最后对表达的重组蛋白rCaIFN-γ进行SDS-PAGE分析、Western-blot鉴定、IPTG浓度优化、Ni-IDA亲和层析,以及采用CCK-8法测定重组蛋白rCaIFN-γ的细胞毒性,实时荧光定量PCR(相对定量)法检测凋亡相关基因和干扰素刺激基因(ISGs)转录水平变化,用细胞病变(CPE)法测定抗水疱性口炎病毒(VSV)效价,实时荧光定量PCR(绝对定量)法测定抗犬流感病毒(CIV)H3N2亚型感染的能力。结果表明:优化后的CaIFN-γ基因PCR扩增产物大小为494 bp,且重组表达质粒pCold-SUMO-10His-CaIFN-γ经菌液PCR、双酶切和测序验证构建成功;阳性菌株经诱导后表达的重组蛋白rCaIFN-γ大小为35.1 ku,该蛋白质能以可溶性形式表达,且可以与His Tag和HA Tag的鼠源单克隆抗体发生特异性反应;IPTG最佳诱导表达浓度为0.05 mmol/L;纯化后的重组蛋白rCaIFN-γ最大安全浓度为20μg/mL。以最大安全浓度的重组蛋白rCaIFN-γ分别作用MDCK细胞、MDCK(PB_(2))细胞4 h和6 h后,促凋亡基因p53和Bcl2相关X蛋白(Bax)的相对表达量无显著变化(P>0.05),γ干扰素受体2(IFNGR2)基因相对表达量降低(P<0.01或P>0.05),信号转导及转录激活因子1(STAT1)和干扰素调节因子1(IRF1)基因相对表达量均升高(P<0.05或P<0.01);MDCK细胞中,作用6 h IFNGR2、STAT1和IRF1基因相对表达量略高于4 h,但差异不显著(P>0.05);MDCK(PB_(2))细胞中,作用6 h IFNGR2和IRF1基因相对表达量极显著高于4 h(P<0.01),而STAT1基因相对表达量显著低于4 h(P<0.05)。再以最大安全浓度的重组蛋白rCaIFN-γ分别刺激MDCK和MDCK(PB_(2))细胞24 h,干扰素诱导跨膜蛋白1(IFITM1)、抗黏病毒蛋白1(MX1)、干扰素诱导蛋白与四肽重复1(IFIT1)、干扰素刺激基因15(ISG15)、2′-5′寡腺苷酸合成酶1(OAS1)5种ISGs转录水平均升高,且MDCK细胞中的转录水平均极显著高于MDCK(PB_(2))细胞(P<0.01)。该蛋白质在MDCK细胞中抗VSV的病毒活性效价为6.4×10~5 U/mL,并且对H3N2亚型CIV有一定的抑制作用。说明重组蛋白rCaIFN-γ在大肠杆菌中成功地实现了可溶性表达,并且具有良好的生物学活性。

基于FIPV S蛋白单抗的竞争ELISA方法建立及应用

为给猫传染性腹膜炎病毒(FIPV)的流行和地理分布提供有价值的检测手段,以FIPV S蛋白为包被抗原,利用FIPV的特异性单克隆抗体(FIPV MAb 3D8)为竞争抗体,经条件优化,建立一种快速检测FIPV抗体的竞争ELISA法。优化结果表明最佳条件为:包被抗原质量浓度10μg/mL,血清稀释度1∶4;FIPV MAb 3D8稀释倍数1∶100,酶标二抗稀释倍数1∶5000;CBS在37℃包被1 h,5%BSA在37℃封闭2 h,FIPV MAb 3D8在37℃孵育1 h,TMD底物显色液37℃避光5 min。临界值PI≥25.76%时为阳性,PI<20.22%为阴性。该方法特异性较强,重复性较好。利用该方法和已发表的其他方法同时对来自宠物医院的62份临床血清样本进行检测,总体符合率为85.5%,表明该方法准确性较高。本研究建立了快速准确测定FIPV抗体的竞争ELISA方法,适用于临床样本检测,为猫传染性腹膜炎的鉴定、防控和流行病学调查提供支持。

柱前衍生化UPLC-MS/MS法测定川芎药材中二氯喹啉酸残留

目的:建立川芎中二氯喹啉酸残留的UPLC-MS/MS分析方法,为川芎药材的安全性研究提供依据。方法:药材中的二氯喹啉酸用0.5%氨水-甲醇溶液提取,提取液吹干,甲醇复溶后,用三甲基硅烷化重氮甲烷衍生化,采用电喷雾离子源(ESI+),多反应监测模式(MRM)下分析。结果:在0.01、0.05、0.1 mg/kg加标水平下,二氯喹啉酸回收率为83.2%~98.5%,RSD为0.9%~8.2%。结论:该方法简单快速准确,适用于川芎中二氯喹啉酸残留的检测,并按欧盟法规制定川芎中二氯喹啉酸的最大残留限量为0.01 mg/kg,能够保证川芎的用药安全。

九味熄风颗粒HPLC指纹图谱及化学成分归属研究

目的:构建九味熄风颗粒的HPLC指纹图谱,获得良好的各色谱分离峰形,获悉其成分归属与含量,准确客观评估九味熄风颗粒的整体质量。方法:采用高效液相色谱法,以Kromasil C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm)为色谱柱,以乙腈-0.1%磷酸为流动相,梯度洗脱,检测波长225 nm,流速0.5 mL/min,柱温30℃。运用相关软件,以11批次的九味熄风颗粒为研究对象,计算其化学成分指纹图谱的相似度,指认图谱共有峰药材来源,结合飞行时间质谱法检测图谱中的主要化学成分。结果:建立了九味熄风颗粒的HPLC指纹图谱;发现并确定17个具有指纹意义的共有峰,可归属到6味药材,其中6个共有峰得到鉴定;各批次九味熄风颗粒样品指纹图谱与标准指纹图谱相似度均大于0.9。结论:该法准确快速获悉各批次原药材、中间体的成分变化,为合理调配提供试验数据支撑,最大程度保证成品的成分含量及组成比例的一致性。

没药不同提取物对小鼠痛经模型的影响

目的探讨没药提取物对原发性痛经小鼠模型的影响及其效应物质基础和可能的作用机理。方法采用原发性痛经小鼠模型,观察没药不同提取物对原发性痛经小鼠的扭体反应以及对子宫匀浆中Ca2+含量、NO含量的影响,并观察其组织病理变化。结果水提后药渣醇提物的石油醚萃取部位大剂量组能够显著地降低痛经小鼠扭体次数,提高痛经小鼠子宫组织中NO水平,降低子宫组织中Ca2+水平,且优于小剂量组。病理切片亦显示了该部位能够改善小鼠痛经模型的病理异常。结论没药水提后药渣醇提液的石油醚萃取部位可能是其治疗原发性痛经的主要有效部位,其作用机理可能与影响子宫组织中NO和Ca2+水平有关。

茶多酚与大豆分离蛋白对复合乳化体系性质的影响

采用单因素试验研究了茶多酚(TP)添加量、pH值、油添加量、大豆分离蛋白(SPI)浓度对TP-SPI复合乳液的乳化活性、稳定性和抗氧化性等性质的影响,为制备不同需求的复合乳化体系条件选择提供理论依据。研究表明:随着TP添加量的增加,复合乳液的乳化稳定性和抗氧化性增强,对乳化活性影响不显著;随着油量的增加,复合乳液的乳化活性和抗氧化性降低,乳化稳定性先增强后降低;随着pH值的增加,复合乳液的乳化活性和稳定性先降低后增强,其乳化活性和乳化稳定性在碱性条件下比在酸性条件下强,抗氧化能力变化则与之相反;随着SPI的浓度增大,复合乳液的乳化活性和乳化稳定性增强,对抗氧化性的影响不显著。

UPLC-TQ-MS法同时测定金振口服液中17种成分的含量

运用超高效液相色谱-三重四级杆质谱联用(UPLC-TQ-MS)技术建立同时测定金振口服液中17种化学成分含量的分析方法。方法 10批金振口服液稀释后,以色谱柱Eclipse Plus C18(2.1×100 mm,1.8m),柱温40℃,流速0.3 mL/min,流动相0.1%甲酸水溶液-乙腈进行梯度洗脱,质谱采用电喷雾离子源、多反应监测模式。结果 17种成分在设定范围内线性关系良好,精密度、重复性、稳定性(24 h)试验的RSD均小于5%;平均加样回收率均在95%~105%之间,RSD均小于5%。10批金振口服液中苯丙氨酸、脯氨酸、丙氨酸、缬氨酸、谷氨酸、精氨酸、盐酸赖氨酸、黄芩苷、汉黄芩苷、大黄酸、汉黄芩素、芹糖甘草苷、千层纸苷、甘草酸、胆酸、甘草苷、牛磺胆酸的含量分别为1.14~1.97、12.60~18.60、3.50~4.86、0.62~1.38、2.88~7.83、24.00~57.40、0.50~0.92、58.10~86.80 、13.60~18.70 、0.09~0.99、1.29~2.03、6.12~10.70、4.44~6.19、20.40~32.90 、4.90~11.50、10.80~14.90、7.37~12.70 mg/100 mL。结论 本研究建立了简单、稳定、准确、灵敏的含量测定方法,适用于金振口服液中不同种类成分的定量分析,为金振口服液的质量控制与评价提供参考。

头颅MRI、CT在诊断小儿病毒性脑炎中的应用价值

目的探究在诊断小儿病毒性脑炎时使用头颅MRI和CT应用价值。方法回顾性分析2016年1月~2018年12月74例在我院接受头颅MRI与CT检查病毒性脑炎患儿影像学资料。分析CT和MRI诊断病毒性脑炎影像学特点,比较CT和MRI诊断患儿病情分度、病灶情况。结果MRI诊断患儿病毒性脑炎阳性率显著高于CT(97.30%vs83.78%,P<0.05),MRI对额叶和颞叶部位病灶检出显著优于CT(P<0.05),对顶叶以及其他部位病灶检出差异不显著(P>0.05)。MRI对于病毒性脑炎患儿多发病灶诊断情况优于CT,差异比较具有统计学意义(P<0.05)。结论在小儿病毒性脑炎诊断时使用头颅MRI诊断价值较CT高,尤其是在对于额叶和颞叶部位病灶以及多发病灶上诊断优势更为明显。

生物安全三级实验室生物安全风险点的识别与控制?

BSL-3实验室须经国家生物安全认可和严格的实验活动审批才能开展相应活动,是国家(地区)开展高致病性病原微生物实验活动的重要技术支撑平台。实验室生物安全风险点易发生在样本及菌毒种的接收、传递和保存,动物实验,污水以及固体废弃物处理等环节,而实验室的意外事件(电力故障、火灾、积水等)与生物安保漏洞也会造成重大的生物安全事故。提示应准确地识别风险并通过人员日常监管、标准操作规程、两级屏障设施和个人防护装备等系列措施对生物安全风险点予以严格控制。

盐酸氨溴索不同给药方式治疗新生儿肺炎68例临床分析

目的:探讨盐酸氨溴索不同给药方式治疗新生儿肺炎的疗效及安全性。方法:依据不同的给药方式随机分组,均采用常规治疗方法。干预组分别加用盐酸氨溴索静脉滴注和雾化治疗。结果:治疗组显效率及有效率均优于对照组,提示盐酸氨溴索可明显改善新生儿肺炎症状和体征。治疗过程中未发现与盐酸氨溴索相关的药物不良反应。同时雾化组与静脉应用组显效率及有效率间比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:盐酸氨溴索治疗新生儿肺炎疗效显著,有良好的安全性,值得临床推广;雾化治疗更具有推广价值。

大孔树脂纯化淫羊藿总黄酮工艺优化

目的优化大孔吸附树脂对淫羊藿总黄酮的最佳纯化工艺。方法以淫羊藿总黄酮的洗脱率和含量为指标,通过对上样量、洗脱液浓度、洗脱液倍量等因素考察,明确淫羊藿总黄酮的纯化工艺参数。结果 D101树脂分离效果较好,优选的纯化工艺条件是以3 BV的蒸馏水洗脱,弃去水洗脱液,再以4BV的85%乙醇洗脱,收集洗脱液,流速均为1 BV/h。结论 D101型大孔树脂可用于纯化淫羊藿总黄酮,优选的纯化工艺稳定可行。

重组人干扰素α2b治疗重症手足口病患儿的临床研究

目的探讨治疗重症手足口病患儿采用重组人干扰素α2b的临床疗效。方法选取本院2018年4月~2019年5月收治30例重症手足口病患儿,随机数字表法将患儿分为观察组和对照组各15例,对照组患儿实施常规抗病毒感染治疗以及皮肤、口腔护理等,观察组在此基础上给予重组人干扰素α2b治疗。观察比较两组患儿的临床疗效、临床症状改善时间及不良反应发生情况。结果观察组患儿的临床治疗总有效率高于对照组(P<0.05);观察组患儿体温、心率恢复时间以及手、足、口腔疱疹消退时间明显短于对照组(P<0.05);两组不良反应发生率比较无统计学意义(P>0.05)。结论对重症手足口病患儿给予重组人干扰素α2b临床疗效好,可明显改善患儿的临床症状,促进患儿健康恢复,安全性好。

水轮发电机定子端部过热故障分析与诊断

在某水轮发电机A修检查过程中发现定子上、下端部有过热导致部分铁芯表面发黑和变形的现象。根据机组以往运行参数和现场检查情况,分析定子端部铁芯过热可能的主要原因,并通过试验和仿真进行验证,最后提出解决方案。

中药资源化学学科引领中药资源全产业链循环利用与绿色发展的创新与实践

中药资源化学学科的概念、内涵与外延、目标与任务等的提出及建设发展已20年。回顾20年的建设发展历程,围绕中药资源的科学生产与有效利用不断探索与创新实践,理论内涵进一步丰富,研究模式进一步完善,技术体系进一步拓展,形成了系列研究成果并得到推广应用,服务于中药资源产业的高质量发展,为中药资源全产业链提质增效与绿色发展做出了应有的贡献。然而,随着我国中医药产业的快速增长和产业链的不断拓展延伸,中药农业与中药工业生产过程产生的废弃物及副产物与日俱增,造成的资源浪费和环境污染已成为行业发展面临的新的重大问题。以中药资源全产业链循环利用与低碳绿色发展的模式建立与实例分析,以及中药资源循环利用生态产业示范园区创建为主线,展示近些年来取得的阶段性成效,以期为中药资源产业由线性经济模式向循环经济模式的低碳绿色转型提供示范和参考,为中药资源利用效率提升和新质生产力创造提供借鉴,为推动中药资源产业领域经济社会发展的低碳绿色提供助力。

动态浊度法测定注射用QHMT中细菌内毒素含量

目的通过以动态浊度法考察注射用QHMT细菌内毒素干扰的情况,建立其细菌内毒素定量分析方法。方法采用《中国药典》2010版(一部)附录ⅩⅢD细菌内毒素检查法中的动态浊度法。结果干扰试验表明:用标示灵敏度为0.03 Eu/ml的鲎试剂,将注射用QHMT稀释至1.4 mg/ml,对细菌内毒素检查无干扰。结论用细菌内毒素检查法检查注射用QHMT中细菌内毒素是可行的,该方法安全可靠,无干扰;可用细菌内毒素检查法(动态浊度法)代替家兔热原检查法控制其热原。