哈茨木霉Chiv基因的原核表达及优化

通过筛选哈茨木霉的DNA文库,克隆到Chiv基因的cDNA全长序列.以连接有哈茨木霉Chiv基因的质粒pBK902为模板,设计含有EcoRI和XhoI酶切位点引物,采用PCR方法扩增得到具有完整开放阅读框的目的基因;将目的基因连接到表达载体pET28上并转化大肠杆菌BL21菌株中,成功地获得了大量的阳性转化子.质粒通过EcoRI和XhoI酶切鉴定及测序鉴定,证明Chiv基因成功地转化到大肠杆菌中.重组大肠杆菌经IPTG诱导表达及SDS-PAGE检测后,发现特异的蛋白表达条带,其分子量为50 kDa左右.通过对诱导剂量与诱导时间等因素的优化,结果显示几丁质酶的最佳诱导时间为13 h,最佳诱导剂浓度为1 mM,为几丁质酶的工业化生产奠定基础.

锰铁合金冶炼工人心血管系统改变调查

1988年7月,对菜铁合金公司一分厂锰铁合金冶炼作业进行高温作业分级调查,并对该作业工人行健康体格检查.为探讨锰铁合金冶炼(高温作业)环境对工人心血管系统的影响,现将调查结果报告于下.

铅接触工人心电图检查结果

通过对某铁合金公司接触铅和四乙铅的工人328例进行健康体格检查,为观察其对工人心脏健康的影响,现将检查结果报告于下。对象和方法选择该公司机修、生活服务公司、运输、机关等四单位的汽车司机、汽车修理、铸字、排字、打字工种为接触组、共328例。年龄20—55岁,工龄1—33年。另外择条件相仿的本所非铅接触者为对照组。全部受检者经询问病史、职业史、内科、心电图描记、血压测量、X 线等项检查。

中学英语课堂中的文化教学初探

众所周知,英语教学必须融入文化教学,然而现实操作中却存在各种随意的状态,导致相关教学效果不如人意。笔者在30余年的英语课堂教学中,就文化教学尝试了词语挖掘、翻译对比、文化旁白、分析手段、语法提示等方法,取得了良好效果。

新型冠状病毒抗原性变异和血清分型研究进展

当前,SARS-CoV-2各变异株之间交叉中和活性的下降提示出现不同的血清型。对病毒进行血清分型是多价/广谱疫苗研究的重要参考依据,也是疫情防控的重要指导。近日已有文献基于血清中和数据对SARS-CoV-2的抗原性分化和血清分型进行了研究和讨论。因此,本文对SARS-CoV-2血清分型的必要性、最新进展和重要价值进行综述。

发展mRNA技术,推动生物医药高质量发展

历经半个多世纪的发展,信使核糖核酸(mRNA)从一个朴素的科学概念,一跃成为家喻户晓的疫苗产品.新冠mRNA疫苗在世界范围内广泛接种,挽救了无数人的生命.目前,mRNA技术已广泛应用于疫苗、抗体与蛋白替代疗法、基因编辑等生物医药领域.全球多国正进行多项相关临床试验,几乎涵盖了肿瘤、传染病、血液系统疾病、罕见病等各个领域.

新冠病毒变异株RBD二聚体mRNA疫苗广谱免疫原性研究

严重急性呼吸综合征冠状病毒2(severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARS-CoV-2)是导致新冠病毒病(coronavirus disease 2019,COVID-19)的病原体.2019年末至今,SARS-CoV-2在全球范围流行,氨基酸突变累积产生多种具有较高传播力或较强免疫逃逸能力的变异株.目前广泛使用的COVID-19疫苗大多基于SARS-CoV-2原型株(prototype,PT)进行免疫原设计.这些疫苗针对早期变异株具有较好的保护效果,然而面对后续出现的Omicron系列变异株,以原型株为免疫原的疫苗保护效力显著下降,特别是在面对免疫逃逸极强的BF.7、BQ.1.1、CH.1.1、XBB及XBB.1.5等变异株时,难以激发较高水平特异性中和抗体.因此,亟须研发针对多种SARS-CoV-2变异株产生高效中和抗体的新一代广谱疫苗.本研究基于SARS-CoV-2受体结合域(receptor-binding domain,RBD)重复串联二聚体的构型,设计了6种包含Delta RBD以及BA.1、BA.2和BA.5等Omicron亚型RBD的串联二聚体mRNA疫苗,并对其表达情况及免疫原性进行了系统性评价.同时,还验证了在两针灭活疫苗基础上以mRNA疫苗作为加强针的序贯免疫效果.假病毒中和数据显示,Delta-BA.2(DO2)与Delta-BA.5(DO5)RBD二聚体疫苗表现出较优的免疫原性,且两者诱导的中和抗体分别针对BA.2之前和BA.5之后出现的变异株有较好的中和活性,表现出一定的互补趋势.因此,我们设计了DO2和DO5混合免疫的策略,实现了对二者优势的互补,进一步扩宽了疫苗中和抗体谱.在三剂免疫的结果中,DO5及DO2+DO5免疫可产生针对CH.1.1、XBB及XBB.1.5的高水平中和抗体.这些结果有助于我们理解不同分支变异株中和抗体谱的变化规律,并为广谱COVID-19疫苗设计提供了参考.

平急一体化传染病防控平台在新冠肺炎疫情中的应用

以新冠肺炎为代表的传染病对人类健康和经济发展造成重大威胁。疫情暴发时的应急科研攻关是开发抗击疫情有力武器的关键,而有机结合了平时研究和应急攻关为一体的传染病防控平台是抗击疫情的基础。新冠肺炎疫情暴发以来,高福院士团队基于长期的研究积累,利用平急一体传染病防控平台,在新冠病毒的基础研究和应用研究两方面取得了重要成果,鉴定出新冠病毒的受体,揭示了新冠病毒以及变异株的入侵机制,跨种传播能力,基于入侵机制的理论基础开发出国际上第一个获批临床使用的新冠病毒重组亚单位疫苗以及在美国等十余国紧急使用的新冠肺炎治疗性抗体药物,迅速开发靶向3CL蛋白酶药物以及靶向入侵的多肽抑制剂,为中国以及世界新冠肺炎疫情的防控做出了重大贡献。

新型冠状病毒结合穿山甲ACE2受体的分子机制

新型冠状病毒病(coronavirus disease 2019,COVID-19)的病原体为新型冠状病毒(COVID-19 virus),以下简称为新冠病毒,也称为severe acute respiratory syndrome coronavirus 2(SARS-CoV-2).研究认为,SARS-CoV-2可能起源于蝙蝠,但是其中间宿主仍不清楚.目前,除蝙蝠外,穿山甲被证明是唯一携带SARS-CoV-2相关冠状病毒的哺乳动物,因而被认为是可能的中间宿主.本研究利用表面等离子共振实验(surface plasmon resonance,SPR)展现和分析了SARS-CoV-2和两种穿山甲冠状病毒(pangolin-CoVs,GX/P2V/2017和GD/1/2019)分别与穿山甲ACE2(pangolin ACE2,pACE2)和人ACE2(human ACE2,hACE2)受体的结合能力,解析了SARS-CoV-2刺突蛋白(spike,S)受体结合域(receptor binding domain,RBD)与pACE2复合物的晶体结构,分辨率为2.3Å,发现SARS-CoV-2 RBD结合pACE2的模式与结合hACE2或猫ACE2(cat ACE2,cACE2)相似,但与hACE2更相近.通过同源建模的方式,进一步模拟了GX/P2V/2017 RBD和GD/1/2019 RBD分别与pACE2和hACE2受体的结合,发现二者结合pACE2和hACE2的方式与SARS-CoV-2 RBD相似,但晶体结构或同源建模的数据暗示,上述3种RBDs结合pACE2的能力均稍弱于hACE2,这与SPR的结论一致.这些研究结果不仅有助于我们更好地理解SARS-CoV-2的进化,而且警示我们穿山甲冠状病毒具有感染人的潜力,强调了持续监测穿山甲携带病毒的重要性,以防止病毒外溢,引起人类疾病.

开启mRNA技术实用化大门的钥匙——浅析2023年度诺贝尔生理学或医学奖

在现代生命的中心法则中,RNA是遗传信息的传递者和重要的调控者.其中,信使RNA(messenger RNA,mRNA)作为中间分子,将DNA编码的信息传递到蛋白质序列,因而在发挥疫苗和药物功能时具备许多独特的优势.从1961年mRNA的发现到2020年新型冠状病毒感染全球大流行期间的mRNA疫苗接种,mRNA技术经历近60年的发展,最终进入了大规模的临床应用阶段.在这一过程的早期,科学家们陆续突破了mRNA的实验室合成、在细胞内表达蛋白质、递送进入动物体内等多种技术,但mRNA自身具有的免疫原性限制了其在人体内的进一步应用,成为了制约mRNA技术实用化的关键技术瓶颈.2023年度诺贝尔生理学或医学奖授予了Katalin Karikó和Drew Weissman,以表彰他们在核苷碱基修饰方面的发现.这一发现使mRNA技术突破了进入人体之后的安全性瓶颈,使得在新型冠状病毒感染大流行期间快速开发出有效mRNA疫苗成为可能.本文将对2023年度诺贝尔生理学或医学奖进行解读,并通过mRNA技术的“前世今生”浅析这一技术的重要意义.

基于RBD抗原性的五种SARS-CoV-2血清型分类

新冠病毒(SARS-CoV-2)的不断进化带来了大量的变异株,特别是Omicron变异株及其众多的亚型.这些变异株表现出越来越强的免疫逃逸能力,使现有疫苗和治疗抗体的效力不断下降.目前,众多变异株已表现出血清交叉中和作用减弱的现象,表明新冠病毒可能已进化出多种血清型.因此,我们选取新冠病毒的主要抗原,即刺突(S)蛋白的受体结合域(RBD)对其进行血清分型.我们首先选择了23个具有代表性的新冠病毒毒株,涵盖了前Omicron变异株和Omicron变异株的多种亚型.通过对RBD抗原性的系统评估,我们将23种变异株分为5种血清型,每种血清型都包含了数种基因型不同的变异株.具体而言,Ⅰ型涵盖了所有前Omicron变异株(含两种亚型),而其余四种血清型均包含处于不同进化阶段的Omicron亚型.本文中的血清分型可以为新型变异株的快速评估奠定基础,并指导未来针对新冠病毒的广谱疫苗和中和抗体的开发.

一株靶向沙贝病毒高度保守的S2亚基的广谱中和纳米抗体

新型冠状病毒感染给人类健康和全球公共安全带来了巨大威胁,但是病毒仍在持续变异产生新的变异毒株,尤其OmicronBQ.1.1和XBB变异株,完全逃逸现有抗体药物,疫苗保护效力也严重降低。此外,多种动物源新冠相关冠状病毒(沙贝病毒)具有感染人的危险。

导致狐狸重症腹泻疫情的新型犬冠状病毒的发现与鉴定

2019年末,中国东北地区狐狸群中暴发大规模疫情,发病狐狸表现出急性腹泻症状,并出现大量狐狸死亡.通过对该疫源地发病狐狸肛拭子、血液与发病组织的检测分析,获得了多条全长新型犬冠状病毒(CCoV)基因组序列,研究团队将该病毒命名为VuCCoV,并确认VuCCoV是引起该疫情的病原.进一步分析表明,VuCCoV基因组的4个结构基因(S,E,M,N)中的3个(E,M,N)与犬冠状病毒(CCoV)对应基因具有超过90%的核苷酸同一性,但S基因核苷酸序列表现出较大的差异.VuCCoV的RNA依赖的RNA聚合酶与蝙蝠冠状病毒PB025的对应蛋白仅存在2~3个氨基酸差异,系统进化分析提示VuCCoV很可能来源于蝙蝠.表面等离子体共振分析实验表明,VuCCoV刺突蛋白受体结合区(RBD)可与犬和狐狸的氨肽酶N(APN)结合,但不与人APN结合,假病毒感染及病毒分离培养实验进一步证实该VuCCoV不易感染人源细胞.蝙蝠等野生动物宿主的病毒跨物种传播对人类和家畜健康构成了显著威胁,VuCCoV的发现和溯源证实蝙蝠作为疫情出现的潜在驱动因素的重要性.积极监控蝙蝠及其他犬科动物中的病毒感染,发现、鉴定对人兽健康构成潜在威胁的新型冠状病毒并研究其进化变异特征与感染特性,对于防控新发人兽共患传染病、建设国家生物安q全体系具有重要意义.