细粒棘球蚴铁蛋白基因的克隆重组高效表达及免疫学初步研究

目的构建细粒棘球蚴(Echinococcus granulosus Eg)铁蛋白(ferritin)基因的原核表达重组质粒并表达、纯化该重组蛋白,初步研究其免疫反应。方法将细粒棘球蚴铁蛋白基因亚克隆于表达载体pGEX-6p-1,转化重组体到大肠杆菌Bl21中,在异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导下表达;用SDS-PAGE和Western-blot对表达产物进行初步鉴定,用切胶纯化的融合蛋白免疫BALB/c小鼠,通过Western-blot对该蛋白的免疫学特性进行初步研究。结果重组铁蛋白与GST以融合表达的形式在细菌中高效表达,表达产物为不可溶性的包涵体,蛋白分子量约为42 kD。融合蛋白Egferritin/GST能被细粒棘球蚴免疫的家兔血清和特异性小鼠抗血清所识别,同时特异性小鼠抗血清可识别天然抗原囊液、原头蚴可溶性蛋白中约19 kD的蛋白条带。结论成功地表达细粒棘球蚴重组铁蛋白,并且该蛋白有一定的免疫原性及抗原性。

红外实时测沙仪研制及其应用

环形水槽是研究细颗粒泥沙的理想装置,但测沙技术的相对滞后极大地制约了环形水槽的使用。为改进环形水槽的传统测沙技术,自主研发完全开放式的实时在线测沙仪器,力求在水槽中实验水样的自然流态下实时测量垂线悬浮泥沙含量。采用光源调制技术,结合特殊的光路设计,将含沙量转换为现代实验技术易于处理的电信号。并针对环形水槽的特殊工作方式,设计数据采集和无线传输接口,送入计算机进行数据后处理及综合分析,实现了含沙量的在线实时量测。实测实验表明数据线性度高,重复性好,有较大的实用价值和创新意义。

细粒棘球蚴重组抗原rEgferritin诱导宿主抗感染免疫应答的初步研究

目的初步探讨细粒棘球蚴重组铁蛋白rEgferritin免疫小鼠产生的抗细粒棘球蚴感染的免疫机制。方法 rEg-ferritin免疫ICR小鼠3次、同时设立佐剂组和对照组,第12w用细粒棘球蚴原头蚴对3组小鼠进行攻击感染,5个月后剖杀小鼠,检查各组小鼠腹腔内包囊个数,根据公式计算保护力。分别于0w,12w,32w取血,制备血清,同时取脾,制备淋巴细胞悬液。通过ELISA检测血清中的IgG及其抗体亚型、IgE及MTT;通过流式细胞仪检测脾淋巴细胞中CD4+及CD8+亚群百分比。结果 rEgferritin组小鼠血清中的IgG,IgG2a,IgG2b持续增高,与佐剂组相比具有显著性差异(P<0.01);3组IgG3无差异。rEgferritin组免疫小鼠可诱导小鼠产生85.6%的保护力抵御细粒棘球蚴原头蚴的再次感染,与对照组相比具有显著性差异(P<0.01);rEgferritin组和佐剂组CD4+T细胞和CD8+T细胞均增加,rEgferritin组CD4+T细胞增加更为明显,与佐剂组相比有显著性差异(P<0.01)。rEgferritin组脾细胞在受到rEgferritin抗原和天然抗原刺激后,细胞增殖明显。结论细粒棘球蚴重组抗原rEgferritin通过诱导宿主产生体液免疫级细胞免疫应答的方式抵御细粒棘球蚴感染的,说明rEgferritin是具有研究价值和潜力的包虫病候选疫苗分子。

基于改进粒子群算法的模糊神经网络变压器油色谱监测故障诊断策略

针对标准误差反向传播(back propagation,BP)神经网络算法易陷入局部最优、收敛速度缓慢等问题,提出一种基于改进粒子群算法的模糊神经的变压器油色谱故障诊断方法。该方法首先通过模糊编码边界对网络输入模糊化;再结合非线性策略的惯性权重及学习因子改进的粒子群BP网络算法来诊断变压器故障类型,既能平衡全局搜索和局部搜索能力,还可以避免BP神经网络陷入局部最优;最后,采用MATLAB软件对变压器油色谱数据进行仿真,结果表明该方法具有收敛速度快、诊断准确率高、泛化能力强等优点。

情景引导教学在医学遗传学中的应用

医学遗传学是联系基础医学与临床医学的桥梁学科,具有一定深奥性及前沿性。为了提高教学效果,宁夏医科大学医学遗传学与细胞生物学系教师采用情景引导教学方法,从教学设计、引导问题及达到的效果几个方面详细分享了5个教学实例,并对情景引导法进行教学的过程中可能存在的问题及解决办法也进行了说明,以期为情景引导法更好地应用到教学过程中奠定基础。

细粒棘球蚴中国大陆株铁蛋白基因分子克隆和序列分析

目的获得细粒棘球蚴(E.granulosus)铁蛋白(ferritin)基因序列,进行序列分析。方法从包虫病患者体内获取细粒棘球蚴原头蚴提取总RNA,根据国外细粒棘球蚴铁蛋白基因的已知序列设计一对引物,采用RT-PCR技术扩增出细粒棘球蚴中国大陆株铁蛋白基因,待PCR产物纯化后,将其克隆到pGEM-T载体,进行序列测定和分析。结果用RT-PCR成功扩增出细粒棘球蚴中国大陆株铁蛋白基因,测序表明该基因为562bp。同源性比较结果表明:该基因序列与已发表基因核苷酸序列相比,390bp同源性约为97.7%,推导编码氨基酸序列同源性为97.7%,此基因序列在435bp出现终止密码。结论测序的铁蛋白基因序列有完整的编码框,为进一步研究其结构和功能,以及对包虫病的免疫预防具有重要意义。

Eg.ferritin抗血清介导的体外杀伤细粒棘绦虫原头节作用的观察

目的体外观察细粒棘球绦虫重组铁蛋白(Eg.ferritin)抗血清对细粒棘球蚴原头节(PSC)的杀伤作用。方法用纯化的Eg.ferritin免疫新西兰家兔制备抗血清,以不同浓度的抗血清与细粒棘球绦虫原头蚴体外共培养,光镜观察培养不同时间点细粒棘球原头节的变化,透射电子显微镜观察原头节超微结构的改变。结果抗血清组的原头蚴的死亡率及破坏程度与抗血清的浓度呈正相关,与对照组相比,抗血清对原头节有杀伤作用(P<0.01)。在20%抗血清组中,原头节内部被大量空泡及髓样结构代替或无结构。结论细粒棘球蚴重组铁蛋白抗体对细粒棘球绦虫有明显的杀伤作用。

细粒棘球绦虫Eg10诱导树突状细胞产生Th2免疫反应

目的研究细粒棘球绦虫蛋白10(antigen 10 of Echinococcus granulosus Eg10)对小鼠感染细粒棘球绦虫免疫机制的影响。方法通过体外培养骨髓来源的小鼠树突状细胞(Bone marrow dendritic cell,BMDC),用不同的抗原包囊囊液(hydatid fluid HF)、Eg10、脂多糖(lipopolysaccharide LPS)单独或联合作用DC,共6组。通过扫描电镜和透射电镜观察各组DC形态学的变化;通过流式细胞仪检测DC的吞噬能力、迁移能力的变化、刺激T细胞增殖能力的变化及DC表面分子的表达情况;利用ELISA检测DC分泌各种细胞因子的变化。结果Eg10抑制DC向成熟状态发展,与囊液对照组相比,DC表面仅增多了褶皱,两者均可提高DC吞噬能力;刺激T细胞的增殖能力很弱,但是能够提高Treg细胞的含量;同时发现Eg10组DC表面分子MHCII和CD86的表达量高于空白组,分泌高含量的IL-10,IL-6。通过给予LPS联合刺激DC形态趋于半成熟状态,细胞表面树突增加,表面分子MHCII、CD80、CD40的表达增高,CD86的表达量降低;IL-10和IL-6的含量也相应的下降。结论Eg10诱导DC产生Th2反应。

肝包虫病患者血清中微量元素的观察

目的观察肝包虫病患者体内血清中微量元素的变化,探讨微量元素与肝包虫病的发生是否具有相关性,能否通过补充微量元素对疾病的防治和预后有作用。方法取患者和正常人各30份血样,离心后,分离血清,用电感耦合等离子体发射光谱对样本的Ca、Se、Zn、Fe和Cu进行检测。结果病人组血清中的Ca、Se、Zn、Fe均低于正常对照组(P<0.05),Cu的含量无明显变化(P>0.05),Zn/Cu比明显低于对照组(P<0.05)。结论细粒棘球蚴感染能引起人体血清中微量元素发生变化。

输电线路覆冰关键影响因素分析

输电线路覆冰严重威胁着电力系统的安全运行,开展输电线路覆冰机理的研究对于提高覆冰区线路运行的可靠性具有重要意义。为此,首次提出了覆冰影响深度分析法,定义了公式和分析步骤,利用该方法分析了贵州电网220kV铜黎线现场覆冰的监测数据,确定了线路覆冰与微气象条件(环境温度、环境湿度、环境风速)和导线温度等因素之间的关系,并与灰关联分析法进行了对比研究。结果表明:覆冰最关键的影响因素为风速,其次为导线温度和环境温度,影响最小的为环境湿度。

Nocardia sp.腈水合酶的纯化过程研究

对Nocardia sp.高活力腈水合酶进行了纯化研究.在细胞破碎中,超声时间对腈水合酶比酶活存在一个最优值,超声时间为20.00min时得到的比酶活最高.在离子交换层析过程中,采用DEAE-Sepharose作为层析介质,分别对平衡缓冲液pH、离子强度和线性梯度洗脱体积进行了优化.结果表明,采用pH7.20、50mmo1·L-1的Na2HPO4-NaH2PO4溶液作为平衡缓冲液,0.00～1.00mo1·L-1的NaCI线性梯度洗脱,洗脱体积为20～25倍柱体积,此条件下腈水合酶的纯化倍数和酶活收率较佳.以Phenyl-Sepharose FF为层析介质研究了疏水层析精制腈水合酶的工艺过程,采用两步层析优化方法纯化出的Nocardia sp.腈水合酶比酶活达到2648.0 U·mg-1,酶活收率为40.84%,用SDS-PAGE检测其纯度为99 00%以上.Nocardia sp.腈水合酶的两个亚基分子量分别为22.90 kDa和27 38 kDa.

Nocardia sp.RS合成腈水合酶过程及其高酶活的表达工艺

对Nocardia sp. RS合成腈水合酶的过程进行了分析,研究了菌体生长和酶活表达的相互关系、pH调控和葡萄糖消耗对产酶速率的影响. 根据腈水合酶在发酵过程中的生成特性,设计开发了葡萄糖-Co2+耦合补加工艺优化产酶过程,通过对产酶过程的优化,大大提高了腈水合酶的发酵水平,酶活达到了10195 U/ml,比优化前提高了43.2倍.

鼓风机在不同工艺单元中的选型与应用

通过对北京市各污水处理厂升级改造及再生水厂工程不同工艺单元中鼓风机的应用进行对比,分析出不同类型鼓风机的性能特点;通过总结目前北京市各污水处理厂升级改造及再生水厂工程中鼓风机的选型情况,分析出齿轮传动单级离心鼓风机、磁悬浮单级离心鼓风机、罗茨鼓风机、多级离心鼓风机在目前升级改造及再生水厂项目中不同处理工艺单元中的适用工况,对污水处理厂及再生水厂鼓风机选型及运行效果起到了积极的作用,有利于污水处理厂及再生水厂的节能减排。

FSHβ基因外显子2的多态性及其与两个山羊品种繁殖性能的相关性研究

【目的】寻找与产羔数相关的遗传标记,为山羊高繁殖力标记辅助选择提供依据。【方法】根据绵羊FSHβ基因序列设计2对引物,采用PCR-SSCP技术检测山羊FSHβ基因外显子2的多态性,利用最小二乘均数法对其与产羔数的关系进行分析,同时对多态位点的遗传方差进行分析,通过标记位点与产羔性状的遗传相关预测选择反应。【结果】在引物(P2)扩增片段中检测到1个多态位点,出现3种基因型(EE、EF和FF)。对于西农萨能奶山羊,在1～4胎和平均产羔数中,EE型个体产羔数显著高于EF和FF型个体(P<0.05),EF型个体的第2胎和平均产羔数显著高于FF型个体(P<0.05);对于波尔山羊,在2～3胎和平均产羔数中,EE型个体产羔数极显著高于EF和FF型个体(P<0.01),EF型个体平均产羔数显著高于FF型个体(P<0.05)。在西农萨能奶山羊和波尔山羊两个群体中,产羔性状的遗传主要受基因加性效应的影响。【结论】对于西农萨能奶山羊和波尔山羊,多态位点EE基因型可作为产羔性状上的标记基因型。

波流环境中射流的大涡数值模拟

采用大涡模拟方法(LES)对波流环境中的垂向圆管射流进行了数值模拟。出口边界采用人工海绵层加零梯度条件以减小数值反射,且保证自由出流;入口边界分别采用线性叠加和非线性叠加的波流边界条件,通过与物理实验数据对比发现,采用非线性叠加的边界条件时模拟精度更高。数模结果表明,在波浪和水流共同作用下,射流体上部出现了较为明显的"水团"现象,射流平均速度矢量较纯流环境中更靠近底床,这与前期实验观察的结果一致。

细粒棘球蚴Eg10基因的克隆、表达及免疫特性研究

目的克隆、表达细粒棘球蚴分离株Eg10基因,并研究其重组蛋白的免疫特性。方法将细粒棘球蚴Eg10基因亚克隆于表达载体pET28a,转化重组质粒至大肠埃希菌BL21进行融合表达,His-bind树脂纯化系统纯化重组融合蛋白,以之作为抗原免疫小鼠。48只ICR小鼠随机均分为4组,A、B组为对照组,分别注射不含抗原的磷酸盐缓冲液(PBS)和福氏佐剂+PBS,每鼠皮下注射100μl。C、D组为免疫组,注射用福氏佐剂乳化的重组抗原Eg10,抗原量分别为0.1mg/μl和0.5mg/μl,每鼠皮下注射100μl。各组小鼠每隔2周免疫1次,共免疫3次。于免疫前和免疫后2、4、6、8和10周采血以获得抗血清。通过蛋白质印迹(Westernblotting)分析和ELISA检测重组抗原的免疫学特性。结果成功构建含目的片段Eg10的基因工程菌株。Westernblotting分析结果表明,免疫血清能识别重组抗原Eg10。ELISA检测结果显示,用重组蛋白免疫小鼠可诱导产生特异性抗体。统计学分析表明,免疫后C、D组抗体水平逐渐升高,至第8周抗体滴度达最高值,分别为(1.143±0.253)和(1.254±0.070);A、B组抗体一直维持在较低水平。第2、4、6、8和10周,A、B与C、D组间抗体水平差异有统计学意义(均P<0.05),C、D组间差异无统计学意义(P>0.05)。结论成功表达细粒棘球蚴重组蛋白Eg10,该蛋白有一定的免疫原性。

细粒棘球绦虫(中国大陆株)诊断抗原P-29基因的表达、纯化及免疫原性初步分析

目的对细粒棘球绦虫(Echinococcus granulosus,Eg)诊断抗原P-29(diagnostic antigen P-29)重组质粒进行原核表达、纯化,并初步分析重组蛋白的免疫原性。方法从重组质粒EgP-29/pGEM-T中获取诊断抗原P-29基因,亚克隆于表达载体pET-28a构建基因工程菌株,并表达、纯化重组蛋白,经Western-blot、ELISA分析重组蛋白的免疫原性。结果成功构建原核重组表达载体EgP-29/pET-28a/BL21(DE3)plysS,并纯化出浓度较高的重组蛋白。ELISA检测显示,用表达、纯化的重组蛋白免疫小鼠,诱导产生了特异性抗体IgG,Western-blotting鉴定该抗体能识别重组抗原及天然抗原原头蚴。结论重组蛋白具有良好的免疫原性。

北京市海淀区幼儿园3～6岁儿童血压及相关因素调查

【目的】 为了掌握北京市海淀区幼儿园 3～ 6岁儿童血压的现状以及影响血压的相关因素 ,对血压偏高的儿童早期实施有效的干预措施提供依据。 【方法】 对 10所幼儿园中的 2 0 73名 3～ 6岁儿童进行相关情况的问卷调查和血压的测量并进行有关的特殊检查 ,用Logistc回归模型进行统计分析。 【结果】 血压偏高率为 5 .7% ;高血压发生率 2 .5 % ,体重超重、性格内向、家族遗传、居住环境的拥挤等为主要的影响因素。男女性别间差异显著。 【结论】 加强卫生保健知识的宣传教育 ,改变不良的生活习惯 ,采取措施有效控制体重 ,减少肥胖儿的发生 。

细粒棘球绦虫(中国大陆株)亲肌肉抗原重组蛋白的免疫保护性研究

目的探讨细粒棘球蚴(Echinococcus granulosus,Eg)亲肌肉抗原重组蛋白的免疫保护性及其作为候选疫苗的潜在价值。方法ICR小鼠随机分为蛋白免疫组和佐剂对照组,每隔2w皮下免疫1次,在第3次免疫后2周,用Eg原头蚴进行攻击感染,感染后20w剖杀小鼠,检获棘球蚴包囊,计算免疫保护力,并用ELISA法测定血清中IgG及其亚型和IgE水平。结果与佐剂对照组比较,蛋白免疫组小鼠的免疫保护力为94.46%;与免疫前比较,免疫后和攻击感染后蛋白免疫组小鼠血清IgG、IgG1、IgG3和IgE水平均明显升高(P<0.05),IgG2b降低(P<0.05)。结论细粒棘球绦虫亲肌肉抗原重组蛋白能诱导小鼠产生一定的保护性免疫,是潜在的疫苗候选抗原分子。

细粒棘球绦虫(中国大陆株)谷胱甘肽s-转移酶重组蛋白(rEgGST)的免疫保护性研究

目的应用细粒棘球蚴(Echinococcus granulosus,Eg)诊断抗原GST重组蛋白进行动物免疫,探讨GST免疫保护性及其作为候选疫苗的潜在价值。方法 ICR小鼠随机分为蛋白免疫组和对照组,每隔2周皮下免疫1次,在第3次免疫后4周,用Eg原头蚴进行攻击感染,感染后20周剖杀小鼠,检获棘球蚴包囊,计算免疫保护力,并用ELISA法测定血清中IgG及其亚型和IgE水平。结果与佐剂对照组比较,蛋白免疫组小鼠的免疫保护力为89.39%;与免疫前比较,免疫后和攻击感染后蛋白免疫组小鼠血清IgG及其亚型和IgE均有不同成程度的升高(P<0.05)。结论 rEgGST能诱导小鼠产生部分免疫保护力,表明rEgGST是具有发展前途的抗包虫病候选疫苗。