抗虫转基因欧美杨的培育

以携带３５Ｓ－Ω－Ｂ．ｔ－Ｎｏｓ嵌合基因的双元载体农杆菌ｐＢ４８．２１４和ｐＢ４８２．１５（Ｂ．ｔ基因片断长度分别为２．１ｋｂ和１．８ｋｂ），转化欧美杨叶片和茎段外植体，共获得２２５株转化再生植株。以舞毒蛾（ＬｙｍａｎｔｒｉａｄｉｓｐａｒＬｉｎｎａｅｕｓ）幼虫进行生物测定后，获得杀虫率分别为５５—８０％的抗虫转基因植株共３株（Ｒ－１３５，Ｒ－１２３和Ｒ－１４０），经组培苗和苗圃移栽植株的ＰＣＲ分析，苗圃移栽植株ＰＣＲ产物杂交和Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ分析表明，Ｂ．ｔ毒蛋白基因已整合到上述抗虫植株的细胞ＤＮＡ中，并表达出杀虫活性。

欧美杨转基因植株的PCR检测

欧美杨转基因植株的ＰＣＲ检测王学聘，卞祖娴，张香华，卢孟柱（中国林业科学研究院林业研究所北京１０００９１）关键词欧美杨，转基因植株，聚合酶，链式反应聚合酶链式反应（ＰｏｌｙｎａｅｎｓｅＣｈａｉｎＲｅａｃｔｉｏｎＰＣＲ）是近几年发展起来的操作简便、结果...

我国西北干旱地区森林土壤中苏云金芽孢杆菌生态分布

对地处我国西北干旱地区新疆、甘肃、宁夏三省（区）内的１１ 个自然保护区——哈纳斯、小叶白蜡、天山云杉、野核桃、塔里木、东大山、贺兰山、六盘山、崆洞山、兴隆山、莲花山等自然保护区采集的２６０ 个森林土壤样品，进行了生态因子调查；分析了土壤ｐＨ、含水量、水解Ｎ、有效Ｐ、速效Ｋ、全Ｎ、有机质；研究了芽孢杆菌、苏云金芽孢杆菌数量和种类生态分布。共分离苏云金芽孢杆菌４２株，其出土率和分离率分别为１１．５３％ 和２．１８％ 。

外生菌根真菌——厚环乳牛肝菌发酵条件的研究

本文对外生菌根真菌——厚环乳牛肝菌(Suillus grevillei(Kl.)Sing.)8001菌株的发酵条件进行了研究。其中培养基初始pH以4.5～5.6为宜,装液量选为150ml/50ml三角瓶,该菌株不需要特殊的碳源和氮源。14L发酵罐液体深层发酵结果表明,8001菌株具有发酵周期短、生长迅速、易于工业化生产等特点。本研究为外生菌根菌剂的大规模工业化生产提供了理论依据。

苏云金杆菌发酵条件的研究——Ⅱ.83002菌株在14L发酵罐发酵条件与制剂生产

以苏云金杆菌83002菌株在14L发酵罐条件下研究表明:培养温度和搅拌速度对菌数表现出一定的相关性,但对培养基pH变化规律影响不大;培养基灭菌前的初始pH值高低对发酵过程中pH变化规律有一定影响,培养温度、搅拌速度、培养基灭菌前pH值高低对发酵过程中培养基C、N变化的规律均表现出一定影响。上述结果,为苏云金杆菌发酵条件参数提供了依据,确立了各种剂型的制备工艺。

表达苏云金杆菌δ－内毒素蛋白基因大肠杆菌对四种林业害虫作用的生物测定

四株表达苏云金杆菌δ－内毒素蛋白基因的大肠杆菌对林业主要害虫杨扇舟蛾Ｃｌｏｓｔｅｒａａｎａｃｈｏｒｅｔａ（Ｆａｂｒｉｃｉｕｓ），马尾松毛虫Ｄｅｎｄｒｏｌｉｍｕｓｐｕｎｃｔａｔｕｓ（Ｗａｌｋｅｒ），舞毒蛾Ｌｙｍａｎｔｒｉａｄｉｓｐａｒ（Ｌｉｎｎａｅｕｓ），杨尺蠖Ａｐｏｃｈｅｉｍａｃｉｎｅｒａｒｉｕｓ（Ｅｒｓｃｈｏｆｆ）幼虫作用进行了室内生物测定，结果表明：该四株菌对上述四种昆虫幼虫均表现出较高的杀虫活性，而且能显著抑制昆虫幼虫的生长发育。

用黄酒滤渣生产苏云金杆菌的研究

研究表明,利用生产黄酒的滤渣代替苏云金杆菌制剂生产中的部份原料,如酵母粉、淀粉等,取得了较好效果。用黄酒滤渣配方生产的苏云金杆菌,杀虫活性不低于原生产配方,并且生产成本降低30%以上。

抗虫转基因欧洲黑杨的培育

用带有３５Ｓ－Ω－Ｂｔ－ＮＯＳ嵌合基历的双元载体的农杆菌ＬＢＡ４４０４转化欧洲黑杨的叶片外植体，共独行５４株转化再生植株，用这些再生植物对杨尺蠖进行毒力测定，昆虫校正死亡率在８０－９６％的再生植株占总测定植株的１５％。部分再生植株对舞毒娥进行测定，表明在５－９天内校正死亡率高达１００％，存活昆虫的生长和发育也明显地受到抑制。根据苗木在苗圃中高生长的昆虫校正死亡率采用重心聚类法进行分析。

抗光肩星天牛苏云金芽胞杆菌Bt886菌株的分离及对毒蛋白编码基因的初步鉴定

从拟谷盗虫尸中分离到一株对鞘翅目害虫光肩星天牛幼虫毒杀作用明显的Bt菌株Bt886。幼虫死亡率高达 6 0 % ,存活者生长明显受到抑制。经过晶体形态特征和杀虫谱分析 ,初步确认该菌株属于cry3类。比较cry3类基因的保守序列 ,利用一对cry3特异引物成功地从Bt886菌株中克隆到了一段基因片段并克隆至pGEM -T载体上。测序分析发现该片段与cry3Aa1基因具有很高的同源性 ,确定来自毒蛋白编码基因。Southern杂交分析表明该基因位于该菌株的质粒上。

我国森林土壤中苏云金芽孢杆菌生态分布的研究

从我国8个森林立地带(寒温带、中温带、暖温带、北亚热带、中亚热带、南亚热带、高原亚热带、热带)所属的13个自然保护区,采集了0—5cm土层林下土壤样品384个.测定了土壤pH、水分和养分.从中分离观察芽孢杆菌菌落1873个,分离出苏云金芽孢杆菌79株,并对其所属亚种进行了初步鉴定.其平均出土率和分离率分别为14.32%和4.21%.研究了芽孢杆菌和苏云金芽孢杆菌在森林土壤中生态分布的规律及苏云金芽孢杆菌对6种昆虫的室内毒力测定,从中筛选出不少的高效菌株.为研究苏云金芽孢杆菌在我国森林生态系中资源的保护、开发和利用,具有重要意义.

我国四个自然保护区森林土壤中苏云金芽孢杆菌的分布

从我国四个不同立地带——长白山、百花山、鼎湖山、尖峰岭自然保护区,采集到林下0～5cm土层土壤样品75个,分离到苏云金芽孢杆菌39株。其中芽孢杆菌的总数量和苏云金芽孢杆菌的出土率和分离率有所差异,pH偏中性和含水量稍高的土壤,菌数较高;而与所测的各种土壤养分无明显相关。对39株苏云金芽孢杆菌的鉴定:17株属库尔斯塔亚种,6株属松蠋亚种,16株未定名。毒力测定表明:对杨扇舟蛾和马尾松毛虫幼虫的致死率在50％以上的菌株约占70％;对榆蓝叶甲和黄粉甲幼虫均无明显杀虫活性。

优良外生菌根真菌的筛选及其菌剂的制备

对21株外生菌根菌依次有选择地进行了生长能力,拮抗作用,生态适应性,激素分泌等系列筛选实验。所筛选出的 Suillus grevillei(K1.)Sing.能在3种类型的培养基上迅速生长对 Rhizoctonia solani Kühn 有较强的拮抗作用,对各种生态条件有较好的耐受能力,离体培养能产生乙烯和玉米素。实验表明,液体深层发酵技术制备的S.grevillei 固体菌剂,对油松幼苗生长有很好的促进作用,从而验证了本文所提出的筛选程序与准则。

中国八个自然保护区森林土壤中苏云金芽孢杆菌的分布

从大兴安岭根河潮查、带岭、千佛山、崂山、黄山、紫金山、武夷山和西双版纳八个自然保护区采集到０—５ｃｍ土层林下土壤样品１２９个，从中分离出大量的苏云金芽孢杆菌。研究表明：不同立地带森林土壤中芽孢杆菌的总数量、苏云金芽孢杆菌的出土率及占所分离芽孢杆菌的分离率间具有一定的差异，但它们与土壤含水量、ｐＨ、单一养分间无明显的相关性。我们还对所分离的苏云金芽孢杆菌所属亚种进行了初步鉴定，对六种有害昆虫进行了毒力测定。

三株不同形状伴孢晶体的苏芸金杆菌对几种害虫的毒力测定

我们从落叶松毛虫(Dendrolimus sibiricus)、印度谷斑螟(Pyralis farinali)幼虫和森林土壤中分离到产生不同形状伴孢晶体的苏芸金杆菌(Bacillus thuringiensis),对三株菌进行了形态特征的电子显微镜观察、生理生化特性的测定及营养细胞的酯酶型分析,并对几种昆虫进行了室内生物测定,表现出不同的毒力。

苏云金芽孢杆菌七个亚种酌DNA的G+C克分子百分数的测定

苏云金芽孢杆菌在害虫的生物防治以及植物抗虫育种中的作用日益扩大。该类细菌资源的开发和利用越来越被重视,而正确的分类鉴定方法是进行该项研究的基础。目前苏云金芽孢杆菌的分类鉴定是根据形态特征、生理生化特性、鞭毛抗原(H)的血清型以及营养细胞的酯酶型等,将其分为31个亚种。随着分子生物学和遗传学的高速发展,

高毒力苏云金杆菌株的筛选

为选育对目的害虫毒力高,生产性能稳定的菌株,收集了101个苏云金杆菌株,经初选、复筛和营养细胞酯酶分析,从中选出82038(galleriae 酯酶型)、83002(dendrolimus 酯酶型)、83016(galleriae 酯酶型)3株优良菌株。用3菌株与生产菌株7216—13对舞毒蛾、杨尺蠖、柳毒蛾和杨扇舟蛾进行毒力测定表明,除对杨扇舟蛾毒力较低外,对其它几种害虫均有80%以上的杀虫效果。

菌根真菌鉴定的血清学技术

使用形态学技术进行菌根真菌的鉴定,具有一定的局限性,近几年来,由于分析技术的发展,帮助了这一问题的解决。这里包括血清学技术、感染解剖学技术以及凝胶电泳后的选择酶染色等。 血清学技术依赖于动物体内产生的一种高特异性抗体。

苏云金芽孢杆菌的细胞接合——质粒和染色体转移

关于通过细胞接合使苏云金芽抱杆菌的一些质粒进行转移的现象,首先是Gonzalez 等报道的,他们曾发现了一个高频率的质粒转移,特别是含有50 MDa 前毒素基因的质粒可以从苏云金芽孢杆菌Kurstaki 亚种HD73转移到腊状芽孢杆菌(形成品体的HD73的衍生物)或苏云金芽孢杆菌thuringiensis 亚种HD200同时也发现了从Kurstaki 亚种菌株(HD263—1)

构建人才培养立交桥的探索——中高职衔接的实践与思考

中高职衔接,可以满足文化基础中低层次学生求学及高起点就业的需要。中高职衔接既有教育理论支撑,又有国家政策支持,既能满足学生及家长的需要,又有社会需求空间;既符合中高职学校发展的需要,也为多层次培养人才提供教育保障。各地区各学校应根据实际情况,走好中高职衔接之路。

苏云金芽孢杆菌制剂与化学药剂混合使用的初步研究

本研究进行了五种化学药剂对苏云金芽孢杆菌库尔斯达克亚种(Bacillus thuringiensis Subsp Kurstaki)的抑菌实验。阐明了细菌杀虫剂与化学药剂混合使用中应该注意的问题和研究方法,为稳定细菌杀虫剂的生产和应用提供了依据。