四株高产磷脂酶C新菌株的鉴定和分类

在前面研究高产磷脂酶C(PLC)菌株筛选及其抗血小板功能的基础上 ,对新筛选的四株高产PLC的75 4 1、779、970和 110 7菌株进行了鉴定和分类。通过形态特征、培养特征、生理生化特征以及 16SrRNA序列测定及其同源性分析 ,证实 75 4 1菌株与Bacilluscereus基本一致 ,因此将 75 4 1菌株分类属于蜡状芽孢杆菌 ,命名为蜡状芽孢杆菌深圳株 75 4 1,B cereusshenzhen 75 4 1strain。而 779、970和 110 7三株菌则与Bacillusmycoides基本一致 ,因而将这三株菌分类属于蕈状芽孢杆菌 ,分别命名为蕈状芽孢杆菌深圳株 779,B mycoidesshenzhen 779strain ,蕈状芽孢杆菌深圳株 970 ,B mycoidesshenzhen 970strain ,和蕈状芽孢杆菌深圳株 110 7,B mycoidesshenzhen 110 7strain。这将为进一步利用这些菌株及其PLC打下坚实的基础。

高产磷酯酶C菌株筛选及其抗血小板功能的研究

在湖北省、湖南省、江苏省、山东省、广东省 15 6个点采土样 12 6 8份 ,利用卵黄琼脂的LB培养基初筛获得产生乳白色晕圈的菌株 6 48株 ;再用卵黄琼脂滤纸圆片检测获得产生乳白色晕圈和透明圈菌株 2 6 6株 ;这些菌株用卵黄琼脂杯蝶法筛选出产生大于 13 0mm乳白色晕圈及少量透明圈共 73株 ,经过菌生物量、卵黄杯碟法和抗兔血小板聚集率的测定 ,从 73株菌中筛选出 15株 ,菌号为 :183,198,2 47,42 4,5 87,5 96 ,6 92 ,744 ,75 4 1,791 2 ,779,970 ,998,110 7,1182 ;将此 15菌株经菌生物量、卵黄琼脂杯碟法、NPPC法和抗人血小板聚集率的测定 ,从中选出 75 4 1,779,970 ,110 7四株菌进行分类鉴定和已知菌CW W 90 3菌对照比较的研究。

酿造虾头虾壳功能性调味料用高产菌株选育研究

小龙虾加工或食用后余留下来的虾头虾壳中含有丰富的蛋白质、不饱和脂肪酸、磷脂、虾青素、甲壳素、矿物质等多种营养性和功能性有效成分,可用来酿制一种功能性增鲜调味料。文章采用紫外线和硫酸二乙酯对酿造用菌种米曲霉进行了多轮诱变选育,获得了一株突变菌株UD-7,其产蛋白酶活的水平达到11059 U/g(干曲),比出发菌株(3436 U/g)提高了222%。经过7次传代培养,表明该突变菌株具有较好的遗传稳定性。

磷脂酶C对ADP诱导的兔、人血小板肌动蛋白聚合的抑制作用

目的 测定磷脂酶C(PLC)对ADP诱导的兔、人血小板肌动蛋白聚合的的影响 ,从而进一步阐明PLC抗血小板聚集作用的机制。方法 取家兔和健康成人的PRP分别用生理盐水、ASA和不同剂量的PLC处理 ,以ADP诱导激活 ,采用Triton抽提液提取和SDS PAGE分离出肌动蛋白 ,再以分光光度法分别测定其肌动蛋白相对含量。结果 家兔血小板经生理盐水处理后的肌动蛋白相对含量为 1 6 82±0 319。而经生理盐水、ASA 6 6 8μmol·L-1、PLC 5、10、15、2 0和 2 5U·ml-1各组处理 ,并以ADP激活的血小板 ,测得的肌动蛋白相对含量分别为 2 4 5 0± 0 5 6 2 ,1 0 89± 0 32 2 ,1 72 7± 0 4 4 2 ,1 4 5 0± 0 32 4 ,1 16 1± 0 30 6 ,0 85 7± 0 2 4 2和0 6 92± 0 187。以生理盐水组作为对照 ,各处理组血小板肌动蛋白聚合的抑制率I(% )分别为 5 5 5 5 ,2 9 5 1,4 0 82 ,5 2 6 1,6 5 0 2 ,71 76。人血小板经生理盐水处理后的肌动蛋白相对含量为 1 35 8± 0 376。而经生理盐水、ASA 6 6 8μmol·L-1、PLC 5、10、15、2 0和 2 5U·ml-1各组处理并以ADP激活后的血小板 ,测得的肌动蛋白相对含量分别为2 4 4 5± 0 75 0 ,1 0 96± 0 344 ,1 70 5± 0 5 0 7,1 4 37±0 4 16 ,1 16 5± 0 35 5 ,0 84 5± 0 2 5 7?

Bacillus Mycoides磷脂酶C部分特性研究

对一种纯化自Bacillus mycoides970发酵上清液的磷脂酶C的部分特性进行了研究。SDS-PAGE检测表明该纯化磷脂酶C由一条多肽链组成,分子量为75.1 kDa。热稳定性实验表明该纯化磷脂酶C对温度敏感,具有热不稳定性。金属离子依赖性检测表明该纯化磷脂酶C属于金属磷脂酶C家族,Ca2+、Mg2+、Zn2+和Ba2+对该磷脂酶C催化活性的发挥必不可少。血平板及卵黄平板检测表明该磷脂酶C没有溶血活性和卵磷脂酶活性。

蚕蛹功能酱油酿制研究(Ⅰ)——生产菌株的诱变选育

文中研究利用UV、DES及Co60 -γ对栖土曲霉进行多因子复合诱变处理 ,在以蚕蛹为主要原料的固体培养基上进行培养 ,选育出了一株生长繁殖速度快、孢子丰富且蛋白酶活高的变异菌株DC -7。其蛋白酶活达 86 2 8 9u/g (干曲 ) ,较出发菌株AS 3 374酶活 40 12 3u/g (干曲 )提高了 115 %。此外 ,其遗传稳定性也较好。

PLC对ADP诱导的兔血小板cAMP的影响

目的 测定磷酯酶C(phospholipaseC,简称PLC,下同)对ADP诱导的兔血小板cAMP的影响,从而进一步阐明PLC抗血小板聚集作用的机制。方法 取家兔的PRP,除去红细胞,分别用生理盐水、ASA和不同剂量的PLC处理,以ADP诱导激活,采用三氯醋酸法制备血小板cAMP,再用放射免疫分析法分别测定cAMP含量。结果 家兔血小板经生理盐水处理后的cAMP含量为 ( 20 16±0 91 ) pmol/109platelets,而经生理盐水、ASA668μmol·L-1、5、10、15、20和25UPLC·ml-1各组处理,并以ADP激活的血小板,测得的cAMP含量分别为 13 85±1 14, 16 27±0 36, 18 74±0 55,19 80±0 52, 20 49±0 43, 22 55±0 61和 24 24±0 85(pmol/109 platelets)。以生理盐水作为对照,ASA668μmol·L-1、5、10、15、20和 25UPLC·ml-1剂量组对激活状态下血小板cAMP的含量有增加的作用,增加率 (% )分别为17 47, 35 31, 42 96, 47 94, 62 82, 75 02。结论 PLC使得ADP激活后的兔血小板cAMP水平提高(P<0 01),且呈剂量依赖性,表明PLC具有提高血小板中cAMP水平的作用。这可能是PLC抗血小板聚集作用的重要原因之一。

蚕蛹功能酱油酿制(Ⅱ)——蚕蛹脱臭效果研究

采用毛细管气相色谱仪对蚕蛹酱油酿造过程中通风制曲阶段蚕蛹臭味物质的含量组成及脱臭效果进行了初步的研究。结果表明: 蚕蛹中臭味成分以正丁胺为主,约占 60%;制曲质量差,蛋白酶活低(4 673. 2u/g干曲),则脱臭效果较差(脱臭率 33% );制曲质量好,蛋白酶活高(8 168 3u/g干曲),则脱臭效果较好(脱臭率 87% )。

Bacillus mycoides磷脂酶C纯化制备研究

通过离子交换吸附(pH7.2)、超滤、离子交换层析(pH8.5)、疏水层析及凝胶层析等多步纯化过程对Bacillusmycoides970发酵所产胞外磷脂酶C的分离纯化进行了研究。纯化倍率为40.8倍,纯化酶活收率为25%。纯化样品比活力达到15370 U/mg。样品纯度经过SDS-PAGE检测达到电泳纯。

改性魔芋葡甘聚糖及其应用研究

利用马来酸单月桂酯对魔芋葡甘聚糖进行干法改性，通过正交实验确定最佳条件为：马来酸单月桂酯：魔芋精粉＝１：５，温度５０℃，反应时间３ｈ．改性精粉的粘度及持水性有显著的提高．将改性后的精粉添加到大豆分离蛋白中进行复配，分离蛋白的溶解性、成膜性、持水性等功能特性均有明显改善．

Asp·ficuum NRRL3135植酸酶分子生物学研究

对无花果曲霉的植酸酶分子结构、氨基酸残基功能及基因工程技术与酶的生物合成、调控等进行论述，并综述了植酸酶的研究、开发与应用前景．

磷脂酶C对血小板粘附性及表面膜GpIb的影响

采用旋转玻球法测定了磷脂酶C(PLC)经十二指肠给药后对家兔血小板粘附性的影响,同时利用竞争性酶联免疫法测定了PLC对人血小板表面膜糖蛋白Ib(GpIb)分子数的影响。结果表明,PLC冻干辅料及100和200U/kg的PLC对家兔血小板粘附率无明显影响,而400～1000U/kgPLC对血小板粘附率具有明显的影响。PLC冻干辅料对人血小板表面膜GpIb分子数没有明显影响,而每mL血浆(PRP)中加入0.5,1.0和2.0U的PLC对人血小板表面GpIb分子数可产生明显影响。

β-胡萝卜素代谢调控研究

研究了酮康唑、β-紫罗兰酮、表面活性剂和正十二烷对三孢布拉氏霉(Blakeslea trispora)发酵的生物量和β-胡萝卜素产量的影响。结果表明,酮康唑的最适添加量为30 mg/L,最适添加时间为接种后40 h。β-紫罗兰酮的最适添加量为0.10%,最适添加时间为接种后36 h。表面活性剂以span-20效果最好,最适添加量为0.10%,接种前加入。正十二烷的最适添加量为1.0%,接种前加入到发酵培养基中。

磷酯酶C抗血小板功能的研究Ⅰ——对血小板聚集率和粘附率的作用

目的 通过研究PLC对家兔血小板粘附率和聚集率的作用 ,以探讨PLC对血小板功能的影响。方法 家兔麻醉后 ,经十二指肠给予阴性对照辅料 ,阳性对照ASA和 6种剂量的PLC ,于给药前及给药后 1、2、4h颈动脉取血测定以ADP、AA、Collagen为诱导剂时的血小板聚集率 ,同时用玻球法测定血小板的粘附率。结果 PLC 10 0、 2 0 0IU·kg-1对家兔血小板粘附率无明显影响。PLC 4 0 0～ 10 0 0IU·kg-1可显著地降低血小板粘附率 ,并呈现一定的剂量效应依赖关系。同一剂量PLC组给药后 1、2、4h时相比P <0 0 5。PLC10 0～ 10 0 0IU·kg-16种剂量组在用ADP、AA、Collagen诱导时 ,均可显著地抑制血小板聚集 ;与阴性对照辅料组相比P <0 0 5 ,与阳性对照组相比 ,在ADP诱导时 ,10 0IU·kg-1组的抑制较弱 (P <0 0 5 ) ,而 80 0、10 0 0IU·kg-1组的抑制较强 (P <0 0 5 ) ,并呈一定的剂量效应和时间效应关系 ;而在AA诱导时 ,PLC各组在给药后 2、4h时的抑制率与ASA的相当 ,无明显剂量效应依赖关系 ,而有一定的时间效应关系 ;在Collagen诱导时 ,PLC各组的抑制作用均弱于ASA(P<0 0 5 ) ,无明显的剂量效应依赖关系 ,而有一定的时间效应关系。结论 ①PLC经十二指肠给药 ,10 0、2 0 0IU·kg-1对家兔血小板粘附性无明显影响 ,而

磷酯酶C抗血小板功能的研究Ⅱ——对血小板释放和代谢的作用

目的 通过检测PLC对家兔血小板释放产物血栓素A2 (TXA2 )、代谢产物前列环素 (PGI2 )以及出血时间的影响 ,以探讨PLC抗血小板聚集的作用。方法 运用放射免疫方法测定以ADP、AA、collagen为诱导剂时 ,PLC对血小板TXB2 、6 Keto PGF1α生成量的影响。常规方法测定PLC对家兔出血时间 (BT)的影响。结果 6种剂量PLC均能延长出血时间 ,但在给PLC 4h时 ,BT恢复至给药前水平 (P >0 0 5)。以ADP、AA、Collagen为诱导剂时 ,6种剂量的PLC能显著降低TXB2 的生成 (P <0 .0 5) ;以AA为诱导剂时 ,PLC 10 0U·kg- 1及以collagen为诱导剂时PLC 10 0U·kg- 1和PLC 2 0 0U·kg- 1其对TXB2 的生成的抑制作用较ASA组弱 (P <0 0 5) ;以ADP为诱导剂时PLC 10 0～ 40 0U·kg- 1,以AA为诱导剂时PLC 2 0 0～ 60 0U·kg- 1和以collagen为诱导剂时PLC 40 0～ 80 0U·kg- 1其对TXB2 的生成的抑制作用与ASA组相当 (P >0 0 5) ;以ADP为诱导剂时PLC 60 0～ 10 0 0U·kg- 1、以AA为诱导剂时PLC 80 0～ 10 0 0U·kg- 1和以collagen为诱导剂时PLC10 0 0U·kg- 1其对TXB2生成的抑制作用强于ASA组 (P <0 0 5)。 6种剂量的PLC组均明显增加 6 酮 PGF1α的生成量 (P <0 0 5) ,其作用强于ASA组 (P <0 0 5) ,并存在剂量效应关系和时间效?

降解黄曲霉毒素B_1菌株的发酵条件优化及降解机制

目的:鉴定一株降解黄曲霉毒素B_1(aflatoxin B_1,AFB1)的霉菌HSK8,通过优化其发酵条件提高AFB_1降解率,并初步探索其降解机制。方法:通过形态学和内部转录间隔区(internal transcribed spacer,ITS)、18S r RNA和26S r RNA序列分析对该菌株进行鉴定,并通过单因素试验对发酵条件进行优化,采用薄层层析对AFB_1降解产物进行研究。结果:经鉴定该株霉菌为夏孢生枝孢(Cladosporium uredinicola)。其发酵条件经优化确定为:发酵温度28℃、装液量75 m L/250 m L、接种量15%、发酵时间36 h、初始p H 8.0。薄层层析观察到一个不同于AFB_1的荧光斑点。结论:发酵条件优化后,AFB_1降解率从40.68%提升到68.96%,提高了69.52%;AFB1降解产物能在365 nm波长处发出蓝色荧光。

磷酯酶C对家兔血小板聚集和超微结构的影响

目的 应用电镜研究磷酯酶C(phospholipaseC ,PLC)对家兔血小板聚集和超微结构的影响 ,以探讨用药后PLC抗血小板聚集作用的机制。方法 家兔颈动脉插管取血 ,制备PRP ,将其分为 4组 :①空白对照组 ;②生理盐水组 ;③ 0 5UPLC组 ;④ 2 5UPLC组。 2～ 4组分别用ADP诱导聚集 ,测出其聚集抑制率 ,各组分别制成超薄切片样品进行电镜观察、摄片。结果 0 5、2 5UPLC明显抑制血小板聚集反应 ,聚集抑制率分别为 86 0 3 %± 12 6%和 82 47%±5 49% ;0 5UPLC抑制血小板形成伪足 ,α颗粒和致密颗粒较多 ,OCS管腔较小 ,其超微结构较生理盐水组变化小 ;2 5UPLC处理血小板的形态结构和超微结构与空白对照组无差异 ,血小板呈圆形或椭圆形 ,边缘光滑 ,无伪足样突起 ,α颗粒、致密颗粒、OCS等正常分布于胞质中。结论 PLC明显抑制ADP诱导的血小板聚集反应及其超微结构的改变 。

响应面法优化芽孢杆菌CJPE209产角蛋白酶发酵培养基的研究

采用响应面法对芽孢杆菌(Bacillus sp.)CJPE209产角蛋白酶的发酵培养基组分进行优化。在前期单因素优化的基础上利用Plackett-Burman试验设计筛选出影响产酶的2个显著性因素:羽毛粉、蔗糖。在此基础上,采用最陡爬坡试验确定中心复合试验的中心点,然后对其他不显著因素进行最低添加量试验以降低生产成本和简化培养基组分。利用中心复合试验,得到预测最佳培养基组成为羽毛粉5.6 g/L、蔗糖13.6 g/L、尿素5.0 g/L、KH_2PO_4 0.4 g/L、MgSO_4 1.44 g/L、CaCl_2 1.1 g/L、NaCl 5.0 g/L,预测角蛋白酶酶活为501.9 U/m L。用预测最佳培养基来进行发酵验证试验,结果实际角蛋白酶酶活为503.5 U/m L,表明模型能较好的预测发酵后酶活。

复合诱变选育酸性蛋白酶高产菌株

以米曲霉M-2为出发菌株,通过紫外线-氯化锂和硫酸二乙脂(DES)复合诱变,筛选酸性蛋白酶高产突变株,并进行固态发酵筛选试验。从大量突变株中进行筛选,获得1株遗传性稳定的酸性蛋白酶高产突变株D-7,其酶活力由出发菌的262.7U/g提高至602.5U/g,提高了129.3%。

产果胶酶菌株的筛选鉴定及产酶条件优化

为了得到产果胶酶菌株,采用含有以果胶为唯一碳源的溴酚蓝平板,结合DP/DC值、平板颜色变化和摇瓶发酵后果胶酶活力的测定等方法进行筛选;对筛选到的菌株XHV25进行菌落形态特征、显微形态结构观察和18S r RNA、ITS、26S r RNA基因序列的测定与分析;通过单因素实验优化菌株XHV25产果胶酶的发酵条件。菌株XHV25的果胶酶活力可达到2937.34 U/m L;经鉴定该菌株XHV25为囊酵母(Zygoascus sp.);其最适发酵产酶条件为:培养基初始p H为5.5,摇床转速为160 r/min,接种量为4﹪(v/v),装液量为25 m L/250 m L,发酵温度为31℃,发酵时间为48 h;在此发酵条件下果胶酶活力为4849.90 U/m L,较优化前显著提高了65.11%。