套式荧光实时RT-PCR检测结直肠癌患者外周血中CRD-BPmRNA

目的 研究结直肠癌患者外周血中CRD BPmRNA的表达,探讨其作为结直肠癌标志物的可行性。方法 用套式荧光实时PCR对 64例结直肠癌患者、20例胃肠道良性疾病患者和 25例健康成人进行外周血CRD -BPmRNA的检测,并对阳性PCR产物进行克隆、测序。结果 结直癌患者中, 28(43 8% )例检测到CRD BPmRNA表达,在良性病和健康人均无表达,两组差异显著(χ2 =26. 493,P<0. 001)。CRD -BPmRNA的表达与结直肠癌的Dukes分期有显著相关性(χ2 =8. 195,P<0. 05)。结论 在结直肠癌患者的外周血中,能够检测到CRD- BPmRNA的表达,CRD- BPmRNA可作为外周血中结直肠癌细胞的肿瘤标志物用于临床诊断。

人乳头瘤病毒基因分型方法的建立和应用

目的建立一种简便快捷、灵敏度高、经济实用的人乳头瘤病毒(HPV)基因分型的低密度基因芯片技术,并对该方法进行评价。方法用低密度基因芯片技术对355例疑似HPV感染女患者检测HPV并分型;用杂交捕获Ⅱ代(HCⅡ)法进行评价,并用该法对珠江三角洲地区的730例标本进行HPV分型检测。结果355例疑似样本中,低密度基因芯片技术和HCⅡ法分别检出211例(59.4%)和222例(62.5%)阳性标本,符合率达94.1%(334/355)。低密度基因芯片技术共检测出15种常见高危型和5种低危型,其中16、52、58、56型检出率较高。结论低密度基因芯片技术能具体分型和检测混合感染,HPV检测与细胞学检测结合,对宫颈癌筛查有重要意义。

应用siRNA抑制K562细胞中c-Myc基因的表达

目的利用小分子干扰RNA(siRNA)技术抑制白血病细胞系K562细胞中c鄄Myc基因的表达,为研究c鄄Myc基因在K562细胞中的作用提供一个新的方法。方法设计c鄄Myc基因特异性小分子干扰RNA,用体外转录方法合成c鄄Myc基因的小分子干扰RNA并转染K562细胞,培养48h后,收集细胞,应用实时荧光定量RT鄄PCR和westernblot方法检测转染细胞中c鄄Myc基因mRNA水平和蛋白表达量的变化,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖活性。结果转染siRNA后,与对照组相比,实验组c鄄MycmRNA水平和蛋白表达量明显降低,抑制率分别为82.16%和74.0%,MTT法表明实验组的增殖速率明显低于对照组的增殖速率。结论在K562细胞中存在RNA干扰的机制,特异性siRNA能够有效的抑制c鄄Myc基因的表达,为研究c鄄Myc基因在肿瘤细胞中的调节途径提供了一个新的方法。

RNA干扰及其应用研究进展

RNA干扰 (RNAi)现象是生物界的一种保守行为 ,能特异性地抑制同源基因表达 ,在基因功能研究和基因治疗上显示巨大潜力。现综述RNAi的基本原理及其应用的最新进展。

食品中副溶血弧菌荧光定量PCR方法快速检测

目的利用荧光定量PCR技术,建立食品中副溶血弧菌污染的快速、准确的定量检测方法。方法根据副溶血弧菌gyrase基因序列设计合成副溶血弧菌FQ-PCR诊断试剂盒,研究其灵敏度、特异性,并应用于模拟食品样本检测。结果在31株不同菌株的检测中,8株副溶血弧菌结果均为阳性,而其他23株弧菌科及其他菌属的菌株均为阴性;纯菌条件下定量检测低限10 cfu/ml;对模拟样本直接进行,检测低限为103cfu/g,经培养增菌后,检测低限则达到2 cfu/g。结论该方法特异性强、敏感性高,操作简便快速,检验周期仅需36 h,扩增与检测在封闭单管进行,可避免常规PCR方法易污染缺陷,具有很好的推广应用前景。

幽门螺旋杆菌感染与上消化道症状的相关性研究

目的分析幽门螺旋杆菌(H.pylori)感染与不同上消化道症状出现的相关性。方法 199例患者的胃黏膜标本用来做本次研究,使用Real-time PCR检测H.pylori的保守基因ure以判断H.pylori的感染。结果 199例患者中,H.pylori阳性121例(60.8%),有反酸嗳气症状者65例(32.7%),恶心呕吐者8例(4%),食欲不振者65例(32.7%),慢性腹痛者89例(44.7%)。H.pylori感染与反酸嗳气(χ2=0.22;P=0.64)、恶心呕吐(χ2=0.01;P=0.92)及食欲不振(χ2=1.92;P=0.17)无显著相关性,但H.pylori阳性人群中出现慢性腹痛症状者明显多于H.pylori阴性的人群(χ2=8.33;P=0.004)。结论 H.pylori可能在慢性腹痛症状的出现过程中发挥着潜在的作用。

STAT3特异性小干扰RNA表达载体的构建及其对STAT3表达的抑制

目的 构建特异性抑制信号转导与转录激活因子3(STAT3)的小干扰RNA(siRNA)表达载体并检测其对STAT3表达及PC 3细胞增殖的抑制作用。方法 设计、合成STAT3特异性的短链寡核苷酸,经退火形成双链DNA片段,克隆到pSilencerTM2.1 U6载体中,构建STAT3特异siRNA的表达载体,HindIII和BamHI双酶切及测序鉴定重组体,并转染PC 3细胞,G418筛选出稳定表达细胞株,半定量反转录聚合酶链反应(RT PCR)方法和免疫印迹法检测STAT3mRNA和蛋白的表达水平,四甲基偶氮唑蓝(MTT)检测细胞增殖活性。结果 经双酶切与测序鉴定成功构建STAT3 siRNA表达载体,转染前列腺癌细胞株PC 3可显著抑制细胞中STAT3mRNA和蛋白的表达水平(抑制率分别为52.4% 及50.5% ),且细胞增殖活性亦较未转染PC 3细胞显著降低(p<0.05)。结论 运用pSilencerTM2.1 U6载体构建的STAT3 siRNA表达载体可有效抑制STAT3的表达及前列腺癌细胞的增殖。

食品中副溶血弧菌FQ-PCR快速检测方法的研究

目的利用荧光定量PCR技术,研制适合各层次实验室使用的,快速、准确地检测鉴定食品中副溶血弧菌污染的定性、定量方法。方法根据副溶血弧菌gyrase基因序列,设计并合成特异性引物和荧光标记探针,将扩增后的特异片断制成阳性模板,绘制标准曲线。以副溶血弧菌菌株8株及同源、非同源参考菌株24株,做特异性检测;将阳性污染菌按梯度加入阴性样品为模拟样本,做敏感性检测。同时使用PE7000型定量PCR仪和国产DA620微量荧光检测仪检测。结果该方法有良好的特异性:8株副溶血弧菌结果均为阳性,而其它24株菌株均为阴性(其中8株是弧菌科,16株分别来自不同的菌属);该方法有良好的敏感性:阳性模板浓度与定量曲线循环阈值之间相关系数达到0.9871。在纯培养的条件下,其检测低限为10cfuml。对32个模拟样本直接进行定量检测,则检测低限在102cfug;经过24小时增菌培养,检测低限可达2cfug。结论该方法特异性强、敏感性高,操作简便快速,能避免常规PCR方法易污染的缺陷,在国产仪器上测试同样取得较好的敏感性和特异性,便于基层实验室使用,具有很好的推广应用前景。

双重实时荧光PCR检测在宫颈癌筛查中的应用

目的评价实时荧光PCR检测方法在宫颈癌筛查中的应用价值及临床意义。方法利用实时荧光PCR技术对310例妇科疑似人乳头瘤病毒(HPV)感染患者进行高危型HPV检测,同时利用低密度基因芯片对310例样本进行HPV基因分型。结果在310例样本中,使用实时荧光PCR技术和低密度基因芯片方法分别检出HPV高危型145例(46.8%)和132例(42.6%),两种方法检测符合率为94.5%(293/310)。基因分型结果:感染率最高的为16型(25%),其次为52型(16%)、58型(15.2%)、56型(7.5%)和31型(7.5%)等。结论实时荧光PCR技术能有效地检测常见高危型HPV的感染,与细胞学检测方法相结合,对宫颈筛查有很重要的指导意义。

低密度基因芯片技术检测人乳头瘤病毒基因型

【目的】利用低密度基因芯片方法对人乳头瘤病毒(HPV)进行分型检测,建立一种经济实用的临床HPV感染的基因型检测方法。【方法】利用低密度基因芯片方法对145例阴道镜门诊病人的宫颈拭子标本进行HPV-DNA检测并分型。【结果】被检人群中共检测出57例HPV阳性,88例HPV阴性,HPV的感染率为39.3%,阳性标本中检测出12种高危型别,2种低危型别。其中单型感染51例(89%),混合感染6例(11%),16,31,18,58型检出率较高。【结论】低密度基因芯片是一种快速、简便、特异性强、灵敏度高的检测方法,在HPV和宫颈癌的筛查与诊断中有很大的应用价值。

消化道症状儿童白细胞介素-1基因簇多态性与幽门螺杆菌感染的研究

目的分析探讨儿童白细胞介素-1(IL-1)基因簇多态性与幽门螺杆菌(H.pylori)感染间的相关性。方法随机选取128例消化道疾病患儿的胃黏膜标本。IL-1B-31,IL-1B-511SNP位点多态性使用实时定量聚合酶链(real-time PCR)双色荧光探针法检测,IL-1RN的可变重复序列使用传统PCR方法检测。Real-time PCR检测H.pylori的保守基因ure以判断H.pylori的感染,高毒力亚型基因vacA s1用Real-time PCR检测,用PCR扩增另一高毒力基因cagA羧基端EPIYA基因序列所在区,然后测序确定其亚型。结果所研究的患儿中IL-1B-31T与IL-1B-511C完全连锁。未检测到H.pylori及其高毒力亚型感染与IL-1-511/-31SNP及IL-1RN基因多态性之间的相关性。结论 IL-1基因簇多态性不是广州地区儿童H.pylori感染的独立影响因素,它可能与其他因素共同影响着儿童H.pylori的感染。

针对hly基因快速筛检食品中霍乱弧菌实时荧光PCR方法的研究

[目的]研制一种供基层疾病控制和口岸检疫单位日常疫情监测使用的对水产品、食品、外环境水中的O1群、O139群和非01群、非O139群霍乱弧菌都可进行筛检的实时荧光PCR快速检测方法及其通用试剂体系。以早期进行流行株的鉴定,分析外环境疫情变化。[方法]针对霍乱弧菌溶血素基因(hly)设计引物和探针,取标准O1、O139、非O1非O139群霍乱菌种各10株,其他肠道菌种21株同时做荧光PCR测试其特异性;用标准菌株系列稀释敏感度测试、实际样品稀释染菌敏感度测试、实际样品不经增菌直接检测低限实验、实际样品经过夜培养增菌检测低限实验等测试其敏感性;通过日常实际样品对方法的应用和实验室间验证考察其符合性。[结果]实验与对照菌株51株只有霍乱弧菌产生S型扩增荧光曲线,其它同源和非同源菌株均未产生S型荧光扩增曲线,设计的引物探针具有强特异性;通用霍乱弧菌实时荧光PCR试剂体系直接检测染菌样本的检测低限为103cfu/mL;对染菌样本经过夜培养增菌检测低限分别在:霍乱弧菌O1群为2.1cfu/g、霍乱弧菌O139群为1.4cfu/g、霍乱弧菌非O1非O139群为3.4cfu/g;实际样本检测252例阳性检出情况与常规方法一致。实验室间验证结果同实验一致。[结论]研制的通用霍乱弧菌实时荧光PCR试剂体系具有快速、准确、实用、敏感性强的优点,值得在各检测部门推广应用。

用FQ-PCR方法快速检测水产品中副溶血弧菌

〔目的〕采用荧光定量PCR技术 ,研制适合各层次实验室使用的 ,快速、准确地检测与鉴定食品中副溶血弧菌污染的定性、定量检测试剂盒。〔方法〕根据副溶血弧菌gyrase基因序列 ,设计并合成特异性引物和荧光标记探针 ,将扩增后的特异片断制成阳性模板 ,绘制标准曲线。以副溶血弧菌菌株 8株及同源及非同源参考菌株 2 4株 ,做特异性检测 ;将阳性污染菌按梯度加入阴性样品为模拟样本 ,做敏感性检测。同时使用PE70 0 0型定量PCR仪和国产DA6 2 0微量荧光检测仪检测。〔结果〕该方法有良好的特异性 :8株副溶血弧菌结果均为阳性 ,而其他 2 4株菌株均为阴性 (其中 8株是弧菌科 ,其它 15株分别来自不同的菌属 ) ;该方法有良好的敏感性 :阳性模板浓度与定量曲线循环阈值之间具有良好的线性关系 ,相关系数达到 0 .9871。直接进行定量检测 ,则检测低限在 10 2cfu/g;经过 2 4小时增菌培养 ,检测低限可达 2cfu/g。〔结论〕该方法特异性强、敏感性高 ,操作简便快速 ,能避免常规PCR方法易污染的缺陷 ,在国产仪器上测试同样取得较好的敏感性和特异性 ,便于基层实验室使用 ,具有很好的推广应用前景。

以太网专线FTP/TCP实测带宽性能问题分析

在通信网络IP化发展趋势下,集团客户租用运营商以太网专线带宽的需求增长迅速,运营商如何解决带宽容量问题尤为重要。本文将从"FTP/TCP理论及现网带宽实测案例"两个方面对PTN+MSTP混合组网承载以太网专线业务的性能问题进行分析,总结得出传送网络承载以太网业务时带宽局限的有效解决方案。

儿童胃黏膜白细胞介素mRNA水平与幽门螺旋杆菌感染的研究

目的分析儿童胃黏膜白细胞介素(IL-1β)水平与幽门螺旋杆菌(H.pylori)及其高毒力亚型感染间的相关性。方法实时定量聚合酶链(real-time PCR)检测H.pylori的保守基因ure以判断H.pylori的感染,高毒力亚型基因vacA s1用real-time PCR检测,用PCR扩增另一高毒力基因cagA羧基端EPIYA基序所在区,然后测序确定其亚型。IL-1βmRNA使用PCR-荧光探针法检测,比较循环CT法分析。结果患儿中无论是低毒力还是高毒力的H.pylori感染都与胃黏膜IL-1βmRNA水平无显著相关性。结论 H.pylori对儿童胃黏膜IL-1β表达的影响作用并不明显,可能还有其他一些环境、遗传因素如IL-1基因簇多态性与H.pylori共同作用调节胃黏膜IL-1β的表达。

微量胃黏膜IL-1β mRNA水平Real-time PCR检测方法的建立

目的建立微量IL-1βmRNA表达水平的Real-time PCR检测法。方法 20例消化道疾病患儿的胃粘膜用来做本次研究。IL-1βmRNA水平检测使用Real-time PCR荧光探针法,保守基因GAPDH做内参,采用比较循环CT法分析IL-1βmRNA的表达量。结果运用IL-1βmRNA Real-time PCR荧光探针法检测出了20例消化道疾病患儿胃粘膜IL-1βmRNA的表达量。结论成功建立了微量胃粘膜IL-1βmRNA水平Real-time PCR检测法,为IL-1β在胃肠道疾病发生发展过程中的研究提供了有力工具。

PON二级分光在全业务组网中的应用探析

本文通过对比分析二级分光在光链路衰减、资源占用、投资、扩容、装维等方面的优劣,总结二级分光在全业务组网中的优势,以及适用的场景,并给出多层住宅、高层住宅和聚类市场等典型场景中的组网规划。

基于TD-LTE技术实现企业客户视频传输业务的研究与应用

随着社会安全意识的提高,政府、企业集团客户视频监控传输类需求呈现快速的上升趋势,尽管视频传输业务在有线通信资源满足的条件下已经有较为成熟的解决方案,但是在无法铺设有线管道或现有管线资源无法满足的场景如河坝、山区等仍然面临很大的设计实施困难,尚未形成有效的解决措施。针对以上问题,结合TD-LTE无线通信的传输特点,研究了通过TD-LTE无线通信方式实现集团客户视频传输业务的方法,并结合TD-LTE无线通信的特点给出了相应的解决方案。

虚拟现实(VR)技术在船员合格证教学中的应用

针对现行船员合格证教学模式存在的以教师讲解、学生被动接受知识为主,在培训的成本、安全性及教学效果等方面存在一定的局限性等问题,将虚拟现实(VR)技术引入教学中,探讨基于虚拟现实(VR)技术教学模式的优势、将现有教学模式与虚拟教学模式相结合的新型教学模式。

荧光定量PCR法检测中国籍海员血清HBV DNA

〔目的〕 了解远洋海员HBVDNA的实际感染情况 ,为国境口岸传染病监测策略提供基础数据。〔方法〕 选广州某口岸 2 0 0 3年 3月至 12月中国籍远洋海员体检血清标本 192例 ,用ELISA法检测 192份血清乙肝五项免疫学指标 ,以HBSAG阳性 12 1例为实验组 ,5 1例HBSAG阴性为对照组。用实时荧光定量PCR法同时检测HBVDNA病毒含量。比较两组HBVDNA检出差异。〔结果〕 192名远洋海员HBVDNA检出 78例 (40 % )。 5项血清免疫学指标和HBVDNA全部阴性 18例。实验组HBVDNA阳性 6 4例 (5 0 .0 2 % ) ,对照组HBVDNA阳性 14例 (2 7.4 5 % ) ,两组差异有显著意义 (χ2 <0 .0 1)。 14例HBSAG阴性HBVDNA阳性血清中 ,现行法规规定的三项传染性指标均为阴性 ,核心抗体均为阳性。〔结论〕 三项传染性指标阴性的人群仍有传播HBV的危险 ,建议有关部门修订远洋海员等特殊人群乙肝防治政策 ,直接检测HBVDNA。