C5aR在金黄色葡萄球菌LukS-PV诱导非小细胞肺癌细胞凋亡中的作用

目的:探讨金黄色葡萄球菌杀白细胞素S组分(LukS-PV)通过活化补体5受体(C5aR)对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞A549和H460凋亡的影响。方法:将敲低C5aR表达的慢病毒载体转染至A549和H460细胞中,qRT-PCR和Western blot检测C5aR敲低率,Annexin V/PI染色法检测敲低C5aR对细胞凋亡的影响。对敲低C5aR的细胞再加入LukS-PV,通过Annexin V/PI染色法和凋亡相关蛋白检测细胞凋亡情况。结果:与PBS对照组相比,LukS-PV可促进A549和H460细胞凋亡(P<0.05)。慢病毒载体转染A549和H460细胞敲低C5aR后,细胞C5aR表达水平降低(P<0.05)。在敲低C5aR基础上再加入LukS-PV,细胞凋亡受到抑制(P<0.05)。结论:敲低C5aR可抑制LukS-PV诱导NSCLC细胞的凋亡。

合肥地区儿童呼吸道感染病原体情况分析

目的了解合肥地区儿科就诊病人呼吸道感染病原体分布特征以及流行特点。方法收集2018年9—12月安徽省立医院儿科就诊疑似呼吸道感染病人的呼吸道标本共257例,包括250份咽拭子和7份肺泡灌洗液。利用13种呼吸道病原体多重聚合酶链式反应(PCR)检测试剂盒对所有标本进行检测。结合临床诊疗资料,对多重PCR检测结果进行统计学分析。结果257份标本总阳性率为66.1%(170/257),其中病毒阳性率为60.7%(156/257),以呼吸道合胞病毒(RSV)、鼻病毒(HRV)和腺病毒(ADV)为主,阳性率分别为31.5%(81/257)、17.5%(45/257)、5.1%(13/257);非典型病原体阳性率为8.2%,以肺炎支原体(MP)为主,阳性率为7.8%(20/257)。23例标本检出2种及以上病原体,以呼吸道合胞病毒和鼻病毒同时感染较为常见。男性呼吸道感染病原体阳性率为67.81%(99/146),女性呼吸道感染病原体阳性率为63.96%(71/111),呼吸道病原体感染性别间阳性率差异无统计学意义(χ^(2)=0.416,P=0.519)。呼吸道合胞病毒感染多发生在1~2岁组儿童(χ^(2)=16.562,P=0.001),各年龄组间阳性率依次为37.8%(34/90)、40.9%(36/88)、13.7%(7/51)、14.3%(4/28),其阳性率随着年龄的增长而降低。肺炎支原体感染多发生在6~15岁组儿童(χ^(2)=34.346,P<0.001),各年龄组间阳性率依次为0.0%(0/90)、3.4%(3/88)、13.7%(7/51)、35.7%(10/28),其阳性率随年龄的增长而上升。结论呼吸道合胞病毒、腺病毒、鼻病毒、肺炎支原体在儿童呼吸道感染病原体中较为常见,病原体感染在性别间不存在差异,呼吸道合胞病毒和肺炎支原体感染在年龄组间存在差异。

基于TCGA数据库分析ALAS1在肝癌中的表达及临床意义

目的基于TCGA数据库分析ALAS1在肝癌中的表达及临床意义。方法从TCGA数据库中下载肝癌组织和正常肝组织的RNASeq数据以及临床数据和预后数据,分析ALAS1 mRNA在肝癌组织和正常肝组织中的表达差异以及肝癌中ALAS1基因表达水平与临床病理特征及预后的相关性。LinkedOmics数据库分析与ALAS1表达相关的基因。GSEA软件分析预测ALAS1可能的调控信号通路。结果肝癌组织中ALAS1 mRNA表达水平(12.39±1.20)显著低于正常肝组织(13.93±0.72),差异具有统计学意义(t=8.87,P<0.01)。ALAS1 mRNA的表达水平与性别、T分期以及AJCC分期显著相关(χ2分别为31.39、6.86和6.77,P均<0.01),而与年龄、N分期和M分期无相关。生存分析表明,低表达ALAS1患者的生存期显著低于高表达患者。此外,ALAS1表达与POR、SORD、AQP9基因呈显著正相关(r分别为0.70、0.68和0.67,P均<0.01),而与PKM2、VEGFB、PLCB3基因呈显著负相关(r分别为-0.65、-0.60和-0.60,P均<0.01)。ALAS1的功能分析显示,低表达样本显著富集到细胞周期、T细胞受体信号通路、GnRH信号通路以及趋化因子信号通路等基因集。结论ALAS1基因可能作为肝癌临床预后评估的指标以及靶向治疗的新靶点。

原核表达载体pET28a-3×flag-LukS-PV的构建与表达鉴定

目的 构建原核表达载体pET28a-3×flag-LukS-PV,并在大肠杆菌中进行表达纯化及鉴定。方法 通过PCR扩增得到LukS-PV基因和3×flag基因,经琼脂糖凝胶电泳分离切胶回收后与pMD-18T载体连接。通过NdeⅠ和Bam HⅠ对pMD-18T-3×flag载体和pET28a载体进行双酶切后,连接得到pET28a-3×flag载体。使用Bam HⅠ和XhoⅠ分别对pET28a-3×flag载体和pMD-18T-LukS-PV进行双酶切,连接后得到pET28a-3×flag-LukS-PV重组质粒并测序鉴定,随后转化入大肠杆菌BL21中。利用SDS-PAGE电泳对表达产物进行分析并使用抗His单克隆抗体和抗flag多克隆抗体进行Western blot检测。结果 PCR获得了LukS-PV和3×flag基因,构建的pET28a-3×flag-LukS-PV重组质粒经测序鉴定无碱基突变。SDS-PAGE电泳表明重组蛋白主要以可溶性蛋白形式存在,且重组蛋白浓度和纯度均较高。Western blot表明使用抗His单克隆抗体和抗flag多克隆抗体在约40 kD均可产生特异性浓集条带。结论 成功纯化得到了高浓度和高纯度的3×flag-LukS-PV重组蛋白,为后续研究LukS-PV的生物学功能和具体机制奠定了基础。

大鼠血清和尿液中4种鹅膏肽类毒素代谢特征的超高效液相色谱-四极杆飞行时间串联质谱分析

目的建立血清和尿液中4种鹅膏肽类毒素的超高效液相色谱-四级杆飞行时间串联质谱测定方法,考察和分析4种鹅膏肽类毒素在大鼠体内的代谢特征,为中毒样品的采集提供科学依据。方法血清样品用乙腈+0.1%TFA二氯甲烷提取,残渣用流动相溶解;尿液样品则直接过0.22μm微孔滤膜;样品溶液经HSS T3色谱柱分离后用ESI-QTOF MS进行测定;选取SD健康大白鼠分别用4种鹅膏肽类毒素染毒,按需收集不同时间段的尿液和血液进行分析。结果血清和尿液样品的检出限分别为10 ng/ml和5 ng/ml,加标回收率分别为77.4%~95.6%和73.8%~103.8%,相对标准偏差在3.0%~18.0%和1.2%~25.4%。大鼠染毒尿液中均检出4种毒素,鹅膏毒肽的含量明显比鬼笔毒肽的含量高,大鼠染毒血清中仅14%检测到毒素的存在。结论检测方法适用于中毒事件生物样品中4种鹅膏肽类毒素的检测和确证分析,采集中毒8 h内的尿液对检出鹅膏毒肽的几率最大。