影响地高辛血药浓度基因多态性的研究进展

地高辛为治疗心力衰竭的经典药物,其被广泛用于各类心功能不全、室上性心动过速、心房纤颤及心房扑动等疾病的治疗。但地高辛的治疗窗窄,有效浓度与中毒浓度接近,因此,如何安全有效地应用地高辛一直为临床工作者探究的重要方向。研究发现,除了基础的机体生理、病理以及合并用药等因素外,基因多态性也是能够影响地高辛血药浓度的一项重要因素。本文对目前地高辛血药浓度相关的基因多态性研究进行系统综述,尝试从遗传变异的层面探讨地高辛有效剂量的个体间差异,为地高辛的个体化精准用药提供一定的参考。

ARMET的原核表达及其单克隆抗体的制备

目的制备抗人ARMET(arginine-rich,mutated in early stage of tumors)的单克隆抗体(mAb),并鉴定其特性。方法将pET28a-ARMET转化到大肠杆菌BL21中,然后用IPTG诱导表达,用预装好的Ni-beads柱进行纯化,通过SDS-PAGE电泳及考玛斯亮蓝染色方法判断融合蛋白的表达量及纯度。将纯化的ARMET免疫雌性BALB/c小鼠后采用淋巴细胞杂交瘤技术,获取分泌抗ARMET杂交瘤细胞株。体内诱生腹水法制备mAb,间接ELISA法测定其效价及抗体亚型,辛酸-硫酸铵沉淀法及亲和层析法纯化mAb。用免疫荧光双标及Western blot法对抗体的特异性进行了鉴定。结果获得了纯度较高、浓度较高的融合蛋白;建立了7株稳定分泌特异性抗ARMET mAb的杂交瘤细胞株,诱生腹水法获得的抗体效价在1×10-5～1×10-7之间,且均有较好的特异性。结论已成功制备出抗ARMET mAb,为进一步用于临床诊断和实验研究奠定了基础。

1例抗精神药物所致多脏器功能衰竭并发肺部感染患者抗感染治疗用药分析

目的:通过参与医院获得性肺炎(HAP)的药物治疗实践,探讨临床药师参与抗感染治疗与开展药学监护的方法。方法:笔者通过回顾性分析1例抗精神药物所致多脏器功能衰竭并发肺部感染患者住院期间主要抗感染治疗药物的合理性,探讨该患者在整个药物治疗过程中存在的不足之处,为临床药师下一步深入临床实践,探寻临床药师如何对精神病患者开展临床药学监护的工作切入点提供参考。结果:通过药师有效的药学监护,能够改善HAP患者的生存质量。结论:临床药师深入临床直接面向患者提供药学服务,参与制定个体化治疗方案,开展药学监护,可避免延误患者的有效药物治疗,切实提高药物治疗水平和医疗质量。

甲氨蝶呤血药浓度与患者肝肾功能指标的相关性分析

目的通过对22例次应用大剂量甲氨蝶呤(HD-MTX)化疗的急性淋巴细胞白血病(ALL)患者血药浓度监测、肝肾功能实验室检查数据进行分析总结,探讨MTX 20 h和44 h血药浓度与MTX实验室肝肾功能指标之间的联系。方法对ALL患者应用HD-MTX化疗后20、44 h进行血药浓度监测,患者HD-MTX化疗后进行血常规、肝肾功能、血糖、血脂、乳酸脱氢酶(LDH)等相关实验室检查,收集资料。采用SPSS 19.0软件Spearman相关分析两变量之间的相关性。结果 MTX 20、44 h血药浓度与患者化疗后血肌酐(CRE)值呈正相关,而与血尿素氮(BUN)、尿酸(UA)值无关。MTX 20 h血药浓度与患者化疗后血总胆红素(STB)、直接胆红素(DBIL)、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)值均呈正相关,而44 h血MTX浓度与STB、DBIL、ALT、AST值无相关性。结论 MTX 20、44 h血药浓度监测可以预测MTX化疗造成的肌酐升高型肾损害,而MTX 20 h血药浓度监测对于MTX造成的肝损害也有一定的预测作用。

清洁手术围手术期干预前后抗菌药物使用情况调查分析

目的探讨合理干预对三种清洁手术围手术期使用抗菌药物的效果。方法调取该院2010年第一季度非干预组和第三季度干预组三种清洁手术(腹外疝手术、乳腺手术、甲状腺手术)患者病历,对其I类切口患者的抗菌药物应用进行评价,评价结果进行χ2检验。结果干预组抗菌药物在药物选择、术后用药时间、联合用药方面使用合理率有显著提高(P﹤0.05)。结论实施的合理用药干预措施具有可行性和有效性,对促进合理使用抗菌药物起到积极作用。

氯化钆对大鼠腹腔巨噬细胞表达CD68的影响

目的观察氯化钆(GdCl3)对大鼠腹腔巨噬细胞(PMΦ)表达CD68是否有抑制作用。方法取正常大鼠PMΦ体外培养,用不同浓度的GdCl3处理PMΦ;采用弗氏完全佐剂(FCA)诱导大鼠佐剂性关节炎(AA)模型并尾静脉注射GdCl3。采用免疫荧光双标、Western blot法检测PMΦ活化标记物CD68的表达情况。结果在一定的浓度范围内,GdCl3可抑制体外培养的正常大鼠PMΦ中CD68的表达,以5×10-6mol/L浓度抑制效果最明显。大剂量的GdCl3对细胞有明显的毒性作用,表现为细胞的形态和核发生改变,并可诱导内质网(ER)应激相关蛋白ARMET的表达。对于AA大鼠活化的PMΦ,体内注射GdCl3(10mg/kg)可使部分CD68阳性的PMΦ转阴,同时促进这些阴性细胞的分化;GdCl3并可诱导部分活化的PMΦ凋亡。结论GdCl3可以抑制大鼠PMΦ中CD68的表达及诱导活化的PMΦ凋亡,这可能是GdCl3抑制PMΦ活化的机制之一。

头孢丙烯颗粒人体药动学和相对生物利用度研究

目的：研究头孢丙烯颗粒在健康人体内的药动学和相对生物利用度，并与市售头孢丙烯片进行生物等效性评价。方法：18名男性健康受试者双周期随机交叉单剂量口服500mg头孢丙烯颗粒剂和片剂，两次试验间隔为1周，采用HPLC法测定血浆中头孢丙烯的浓度。结果：受试制剂与参比制剂的体内过程基本一致，其主要药动学参数Cmax分别为（10．36±1．27）和（8．90±0．93）μg／mL；tmax分别为（1．07±O．30）和（2．19±0．81）h；t1/2分别为（1.55±0．17）和（1．47±0．22）h；AUC0-10分别为（31．39±5．17）和（30．21±4．77）μg·h·mL^-1。结论：统计分析结果表明两种制剂具有生物等效性，头孢丙烯颗粒的相对生物利用度为（104．30±9．94）％。

临床药师参与社区获得性肺炎药物治疗的分析与体会

目的通过参与社区获得性肺炎患者的药物治疗实践,探讨临床药师参与抗感染治疗和开展药学监护的方法。方法以1例社区获得性肺炎住院患者的诊治过程为例,根据社区获得性肺炎防治指南,分析患者具体病理生理特点,临床药师与临床医师共同制定治疗方案,根据治疗反应和病情变化及时调整方案。结果通过临床药师对患者药物治疗过程的药学监护,使患者获得完善的个体化治疗,及时发现患者的药物治疗问题,促进临床合理用药,提高患者用药的安全性、有效性,并最终获得满意的疗效。结论临床药师深入临床后,努力将药学理论知识优势和临床实践相结合,不断提高药物治疗水平,获得临床认可,在治疗团队中实现自己的价值。

盐酸格拉司琼胶囊健康人体药代动力学研究

目的:建立测定人血浆中格拉司琼浓度的LC/MS/MS法,并应用于健康人体药代动力学研究。方法:12例健康受试者单剂量口服2mg盐酸格拉司琼胶囊,LC/MS/MS法测定血浆中格拉司琼浓度,采用非房室模型统计矩法计算药代动力学参数。结果:单剂量口服2mg盐酸格拉司琼胶囊后,主要的药代动力学参数Cmax、tmax、t1/2、MRT、Cl/F、AUC0-24和AUC0-∞分别为(6.93±1.90)ng/ml,(1.35±0.29)h,(5.59±1.87)h,(8.05±1.84)h,(54.23±16.08)L/h,(36.61±8.87)ng·h·ml-1和(39.32±9.36)ng·h·ml-1。结论:本分析方法的准确度、灵敏度、专属性及定量线性范围等均符合生物样品的分析要求,适用于盐酸格拉司琼胶囊的人体药代动力学研究。

药师干预前后门诊处方对比分析

目的:探讨药师对门诊不合理处方的干预效果。方法:以随机抽样法抽取2011年8—12月1 000张处方作为干预前研究资料,按照有关规定对其进行评价,并将结果反馈给临床医师以进行有效干预;以随机抽样法抽取2012年4—7月1 000张处方作为干预后研究资料,按照有关规定进行再次评价,并将结果进行统计分析。结果:经药师干预后,抗菌药物使用率、国家基本药物使用率、药品通用名使用率和处方合理率有显著改善(P<0.01);在不合理处方分类方面,干预后用法与用量不正确、超剂量用药、不合理使用抗菌药物项目较干预前有显著改善(P<0.01)。此外,抗菌药物的分级使用情况在干预后也得到了显著改善(P<0.01)。结论:经药师干预后,门诊处方的大部分指标有显著改善,但仍有部分指标未达到规定要求,还存在不合理用药现象。药师应持续不断地对医师处方实施干预,以规范医师处方行为,最终使门诊处方用药达到安全、有效、经济。

重组人tau蛋白对神经细胞的毒性作用

目的观察重组人tau蛋白对神经来源的细胞株SH-SY5Y及体外原代培养的神经元是否有毒性作用。方法将原核表达纯化的重组人tau蛋白加入SH-SY5Y细胞和原代培养的大鼠神经元培养液中,通过观察细胞形态、四甲基偶氮唑盐(MTT)检测细胞增殖活性、TUNEL染色检测细胞凋亡、免疫荧光染色观察凋亡诱导蛋白CHOP及内质网应激上调蛋白ARMET的表达情况研究tau蛋白对神经细胞生长、增殖和凋亡的影响。结果随着tau蛋白作用时间的延长,细胞胞体逐渐变圆,突起减少甚至消失,染色质聚集,部分神经元出现了凋亡。MTT检测结果显示tau蛋白可抑制细胞的增殖。同时发现,细胞外的tau作用可诱导内质网应激标志性蛋白CHOP和ARMET的表达。结论重组人tau蛋白对神经细胞有毒性作用,该作用可能部分与tau诱导的内质网应激有关。

中医方药治疗男性不育症研究进展

目的综述近年来中药在男性不育症治疗中的实验研究进展。方法查阅文献,总结分析。结果治疗不育症的单味中药主要有枸杞子、菟丝子、五味子、淫羊藿、何首乌等,复方制剂主要有五子衍宗丸类、六味地黄丸类等。结论中药治疗不育症有独到优势,应在中医药理论指导下,进一步深入探索和系统研究中药治疗不育症作用机制,为临床治疗不育症做出贡献。

GM(1,1)模型预测分析2016年～2018年我国综合医院人均医药费用及药占比

目的使用灰色系统GM(1,1)方法分析我国综合医院2000～2015年人均医药费用的变化趋势,并对2016年～2018年我国综合医院人均医药费用进行预测分析,验证医改对人均医药费用的影响。方法对我国综合医院2000～2015年间人均医疗费用数据进行统计分析,并使用Matlab软件利用2000～2015年度人均医疗费用数据建立灰色系统GM(1,1)模型进行分析预测。结果 2016年～2018年综合医院患者人均医药费和人均药品费将继续升高,而药占比将持续降低。结论通过医疗改革,我国综合性医院药占比呈下降趋势,但药品费用和医药费用呈持续上升趋势。

HPLC法测定患者丙戊酸钠血药浓度

目的建立反相高效液相色谱法测定人血清中丙戊酸钠（VPA）血药浓度的方法学。方法血清酸化后用环戊烷提取,选择环己烷羧酸为内标,以α-溴苯乙酮为衍生化试剂,采用Symmetry C18（250mm×4.6mm,5μm）分析柱,流动相为乙腈-水（75∶25）,检测波长为248nm,流速1mL·min-1,柱温35℃。用高效液相色谱法测定丙戊酸钠血药浓度。结果内标环己烷羧酸和VPA的保留时间分别为10.0min,15.0min,分离效果良好,丙戊酸钠（VPA）血药浓度在6.25～200μg·mL-1范围内呈现良好的线性关系（R=0.9982）,平均回收率98.2%,日间RSD〈5%。结论本法快速、简便、准确,适合临床常规监测需要。

GFP-ATZ在HEK 293T中的表达及其细胞毒作用

目的构建具有绿色荧光蛋白(GFP)标签的α1抗胰蛋白酶Z突变型(ATZ)的真核表达载体,在人胚胎肾细胞(HEK293T)中验证表达情况及检测其对细胞的影响。方法以pcDNA3.1-zeo+-ATZ质粒为模版,设计引物,PCR扩增出ATZ的cDNA序列,插入真核表达载体pEGFP-C1中,构建带有GFP标签的ATZ真核表达载体pEGFP-C1-ATZ,脂质体转染体外培养的HEK293T细胞,Western blot、荧光显微镜和激光共聚焦显微镜检测GFP-ATZ在细胞中的表达、分布情况及其对细胞形态和分裂的影响。结果 ATZ片段成功插入pEGFP-C1表达质粒,在表达GFP的HEK293T细胞内,绿色荧光呈弥散的全细胞分布,而表达GFP-ATZ的细胞绿色荧光分布于细胞质内;Western blot结果显示特异性条带,分子量大小与GFP-ATZ预期相符;GFP-ATZ的过度表达引起细胞出现不同程度的形态改变、分裂障碍、聚集体出现甚至死亡。结论成功构建了具有绿色荧光标记的ATZ真核表达载体,GFP-ATZ的表达具有细胞毒性。

用HPLC法和微生物法测定人血浆中头孢丙烯浓度的比较

目的:比较用HPLC法和微生物法测定人血浆中头孢丙烯浓度的差异。方法:10名健康志愿者单剂量口服头孢丙烯片500 mg,分别用HPLC法和微生物法测定血浆中药物浓度。结果:HPLC法线性范围为0．143～14．300μg／mL,低、中、高浓度(0．357 5、1．430 0、7．150 0μg／mL)的回收率分别为(101．75±7．71)％、(96．89±2．55)％和(98．70±1．67)％(n= 6);3种浓度的日内、日间RSD分别为7．58％0、2．63％、1．69％和7．11％、3．77％、2．01％(n=6)。微生物法线性范围为0．25～3．00μg／mL,低、中、高浓度(0．50、1．75、3．00μg／mL)的回收率分别为(96．37±5．99)％、(108．26±8．39)％和(105．12±10．35)％(n=5);3种浓度的日内、日间RSD分别为9．84％、7．75％、6．22％和10．05％、8．31％、7．87％(n=5)。结论:两种方法回收率和精密度均符合要求,受试者各时间点平均血药浓度测定值无显著性差异。

泛素连接酶Hrd1促进α1-抗胰蛋白酶Z型突变体降解及细胞存活

目的：α1-抗胰蛋白酶（AAT）缺乏症是一种常染色体隐性遗传病，其特征是错误折叠的AAT突变体在肝细胞内质网内聚集及血清AAT水平降低，并由此引发肝脏及肺部疾病。AAT的Z型突变（ATZ）是造成AAT缺乏的最常见突变类型。有研究已经证实泛素-蛋白酶体通路参与ATZ的降解。Hrd1是一种定位于内质网膜的泛素连接酶（E3），本文旨在研究Hrd1是否可以通过内质网相关降解通路促进ATZ的降解。

一例左下肺炎伴脓胸患者的药学监护实践

目的:通过参与一例左下肺炎伴脓胸患者的药物治疗实践,探讨临床药师参与药物治疗与开展药学监护的方法。方法:针对具体病例,协助医生为患者制订有效的治疗方案,关注患者用药期间发生的药品不良反应提出合理的药学监护措施及健康教育计划。结果:通过药师有效的药学监护,能够改善患者预后,改善患者生存质量。结论:临床药师深入临床直接面向患者提供药学服务,参与制定个体化治疗方案,开展药学监护,可避免延误患者的有效药物治疗,提高药物治疗水平和医疗质量。

盘状结构域受体1通过调控NF-κB/NLRP3信号通路介导的细胞焦亡对高糖诱导血管内皮功能障碍的影响

目的 探究盘状结构域受体1 (discoidin domain receptor 1,DDR1)对高糖诱导血管内皮细胞功能障碍的作用机制。方法 体外培养人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HU VECs),首先分为对照组(Control)、高糖诱导组(high glucose,HG),采用33 mmol·L^(-1) D-glucose处理48 h构建HUVECs功能障碍。碘化丙啶染色(PI)检测细胞焦亡情况;酶联免疫吸附法(ELISA)测定乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)、IL-1β、IL-18水平;Western blot检测DDR1、NF-κB/NLRP3信号通路蛋白及细胞焦亡相关蛋白表达;随后,实验分为C ontrol组、HG组、HG+DDR1 NC组、HG+DDR1 siRNA组。转染DDR1 siRNA 24 h后观察HG对HUVECs增殖和迁移能力的影响;ELISA检测内皮型一氧化氮合成酶(endothelial nitric oxide synthase,eNOS)、血管细胞黏附分子-1(vascular cell adhesion molecule-1,VCAM-1)、细胞间黏附分子-1 (intercellular adhesion molecule-1,ICAM-1)及LDH、IL-1β、IL-18水平;PI检测细胞焦亡情况;Western blot检测DDR1、NF-κB/NLRP3信号通路蛋白及细胞焦亡相关蛋白表达。结果 与Control组相比,HG组细胞eNOS含量降低,VCAM-1、ICAM-1含量升高,细胞活力及迁移能力降低,DDR1、p-NF-κB、NLRP3及细胞焦亡相关蛋白表达均明显升高,且LDH、IL-1β、IL-18水平及细胞焦亡率均增加(P<0.05)。与HG组相比,DDR1siRNA能够促进eNOS分泌,降低VCAM-1、ICAM-1、LDH、IL-1β、IL-18水平,增加细胞活力和迁移能力,降低p-NF-κB、NLRP3及细胞焦亡相关蛋白表达,抑制高糖诱导的HU VECs焦亡(P<0.05)。结论基因沉默DDR1能够改善高糖诱导的血管内皮细胞功能障碍,其机制与抑制NF-κB/NLRP3信号通路介导的细胞焦亡相关。