目的探讨分析microRNA-21(miR-21)靶向调控Wnt2基因对肝癌细胞HepG2增殖与迁移的影响。方法采用实时荧光定量PCR法检测肝癌细胞HepG2及正常肝细胞株LO2 miR-21的表达情况。对HepG2细胞转染miR-21抑制剂,分析转染后抑制剂组与对照组miR-2...目的探讨分析microRNA-21(miR-21)靶向调控Wnt2基因对肝癌细胞HepG2增殖与迁移的影响。方法采用实时荧光定量PCR法检测肝癌细胞HepG2及正常肝细胞株LO2 miR-21的表达情况。对HepG2细胞转染miR-21抑制剂,分析转染后抑制剂组与对照组miR-21的表达情况、细胞增殖、迁移及凋亡情况,检测两组细胞Wnt2蛋白表达水平,并采用双荧光素酶报告基因实验验证miR-21与Wnt2基因的关系。计量资料两组间比较采用t检验。结果HepG2细胞miR-21相对表达水平明显高于LO2细胞(1.978±0.035 vs 1.586±0.022,t=16.424,P<0.05)。转染miR-21抑制剂后,抑制剂组miR-21相对表达水平较对照组显著降低(0.857±0.017 vs 1.684±0.039,t=33.669,P<0.05)。转染miR-21抑制剂24、48、72 h后,抑制剂组HepG2细胞增殖能力均较对照组显著降低(P值均<0.05);抑制剂组穿过Tranwell小室的细胞数显著低于对照组(83.72±15.06 vs 147.85±20.64,t=4.347,P<0.05);抑制剂组细胞凋亡率明显高于对照组(25.67%±3.95%vs 10.27%±2.14%,t=5.937,P<0.05)。抑制剂组HepG2细胞的Wnt2相对表达水平明显低于对照组(0.862±0.127 vs 1.306±0.218,t=3.048,P<0.05)。TargetScan软件显示,miR-21抑制剂可显著抑制野生型Wnt2-3′UTR质粒转染细胞的荧光素酶活性(0.972±0.102 vs 0.612±0.092,t=4.219,P<0.05),而对突变型Wnt2-3′UTR质粒转染细胞的荧光素酶活性并无明显影响(0.982±0.093 vs 0.911±0.128,t=0.972,P>0.05)。结论抑制miR-21表达可有效抑制HepG2细胞增殖和迁移,促进HepG2细胞凋亡,并抑制Wnt信号通路的过度激活,可能成为肝癌治疗的潜在靶基因之一。展开更多
采用恒压、阶段升压及恒流-恒压3种微弧氧化电源模式在ZK60镁合金基体上制备微弧氧化生物膜层.利用扫描电镜(SEM),能谱分析(EDS)及X射线衍射仪(XRD)分析表征不同电源模式下微弧氧化生物膜层微观结构、元素分布及膜层物相变化.通过电化...采用恒压、阶段升压及恒流-恒压3种微弧氧化电源模式在ZK60镁合金基体上制备微弧氧化生物膜层.利用扫描电镜(SEM),能谱分析(EDS)及X射线衍射仪(XRD)分析表征不同电源模式下微弧氧化生物膜层微观结构、元素分布及膜层物相变化.通过电化学测试方法表征最优模式下微弧氧化生物膜层在模拟体液(simulated body fluld,SBF)中的降解速率及降解特性.结果表明:恒压模式下,微弧氧化生物膜层的厚度随电压升高而增大,该模式下膜层截面伴有贯穿至基体的微孔裂纹等缺陷,降低了膜层的耐蚀性.阶段升压模式下制备的微弧氧化膜层质量较恒压模式有所提高,但仍存在通孔裂纹等缺陷,不利于膜层耐蚀性的提高.恒流-恒压模式下制备的微弧氧化膜层均匀致密,微孔孔径约为4.0μm,相较于其他两种模式,该模式下获得的膜层具有较好的耐蚀性及生物相容性(Ca/P比为1.52),模拟体液浸泡实验也表明,恒流-恒压模式下制备的微弧氧化生物膜层具有良好的前期生物活性.展开更多
基金supported by the Jiangsu Province Industry–University–Research Project,China(No.BY20221160)the Postgraduate Research and Practice Innovation Program of Jiangsu Province,China(No.KYCX22_3798)+2 种基金the National Natural Science Foundation of China(No.52275339)the Key Research and Development Plan of the Ministry of Science and Technology,China(No.2023YFE0200400)the Science and Technology Project of Jiangsu Province,China(No.BZ2021053)。
文摘目的探讨分析microRNA-21(miR-21)靶向调控Wnt2基因对肝癌细胞HepG2增殖与迁移的影响。方法采用实时荧光定量PCR法检测肝癌细胞HepG2及正常肝细胞株LO2 miR-21的表达情况。对HepG2细胞转染miR-21抑制剂,分析转染后抑制剂组与对照组miR-21的表达情况、细胞增殖、迁移及凋亡情况,检测两组细胞Wnt2蛋白表达水平,并采用双荧光素酶报告基因实验验证miR-21与Wnt2基因的关系。计量资料两组间比较采用t检验。结果HepG2细胞miR-21相对表达水平明显高于LO2细胞(1.978±0.035 vs 1.586±0.022,t=16.424,P<0.05)。转染miR-21抑制剂后,抑制剂组miR-21相对表达水平较对照组显著降低(0.857±0.017 vs 1.684±0.039,t=33.669,P<0.05)。转染miR-21抑制剂24、48、72 h后,抑制剂组HepG2细胞增殖能力均较对照组显著降低(P值均<0.05);抑制剂组穿过Tranwell小室的细胞数显著低于对照组(83.72±15.06 vs 147.85±20.64,t=4.347,P<0.05);抑制剂组细胞凋亡率明显高于对照组(25.67%±3.95%vs 10.27%±2.14%,t=5.937,P<0.05)。抑制剂组HepG2细胞的Wnt2相对表达水平明显低于对照组(0.862±0.127 vs 1.306±0.218,t=3.048,P<0.05)。TargetScan软件显示,miR-21抑制剂可显著抑制野生型Wnt2-3′UTR质粒转染细胞的荧光素酶活性(0.972±0.102 vs 0.612±0.092,t=4.219,P<0.05),而对突变型Wnt2-3′UTR质粒转染细胞的荧光素酶活性并无明显影响(0.982±0.093 vs 0.911±0.128,t=0.972,P>0.05)。结论抑制miR-21表达可有效抑制HepG2细胞增殖和迁移,促进HepG2细胞凋亡,并抑制Wnt信号通路的过度激活,可能成为肝癌治疗的潜在靶基因之一。
文摘采用恒压、阶段升压及恒流-恒压3种微弧氧化电源模式在ZK60镁合金基体上制备微弧氧化生物膜层.利用扫描电镜(SEM),能谱分析(EDS)及X射线衍射仪(XRD)分析表征不同电源模式下微弧氧化生物膜层微观结构、元素分布及膜层物相变化.通过电化学测试方法表征最优模式下微弧氧化生物膜层在模拟体液(simulated body fluld,SBF)中的降解速率及降解特性.结果表明:恒压模式下,微弧氧化生物膜层的厚度随电压升高而增大,该模式下膜层截面伴有贯穿至基体的微孔裂纹等缺陷,降低了膜层的耐蚀性.阶段升压模式下制备的微弧氧化膜层质量较恒压模式有所提高,但仍存在通孔裂纹等缺陷,不利于膜层耐蚀性的提高.恒流-恒压模式下制备的微弧氧化膜层均匀致密,微孔孔径约为4.0μm,相较于其他两种模式,该模式下获得的膜层具有较好的耐蚀性及生物相容性(Ca/P比为1.52),模拟体液浸泡实验也表明,恒流-恒压模式下制备的微弧氧化生物膜层具有良好的前期生物活性.