胫骨内注射肿瘤细胞法构建骨肿瘤动物模型的研究进展

骨骼系统肿瘤分为原发性和继发性两种,骨肉瘤是原发恶性骨肿瘤之一。乳腺癌、前列腺癌、肺癌等均具有较强的骨转移倾向。通过向动物骨髓腔内接种肿瘤细胞建立的肿瘤模型,具有成瘤周期短、操作简单、重复性好、成功率高等优点,为原发性骨肿瘤和肿瘤骨转移发病机制的研究提供了重要工具。本文对胫骨内注射肿瘤细胞法构建骨肿瘤动物模型的研究进展进行综述。

重楼皂苷Ⅰ对人骨肉瘤MG63细胞增殖、凋亡及DNA损伤影响研究

目的探讨重楼皂苷Ⅰ对人骨肉瘤MG63细胞增殖、凋亡及DNA损伤的影响。方法将MG63细胞分为PBS对照组、0.625μmol/L重楼皂苷Ⅰ组、1.25μmol/L重楼皂苷Ⅰ组,各组给予相应干预72 h后,采用Countstar细胞计数仪检测细胞存活率;将MG63细胞分为PBS对照组、0.625μmol/L重楼皂苷Ⅰ组,划痕实验检测各组培养0 h、24 h、48 h、72 h细胞迁移能力;将MG63细胞分为PBS对照组、0.625μmol/L重楼皂苷Ⅰ组、1.25μmol/L重楼皂苷Ⅰ组,流式细胞术检测干预24 h后各组细胞凋亡率;将MG63细胞分为PBS对照组、0.625μmol/L重楼皂苷Ⅰ组、1.25μmol/L重楼皂苷Ⅰ组,TUNEL法和彗星实验分别检测细胞DNA损伤情况;Western blot法检测1.25μmol/L重楼皂苷Ⅰ处理0 h、0.5 h、1.0 h、1.5 h、3 h、6 h后MG63细胞中Bax、Bcl-2、Cleaved PARP蛋白表达情况。结果0.625μmol/L重楼皂苷Ⅰ组和1.25μmol/L重楼皂苷Ⅰ组细胞存活率均明显低于PBS对照组(P均<0.05),且1.25μmol/L重楼皂苷Ⅰ组明显低于0.625μmol/L重楼皂苷Ⅰ组(P<0.05)。培养24 h、48 h、72 h时,0.625μmol/L重楼皂苷Ⅰ组的划痕宽度均大于PBS对照组(P均<0.05)。0.625μmol/L重楼皂苷Ⅰ组和1.25μmol/L重楼皂苷Ⅰ组细胞凋亡率、TUNEL/DPAI荧光值、细胞DNA损伤率均明显高于PBS对照组(P均<0.05),且1.25μmol/L重楼皂苷Ⅰ组均明显高于0.625μmol/L重楼皂苷Ⅰ组(P均<0.05)。1.25μmol/L重楼皂苷Ⅰ培养后0 h、0.5 h、1.0 h、1.5 h、3 h、6 h,Bax、Cleaved PARP蛋白表达随时间延长而逐渐增高,Bcl-2蛋白表达逐渐降低。结论重楼皂苷Ⅰ能够通过诱导DNA损伤抑制骨肉瘤MG63细胞增殖、迁移,促进细胞凋亡,发挥抑制骨肉瘤的作用。

中医“肾髓系统”刍议

肾藏精,精生髓,髓充脑、养骨、生血,"肾、精、髓"物质与功能共同构成了中医"肾髓系统",其中"肾为本,精为要,髓为枢",肾中精气盛衰决定髓的盈亏,是脑为髓海、肾主骨、精化血的生理和病理基础;同时,中医现代研究发现干细胞与肾精关系密切,体现了"肾髓系统"的物质和功能特点。

系统思维探讨中医肾藏象的范畴

中医对于肾的概念比较广泛,在《黄帝内经》中被称为"先天之本"的肾,除了包含了泌尿生殖系统,又有藏精、主管命门之火,主持生殖、生长、发育、主水、主纳气、调节水液代谢的作用,是水火之脏,内寓元阴和元阳,与骨、髓、脑、耳、齿、发都有着密切的关系。目前通过大量的基础实验,以及补肾方药的疗效验证,发现存在"肾髓系统""肾脑系统""肾骨系统""肾生殖系统"等围绕中医"肾"为主的一系列理论基础研究。本文就近年来在这个领域所取得的研究进展做一综述。

陈博来基于“肾为生痰之本”辨治肾虚痰阻型腰痛

肾主水,为先天之本,对于体内津液的运行输布具有重要作用,且肾与水腑膀胱互为表里,通过冲脉与“水谷之海”的胃有经络上的联系,故肾在痰的生成中起着关键作用。陈博来教授认为,肾虚痰阻型腰痛为本虚标实之证,“痰阻”为其标,“肾虚”为其本,临床以腰骶钝痛、痛处固定、腰部僵硬、肢体麻木或偏枯为主要特点,兼见腰膝酸软、喜按喜揉等表现。肾虚痰阻型腰痛的治疗可基于“肾为生痰之本”,以补肾祛痰为法,拟定理痰汤(主要组成药物为芡实、半夏、黑芝麻、柏子仁、白芍、陈皮、茯苓等)为基础方,针对不同兼症辅以健脾、宣肺等药进行加减治疗。其辨治思路可为临床中医治疗腰痛提供参考。

循经取穴贴敷疗法对腰椎内固定术后患者胃肠功能的影响

目的观察循经取穴贴敷疗法对腰椎内固定术后患者胃肠功能恢复的疗效。方法选取2020年1月至2022年3月在广州中医药大学第二附属医院收治的125例腰椎内固定术后患者,按随机数字表法分为对照组和观察组:对照组62例为常规腰椎内固定术后护理,观察组63例在常规护理的基础上加用循经取穴贴敷疗法,观察两组患者术后恶心呕吐NVAS评分、腹胀腹痛、肠鸣音与首次排气、排便时间。结果两组患者术后均发生不同程度的胃肠功能障碍。其中观察组恶心人数、恶心NVAS评分、呕吐分级、腹胀发生率、肠鸣音恢复正常时间和首次排气、排便时间,均较对照组降低(均P<0.05);但腹痛、腹围对比无统计学差异(均P>0.05)。2组均未发生不良反应。结论循经取穴贴敷疗法可加快腰椎内固定术后患者胃肠功能恢复,促进术后快速康复,提高生活质量。

电磁导航与C臂透视引导经皮椎间孔镜手术治疗腰椎间盘突出症的疗效比较:2年随访

目的对比分析电磁导航引导经皮椎间孔镜下腰椎间盘切除术(see electromagnetic-navigation endoscopic spinal surgery system,SEESSYS)与C臂透视引导经皮椎间孔镜下腰椎间盘切除术(transforaminal endoscopic surgical system,TESSYS)的疗效,探讨电磁导航技术在椎间孔镜手术应用中的优势与不足。方法 2018年9-12月在我院接受经皮椎间孔镜手术治疗的44例腰椎间盘突出症患者,SEESSYS组和TESSYS组各22例。比较两组的手术时间(置管时间与镜下减压时间)、术中透视次数、住院天数。应用视觉模拟量表(VAS)评分、Oswestry残疾指数(ODI)和改良MacNab标准进行疗效评估。结果 SEESSYS组的置管时间、总手术时间和术中透视次数均明显短于TESSYS组(P <0.01),而两组的镜下减压时间和住院天数差异无统计学意义(P> 0.05)。SEESSYS组和TESSYS组的术后ODI和VAS明显低于术前(P <0.01),但两组之间各时间点的ODI和VAS评分差异无统计学意义(P> 0.05)。2年随访后,SEESSYS组的优良率是95.5%,TESSYS组为90.91%。结论相对于C臂透视引导,电磁导航经皮椎间孔镜手术2年随访的临床疗效明确,有助于减少术中X线辐射损害,也能有效缩短置管时间和总体手术时间,提高手术效率。

基于网络药理学与分子对接技术的益气散瘀解毒方治疗骨肉瘤的潜在机制分析

目的探讨益气散瘀解毒方治疗骨肉瘤的活性成分及其潜在作用机制。方法通过TCMSP、TCMID数据库及文献检索查找黄芪、重楼、黄连3味中药的活性成分及作用靶点;利用Genecards、OMIM、TTD数据库获取骨肉瘤相关靶基因;对药物靶点和疾病靶点取交集,运用Cytoscape 3.7.2软件构建“药物-靶点-疾病网络”;通过String数据库获取益气散瘀解毒方治疗骨肉瘤相关蛋白相互作用网络(PPI),利用Network Analyzer工具进行拓扑学分析;利用DAVID数据库对核心靶点进行GO功能富集分析和KEGG通路富集分析;利用AutoDock Vina软件将化合物与骨肉瘤相关蛋白进行分子对接。结果筛选得到益气散瘀解毒方中的共49种活性成分,关键活性成分共23个,治疗骨肉瘤的潜在靶点93个;PPI网络分析得出益气散瘀解毒方治疗骨肉瘤的17个关键靶点蛋白,涉及Akt1、MAPK1、PTGS2和VEGFA等。GO功能富集分析得到GO条目1720个(P<0.05),其中生物过程(BP)条目1583个,细胞组成(CC)条目30个,分子功能(MF)条目107个。KEGG通路富集筛选得到112条信号通路(P<0.05),涉及PI3K-Akt信号通路、MAPK信号通路、HIF-1信号通路等。分子对接结果显示,山柰酚、黄连素和槲皮素与骨肉瘤的Akt1、MAPK1蛋白具有较强的亲和力。结论益气散瘀解毒方中的活性成分可能通过作用于Akt1、MAPK1等靶点,调节多条信号通路,进而起到治疗骨肉瘤的作用。

基于文献计量学及可视化技术的中医药治疗骨肉瘤研究现状及热点分析

目的分析中医药治疗骨肉瘤的研究现状及热点,揭示研究热点的动态变化和发展态势,为中医药治疗骨肉瘤的临床及基础研究提供思路和依据。方法检索收集中国期刊全文数据库(CNKI)、万方医学网数据库、中国生物医学文献服务系统(SinoMed)等数据库中中医药治疗骨肉瘤的研究文献,检索时间为建库至2019年6月。应用文献计量学方法对研究文献的基本情况(发表时间、发文机构、刊载来源、基金项目等)进行分析描述;应用Citespace软件对研究的热点进行知识图谱描绘及可视化分析,包括文献关键词的共现分析、聚类分析、时间线视图分析和突现分析。结果①经筛选,最终获得有效文献197篇,其中基础研究文献占比较多,临床研究文献较少。②1988年至2019年中医药治疗骨肉瘤相关文献量总体呈上升趋势,涨势较缓,呈波动上涨。③福建中医药大学(校本部及附属机构)发表中医药治疗骨肉瘤文献最多;总体而言,不同区域之间、不同高校机构之间的合作度相对较小。④相关文献分别刊载在38种来源中,包括期刊和学位论文,刊载来源较为分散。⑤国家自然科学基金对本专题研究的资助最多;有基金资助的文献占比不足40%。⑥发文量排名第一的作者(第一作者)是上海中医药大学附属市中医医院的陈永强;相关学者数量较少、分布较散,不同区域的不同作者之间的合作相对较少。⑦共现分析与聚类分析表明,中医药治疗骨肉瘤的研究热点主要是围绕如何调控骨肉瘤细胞的增殖和凋亡展开,其中姜黄素、片仔癀和蜂毒素的研究最为广泛和深入。⑧时间线视图分析表明,中医药治疗骨肉瘤热点关键词2003年至2019年期间的变化趋势明显,免疫调节可能成为研究的前沿点。⑨突现分析表明,雷公藤红素的突现率最高,从2015年起激增。结论骨肉瘤的中医药研究取得了一定的成果,但总体研究水平仍处于初级阶段,不同区域之间、不同作者团队之间的学术合作有待加强。目前中医药干预骨肉瘤研究的主流是中药单体的基础研究,而骨肉瘤的中医证候标准研究或许是今后的研究重点方向之一。

DOT1L对骨肉瘤MG63细胞生物学行为的影响及其作用机制

目的探讨抑制组蛋白H3赖氨酸79(H3K79)甲基转移酶DOT1L基因对骨肉瘤MG63细胞增殖、迁移、DNA损伤的影响及可能的作用机制。方法将hDOT1L-shRNA质粒转染至骨肉瘤MG63细胞(hDOT1L-shRNA组),同时设置shRNA阴性对照组(Scramble组)。采用实时荧光定量PCR检测DOT1L mRNA的表达水平,MTT法检测细胞增殖能力,划痕实验检测细胞迁移能力,TUNEL法和彗星实验检测细胞DNA损伤。Western blot检测MG63细胞中DOT1L、H3K79me2、Histone H3、Sirt1、XPA蛋白的表达水平。结果转染后,与Scramble组相比,hDOT1L-shRNA组MG63细胞中DOT1L mRNA及蛋白表达水平下调(P<0.05),细胞增殖能力降低(P<0.05),细胞迁移率降低(P<0.05),DNA损伤程度加剧(P<0.05)。Western blot检测结果显示,与Scramble组相比,hDOT1L-shRNA组MG63细胞中细胞Histone H3总量差异无统计学意义(P>0.05),其他DOT1L、H3K79me2、Sirt1、XPA蛋白表达水平均降低。结论DOT1L可能通过DOT1L/H3K79me2-SIRT1-XPA信号通路抑制骨肉瘤MG63细胞增殖、迁移并诱导其DNA损伤。

骨科手术机器人辅助技术在颈椎手术中的应用进展

与其他外科领域相比,手术机器人对脊柱手术相对较新。随着颈椎手术技术的发展,微创技术因创伤小、恢复快等优势被越来越多的采用,但同时带来更多的射线暴露。骨科手术机器人可以实现术中导航及辅助置钉等功能,减少术者的射线暴露,提高置钉准确率及安全性。近年来,骨科手术机器人的接受度逐渐提高,临床应用逐渐增多。本文综述骨科手术机器人在颈椎手术中的应用进展,分析现有骨科手术机器人辅助颈椎手术的研究,总结机器人技术的应用术式与疗效,并探讨未来的发展方向。

氯化钴诱导体外人髓核细胞缺氧模型的建立

目的观察氯化钴(CoCl_(2))对体外培养的原代髓核细胞的影响,探寻符合研究目的体外化学干预低氧模型。方法利用贴壁法培养原代髓核细胞,使用100μmol/L、200μmol/L、300μmol/L CoCl_(2)溶液分别处理12 h、24 h、36 h、48 h,形成最终13个分组:空白对照组,CoCl_(2)处理组(100μmol/L-12 h组,100μmol/L-24 h组,100μmol/L-36 h组,100μmol/L-48 h组;200μmol/L-12 h组,200μmol/L-24 h组,200μmol/L-36 h组,200μmol/L-48 h组;300μmol/L-12 h组,300μmol/L-24 h组,300μmol/L-36 h组,300μmol/L-48 h组)。利用CCK-8实验观察不同条件下细胞生长、凋亡情况,并通过免疫印迹(western blot)及实时定量聚合酶链反应(qPCR)检测低氧诱导因子-1α(HIF-1α)、血管内皮生长因子(VEGF)的表达情况。结果与空白对照组比较,CoCl_(2)处理组的细胞生存率整体趋势随着浓度升高、时间延长而降低(P<0.05),但在低浓度、短时间的CoCl_(2)诱导下,髓核细胞的生存率反而提高(P<0.05)。HIF-1α与VEGF的mRNA及蛋白表达亦随CoCl_(2)浓度升高和时间延长而增加(P<0.05)。但在300μmol/L CoCl_(2)的诱导下,HIF-1α、VEGF蛋白的表达进入平台期。结论CoCl_(2)对原代髓核细胞的增殖、凋亡及相关基因、蛋白的表达与时间和浓度相关,总体成逐渐升高趋势。本文成功建立起一种体外培养原代髓核细胞缺氧诱导方法,可以作为研究椎间盘髓核细胞缺氧模型的参考。

温肾壮阳方含药血清调控HIF-1α/VEGF通路对髓核细胞凋亡与增殖的影响

目的 探讨温肾壮阳方含药血清对髓核细胞凋亡、增殖及缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)/血管内皮生长因子(VEGF)通路的影响。方法 将25只SD雄性大鼠随机分为5组,分别用生理盐水、依托考昔溶液及低、中、高浓度温肾壮阳方进行灌胃7 d制备相应含药血清。取人髓核细胞,实验分为6组:空白对照组用正常大鼠血清培养,缺氧造模组用300μmol/L氯化钴(CoCl_(2))溶液干预24 h诱导缺氧状态,依托考昔组用300μmol/L CoCl_(2)+依托考昔含药血清同时干预24 h,低、中、高浓度温肾壮阳方组分别用300μmol/L CoCl_(2)+相应浓度肾壮阳方含药血清同时干预24 h。采用CCK-8实验检测细胞生存率,采用Western blot法和qPCR法检测细胞中HIF-1α、VEGF、半胱天冬酶-1(Caspase-1)、p53蛋白与mRNA表达情况,流式细胞术检测髓核间充质干细胞(NPSCs)增殖情况。结果 缺氧诱导各组细胞存活率均明显低于空白对照组(P均<0.05),中浓度温肾壮阳方组、高浓度温肾壮阳方组的细胞存活率均明显高于缺氧造模组(P均<0.05)。缺氧造模组细胞中HIF-1α、VEGF、Caspase-1、p53蛋白及mRNA相对表达量均明显高于空白对照组(P均<0.05);依托考昔组HIF-1α蛋白及mRNA相对表达量均明显高于缺氧造模组(P均<0.05),VEGF、Caspase-1、p53蛋白及mRNA相对表达量与缺氧造模组比较差异均无统计学意义(P均>0.05);温肾壮阳方各组HIF-1α蛋白及mRNA相对表达量与缺氧造模组比较差异均无统计学意义(P均>0.05),VEGF蛋白及mRNA相对表达量均明显高于缺氧造模组(P均<0.05);中浓度温肾壮阳方组、高浓度温肾壮阳方组Caspase-1、p53蛋白及mRNA相对表达量均明显低于缺氧造模组(P均<0.05)。各造模组NPSCs占比均明显低于空白对照组(P均<0.05),中浓度温肾壮阳方组NPSCs占比明显高于缺氧造模组、依托考昔组、高浓度温肾壮阳方组(P均<0.05)。结论 温肾壮阳方对缺氧诱导的髓核细胞有保护作用,可促进NPSCs增殖,减少细胞凋亡,且可特异性促进VEGF的表达,有利于血管的分化与生成。

补骨脂素对大鼠腰椎间盘软骨细胞炎性退变的影响

目的探讨补骨脂素延缓椎间盘退变的内在机制。方法体外分离1月龄雌性SD大鼠腰椎间盘软骨板,采用组织块法培养,通过HE染色、甲苯胺蓝染色和免疫荧光进行细胞辨别、鉴定。通过细胞增殖实验和RT-PCR法进行补骨脂素最佳浓度筛选。取第3代生长状况良好的椎间盘软骨细胞,以每孔1×105的浓度将细胞置于6孔板内,分为空白对照组、白细胞介素-1β(IL-1β)诱导组(10ng/ml)、补骨脂素组(IL-1β10ng/ml+补骨脂素最佳浓度),每组3孔,检测各组Ⅱ型胶原基因(Col2a1)、聚集蛋白聚糖(Aggrecan)、血小板反应蛋白解整合素金属肽酶5(ADAMTS-5)、IL-1β和环氧化酶-2(COX-2)mRNA的表达。结果补骨脂素浓度在100、150、200、400μM时,细胞活性较浓度为0时明显减弱(P<0.01)。补骨脂素在12.5、25μM时较浓度为0时能上调Col2a1 mRNA表达(P<0.05或P<0.01)。补骨脂素组Aggrecan mRNA高于空白对照组(P<0.01);与IL-1β诱导组比较,补骨脂素组Col2a1 mRNA升高,ADAMTS-5 mRNA降低(P<0.01)。结论补骨脂素可以一定程度缓解IL-1β诱导的椎间盘软骨细胞的退变进程,并对IL-1β炎性信号通路的相关因子产生影响。

癌症放化疗等治疗引起骨量丢失的研究现状

国际癌症研究机构2012年发布的癌症状况报告指出，全球每年新增癌症病例为1400万，而且这数字在持续增加。虽然美国等发达国家的癌症患病率呈下降趋势（AACRCancerProgressReport，2013），但是并发症已经成为重要的死亡原因[1]。

机器人辅助椎弓根置钉临床疗效的系统评价再评价

目的 对机器人辅助椎弓根置钉疗效的系统评价/Meta分析(SR/MA)进行再评价。方法 计算机检索CNKI、VIP、WanFang Data、SinoMed、PubMed、Embase、Cochrane Library、Web of Science数据库,搜集有关机器人辅助椎弓根置钉的SR/MA,检索时限均为建库至2023年4月28日。由2名研究者独立筛选文献、提取资料后,分别使用PRISMA、AMSTAR-Ⅱ、ROBIS和GRADE工具评价纳入研究的报告质量、方法学质量、偏倚风险以及证据质量强度。结果 共纳入20篇SR/MA。纳入研究结论显示机器人辅助椎弓根置钉准确性相比徒手置钉可能更高,并发症数量更少。所有SR/MA的报告质量、方法学及置钉疗效的证据质量均为低或极低,偏倚风险为高风险。其主要原因包括纳入研究的异质性偏高,研究方法和选择标准模糊、关键报告流程缺失等。结论 机器人辅助椎弓根置钉相比传统徒手置钉可能具有更好的临床疗效,但相关SR/MA的质量较低。

骨肉瘤中医证候要素诊断量表的构建

目的:采用国际通用量表研制的程序和方法,研制并评估骨肉瘤中医证候要素诊断量表,探索运用量表的方法进行证候规范化、客观化研究。方法:通过多中心临床流行病学调查的方法收集133例骨肉瘤患者中医四诊信息和一般情况,运用相关分析、逐步回归、因子分析3种统计学方法对证候要素条目进行筛选,运用回归分析方法进行四诊条目赋分,采用曲线方法进行证候要素诊断阈值的确定,建立骨肉瘤中医证候要素诊断量表。运用43例临床样本进行量表的临床验证,评估量表的信度和效度。结果:量表研制结果:骨肉瘤中医证候要素诊断量表共包括5个证候要素(血瘀证、气虚证、气滞证、血虚证和痰阻证)。量表考评结果:总体Kappa值为0.816,总体Cronbach’s α系数值为0.809。共筛选出3个公因子,总方差累计贡献率为70.295%,因子载荷均大于最小可接受值。量表各证候要素得分与量表总分间均具有较好的相关性(P<0.01)。结论:骨肉瘤中医证候要素诊断量表包括个5证候要素和25项条目,具有较好的信度、效度;初步应用研究显示该量表能够为临床骨肉瘤辨证提供规范的证候诊断标准,客观描述证候的分布规律,为中医证候规范化研究提供了可借鉴的思路和方法。

骨肉瘤中医证候要素诊断量表的临床应用

目的:采用骨肉瘤中医证候要素诊断量表探讨骨肉瘤中医证素分布规律及特征,为中医临床辨证提供参考。方法:采用多中心的调查方法,建立骨肉瘤中医临床调查病例数据库,使用骨肉瘤中医证候要素诊断量表进行中医证素的提取和分析。结果:176例患者中最常见的证素是血瘀证(98例,占55.68%),其次为气虚证(76例,占43.18%)、血虚证(65例,占36.93%),比较少的是气滞证(28例,占15.91%)、痰阻证(26例,占14.77%)。176例骨肉瘤患者中出现了无证型、单证型、双证型组合、三证型组合、四证型组合、五证型组合。其中双证型组合最多,56例,占31.82%;无证型10例,占5.68%;单证型38例,占21.59%;三证型组合52例,占29.55%;四证型组合18例,占10.23%;五证型组合2例,占1.14%。结论:骨肉瘤中医证候要素诊断量表能够为中医证候规范化研究提供可借鉴的思路和方法。

激光噪声对声频段横向小位移测量精度的影响

本文研究了由厄米高斯模TEM00作为信号光场、TEM10模作为本地光组成的小位移产生及平衡零拍探测系统,实验上开展了基于该系统的声频段(20 Hz~20 kHz)横向小位移的产生和测量,讨论了系统散粒噪声、指向性噪声和激光强度噪声对最小可测位移量的影响。通过噪声测量实验结果,当信噪比为3 d B时给出了声频段不同频率处的最小可测位移量,其中1 kHz处为3×10^(-9)m,10 kHz处为1.2×10^(-10)m,15 kHz处为0.85×10^(-10)m。本文为小位移测量系统中抑制声频段激光噪声,减小系统指向性噪声的实验和理论研究奠定了一定的基础。