电镜和荧光显微技术在细胞凋亡研究中的应用

目的 :探讨荧光显微技术在检测细胞凋亡中的作用。方法 :应用拓扑异构酶Ⅱ抑制剂VP 16及化学毒物叠氮钠分别诱导HL 6 0细胞凋亡和死亡 ,用透射电镜和经Hoechst 332 5 8染色的荧光显微镜对凋亡及死亡动态观察和定量分析。结果 :HL 6 0细胞在VP16处理后 ,荧光显微镜下可见核浓缩、染色质凝聚、核碎裂等凋亡特征 ;而叠氮钠诱导的细胞死亡则出现核溶解、核染色质弥散 ,但无上述改变 ;两者电镜的观察与荧光显微镜的改变一致 ;凋亡细胞及坏死细胞荧光显微镜下呈不同的形态特征。对处理的不同时间点细胞的荧光显微镜观察发现 :处理后4h核形态开始变化 ,有核浓缩的细胞比例在处理的 8h达高峰 ,然后下降 ,核碎裂细胞的比例在 2 4h达高峰 ,约占80 % ,表明核浓缩发生在核碎裂之前。结论 :荧光显微镜技术可明确观察判断细胞凋亡及坏死 ,并可进行动态及定量分析 。

结核分枝杆菌广泛耐药株与耐多药株菌体蛋白质组学比较研究

目的比较和分析结核分枝杆菌广泛耐药(XDR)与耐多药(MDR)菌株在菌体蛋白质表达水平上的差异,并寻找与XDR相关的蛋白质点。方法利用双向凝胶电泳分离XDR、MDR菌株以及H37Rv标准菌株菌体蛋白质,通过计算机图像分析软件分析各菌株之间在菌体蛋白质表达水平上的差异性,并进行质谱分析。结果 XDR与MDR以及H37Rv菌株之间在菌体蛋白质表达水平上存在明显差异;与XDR相关的28个差异(新增、缺失、上调、下调)表达的蛋白质点中,质谱分析鉴定出5个相关的蛋白质点。结论结核分枝杆菌XDR与MDR菌株在菌体蛋白质表达水平上存在明显差异,为进一步研究XDR菌株耐药机理奠定了基础。

凝血酶诱导非小细胞肺癌血管内皮生长因子分泌的实验

目的探讨凝血酶对非小细胞肺癌细胞株A549分泌血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)的促进作用及其机制。方法采用ELISA法检测凝血酶对A549细胞分泌VEGF的浓度以及水蛭素对其阻断作用。采用RT-PCR法检测凝血酶受体PAR-1在A549细胞中的表达。结果凝血酶在0.5～3U/ml的浓度范围内可以明显地增加VEGF的分泌,而<0.5U/ml时这种促进作用则不明显,水蛭素能够完全阻断凝血酶的这种促进作用。PAR-1在A549细胞中表达,而在正常的胎肺细胞(KMB-17)中并不表达。结论在一定浓度范围内,凝血酶能有效地促进A549细胞VEGF的分泌,而这种促进作用可能与PAR-1受体的表达有关。

静脉采血法、末梢采血法在血常规检验中应用效果分析

目的:分析并比较静脉采血法、末梢采血法在血常规检验中的应用效果。方法:选取200名自愿参与研究的健康志愿者作为研究对象,将其随机分为两组,A组和B组,各100名,均实施血常规检验,其中,A组志愿者采用末梢采血法获取血液标本;B组志愿者采用静脉采血法获得血液标本,分别对两组志愿者在不同采血方法下获得的标本最终的检验结果 (包括WBC、RBC、Hb、MCHC、Hct、MCH、MCV、PLT)进行比较。结果:B组志愿者的RBC、Hb、PLT等三项指标显著高于A组,而WBC显著低于A组,差异有统计学意义(P<0.05)。而MCHC、Hct、MCH、MCV等四项指标比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:在实施临床血常规检验的过程中,通过静脉采血法和末梢采血法获得的检验结果存在一定的差异,但是通过静脉采血方式获得的最终检验结果相对更为准确,在临床检验中的应用也更为广泛。

2607例体检同型半胱氨酸检测结果的报告

同型半胱氨酸（HCY）是一种含硫基的氨基酸,是蛋氨酸代谢的中间产物.近年来大量临床资料证实血清HCY水平升高是冠心病的独立危险因素,同时也是促使急性心肌梗死发生的可能因素[1].本文收集了我院2012年1月1日至2012年12月31日共2607例健康体检HCY的人群,现报道如下.

201例疑似肺结核患者的支气管镜检查术后痰涂片结果分析

目的探讨支气管镜检查术后痰涂片对疑似肺结核患者的诊断价值。方法 201例疑似肺结核患者行支气管镜检查术并常规送检,106例患者获得病理学和病原学诊断,结果刷检涂片+BALF涂片联合检测阳性率为44.3%;PBS联合刷检涂片+BALF涂片阳性率为56.2%,其中术后痰涂片阳性率为52.7%。结论支气管镜检查术后痰涂片与其他肺结核病原学检测手段互为补充,提高了检测阳性率。

探讨尿常规定性检验在诊断糖尿病肾病中的应用价值

目的 探讨尿常规定性检验在诊断糖尿病肾病中的应用价值。方法 以2021年1月—2022年4月在龙岩市第一医院接受治疗的糖尿病肾病患者113例为观察组,再选取同期在本院接受健康体检的体检者100名为对照组。所有参与研究人员均接受尿常规定性检验,对比两组尿常规检验差异。并分析蛋白尿与糖尿病患者年龄及患病病程的相关性。结果 观察组患者的尿隐血、尿糖、白细胞脂酶、尿酮体、白细胞、尿蛋白阳性率均显著高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);观察组出现蛋白尿的患者中,一过性蛋白尿发生率显著高于持续性蛋白尿发生率;观察组患者的一过性蛋白尿发生率显著低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);观察组患者的持续性蛋白尿发生率显著高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);患者的病程越长,严重白蛋白尿发生率越高,说明糖尿病患病病程与蛋白尿之间的关系呈正比;患者的年龄越大,严重白蛋白尿发生率越高,说明糖尿病患病年龄与严重白蛋白尿之间的关系呈正比。结论 尿常规定性检验能够有效检出糖尿病患者的蛋白尿情况,能够对患者是否存在糖尿病肾病进行判断,临床应用价值显著。

用流式细胞术检测胃癌p53蛋白的表达

目的 :检测并比较胃癌及癌前病变 p5 3蛋白表达水平 ,探讨p5 3蛋白在胃癌发病中的意义。 方法 :采用间接免疫荧光标记 ,流式细胞术分析。以DNA指数、增殖指数、荧光指数为分析指标。结果 :胃癌、不典型增生及肠上皮化生的荧光指数 (FI)值与正常胃粘膜相比差异均有显著性 (P <0 0 5 ) ,前三者与浅表性胃炎相比差异也都有显著性 (P <0 0 5 )。不同病变间的比较 ,可见胃癌FI高于不典型增生及肠上皮化生 (P <0 0 5 )。不典型增生 p5 3蛋白阳性率为 2 7% ,胃癌为 6 8% ,在不典型增生及胃癌病例中 ,其异倍体的FI值、增殖指数 (PI)值和 p5 3蛋白阳性率与二倍体者相比差异都有显著性 (P <0 0 5 )。 结论 :胃癌组织 p5 3蛋白的表达水平高于癌前病变及正常胃粘膜组织 ,随病变向恶性转化 ,p5 3蛋白、PI及异倍体率均增高。检测 p5

基于因子分析法的新疆上市公司盈余质量研究

新疆作为推进我国丝绸之路经济带建设的核心区域,其盈余质量的优劣是繁荣和促进新疆资本市场健康发展的重要内容。本文根据盈余质量的内涵及度量,选择了影响会计盈余质量因素中的四个重要方面——现金保障性、安全性、持续性和成长性,构建了新疆上市公司盈余质量评价体系,运用因子分析法和主成分分析法对新疆33家上市公司2012—2014年的盈余质量状况进行了分析评价。研究发现,新疆上市公司盈余质量普遍较低,两级分化严重,其中持续性和成长性是影响新疆上市公司盈余质量最重要的两个方面。为提高盈余质量,上市公司可采取突出核心业务和完善公司治理结构等措施。

凝血酶对A549细胞增殖和顺铂凋亡效应影响的实验研究

目的:研究凝血酶在体外对非小细胞肺癌细胞(A549)增殖、化疗药物顺铂疗效的影响及其机理。方法:非小细胞肺癌细胞株A549与不同浓度的凝血酶(0.05-3U/ml)共培养,按不同分组加入顺铂(30mg/ml)和水蛭素(0.05-10U/ml)。在不同的时间,采用MTT比色法检测细胞生长活性,细胞增殖程度;采用流式细胞术检测凝血酶对顺铂杀伤肿瘤细胞作用的影响。结果:凝血酶在一定浓度范围内(0.05-1.5 U/ml)可促进A549增殖,72 h后增殖效应明显;在增殖浓度范围内可抑制顺铂对肿瘤细胞A549的凋亡作用。结论:凝血酶在一定浓度范围内诱导A549细胞增殖,并减弱化疗药物顺铂对该细胞的杀伤作用。

细菌性感染患儿外周血C-反应蛋白与血常规检测结果分析

目的探讨细菌性感染患儿外周血C-反应蛋白(C R P)与血常规变化规律及诊断意义。方法收集细菌性感染患儿68例,同期同年龄健康体检儿童30例作为健康对照,检测并比较2组C R P含量及白细胞(W B C)计数。结果细菌性感染患儿外周血C R P和W B C数目比健康对照组高。在细菌性感染患儿中,C R P检测敏感性为84.0%,特异性为82.2%,阳性检出率为83.82%;W B C敏感性为61.4%,特异性为78.3%,阳性检出率为77.94%;C R P与W B C联合检测的敏感性为95.1%,特异性为66.8%,阳性检出率为89.70%。结论细菌性感染患儿外周血中C R P与W B C反应灵敏,将其联合应用于小儿细菌性感染疾病有助于提高诊断符合率。

不伴基础疾病及免疫低下的半侵袭性肺曲霉菌病7例诊治体会

目的探讨不伴基础疾病及免疫低下的半侵袭性肺曲霉菌病的临床特征、诊断及治疗方法。方法收集收治的7例不伴基础疾病及免疫低下的半侵袭性肺曲霉菌病病例,对其临床特点进行分析。结果 7例患者中男性5例,女性2例,曾误诊为结核4例,经纤维支气管镜检查确诊2例。经皮肺活检确诊3例,痰培养诊断2例。结论不伴基础疾病及免疫低下的半侵袭性肺曲霉菌病临床表现无特异性,因无真菌感染危险因素,易误诊而延误治疗,确诊需要病理依据。

以大量胸腔积液为首发症状的肺非霍奇金T细胞淋巴瘤1例并文献复习

原发性肺淋巴瘤病例少见，其临床诊治困难，现报道1例以大量胸腔积液为首发症状的肺非霍奇金T细胞淋巴瘤并结合国内外文献进行复习，以提高临床医生对该病的认识。1病历介绍患者，女，62岁，因“胸闷、气促2月，加重10d”于2012年1月24日入院。既往史：有“高血压病”史10余年，否认传染病史。患者2个月前无明显诱因出现胸闷、气促，活动症状加重，伴轻微咳嗽，少量白色泡沫痰，无发热、心悸、胸痛、消瘦、下肢水肿等，曾在外院诊断为“胸腔积液”，给予胸腔穿刺引流黄色胸水1800mL后症状缓解出院，未行特殊治疗，10d前上述症状再次加重。入院时体检：体温正常，左肺第7后肋、第4前肋以下叩浊，呼吸音及语音共振减低，未闻及干湿哕音，心腹查体未见异常，双下肢胫前轻度水肿。

APC和NeuN在肺腺癌A549细胞株的表达

目的探讨APC和NeuN在肺腺癌A549细胞株中的表达及意义.方法体外培养肺腺癌A549细胞株,观察细胞形态变化;取第1代培养后1 d、5 d的细胞,用免疫组化检测APC和NeuN在肺腺癌细胞株A549的表达及计处阳性染色细胞的变化.结果 APC和NeuN在体外传代培养的肺腺癌A549细胞株中有表达,且随着细胞的生长,APC的表达减少,NeuN的表达增多.结论 APC可能在其早期形成中就发挥一定的作用;A549、NeuN的表达增A549肺腺癌细胞可能存在向神经细胞分化的潜力.在肺腺癌A549细胞表达减少.

凋亡细胞细胞膜和线粒体的动态变化

应用拓扑异构酶抑制剂VP-16及化学毒物叠氮钠分别诱导HL-60细胞凋亡及坏死,在0、2、4、8、16及24h各时间点,应用Hoechst33258染色,荧光显微镜及透射电镜对核形态进行观察,通过流式细胞术检测二乙酸荧光素(FDA)、罗丹明123(Rh123)和碘化丙啶(PI)荧光强度的变化,观察细胞凋亡及坏死过程中细胞膜通透性和线粒体膜电位的动态变化。结果显示:HL-60细胞在VP-16处理4h时核形态开始变化,有核浓缩的细胞比例在8h达高峰,然后下降;核碎裂细胞的比例在24h达高峰,约占80%,表明核浓缩发生在核碎裂之前。线粒体跨膜电位在8h后渐渐降低,16h可见明显降低。坏死细胞的线粒体膜电位在4h降低50%,细胞膜通透性也在8h之后出现变化。随处理的时间延长,FDA荧光强度进一步降低,对PI的摄取渐渐升高。结果提示,细胞凋亡过程中细胞膜通透性逐渐增高,线粒体膜电位降低。这两个指标能反映细胞凋亡及其程度,结合对细胞核形态观察,能更准确、可靠地反映细胞凋亡的发展变化。

肾活检标本包埋后免疫电镜技术

目的 :探讨肾活检标本树脂包埋及低温包埋的免疫电镜技术。方法 :选择 9例膜性肾病和 7例IgA肾病的肾活检标本 ,分别进行IgG及IgA的免疫电镜标记 ,观察不同的固定方法及环氧树脂、低温包埋剂包埋后的免疫标记结果。结果 :低温包埋剂LRWhiteresin和LowicrylK4M包埋后的标本 ,IgG和IgA的标记密度均较高 ,两种包埋剂的标记效果相同 ;但LRWhiteresin对超微结构的保存优于LowicrylK4M。常规固定方法、Epon812包埋的标本 ,IgG及IgA均不能标出 ;混合固定液 (多聚甲醛加戊二醛 )固定、Epon812包埋的标本 ,IgG及IgA均可标出 ,但与低温包埋剂相比 ,标记密度较低。结论 :低温包埋剂LRWhiteresin和LowicrylK4M对免疫标记效果好 ,但较昂贵 ,难应用于临床。树脂包埋剂虽然免疫标记效果略差 ,但可作为一种诊断免疫电镜方法。

骨骼肌活组织检查病理诊断技术的改进及应用

目的:对300例骨骼肌活组织检查(活检)标本进行组织学切片和染色,总结分析技术方法的操作过程和改进,重点探讨各种肌酶及非酶组织化学染色技术在神经肌肉病诊断中的应用选择和价值。方法:将标本经异戊烷-液氮速冻后进行冰冻切片,应用HE及Gomori三色(GMR)、糖原(PAS)、脂肪(油红O)等特殊染色,肌球蛋白三磷酸腺苷酶(ATP酶)、还原型辅酶Ⅰ四唑氮还原酶(NADH-TR)等酶组织化学染色,并对各种染色技术进行调整和改进。结果:标本经异戊烷-液氮速冻及恒冷切片,可以有效避免产生冰晶。GMR染色主要显示线粒体及肌纤维变性坏死的病变,油红O染色显示肌纤维内有无脂质增多,PAS染色主要显示糖原和糖蛋白。对于肌肉组织,应用冰冻切片优于石蜡切片。NADH-TR及ATP酶染色可以区分两型肌纤维,并可观察肌纤维内部结构及线粒体酶的变化等。结论:通过骨骼肌酶与非酶组织化学染色技术,可以清晰地显示出两型肌纤维的分布情况及各种特征性的病理改变,几种方法可互为补充。

移植相关性血栓性微血管病的肾损害

目的:探讨移植相关性血栓性微血管病(transplantation-associated thrombotic microangiopathy,TA-TMA)肾损伤的临床和病理特点及其病因和发病机制。方法:以造血干细胞移植和同种异体肾移植为例,将其肾穿刺活检标本分别进行免疫荧光、光学显微镜和透射电子显微镜的病理学观察。结果:患者在接受移植后的不同时间内,出现高血压、大量蛋白尿、血管内溶血性贫血及肾功能减退;免疫荧光检查显示,各种免疫球蛋白及补体均阴性;光学显微镜检查显示,肾小球和肾小动脉内皮细胞增生、肿胀,基底膜不规则增厚,可有微血栓形成;透射电子显微镜检查显示,除内皮细胞增生、肿胀外,基底膜内疏松层增厚,未见电子致密物。结论:TA-TMA是器官或组织移植后较少见的并发症。TA-TMA常累及肾脏,出现大量蛋白尿、贫血及肾功能减退。应与常见的排异反应或其他肾疾病鉴别,肾穿刺活检是确诊的主要方法。TA-TMA的发生与抗排异反应的免疫抑制剂的应用和病毒感染并导致内皮细胞损伤有关。