降钙素基因相关肽对缺氧时海马细胞内游离Ca^（2＋）的影响

本实验用Ｆｕｒａ－２荧光测定技术直接监测了缺氧时大鼠海马细胞内游离Ｃａ２＋浓度（［Ｃａ２＋］ｉ）的变化，并观察了降钙素基因相关肽（ＣＧＲＰ）对这种变化的影响。结果发现，缺氧可使海马细胞［Ｃａ２＋］ｉ显著增高；４或８ｎｍｏｌ／ＬＣＧＲＰ能明显地降低缺氧引起的［Ｃａ２＋］ｉ增高，但在无胞外Ｃａ２＋的情况下，ＣＧＲＰ的作用消失。结果表明，ＣＧＲＰ的降钙作用是通过抑制缺氧时胞外Ｃａ２＋的内流来实现的。

锌对新生大鼠海马培养神经元生长发育的作用

采用无血清培养的新生大鼠海马神经细胞，观察锌对脑细胞生长发育的作用。结果表明，锌能促进体外培养海马神经元的神经突起生长，突起数增多；神经元的活存数和神经元胞体的直径和面积增加。用流式细胞术分析证明，神经元总蛋白含量增高。本结果提示。

降钙素基因相关肽对脑缺血大鼠脑血流的影响

大鼠侧脑室注入降钙素基因相关肽（ＣＧＲＰ）或等体积甘露醇为对照，用非损伤阻抗法测定一侧颈总动脉结扎后ＣＧＲＰ对脑血流的影响。结果表明，一侧颈总动脉结扎后，脑血流量降低３４％，此时侧脑室给予ＣＧＲＰ即刻使脑血流图波幅增加，５分钟时达高峰，比注药前平均增加６５％，与甘露醇对照相比差别非常显著（Ｐ＜０．０１），４０分钟时作用开始减弱，１００分钟后作用消失。与颈总动脉结扎前相比，在脑血供不足时，ＣＧＲＰ增加脑血流的作用更为明显。侧脑室预先给予β受体阻断剂心得安，未能阻断上述ＣＧＲＰ的作用。

海马培养细胞的缺氧损伤及降钙素基因相关肽的保护作用

采用新生大鼠海马细胞进行分离培养，观察缺氧对海马培养细胞的影响以及降钙素基因相关肽（ＣＧＲＰ）的保护作用。结果表明：培养１２ｄ的细胞置于缺氧环境（９５％Ｎ２＋５％ＣＯ２）中４─２４ｈ后，随着缺氧时间延长，神经细胞由肿胀、胞膜受损乃至死亡，台盼蓝染色细胞数增多，乳酸脱氢酶（ＬＤＨ）和Ｋ＋漏出增加。经ＣＧＲＰ孵育的细胞缺氧后形态变化轻微，细胞死亡率以及ＬＤＨ和Ｋ＋漏出量均明显低于对照组。本结果表明，体外培养的海马神经元对缺氧甚为敏感。缺氧造成海马细胞严重损伤，ＣＧＲＰ对此有明显的保护作用。

降钙素基因相关肽对低氧下海马脑片突触功能的保护作用

本文采用大鼠海马脑薄片，同时双通道记录脑片的诱发电位，观察低氧下突触功能的变化，并于一侧脑片灌流降钙素基因相关肽（ＣＧＲＰ），另侧作对照，比较双孔脑片诱发电位的异同。结果显示，电刺激ＣＡ３区的Ｓｃｈａｆｆｅｒ侧支，可在ＣＡ１区锥体细胞诱发突触前排放（ＰＶ）和突触后群峰电位（ＰＳ）。低氧时ＰＳ迅速减小并逐渐消失。部分脑片出现低氧损伤电位（ＨＩＰ）。经ＣＧＲＰ灌流的脑片低氧后电位开始减小与完全消失的时间均向后推迟，ＨＩＰ出现减少或延迟。恢复给氧后，ＣＧＲＰ组脑片恢复率明显高于对照组，呈现剂量依赖性保护作用。此外，低氧后给予ＣＧＲＰ亦可提高突触功能恢复率。以上结果提示低氧早期海马突触功能迅速受损，神经肽－ＣＧＲＰ对此具有明显的保护作用。

NGF对新生大鼠隔神经元的神经营养作用

本实验观察了神经生长因子（ＮＧＦ，２．５ｓ）对无血清培养新生大鼠隔神经元生长发育的作用。结果证明，ＮＧＦ能促进新生大鼠隔神经元的存活，增加神经元胞体面积和直径，增加隔培养神经元中ＡＣｈＥ阳性神经元的数目。流式细胞分析显示，ＮＧＦ使神经元平均蛋白含量增加。以上结果表明：ＮＧＦ对新生大鼠隔神经元的生长发育具有促进作用。Ｐ＜０．０１３．ＮＧＦ增加隔培养神经元胞体面积、最长径和最短径图像分析结果可见：在前７ｄ，在神经元胞体面积、最长径和最短径等方面两组之间无明显差别，但在培养１４、２１和３０ｄ时，ＮＧＦ组培养神经元的平均胞体面积、最长径和最短径均大于对照组，经统计学处理有显著意义（表２）。表２对隔培养神经元胞体面积、最长径和最短径的影响（ｘ±ｓ）注：Ｎ＝３０与同时期对照组相比＊Ｐ＜０．０５Ｐ＜０．０１４．ＮＧＦ促进新生大鼠隔细胞的总量白合成用ＦＡＣＳ４４０流式细胞仪测定隔细胞的平均蛋白含量，结果表明：在培养３、７、１４和２１ｄ时，ＮＧＦ组培养细胞的平均蛋白含量均显著高于对照组（表３，Ｆｉｇ．１）。表３ＮＧＦ对隔神经元蛋白合成的影响（ｘ±ｓ）往：Ｎ＝５与同时期对照组相比 ＊Ｐ＜０．０５５．ＮＧＦ提高隔神经元的ＡＣｈＥ?

缺氧对海马培养细胞人重组白细胞介素－6免疫组化反应的影响

本文观察了缺氧对体外培养海马细胞中ｒｈＩＬ－６免疫反应的影响。结果显示，体外培养的海马神经元和神经胶质细胞的ｒｈＩＬ－６呈弱阳性免疫反应，缺氧１～４ｈ后神经元和神经胶质细胞的ｒｈＩＬ－６免疫组化反应明显增强。对免疫染色细胞作图像分析结果显示，缺氧后神经元和神经胶质细胞的平均光密度较缺氧前增加，尤以缺氧２ｈ时最明显，之后随缺氧时间延长，神经元和神经胶质细胞的平均光密度又逐渐减弱。上述结果表明，海马脑区存在ｒｈＩＬ－６免疫反应细胞；缺氧条件下ｒｈＩＬ－６免疫组化反应增强，提示ｒｈＩＬ－６可能参与脑缺氧损伤的调控。

新生大鼠下丘脑培养细胞LH-RH免疫组化观察

用新生大鼠下丘脑细胞进行体外细胞培养,观察了下丘脑神经元的生长分化,并对培养的下丘脑细胞作了LH-RH和NSE免疫组化观察。结果显示:新生大鼠下丘脑神经细胞可在体外生长发育,对LH-RH和NSE均呈阳性免疫反应。LH-RH免疫组化阳性细胞的图像分析表明,细胞平均光密度和积分光密度在培养早期较低,至第7天时明显增加,以后随培养时间延长又逐渐下降。提示体外培养的新生大鼠下丘脑神经细胞具有合成LH-RH的功能。

新生大鼠海马、隔和下丘脑培养细胞中AchE阳性神经元的分布

应用乙酰胆碱酯酶(AchE)组化方法,观察了AchE阳性神经元在新生大鼠海马、隔和下丘脑培养细胞中的分布及形态特征.AchE阳性神经元胞体都较大.在海马培养细胞中AchE阳性神经元数较少,为多极神经元,胞体着色浅.但在隔和下丘脑培养细胞中AchE阳性神经元数较多,多为双极神经元,胞体呈中强度染色.这三种培养细胞中的AchE阳性神经元数均随着培养时间的延长而逐渐增多.

脑细胞缺氧损伤的发生发展及其防治对策

脑细胞缺氧损伤的发生发展及其防治对策王福庄（北京军事医学科学院基础医学研究所，１００８５０）目前，一般认为脑缺氧引起神经元损伤是由于细胞外兴奋性氨基酸（ＥＡＡ），特别是谷氨酸（Ｇｌｕ）大量释放和堆积引起Ｃａ２＋内流，使细胞内游离钙超载，对神经元产生损...

大鼠脊髓诱发电位与脊髓损伤的关系 Ⅰ、刺激坐骨神经诱发脊髓电位的特征与分布

本工作用电刺激大鼠的坐骨神经,双极引导硬膜外脊髓诱发电位,观察电位的特征与分布。结果表明,大鼠脊髓对刺激坐骨神经的反应分布于L5到T10椎体水平。反应潜伏时自L5向T11有规律地依次增加,由0.35ms延长到1.17ms。电位的基本波形为正(P1)、负(N1)、正(P2)三相电位的早期反应和随后的负(N2)、正(P3)双相晚期反应。不同节段水平的电位存在各自的特征。其中,T13与L1水平的电位大而稳定,晚期反应的波幅平均高达394μv和432μv左右,且波形互为反相,呈现明显的传入神经投射节段的电位特征。上述结果及对电位诸参数的分析为识别损伤后电位提供了依据。

降钙素基因相关肽对缺氧时大鼠海马培养神经元c—fos表达的影响

采用免疫组化（ABC）方法，观察缺氧诱导体外培养大鼠海马神经元c-fos的表达及降钙素基因相关肽（CGRP）的影响。结果显示，缺氧后海马神经元中Fos-免疫反应（Fos—IR）阳性胞核百分率随缺氧时间的延长而逐渐增多，图像分析的结果显示，缺氧后Fos—IR阳性胞核的平均失密度亦随缺氧时间的延长而逐渐增强。经CGRP孵育的海马神经元缺氧后Fos-IR阳性胞核的百分率和Fos-IR阳性胞核的平均光密度均明显低于非CGRP孵育组。本结果表明，缺氧能诱导体外培养海马神经元。c-fos的表达，神经肽CGRP能抑制缺氧海马神经元c-fos的表达。提示CGRP对海马神经元缺氧损伤可能具有一定保护作用。

细胞因子rhIL—1β、rhIL—2及rhIL—6对大鼠海马神经元营养作用的研究

本工作采用显微测量、图像分析和流式细胞分析方法，研究了细胞因子ｒｈＩＬ—１β、ｒｈＩＬ－２及ｒｈＩＬ—６对新生大鼠海马培养神经元突起生长发育、胞体生长状态、神经元存活数及培养过程中蛋白总量影响。结果显示，这３种细胞因子均对海马培养神经元的突起生长，胞体发育以及发育过程中神经元的蛋白质合成具有明显的促进作用，并且在提高海马培养神经元存活、延长存活时间方面有较为显著的效应。提示白介素类细胞因子ｒｈＩＬ—１β、ｒｈＩＬ－２及ｒｈＩＬ—６对海马神经元具有营养作用。

巴曲酶对海马脑片缺氧损伤的保护作用

本实验采用离体大鼠海马脑片缺氧模型，观察巴曲酶对缺氧后海马脑片ＣＡ１区诱发突触电位的影响。结果可见：用三种浓度巴曲酶孵育的海马脑片缺氧后ＰＶ消失时间均明显延迟，但对ＰＳ的消失时间无明显影响。提示：巴曲酶对海马神经元缺氧损伤具有一定保护作用。

GABA对大鼠海马脑片缺氧损伤的保护作用

目的 :研究GABA对大鼠海马脑片急性缺氧损伤的保护机制。方法 :采用成年大鼠离体海马脑片 ,用胞外记录的电生理技术 ,观察GABA对急性缺氧后海马脑片诱发电位的影响。结果 :①GABA可明显延迟PV的消失 ,但对PS却无影响 ;②给予GABAA 受体拮抗剂荷包牡丹碱 (bicuculine)以及Cl 通道阻抗剂NPPB可阻断GABA的保护作用。结论 :GABA可提高海马脑片耐缺氧妮力 ,其机制可能与GABA通过GABAA 受体提高Cl

低氧预适应增强大鼠海马神经元的耐缺氧能力

本研究对整体大鼠进行了模拟不同海拔高度 (30 0 0、5 0 0 0m)的低氧预适应 ,然后观察了急性致死性缺氧对这些大鼠海马脑片诱发群锋电位的影响。结果显示 ,经低氧预适应的大鼠其海马脑片在给予急性缺氧后 ,CA1区缺氧损伤电位 (hypoxicinjurypotential,HIP)出现时间以及突触前排放 (presynapticvolley ,PV)消失时间均明显延迟 ;其中 5 0 0 0m预适应组的延迟程度比 30 0 0m组明显。复氧后 ,PV的恢复率在 30 0 0m和 5 0 0 0m低氧预适应组均明显高于对照组。本研究结果提示 。

重组人白细胞介素-6对缺氧-复氧后大鼠海马培养神经元Bcl-2、Bax表达和神经元凋亡的影响

实验在培养的大鼠海马神经元中观察了重组人白细胞介素 6 (recombinanthumaninterleukin 6 ,rhIL 6 )对缺氧 复氧后Bcl 2、Bax表达和神经元凋亡的影响。把培养 12d的大鼠海马神经元分为对照组和rhIL 6组 ,同时于缺氧环境 (90 %N2 +10 %CO2 )中培养 2、4h后 ,再于常氧培养箱内复氧培养 2 4和 72h。于不同时间取出 ,分别用抗Bcl 2和Bax抗血清进行免疫组织化学染色 ,观察缺氧 复氧后大鼠海马培养神经元Bcl 2和Bax的表达 ,并用原位末端标记 (TUNEL)法和流式细胞术分别检测缺氧 复氧对体外培养海马神经元凋亡的影响。结果可见 ,与缺氧前相比 ,缺氧 复氧后 2 4和 72h ,海马神经元Bcl 2表达明显减弱 ,Bax表达明显增强 ,凋亡神经元明显增多。经rhIL 6预处理的海马神经元与对照组相比 ,缺氧 复氧后 2 4和 72h ,Bcl 2表达明显增强 ,Bax表达明显减弱 ,凋亡神经元明显减少。本实验结果提示 ,rhIL 6对海马神经元缺氧

低氧预适应可减少缺氧—复氧后大鼠海马培养神经元凋亡

用原位末端标记 ( TUNEL )法观察低氧预适应对大鼠海马培养神经元缺氧 -复氧后神经元凋亡的影响。结果显示 ,经低氧预适应的海马神经元缺氧 -复氧后凋亡神经元百分率明显低于对照组。本结果表明 ,低氧预适应可使体外培养的海马神经元对缺氧产生耐受 ,减少缺氧

低氧预处理提高离体培养的下丘脑细胞缺氧耐受性及其与线粒体膜电位稳定性的关系

本文用新生大鼠下丘脑培养细胞 ,研究了低氧预处理对下丘脑细胞缺氧耐受性的影响及其与线粒体膜电位的关系。结果显示 :在急性缺氧条件下 ,低氧预处理可以提高细胞存活率 ,减少乳酸脱氢酶漏出 ;此外 ,低氧预处理可以使线粒体膜电位在缺氧时保持相对高的水平 ,并诱导B淋巴细胞 /白血病 2 (B celllymphoma/leukemia 2 ,bcl 2 )高表达。结果提示 ,低氧预处理能提高下丘脑细胞的缺氧耐受性 ,其机制与线粒体膜电位稳定性增强有关 ;低氧预处理诱发bcl

γ-氨基丁酸抑制缺氧所致神经元钙超载

本文以体外分散培养的新生大鼠海马ＣＡ１区神经细胞为标本，分别采用激光扫描共聚焦显微镜动态监测单个细胞［Ｃａ２＋］ｉ和膜片箝全细胞记录的电生理技术检测细胞的ＮＭＤＡ电流和电压依赖性Ｃａ２＋电流等方法，较为深入地研究了抑制性神经递质γ－氨基丁酸（ＧＡＢＡ）及ＧＡＢＡ－Ａ受体激动剂蝇蕈醇（Ｍｕｓｃｉｍｏｌ）对急性缺氧时海马ＣＡ１神经元［Ｃａ２＋］ｉ升高过程的影响方式及其作用机制。结果表明：对照组细胞缺氧后比缺氧前［Ｃａ２＋］ｉ升高２６８％±６８％（ｎ＝５）；而以２０μｍｏｌ／ＬＧＡＢＡ或２０μｍｏｌ／ＬＭｕｓｃｉｍｏｌ作用的细胞在缺氧后［Ｃａ２＋］ｉ升高仅分别为２６％±９％（ｎ＝５）和４０％±１５％（ｎ＝５），与对照组相比均有极显著差异（Ｐ＜０．００１）。说明它们具有抑制缺氧引起的神经元［Ｃａ２＋］ｉ升高的作用。在膜片箝的全细胞记录实验中，观察到２０μｍｏｌ／ＬＧＡＢＡ能够抑制ＮＭＤＡ电流，对其幅度的抑制率为６３．３±１１．６％（ｎ＝５）；别外，２０μｍｏｌ／ＬＧＡＢＡ对由－９０－０ｍＶ脉冲电压诱发的Ｃａ２＋电流最大峰值的抑制率为５４．８％±１０．７％（ｎ＝５）。以往的实验证据揭示，ＮＭＤＡ受体耦联的离子通道和电?